不同产地茯苓中萜类成分的HPLC指纹图谱研究
中药指纹图谱的原理与应用
气相色谱(GC)以气体为流动相，对于含挥发性 成分中药的鉴别具有一定优势。由于裂解气相 色谱具有操作简便、样品无须化学前处理、提 供信息量大等优点而格外引人注目。该方法将 样品故人裂解器内，在一定的条件下将样品加 热使其瞬间裂解，生成可挥发性的小分子物质， 立即被载气带人气相色谱系统的分析柱上，分 离后得到具有指纹性质的裂解气相色谱图。如 果将气相色谱与质谱、傅立叶变换红外光谱联 用，则不但可以知道不同中药中挥发性成分的 差别，而且可以对这些成分进行鉴定。
高速逆流色谱指纹图谱(HSCCC fingerprintspectrum， 即调整逆流色谱法) HSCCC利用动态液-液分配原理分 离样品，其分离度和重现性与HPLC类似，但样品前处 理简单。具体地说它是一种基于液-液多级逆流萃取建 立的色谱体系，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作分离柱，
在行星式运动中连续地完成整个分配、传递、分离过
中药指纹图谱，即中药身份证，主要指中 药化学指纹图谱，实际上是一种保证中药质量 的措施，是指对某种中药材或中成药等运用现 代分离分析科学的手段，得到能够标示该中药 的色谱或光谱的图谱，最终用来对中药质量评 价的科学性方式。它有两个显著特点，一是通 过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪 或产地。二是通过指纹图谱主要特征峰的面积 或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保 产品质量的相对一致。
对这种中药材的分子遗传标记的研究，找到具有该种高度特异性
的片段，便可以此为基础，制备出对该种高度特异性的寡核苷酸 探针，再经分子杂交进行指纹分析，即可达到鉴别目的。DNA指 纹图具有高度的个体特异性。DNA指纹图谱技术包括AP-PCR(arb itrary primer PCR，任意引物聚合酶链式反应)和RAPD(随机扩增 多态性DNA，randomly amplified polymorphic DNA)两种指纹图谱 技术。RFLP (限制性[内切酶]片段长度多态性，restriction fragment length polymorphism)是最常用的构建DNA指纹图的方法，但该法 费时费力，使应用受到限制。随机扩增多态DNA(RAPD)标记，可 以在特异DNA序列尚不清楚的情况下，检测DNA的多态性，这是
中药色谱指纹图谱相似度评价系统
中药色谱指纹图谱相似度评价系统国家药典委员会翟为民背景国家食品药品监督管理局于2000年先后下达“关于加强中药注册管理有关事宜的通知”（国药管注［2000］157号）和关于印发《中药注射剂色谱指纹图谱研究的技术要号）和“关于印发《中药注射剂色谱指纹图谱研究的技术要求》的通知”（国药管注［2000］348号）文件。
国家药典委员会负责组织实施“已批准生产的中药注射剂质量标准的提高完善及指纹图谱工作”及牵头组织“已批准多家生产的中药注射剂，其指纹图谱联合起草工作”。
国家药典委员会从2000年12月起开始组织实施，进行了可行性调研、规范性技术文件起草与研究、同布进行了科技部立项。
从中药注射剂的指纹图谱研究质量标准提高逐步从中药注射剂的指纹图谱研究、质量标准提高，逐步成熟、扩展，到2010版药典，部分提取物和中成药标准中都收载了指纹图谱项目，为发挥着积极的作用。
1、论证1论证首先进行调研，多次召开研讨会，代表涉及科研院所、中央和省级药品检验所及企业科技人员。
形成共识：央和省级药品检验所及企业科技人员形成共识：①重点-色谱指纹图谱；②理论上可行。
②理论上可行③通过实践，检验可行性，不断完善。
2、修订《中药注射剂指纹图谱研究技术要求》（国药谱管注［2000］348号）①优化、方法验证，细化参数、明确要求。
②解决手工计算“共有峰”、“非共有峰”面积工作中大量的人为因素，改变“只见树木不见森林”的局面，力求量的人为因素改变“只见树木不见森林”的局面力求反映整体质量特性。
二规范性技术文件起草与研究工作二、规范性技术文件起草与研究工作1、修订修订稿就原料药材、半成品、成品的样品收集、制备、参照物的选择，指纹图谱试验条件，对实验室的要求，对仪器的要求，试验方法和试验条件的建立及验证，色谱条件的优选，指纹图谱的建立和验证、识别、计算和复核，标准书写格式指纹图谱的建立和验证识别计算和复核标准书写格式等进行了详尽的细化规定，起草稿经广泛征求意见，先后进行了多次修改得以完成。
5_第五章_中药的指纹图谱研究-20130310
3．特征指纹峰
是中药材或饮片所有供试品图谱中均存在的色谱 峰，可以认为它们是该中药材品种所特有，称之 为特征指纹峰。 特征指纹是指由一系列特征指纹峰所组成的固定 峰群，实现了从多组分的角度来反映中药材或饮 片内在特征的目标，为中药材或饮片品种鉴定， 特别是同属不同种或含相同有效成分不同种的药 材的鉴别，提供更多更细致的信息和依据。
4
基本属性：整体性和模糊性 。即：多个成 分以相对稳定的比例及位置顺序的完整性 特征；在共同特征的基础上个体之间又互 有差异的模糊性特征。
特点：不要求对每个峰进行归属，不要求 知道每个组分的化学结构，也不需要对每 个组分精确定量，但要求图谱具有系统性、 特征性、稳定性。
5
建立指纹图谱的目的和意义
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为了有助于辨认和匹配，峰保留时间的波动应控 制在该峰保留时间的±5％～±10％。 选择参照物或在同一色谱中选一个适当的色谱峰 作为内参照物，计算特征峰的相对保留时间和相 对峰面积比，考察指纹图谱的稳定性和重复性。 以特征峰的相对保留时间和相对峰面积比作为参 数，峰面积大于10%的峰规定其相对峰面积值的 范围，建立对照用指纹图谱（共有模式），且用 以判断样品的真实性。
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三、历史沿革与发展趋势
指纹图谱分析是中药鉴别技术的循序发展和延伸。
90年版 《中国药 85年版《中 典》，TLC 国药典》， 增加了对 对照品对照 照药材 20 世纪 70 的TLC 年 代 ， TLC 初 步 尝试
95年版 《中国药 典》后提 出中药指 纹图谱的 概念
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三、历史沿革与发展趋势
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（三）指纹图谱相似度评价
相似度是中药材供试品指纹图谱与对照指纹图 谱共有模式的相似性的量度。 相似度比较属模糊信息分析法的一种，可以量 化描述指纹图谱相似性，即客观的数字化描述。
HPLC指纹图谱相似度研究
高效液相色谱仪 : W aters 600 型 , 996 二极管阵
列检测器 ,美国 W aters公司 ;
电子分析天平 : GB3002型 ,瑞士梅特勒 - 托利
多仪器有限公司 ;
金银花 :自购 ;
甲醇 、磷酸 :分析纯 ;
乙醇 :分析纯 ;
试验用水为蒸馏水 。
1. 2 色谱条件
7# 0. 957 0. 952 0. 948 0. 947 0. 942 0. 995 1
指纹图谱得到广泛应用的前提 。利用向量夹角法计
算的 HPLC指纹图谱的相似度能够定量地对获得的 指纹图谱进行科学有效的评价 。从图 1中可以看出 提取物中有多种成分 ,从外形看不同指纹图谱之间 比较相似 。从表 2 中可以看出 ,不同金银花提取物 的 HPLC指纹图谱相似度都在 0. 94以上 ,说明不同 金银花在有效成分及含量方面的一致性 。从表 2中 还可以看出 ,利用向量夹角法计算的同种金银花相 似度都为 1,从另一个方面印证了向量夹角法计算 的相似度的准确性 。利用向量夹角法计算 HPLC指 纹图谱的相似度能够定量地对获得的指纹图谱进行
如果 co sθ越接近 1则说明两个向量越相似 [ 1 ] 。 2. 2 指纹图谱 按 1. 2 色谱条件进样分析 , 7 种不同金银花提 取物的色谱图见图 1,以峰面积进行归一化 ,每组色 谱的相对峰面积结果见表 1。
图 1 色谱图 表 1 不同金银花提取物色谱的相对峰面积向量
图谱 编号
相对峰面积向量 ( x1 , x2 , x3 , ……, x20 )
1#
0, 8. 57, 5. 23, 0. 98, 0. 73, 0. 38, 5. 21, 1. 97, 0. 67, 2. 53, 0. 73, 27. 51, 0, 1. 41, 27. 98, 4. 7, 1. 15, 3. 57, 1. 62, 0. 65
中药制剂分析试卷一
河南中医学院 2006 至 2007学年第 一 学期《中药制剂分析》试题（供03级中药专业使用）学号： 姓名： 座号：系别： 年级：总分合计人： A 型题（每小题1分，共20分） A 、B 、C 、D 、E 五个备选答案，请从中选择一个1．中药制剂分析的任务是（ ）A ．对中药制剂的原料进行质量分析B ．对中药制剂的半成品进行质量分析C ．对中药制剂的成品进行质量分析D ．对中药制剂的各个环节进行质量分析E ．对中药制剂的体内代谢过程进行质量检测2．中药制剂分析的主要对象是（ ）A ．中药制剂中的有效成分B ．影响中药制剂疗效和质量的化学成分C ．中药制剂中的毒性成分D ．中药制剂中的贵重药材E ．中药制剂中的指标性成分3. 纸色谱法是以下列哪种物质为固定相（ ）A.纸B.水C.乙醇D.酸E.硅胶4. 中药制剂的显微鉴别最适用于（ ）A ．用药材提取物制成制剂的鉴别B ．用水煎法制成制剂的鉴别C ．用制取挥发油方法制成制剂的鉴别D ．用蒸馏法制成制剂的鉴别E ．含有原生药粉的制剂的鉴别 5．砷盐检查法中加入KI 的目的是（ ）A. 除H2SB. 将五价砷还原为三价砷C. 使砷斑清晰D. 在锌粒表面形成合金E. 使氢气发生速度加快 6．在薄层层析中，边缘效应产生的主要原因是（ ）A 、点样量过大B 、展开剂pH 值过高C 、混合展开剂配比不合适D 、展剂 （ ）A. 硫代乙酰胺B. 氯化钡C. 硫化钠 D. 氯化铝 E. 硫酸钠8．应用HPLC 法进行中药制剂有效成分含量测定，最常用的定量方法是 （ ）A 、外标法B 、内标法C 、归一化法D 、校正因子法E 、内加法9．中药制剂分析中下列哪些成分的含量最适合采用HPLC 法测定 （ ）A 、冰片B 、炽灼残渣C 、总生物碱D 、黄芩苷、葛根素等单体成分E 、重金属元素10．通常不用混合溶剂提取的方法是（ ）Ａ.冷浸法 Ｂ.回流提取法Ｃ.超声提取法Ｄ连续回流提取法 Ｅ.超临界提取法11．回收率试验是在已知被测物含量（A ）的试样中加入一定量（B ）的被测物对照品进行测定，得总量（C ），则Ａ.回收率(％)＝(C －B)/A ×100%B. 回收率(％)＝(C －A)/B ×100%C. 回收率(％)＝B/(C－A)×100%D. 回收率(％)＝A/(C－B)×100%E. 回收率(％)＝(A＋B)/C×100%12．GC法或HPLC法用于中药制剂的含量测定时，定量的依据一般是（）A、峰面积B、保留时间C、分离度D、理论塔板数E、拖尾因子13．可用于中药制剂中总生物碱的含量测定方法是（）A. 反相高效液相色谱法B.薄层色谱法C. 气相色谱法D. 正相高效液相色谱法E. 分光光度法14．生物碱雷氏盐比色法溶解沉淀的溶液是（）A. 酸水液B. 碱水液C. 丙酮D. 氯仿E. 正丁醇15．用C18柱进行生物碱HPLC测定时，为克服游离硅醇基影响可采用（）A. 流动相中加二乙胺B. 调整流速C. 调整检测波长D.调整进样量E. 改变流动相极性16．天然牛黄与人工培育牛黄相比其化学成分与药理作用（）A、有较大差异B、差异较少C、无很大差异D、个别成分有差异E、基本一致17．合剂与口服液最常用的净化方法为（）A. 液—固萃取B. 液—液萃取C. 蒸馏法D. 沉淀法E. 升华法18．颗粒剂提取时，由于含有较多的糖、糊精或其他辅料，应注意提取溶剂的A. 沸点B. 渗透性C. 相对密度D. 极性E. 粘度19．《中国药典》2005年版中，含量测定应用最多的方法是（）20．外用药和剧毒药不描述（）A.颜色B.形态C.形状D.气二、试题类型：X型题（每小题1分（每一道试题下面有A、B、C、D、项是符合题目要求的，并将其字母标21．质量标准本身具有的特性为（）A.权威性B.科学性C.进展性D.稳定性E.可控性22．制定质量标准的前提是（）A.药物组成固定B. 药物有特异性成分C.制备工艺稳定D. 原料稳定E.具有简单有效的检测方法23．中药制剂分析的特点是（）Ａ．化学成分的多样性和复杂性B．有效成分的单一性C．原料药材质量的差异性D．制剂杂质来源的多途径性E．制剂工艺及辅料的特殊性24．影响薄层色谱分析的主要因素有（）A.样品预处理及供试液制备B.薄层色谱的点样技术C.吸附剂的活性与相对湿度的影响D.温度的影响E.样品的光谱数据25．中药制剂的杂质来源途径包括（）A. 中药材原料质量差别B. 在合成药的过程中未反应完全的原料C. 包装、运输及贮存过程中受外界条件的影响而使中药制剂的理化性质发生改变D. 生产过程中的机器磨损E. 药物在高温灭菌过程中发生水解26．下列关于分析方法效能指标的概念描述正确的有（）A.在大多数情况下我们研究分析方法的精密度是指重现性B.被法定标准采用的分析方法是进行过重现性试验的或通过协同检验的C.选择性是指在样品中有其他组分共存时，该分析方法对被测物准确而专属的测定能力D.选择性是指分析方法用于复杂样品分析时相互干扰程度的量度E.耐用性是指在测定条件有小的变动时，测定结果受影响的承受能力27．HPLC 色谱仪常用的紫外检测器具有哪些优点 （ ）A .稳定性好 B.线性范围宽 C.对流速变化敏感 D.灵敏度高 E.重现性好28．生物碱采用酸性染料比色法测定时主要的影响因素有 （ ）A. 反应时间B. 反应介质的pH 值C. 反应温度D. 生物碱与酸性染料结合的能力E. 有机溶剂与离子对形成氢键的能力 29．下列注射剂检查项目中属于一般要求的检查项目有 （ ）A. 澄明度检查B. 无菌试验C. 不溶性微粒检查D. 鞣质检查E. 装量差异 30．目前中药指纹图谱研究的方法主要有A TLC 指纹图谱B HPLC 指纹图谱 C GC 指纹图谱D MS 指纹图谱E DNA 指纹图谱三、试题类型：填空题（每空1分，共10分）31．国家药品标准包括 和 。
211216254_茯苓化学成分及药理作用研究进展
Research Progress in ChemicalConstituents and Pharmacological Effects of Poria CocosLIU Qi ，GENG Xiaotong ，HUA Jiaojiao ，ZHANG Wenwen ，ZHAO Liping *（School of Pharmaceutical Engineering ，Xinyang Agricultural and Forestry University ，Xinyang 464000，China ）Abstract ：Poria cocos is the dry sclerotium of Poria cocos ，a fungus belonging to the family of porobacteriaceae.It has a variety of chemical components such as polysaccharides ，triterpenes ，volatile oil ，and has many pharmacological effects such as hypoglycemic ，lipid-lowering ，anti-tumor ，anti-heart failure ，treatment of gynecological diseases ，liver protection ，immunity ，sedation ，and so on.In this paper ，the chemical composition and pharmacological action of Poria cocos are reviewed to provide reference for the study of Poria cocos.Key words ：poria cocos ；chemical composition ；pharmacological action茯苓化学成分及药理作用研究进展刘琦，耿晓桐，花娇娇，张雯雯，赵丽平*（信阳农林学院制药工程学院，河南信阳464000）【摘要】茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，含有多糖、三萜类、挥发油等多种化学成分，具有降糖、降血脂、抗肿瘤、抗心衰、治疗妇科疾病、保肝、免疫、镇静等多种药理作用。
HPLC指纹图谱结合主成分分析对不同产地头顶一颗珠质量的评价
HPLC指纹图谱结合主成分分析对不同产地头顶一颗珠质量的评价目的通过HPLC指纹图谱结合主成分分析（PCA）对不同产地头顶一颗珠药材的质量进行评价，为其质量控制提供依据。
方法采用Hibar C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为203 nm，柱温为30 ℃，利用相似度评价软件和PCA对14批头顶一颗珠药材检测结果进行分析比较。
结果HPLC指纹图谱的方法学考察符合相关要求，共标定了头顶一颗珠药材HPLC指纹图谱的15个共有峰，14批药材的相似度为0.389～0.979。
PCA结果显示前3个主成分的累积方差贡献率为87.674%，S2样品综合得分最高（4.926）、质量最好。
结论所建立的HPLC指纹图谱结合PCA可以客观、有效地评价不同产地头顶一颗珠药材的质量。
Abstract：Objective To evaluate the quality coherence of Trillium tschonoskii Maxim. from different producing areas by HPLC fingerprint and PCA；To provide a method for quality control. Methods Samples were separated by Hibar C18 （4.6 mm × 250 mm，5 ?m）with acetonitrile-water as gradient mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The wavelength was 203 nm and the temperature was 30 ℃. Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System and PCA were used to analyze the data. Results The results of method validation of HPLC fingerprint met technical standards. 15 common peaks was verified and the similarities of 14 batches of Trillium tschonoskii Maxim. from different producing areas were among 0.389–0.979. 3 principal components with the characteristic root cumulative contribution rate reaching 87.674% were screened out by PCA results. The composite score of S2 was the highest （4.926），and the quality was the best. Conclusion The application of HPLC combined with PCA can objectively and effectively evaluate the quality difference of Trillium tschonoskii Maxim. from different producing areas.Key words：Trillium tschonoskii Maxim.；fingerprint；HPLC；principal component analysis；similarity analysis头顶一颗珠，又名芋儿七，为百合科延龄草属植物延龄草Trillium tschonoskii Maxim.的干燥根和根茎，主要分布于我国陕、川、鄂、湘等地，是土家族、苗族等少数民族常用药材。
中药现代化技术-中药指纹图谱技术
紫外光谱指纹图谱 紫外光谱是由分子中价电子 的跃迁而产生的一种光谱，它依靠图谱上吸收峰 的位置和吸收光谱的吸收强度来分析鉴别样品， 具有实用性强、可靠灵敏、无污染、重现性好等 特点。
彭文进等研究了紫外指纹图谱技术在长生露口 服液鉴别及质量控制中的应用，建立了长生露口 服液的质量控制紫外光谱指纹图谱。
刘向华等分别从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动 物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取DNA，经PCR扩 增得到400bp的12srRNA基因片段，并对该基因 片段进行测序研究，结果表明同一动物的胆衣和 胆汁、肌肉和胆汁的碱基序列完全一致，所以可 依次用于鉴别中药材蛇胆和胆汁。
展望
中药指纹图谱技术在中药质量控制领域以及药 效学研究方面有着不可或缺的作用，中药指纹图 谱技术是中药现代化发展必不可少的手段。
核磁共振指纹图谱 核磁共振指纹图谱主要用于 纯化合物的结构鉴定，可以反映出有机分子中氢 或碳的类型。中药材及其制剂的核磁共振谱是多 种化合物核磁共振的叠加。
江洪波采用1 H － NMＲ 建立了不同产地麦冬 甲醇提取物的指纹图谱，并对不同品种、产地的 样品进行分析，结果表明不同麦冬品种、不同产
地 1 H － NMＲ指纹图谱有较大的差异，可以 此区分，故1 H － NMＲ指纹图谱不但可以鉴 定不同麦冬品种，还可以区分不同产地的麦冬 。
图谱
中
核磁共振波谱法 气相色谱法
药
电化学法
毛细管电泳法
指
纹
图
谱
中药生物指纹 图谱
基因组学指纹图谱 蛋白质组学指纹图谱
DNA 指纹图谱
测定方法及运用
红外光谱指纹图谱 主要是利用红外光谱仪分析 、测定中药材及其制剂而得到的光谱图。通过比 较光谱中各吸收峰的位置及强度来鉴定中药材及 其制剂的真伪。
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【药学研究】 基金项目:湖北省科学技术委员会攻关项目,[2002AA304A04] 作者简介:许腊英(19522),女,湖北中医学院药学院教授。
不同产地茯苓中萜类成分的HP LC 指纹图谱研究许腊英,万 芳,付文强,毛 翼,胡 静,李 凯(湖北中医学院药学院,湖北武汉430065) 摘要:目的 比较不同产地茯苓中萜类成分的HP LC 指纹图谱。
方法 用高效液相色谱法分析10批英山G AP 产地的茯苓药材,建立共有模式,并和其它产地茯苓药材的指纹图谱进行比较。
结果 英山G AP 产地茯苓药材的指纹图谱稳定性好,不同产地茯苓药材的指纹图谱中典型色谱峰较一致,但峰面积存在差异。
结论 所建立的指纹图谱可用于茯苓药材的质量控制。
关键词:茯苓;高效液相色谱;指纹图谱中图分类号:R282171 文献标识码:A 文章编号:1008-987X (2007)02-0041-02The S tudy o n F i nge r p ri n t A tl a s o f D i ffe ren t Hab ita taPo ri a Co co s’Te r p eno i d by HPLCXU Naying,et al(The School of Phar macol ogy,Hubei Collge of T C M ,W uhan,Hubei,430065)Ab s trac t:O b j e c ti ve:To compare the finger p rint atlas of different habitat poria cocos’ter penoid by HP LC 1M ethods:The mutual mode of HP LC finger p rint is set up after ten batches of poris fr om Yingshan County are analyzed by HP LC with the com 2paris on t o that fr om different habitats .Results:The HP LC finger p rint of ter peni od on poria fr om Yingshan County shows stable quality .The characteristic peak in finger p rint of different habitats is accordance,but the peak area is different .Conclusi ons:The HP LC finger p rint can be used f or the quality evaluati on of poria cocos .Ke y wo rd s:Poria cocos;HP LC;Finger p rint 茯苓为多孔菌科植物茯苓Poriacocs (Sch w 1)Wolf 的干燥菌核,其主要化学成分为多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等。
有研究表明,其所含的大量三萜类物质具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎等作用[1]。
传统认为茯苓以云南为道地产区,但发展人工栽培以来,湖北、安徽均建立了G AP 示范产地,成为茯苓的主产区。
本实验以英山G AP 产地的茯苓为主要研究对象,探讨不同产地茯苓药材指纹图谱的异同点,提供茯苓的鉴别指标。
1 材料与方法111 仪器与试剂D I O NEX 高效液相色谱仪,170u 可见紫外检测器,Peak Net色谱工作站,超声提取器。
甲醇、磷酸均为分析纯,乙腈为色谱纯,水为重蒸水。
茯苓药材为湖北、安徽、天津等市场商品,共15个样品,见表1。
经鉴定均为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。
112 色谱分析条件色谱柱:Scienhome C 18(250mm ×416mm,5μm );流动相:乙腈2015%磷酸水溶液进行梯度洗脱,见表2;流速:110m l/m in;柱温:30℃;检测波长:243n m;进样量:20μl 。
113 供试品溶液的制备将茯苓药材均匀粉碎,过80目筛,取茯苓粉末110g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇30m l,称定重量,超声提取30m in,再次称重,用甲醇补足减失的重量,过滤,取续滤液用0145μm 微孔滤膜滤过,即得。
表1 茯苓药材来源样品编号产地或收集地1-10湖北英山G AP 产地11湖北罗田12湖北罗田13安徽岳西14天津(产地不详)15北京(产地不详)表2 梯度洗脱条件时间(m in )乙腈(%)015%磷酸溶液(%)05050106040357040609552 结果211 稳定性试验・14・2007年9月第9卷第3期sep te mber 12007,Vol 19,No 13 湖北中医学院学报Journal of Hubei College of TC M取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8、12、24h进行检测,记录各共有色谱峰保留时间和峰面积,通过分析,24h内共有峰的相对保留时间的RS D值均小于015%,相对峰面积的RS D值均小于310%,表明常温下供试品溶液在24h内保持稳定。
212 精密度试验取同一供试品溶液,连续进样6次,各色谱峰的相对保留时间及相对峰面积的RS D值均小于210%,表明仪器精密度良好。
213 重现性试验取同一批号的供试品5份,分别按供试品溶液制备方法制备,进行检测,各色谱峰的相对保留时间及相对峰面积的RS D值均小于310%,说明本方法具有较好的重现性。
214 茯苓萜类高效液相色谱指纹图谱的分析21411 指纹图谱的制备 分别精密吸取15批供试品溶液20μl,注入高效液相色谱仪,考察120m in内供试品溶液的色谱图,供试品溶液在上述色谱条件下60m in后无特征峰出现,故记录60m in的色谱图,即得(见图1、图2)。
21412 指纹图谱特征峰的标定及15批样品的特征峰的相对保留时间及相对峰面积 根据15批供试品的高效液相图谱所给出的相关参数,15批样品指纹特征相互间较为吻合,其中共有的典型色谱峰共20个,分别出现在7123、8151、9172、10129、11105、13146、14108、16168、18128、18180、20146、22161、23124、25159、26179、29118、40124、42160、51112、52183min。
共有峰面积占总峰面积的百分比均在90%以上。
其中,保留时间为4216min的色谱峰分离较好,保留时间的RS D=0115%,相对峰面积的RS D小于其它面积,比较稳定,且相对峰面积较大,故选择保留时间为4216min的色谱峰为参照峰。
以保留时间为42160m in的色谱峰为参照来计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积,其中相对保留时间的RS D值均小于014%,但有些特征峰相对峰面积的RS D值较大。
21413 指纹图谱相似度评价:采用中位数方法计算指纹图谱共有模式(见图3),并进行相似度评价,1-10号样品的指纹图谱与其共有模式的相似度值分别为01962、01990、01959、01974、01981、01971、01989、01992、01971、01946。
结果表明不同批号的英山G AP产地茯苓药材指纹图谱的相似度均大于01940,说明英山G AP产地不同批号间茯苓药材的成分一致性良好。
3 讨论311 样品提取溶剂、时间和方法的选择笔者考察了甲醇、乙醚两种溶剂和超声提取法,加热回流法以及提取时间,结果表明以甲醇为溶剂超声提取效果较好,且提取时间为30m in和60m in得到的色谱图无明显变化,故选择甲醇超声提取30m in。
312 流动相的选择根据文献[2-3]选择了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-015%磷酸作流动相进行比较,由于茯苓的甲醇提取物成分较多,在等梯度条件下难分离且出峰时间较长,故选择梯度洗脱。
选择乙腈-015%磷酸作为流动相时基线漂移较小,峰形有显著改善,而且在该色谱条件下所得色谱图中各特征峰分离度较好,特征峰较多,故选择乙腈-015%磷酸作为流动相进行梯度洗脱。
313 不同产地批纹图谱比较对G AP产地茯苓指纹图谱的共有模式和5批其它产地茯苓的指纹图谱进行比较,图谱中色谱峰数量及位置均大致相同,罗田产地与英山G AP产地茯苓指纹图谱的特征峰峰面积之间有差异但不明显,安徽及其它产地茯苓的指纹图谱中保留时间为22161、25159、52183m in的色谱峰与英山G AP产地茯苓相比差异显著,其峰面积明显高于G AP产地茯苓。
结果表明不同产地的茯苓中萜类成分非常相似,某些成分差异显著,通过这些特征可对茯苓药材进行鉴别,10批比英山G AP基地茯苓的采收贮存时间差异较大,但所得指纹图谱一致性仍然很好,说明英山G AP产地茯苓的质量稳定性良好。
参考文献:[1] 张思访,刘静涵,蒋建勤,等1茯苓的化学成分和药理作用及开发利用[J]1中华实用中西医杂志,2005,18(2):22722301[2] 王少军,段启,曹君,等1茯苓皮中三萜酸类成分HP LC指纹图谱的方法学研究[J]1中药新药与临床药理,2005,16(1):532551[3] 杨冉,李建军,屈凌波,等1茯苓萜类的高效液相色谱指纹图谱研究[J]1中草药,2004,35(3):27322751(收稿日期:200⑹-12-05 编辑:郑晓屏)・24・湖北中医学院学报 2007年第9卷第3期。