2.2动物细胞工程
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选修3-2.2动物细胞工程
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 细胞全能性 固体培养基 蔗糖 植物激素
已分化的组织→愈 伤组织→胚状体、 丛芽→完整植株
动物细胞培养 细胞增殖 液体培养基 葡萄糖 动物血清
动物组织→单个细 胞→细胞悬液→原 代培养→传代培养
原理
培养基状态 培养基特有成分 培养过程 生长特点 接种前处理 培养目的
动物细胞培养过程中需注意的问题 2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
二、动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境
添加一定量的抗生素，定期更换培养液
2、营养
可以补充培养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等 基中缺乏的物 质如生长因子， 通常需加入动物血清等一些天然成分 保证细胞顺利 的生长增殖
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、 习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克 隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可 能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供 体动物100%的复制。
一、动物细胞核移植技术和克隆动物
3、体细胞核移植技术的应用前景
受精卵发育成新个体的生殖方式。
无性生殖：不经过两性生殖细胞结合，直接由母体
的一部分发育成新个体的生殖方式。如细胞有丝分裂、 植物组织培养、动物体细胞核移植等。
克隆：群细胞或者生物个体。现在指个体水平的 核移植技术、细胞水平的动物细胞培养、基因水平的 DNA复制等。
⑷为什么用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以 内的细胞？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，
动物细胞工程(第4课时)高二生物(人教版2019选择性必修3)
育进程
将胚胎移入（受体）
代孕母牛
早期胚胎
生出与供体奶牛 遗传物质基本相 同的犊牛（克隆牛）
一 动物体细胞核移植技术
【分析与探讨】
1.体细胞和卵母细胞从哪里来？ 体细胞来自于供体高产奶牛身体的某部位（如耳）上取 卵母细胞从屠宰场收集牛卵巢
2.卵母细胞需要在体外培养到什么时期？ MⅡ期
3.在将供体细胞的细胞核移入卵母细胞前，需要对卵母细胞进 行什么操作？为什么？
即时练习
2.2017年，某国批准了首例使用细胞核移 植技术培育“三亲婴 儿”的申请。其培育过程可选用如下技术路线。
据图分析下列叙述错误的是 （C）
A. 该技术涉及物细胞培养、细胞核移植 等操作 B. 该技术可避免母亲的线粒体遗传病基 因传递给后代 C. 卵母细胞捐献者携带的红绿色盲基因 能够遗传给“三亲婴儿” D.“三亲婴儿”同时拥有自己父亲、母亲 及卵母细胞捐献者的部分基因
去核 保证克隆动物的核基因全部来自供体细胞
一 动物体细胞核移植技术
【分析与探讨】
4.实际在克隆高产奶牛时，科学家并没有从供体细胞中取出细胞 核，而是直接将供体细胞注入去核的卵母细胞，你知道这是为什 么吗？ 这种方法操作简便，对卵母细胞损伤较小，伴随着两细 胞融合，体现出细胞膜具有一定的流动性的结构特点。
一 动物体细胞核移植技术
采集牛卵巢中的 卵母细胞，在体 外培养到MⅡ期
从供体高产奶 牛取体细胞
（1）选择卵母细胞作为核 移植受体细胞的原因：
显微操作去核 （实际上是去 除纺锤体-染色 体复合物）
动物细胞培养
①卵母细胞体积大，易操作
②含有促使细胞核表达全 能性的物质和营养条件
（2）将供体细胞整个注入去 核卵母细胞中的原因：
2.2动物细胞工程
O2—有氧呼吸、细胞代谢 有氧呼吸、 有氧呼吸 细胞代谢(95%) (3)气体环境 气体环境 CO2—维持 维持pH(5%) 维持
培养液和培养用具杀菌消毒 (4)无菌、无毒环境培养过程加抗生素杀菌 无菌、 无菌 定期更换培养液，清除代谢产物 定期更换培养液，
4．实践应用 ． (1)生产生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克 生产生物制品： 生产生物制品 病毒疫苗、干扰素、 隆抗体等。 隆抗体等。 (2)与基因工程相结合。 与基因工程相结合。 与基因工程相结合 (3)检测有毒物质，判断某种物质的毒性。 检测有毒物质， 检测有毒物质 判断某种物质的毒性。 (4)科研方面：筛选抗癌药物、治疗和预防疾 科研方面： 科研方面 筛选抗癌药物、 病。
(2009年山东高考题 人类在预防与诊疗 年山东高考题)人类在预防与诊疗 年山东高考题 传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。 传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。 已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该 病毒， 已知某传染性疾病的病原体为 病毒 病毒表面的A蛋白为主要抗原 蛋白为主要抗原， 病毒表面的 蛋白为主要抗原，其疫苗生产和 抗体制备的流程之一如下图。 抗体制备的流程之一如下图。
三、动物细胞融合与单克隆抗体制备 1．原理：细胞膜的流动性。 ．原理：细胞膜的流动性。 2．诱导融合的因素：聚乙二醇 ．诱导融合的因素：聚乙二醇(PEG)、灭活 、 的病毒、电激等。 的病毒、电激等。 3．意义：最重要的用途是制备单克隆抗体。 ．意义：最重要的用途是制备单克隆抗体。
4．单克隆抗体的制备 ． (1)过程： 过程： 过程
【答案】 (1)逆(反)转录 (2)限制性核酸内 答案】 逆 反 转录 限制性核酸内 切酶(限制性内切酶 限制酶) 限制性内切酶、 切酶 限制性内切酶、限制酶 DNA连接酶 连接酶 (注：两空顺序可颠倒 (3)细胞融合 杂交瘤 注 两空顺序可颠倒) 细胞融合 基因)序列 细胞 (4)A蛋白 核酸 基因 序列 抗A蛋白 蛋白 核酸(基因 蛋白 的单克隆抗体
培养液和培养用具杀菌消毒 (4)无菌、无毒环境培养过程加抗生素杀菌 无菌、 无菌 定期更换培养液，清除代谢产物 定期更换培养液，
4．实践应用 ． (1)生产生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克 生产生物制品： 生产生物制品 病毒疫苗、干扰素、 隆抗体等。 隆抗体等。 (2)与基因工程相结合。 与基因工程相结合。 与基因工程相结合 (3)检测有毒物质，判断某种物质的毒性。 检测有毒物质， 检测有毒物质 判断某种物质的毒性。 (4)科研方面：筛选抗癌药物、治疗和预防疾 科研方面： 科研方面 筛选抗癌药物、 病。
(2009年山东高考题 人类在预防与诊疗 年山东高考题)人类在预防与诊疗 年山东高考题 传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。 传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。 已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该 病毒， 已知某传染性疾病的病原体为 病毒 病毒表面的A蛋白为主要抗原 蛋白为主要抗原， 病毒表面的 蛋白为主要抗原，其疫苗生产和 抗体制备的流程之一如下图。 抗体制备的流程之一如下图。
三、动物细胞融合与单克隆抗体制备 1．原理：细胞膜的流动性。 ．原理：细胞膜的流动性。 2．诱导融合的因素：聚乙二醇 ．诱导融合的因素：聚乙二醇(PEG)、灭活 、 的病毒、电激等。 的病毒、电激等。 3．意义：最重要的用途是制备单克隆抗体。 ．意义：最重要的用途是制备单克隆抗体。
4．单克隆抗体的制备 ． (1)过程： 过程： 过程
【答案】 (1)逆(反)转录 (2)限制性核酸内 答案】 逆 反 转录 限制性核酸内 切酶(限制性内切酶 限制酶) 限制性内切酶、 切酶 限制性内切酶、限制酶 DNA连接酶 连接酶 (注：两空顺序可颠倒 (3)细胞融合 杂交瘤 注 两空顺序可颠倒) 细胞融合 基因)序列 细胞 (4)A蛋白 核酸 基因 序列 抗A蛋白 蛋白 核酸(基因 蛋白 的单克隆抗体
高中生物专题2细胞工程2.2动物细胞工程2.2.1动物细胞培养和核移植技术学案新人教版选修3
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术[学习目标] 1.归纳动物细胞培养的过程、条件及应用。
2.归纳通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景。
方式一2003年，四川少年小林点燃鞭炮，导致面部、四肢被严重烧伤并感染。
为了挽救儿子的生命，小林的爸爸、妈妈向医生恳求“割皮救儿”，烧伤整形科主任魏平最终同意进行这场罕见的亲体皮肤移植手术。
为了全覆盖孩子身体上被深度烧伤并发生感染的创面，医生把取自父子俩的皮肤全部剪成指甲盖大小的皮块，儿子和爸爸的皮肤相隔相嵌，估计父亲的皮肤至少能在其儿子身上存活半年甚至更长时间，这就给儿子自身皮肤的生长带来了生机，孩子的痊愈指日可待。
思考：1．小林在皮肤烧伤之后，很容易得病，为什么？2．选取植皮时，理论上选择谁的皮肤最好？为什么？3．自身的健康皮肤是有限的，能不能通过其他途径获得自身的皮肤？方式二古代神话里孙悟空用自己的汗毛变成无数个小孙悟空的离奇故事，表达了人类对复制自身的幻想。
1978年，美国科幻小说家罗维克(D.Rorvick)写了一本名叫《克隆人》(The Cloning of a man)的书，内容是一位富商将自己的体细胞核移植到一枚去核卵中，然后将其在体外卵裂成的胚胎移植到母体子宫中，经过足月的怀孕，最后生下了一个健康的男婴，这个男婴就是一个克隆人。
现在，克隆人已经不是科幻小说里的梦想，而是呼之欲出的现实。
由于克隆人可能带来复杂的后果，一些生物技术发达的国家，现在大都对此采取明令禁止或者严加限制的态度。
克隆人，真的如潘多拉盒子里的魔鬼一样可怕吗？我们应该怎样正确看待克隆技术呢？一、动物细胞工程和动物细胞的培养1．动物细胞工程2.动物细胞培养 (1)概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
(2)过程动物组织块或器官――――――――――→剪碎胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理单个细胞――→加培养液细胞悬液――→初次培养原代培养―→传代培养。
选修3-2-2-动物细胞工程XXXX
2.动物细胞培养 (1)概念:
44页4段
从动物机体中取出相关的组织，将它分散成 单个细胞 ，然后，
放在适宜的培养基中，让这些细胞 生长 和 增殖 。
(2)原理: 细胞增殖
(3)条件
46页
①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养 液中添加一定量的 抗生素 ，以防培养过程中的污染。
此外，应 定期更换培养液 ，防止代谢产物积累造成危害。
【例1】 回答下列有关动物细胞培养的问题。 (1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表 面相_互__接__触___时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的 __接__触__抑_制_。此时，瓶壁上形成的细胞层数是___一_层__。要使贴 壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是 __胰__蛋__白_酶_。
【例2】 右图为某哺乳动物的生殖过程图，
正确的叙述是
( )。
A．个体2为克隆动物，c为高度分化的
体细胞
B．个体2的遗传性状与提供b细胞的母
羊完全不同
C．产生动物个体2的生殖方式为有性生殖
D．e细胞为完成减数分裂的卵细胞
答案 A
【巩固1】 一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件
( )。
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③合成培养基需加血浆
2．2 动物细胞工程
图2—15 用培养的人细胞构建的人造皮肤
1．动物细胞工程
44页1段
基础
技术手段
应用
动物细胞培养技术
动物细胞培养 、 ①深入探索并改
动物细胞 性
单克隆抗体的制备等 ②大量培养细胞
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术
1、动物细胞培养的流程： 动物胚胎或幼龄动物的器官或组织
人教版教学课件2.2 动物细胞工程
需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞),需经克隆化培
养和抗体检测,经多次筛选后就可获得足够数量的
能分泌所需抗体的细胞。
(4)2个培养提取场所
①体外培养——培养液提取。
②体内小鼠腹腔中培养——小鼠腹水中提取。
提醒
取相应B细胞前必需先注射相应抗原,形
象地说先“打针”,否则失败。 (5)原理：细胞膜的流动性和细胞增殖。 拓展提升 植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备的比较
障碍,大大扩展杂交的亲本 组合范围 (2)克服有性杂交的母系遗 传现象、获得细胞质基因的 杂合子、研究细胞质遗传
(1)制备单克隆抗体 (2)诊断、治疗、预
防疾病。例如:单抗
诊断盒、“生物导
弹”治 疗癌症
对位训练
3.利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗 原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是 （ D ） A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产 生的血清抗体为单克隆抗体 B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得大量针对SARS 病毒的单克隆抗体 C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱 导融合后的细胞均为杂交瘤细胞 D.利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异 性结合的方法可诊断出病毒感染者
冷冻（或超低温、 （5）在细胞培养过程中，通常在________________ 液氮） 条件下保存细胞。因为在这种条件下，细 胞中 酶 的活性降低，细胞 新陈代谢 的速率降低。
（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发
生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当
作 抗原 进行攻击。
考点二
动物体细胞核移植技ຫໍສະໝຸດ 与克隆动物植物体细胞杂交 动物细胞融合(单克隆抗体 的制备)
理论基础 细胞膜的流动性、细胞的 细胞膜的流动性、细胞增殖 (原理) 全能性 融合前 酶解法去除细胞壁(纤维 注射特定抗原,免疫处理正 处理 素酶、果胶酶) 常小鼠
选修3 专题2.2 动物细胞工程
【典例4】如图表示高等动、植物细胞融合 的部分过程，请据图回答： (1)若上图表示植物体细胞杂交的部分过程， 欲将丁细胞培育成植株，可选用 植物组织培养 ______________技术，这一技术的两个关 脱分化 再分化 键步骤是___________和________。
(2)若上图表示制备单克隆抗体的部分过程， 甲细胞为小鼠的骨髓瘤细胞，则乙细胞为 B淋巴细胞 _____________。在分离乙细胞之前，应对 小鼠进行的处理是 将抗原注射入小鼠体内 ________________________________。 过程①区别于植物细胞常用的诱导方法是 用灭活的病毒诱导 __________________，过程②可利用 特定的选择性 _____________培养基进行筛选，筛选得到 克隆化培养 的丁细胞还需进行___________和抗体检测， 经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌 所需抗体的细胞。上述制备过程涉及到的 动物细胞融合、动物细胞培养 生物技术有_____________________。
【典例1】科学家通过转基因技术获得了含 有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转 基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进 行克隆(如图所示)，请结合图示回答下列 问题：
(1)在进行细胞培养时，要对取自转基因奶 牛的组织细胞进行分散处理，形成单个细胞， 胰蛋白 这个过程中需要利用________酶处理。 (2)用于核移植的供体细胞，一般都选用传 该种细胞代谢旺 代10代以内的细胞，原因是______________ 盛、分裂能力强，且遗传物质没有发生改变 ______________________________________
(5)将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎 移入受体母牛后，该母牛就会生出与供体奶 牛遗传物质相同的牛犊，但也不是100%的复 ①生物的性状受细胞核 制，原因最可能是______________________ 基因和细胞质基因共同控制； ______________________________________ ②生物的性状还受环境因素的影响 ______________________________________
动物细胞工程课件高二下学期生物人教版选择性必修3
多孔细胞培养板
从细胞培养液或 小鼠腹水中获取大量 的单克隆抗体。
筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接 种在多孔细胞培养板上培养
单克隆抗体制作的流程
注射特定的抗原
用特定的抗原对小
鼠进行免疫，并从
该小鼠的脾中得到
能产生特定抗体的B
淋巴细胞。
多种B淋巴细胞
诱导融合
培培养基进 行筛选:在该培养基上 ，未融合的亲本细胞和 融合的具有同种核的细 胞都会死亡，只有融合 的杂交瘤细胞才能生长 。
将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 多种杂交细胞
抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 (分泌的抗体能与特定抗原结
合)
将抗体检测呈阳性 的杂交瘤细胞在体 外条件下大规模培 养，或注射到小鼠 腹腔内增殖。
注射到 小鼠腹 腔内
第二次筛选 克隆化培养、抗体检测 （可进行多次）
用96孔板培养和筛选杂交瘤细胞，在每 一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞
体外培养 单克隆抗体
米尔斯坦 【英国】
科勒 【德国】
一个B淋巴细胞(产生单一的抗A的抗体)
骨髓瘤细胞能无限增殖
单克隆 抗体
动物细胞 培养技术
杂交瘤 细胞
动物细胞 融合技术
既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞
通过实验，他们得到了单克隆抗体。由于发明了单克隆抗体的制备 技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。
2.2动物细胞工程(2)
动物细胞融合技术 与单克隆抗体
旁栏思考题P49
19世纪30年代，科学家曾在患肺结 核、天花和麻疹等疾病的病人的病 理组织中观察到多核细胞。如何解 释这一现象？ 【答案】病人体内的病毒等诱导多 个体细胞融合形成了多核细胞。
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目前已经成功的实例有：
• 克隆两栖类、克隆鱼、克隆牛、羊、兔、 猴、小鼠等克隆哺乳动物。
克隆人？
• “克隆狂人”帕纳约蒂斯· 扎沃斯
克隆步骤上
克隆步骤下
5.克隆动物的研究意义：
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白
（能生产人体胰岛素的转基因牛 ）
2.改良动物品种
（世界首例能产生ω-3多不饱和脂肪酸的转基因克隆
分散成单个细胞 制成细胞悬液
10代以内， 保持正常 培养瓶培养 二倍体核 原代培养 型 胰蛋白酶处理 传代培养 部分细胞 “癌变”， 10代细胞 细胞株 遗传物质 50代细胞 改变，无 限传代 细胞系
动物细胞培养过程
动 物 组 织
胰蛋白酶 胶原蛋白酶
分散成 单个细 胞
细胞 悬液
（原代 传代 培养 胶原蛋白酶 培养 培养）
2.2动物细胞工程
动物细胞培养 （其他技术的基础） 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体
概念
组织离体,分散细胞、培养基、 细胞生长和增殖
动 物 细 胞 培 养
过程
原理 条件 应用
取什么样的组织 或细胞才有利于 动物细胞培养？
取动物组织块
为什么培养 前要将组织 剪碎组织 细胞分散成 单个细胞？
动物体细胞大都生活 在液体的环境
（1）液体培养基
与植物组织培养基相比
其特点是：
（2）含有动物血清
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
原理
植物组织培养
细胞的全能性
动物细胞培养
细胞增殖
细胞来源 培养基 培养目的 培养条件
特点（有无
分裂、脱分化）
培养结果
1.动物细胞工程技术的基础是（ C ） A、动物细胞融合 B、胚胎移植 C、动物细胞培养 D、核移植 2.下列有关动物细胞培养的叙述中正确的 是（ B ） A、动物细胞培育的目的是获得大量的细胞 分泌蛋白 B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分 散 C、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养 的过渡过程中 D、培养至50代后的传代细胞称为细胞株
2.培育克隆牛的过程中，如果供体细胞来自同一 头牛，培育出的这些个体在性状上也不完全相同， 分析其原因，下列说法不正确的是 D A．性状变异可由环境条件引起 B.基因可能会发生突变 C.受体细胞的细胞质基因不同 D.细胞核基因发生了重组
• 3.在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中， 正确的是（ ） Ｂ • A．结果是相同的 • B．杂种细胞的形成过程基本相同 • C．操作过程中酶的作用相同 • D．诱导融合的手段相同 • 3.动物细胞融合技术最重要的应用是 • A．制备单克隆抗体 A • B．制备大量的动物细胞 • C．制备胚胎 • D．进行细胞核移植
杂交瘤 细胞
既能分泌一种特异性抗体 又能无限增殖
注射抗原的目的是什么
融合后培养液中可能有 几种细胞
怎样筛选出杂交瘤细胞，杂 交瘤细胞有何优点 为何要进行多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获 得单克隆抗体的方法
免疫小 鼠
效应B淋 巴细胞
细胞融合 骨髓瘤细胞 杂交细胞 第一次 筛选 （选择性培养基）
诱导形成相应 筛选能产生所 效应B细胞 需要抗体的杂 交瘤细胞
牛在内蒙古茁壮成长）
3.治疗人类疾病，作为供体 （克隆人体器官） 4.保护濒危动物
• 雪貂利比和利丽
克隆亚洲野牛诺亚
6．体细胞核移植技术存在的问题： 1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷， 如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫 失调等。 2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性 问题。
p49讨论题
保证细胞顺利的 生长增殖
4、气体环境： 和CO （95%空气和5% CO ） O2 2 2
维持培养液的pH
动物细胞培养的应用：
• 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体） • 作为基因工程中的受体细胞 • 培养的动物细胞可以用于检测有毒物 质，判断某种物质的毒性 • 用于生理、病理、药理等方面的研究， 如培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移 植
3.下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的 是（ D ） A、用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动 物的器官或组织 B、将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理 使其分散成单个细胞 C、在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从 瓶壁上脱离，制成悬浮液 D、动物细胞培养只能传50代左右，所培养 的细胞会衰老死亡
4、在动物细胞培养过程中遗传物质发生 改变的细胞是（ A） A．细胞系 C．原代细胞 B．细胞株 D．传代细胞
四、单克隆抗体的制备
1、抗体的化学本质？
2、抗体由什么细胞产生？
3、抗体的作用特点？
4、抗体的分布？ 如何获取某种特定抗体？
抗体的传统生产方法
某抗原
输入
动物体内
浆细胞
某抗体
再从动物血清中分离抗体
特点：产量低、纯度低
1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒 设想：
B淋巴细胞——只分泌特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖
去壁
原生质体B
原生质体培养
动物细胞A
动物细胞B
物理法 化学法
生物法： 灭活的病毒
愈伤组织
杂种细胞
杂种植株
植物体细胞杂交
过程
不同DNA的两个细胞 灭活病毒（PEG）诱导细胞 融合，得到单核杂交细胞
细胞融合完 成的标志 杂交细胞进行有丝分裂
(细胞膜融合、细胞质、核融合）
• 韩国科学家黄禹锡和克隆狗Snuppy
• 伊恩· 威尔莫特和克隆羊多莉
二、动物体细胞核移植技术:
1.概念：47
2.原理： 动物细胞核的全能性 3. 胚胎细胞核移植： 细胞分化程度低 分 类 体细胞核移植： 细胞分化程度高难度高
4.过程：
取自性 状优良 个体 供体细胞培养
作用？
取供体细胞
取卵母细胞 培养到 MⅡ
多个杂交细胞
• 动物细胞融合它相当于植物体细胞
杂交的那一过程？
原生质体的融合
原理： 细胞膜的流动性
最有价值的应用： 制备单克隆抗体 意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘
杂交成为可能。
植物体细胞杂交和动物细胞融合得比较
比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 去处细胞壁后诱 导原生质体融合 动物细胞融合 细胞膜的流动性 使细胞分散后 诱导细胞融合
杂交细胞有多少 杂交瘤细胞 种类型 细胞培养（克隆）
第二次筛选 继续培养 （抗体检测） 体内培养
（腹水中）
体外培养
提取单克隆 抗体
（培养液）
单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？ • 动物细胞融合 • 动物细胞培养
单克隆抗体的应用：
优点：产量大、特异性强、灵敏度高 ①作为诊断试剂（最大用途）
卵母细胞去核
供体细胞注入去核的卵母细胞
物理或化学法
供体核进入受体卵母细胞
胚胎移植
显微注射技术
重组胚胎 代孕母牛
无需一定性状优良
生出与供体遗传物质相同的个体
思考题
细胞核移植生产的克隆动物是对体细 胞供体动物进行了100%的复制吗？为 什么？
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体 细胞核，但细胞质中还有少部分DNA （如线粒体DNA），来自受体卵母细胞.
5.贴壁细胞的分裂方式属于（ B ） A.无丝分裂 B.有丝分裂 C.减数分裂 D.增殖
6.在动物细胞培养过程中，会发生遗传
• • • •
物质改变的细胞是 ( A) A．50代后的传代细胞 B．10─50代内的传代细胞 C．原代细胞 D．10代内的传代细胞
7.动物细胞培养和植物组织培养最主要的相 同点和不同点是（ D ） • A、理论基础相同，培养基成分不同 • B.理论基础相同，最终目的不同 • C.均需无菌条件，最终结果不同 • D.均需无菌条件，培养基不同
诱导方法
用途 意义
物理（离心、振荡、 物理、化学方法 电刺激） （同左） 化学（聚乙二醇） 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体
解决远源杂交不亲和的问题
过程
不同DNA的两个细胞 灭活病毒（PEG）诱导细胞 融合，得到单核杂交细胞
(细胞膜融合、细胞质、核融合）
杂交细胞进行有丝分裂
多个杂交细胞
1．能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 A.离心 B.灭活的病毒 B C.电刺激 D.振动
• 1.为使核移植的胚胎或动物的遗传物 质基本全部来自有重要利用价值的动 物供体细胞。
• 2.10代以内的细胞一般能保持正常的 二倍体核型，10-50代左右时，部分细 胞核型可能发生变化。
三、动物细胞融合（细胞杂交）
概念： 是指两个或多个动物细胞结合形成 一个单核的杂交细胞的过程。
动物细胞融合
植物细胞A 植物细胞B
3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单 克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（ A ）
A.经过免疫的B淋巴细胞
B.没经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
4下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：
（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得 效应B 抗体 __________细胞，该细胞能够产生___________。 从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射 抗原 _____________类物质。 细胞融合 （2）B过程是一个____________过程，该过程的 进行需要灭活的_____或_______________的诱导 病毒 聚乙二醇（PEG） 。
胰蛋白酶
原理： 细胞增殖（有丝分裂） 结果：
动物细胞培养最终不 能得到完整动物个体
细胞群，细胞产物
动物细胞培养的条件：
1、无菌、无毒： （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、全部的营养物质：