抗原或抗体的检测
ELISA试验方法
ELISA试验方法ELISA试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），也称酶联免疫吸附试验，是一种常用于检测抗原或抗体的敏感且特异性的实验方法。
ELISA试验既可以用于研究基础科学，也可以应用于诊断医学、生物制药、科研开发等领域。
第一步：固相吸附首先，将特异性抗原或抗体加入固相载体，如微孔板或磁珠，通过吸附作用将其固定在载体上，形成固相。
然后，将未被吸附的地方进行阻断，例如使用牛血清蛋白（BSA）或胸腺素等阻断剂来封闭非特异性结合位点，减少非特异性结合。
第二步：样品加入将待检样品加入固相，并充分与特异性抗原或抗体反应。
如果待检物是抗原，则待检样品中存在的特异性抗体会与固相上的抗原结合。
如果待检物是抗体，则待检样品中存在的抗原会与固相上的抗体结合。
第三步：洗涤通过反复洗涤固相，去除非特异性结合的物质，确保只有特异性结合物留在固相上。
典型的洗涤液包括缓冲盐水或洗涤缓冲液。
第四步：二抗加入将经过酶标记的二抗加入固相，使其与特异性结合的抗原或抗体结合。
酶标记的二抗可以与特异性结合物形成二抗-抗原或二抗-抗体复合物。
第五步：洗涤再次进行洗涤步骤，去除非特异性结合的酶标记的二抗，确保只有特异性结合的复合物留在固相上。
第六步：底物加入将含有底物的反应物加入固相，使其与酶标记的二抗发生反应。
底物与酶标记的二抗之间的反应产生颜色变化，即可定性或定量检测待检物质的存在和浓度。
第七步：反应停止通过加入反应停止剂，停止酶反应，阻止进一步的底物转化为产物。
产物的生成量与待检物质的浓度成正比。
最后，通过光度计或酶标仪等检测设备，测量产生的颜色变化的光密度，可以定性或定量计算待检物质的存在和浓度。
ELISA试验具有高度的敏感性和特异性，能够检测低浓度的抗原或抗体。
它的操作简单、重复性好，广泛应用于生物医学研究、临床检测、植物检测、食品检测等领域。
不过需要注意的是，ELISA试验的结果受到很多因素的影响，如抗体的质量和纯度、试剂的质量和保存条件等，因此在进行ELISA试验时需要严格控制实验条件，保证结果的准确性和可重复性。
抗原抗体检测的基本原理
抗原抗体检测的基本原理抗原抗体检测是基于免疫学的原理。
当人体受到外界抗原刺激时，免疫系统会产生特异性的抗体来与抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
这种抗原-抗体相互作用是高度特异的，抗体只与特定的抗原结合。
这种特异性的抗原-抗体相互作用是抗原抗体检测的基础。
直接检测是通过将特异性抗体与抗原直接结合来进行检测。
首先，目标抗原会被提取出来，并固定在试验板或表面上。
然后，添加已知与目标抗原特异性结合的荧光标记或酶标记的抗体，使其与目标抗原发生结合。
经过洗涤和处理之后，如果目标抗原存在，荧光信号或酶的底物会发生变化，可以通过荧光显微镜或酶标仪来测量信号的强度，从而判断目标抗原的存在。
间接检测是通过将特异性抗体与抗原结合，然后再用被标记上标记物的次级抗体结合到已结合的抗原-抗体复合物来进行检测。
首先，目标抗原会被固定在试验板或表面上。
然后，添加已知与目标抗原特异性结合的初级抗体，使其与目标抗原发生结合。
经过洗涤之后，再添加与初级抗体特异性结合的次级抗体，该次级抗体通常被标记上荧光标记或酶标记。
经过洗涤和处理之后，如果目标抗原存在，荧光信号或酶的底物会发生变化，可以通过荧光显微镜或酶标仪来测量信号的强度，从而判断目标抗原的存在。
抗原抗体检测的基本原理是依赖特异性抗体与抗原的结合作用。
抗体是由免疫系统产生的一类蛋白质，可以识别和结合抗原。
抗原则是对生物体产生免疫应答的分子，可以是细菌、病毒、细胞表面的蛋白质等。
免疫系统会通过识别抗原并产生相应的抗体来保护机体免受致病微生物的侵袭。
抗原抗体检测在临床应用中具有广泛的用途。
例如，它可以用于疾病的早期诊断，如癌症、感染性疾病等。
通过检测血液中特定抗原或抗体的存在，可以确定是否存在相应的疾病。
此外，抗原抗体检测还可以用于评估个体的免疫状态，例如检测疫苗接种后的抗体水平，以确定个体是否具有免疫保护力。
此外，抗原抗体检测还可以用于监测感染，例如检测HIV、乙肝病毒等病原体的存在，以及评估治疗的效果。
免疫检测技术的基本原理
免疫检测技术的基本原理1.抗原与抗体的特异性结合：免疫检测首先需要获得特定的抗体，该抗体与特定的抗原结合。
抗原可以是病原体的蛋白质或其他特定分子，也可以是细胞表面的标记分子。
抗体与抗原结合时形成免疫复合物，这种结合是高度特异性的，可以通过这种复合物实现对抗原的检测。
2.标记物的选择：在免疫检测中，通常需要选择一种标记物来标记抗体或抗原。
常用的标记物包括放射性同位素、荧光染料、酶和金纳米颗粒等。
标记物的选择需要考虑到标记物的稳定性、灵敏度和安全性等因素。
3.免疫反应的检测方法：免疫检测方法包括放射免疫测定法（RIA）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、荧光免疫测定法和免疫组化等。
不同的检测方法适用于不同的实验需求，选择适当的方法可以提高检测的灵敏度和特异性。
4.检测结果的定量或定性分析：通过检测生成的信号，可以对抗原或抗体进行定量或定性分析。
定量分析通常测定免疫反应的信号强度来判断抗原或抗体的浓度，定性分析则仅判断免疫反应是否发生。
免疫检测技术在临床诊断、疫苗研发、药物研发等领域有着广泛的应用。
例如，在临床上，免疫检测技术可以用于检测病毒感染、细胞因子水平、肿瘤标志物等，为疾病的早期诊断和治疗提供依据。
在疫苗研发中，免疫检测可以评估疫苗的免疫原性和免疫保护效果。
在药物研发中，免疫检测可以用于评估药物对免疫系统的影响。
总而言之，免疫检测技术是一种基于免疫学原理的生物学技术，基于抗原与抗体之间的高度特异性和亲和性进行定量或定性检测。
通过选择合适的抗体和标记物，并使用适当的检测方法，可以实现对抗原或抗体的准确检测和分析，为生物学研究和临床诊断提供有力的工具。
高中二年级生物抗原或抗体的检测
抗原或抗体的检测一、检测的原理借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。
1．抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。
抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。
空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。
互补程度高，则亲和力强。
此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。
高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。
2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。
定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。
若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。
同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。
（1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比。
也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。
可用实验性标准曲线推算出样品中抗原（或抗体）的含量。
如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。
（2）抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。
在实际工作中，把浓度低的反应成分（抗原或抗体）的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。
常用的抗原抗体检测方法
常用的抗原抗体检测方法抗原抗体检测是生物医学领域中常见的技术手段，主要用于检测样品中是否含有特定的抗原或抗体。
以下是几种常用的抗原抗体检测方法：1、酶联免疫吸附法（ELISA）：这种方法利用酶作为标记物，与抗原或抗体结合，通过酶催化底物反应产生颜色变化，从而检测抗原或抗体的存在。
ELISA 方法具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，因此在临床诊断、生物制品检测等领域广泛应用。
2、免疫荧光技术：该技术通过荧光物质标记抗原或抗体，利用荧光显微镜观察荧光信号，检测抗原或抗体的存在。
免疫荧光技术具有高灵敏度、高特异性、无放射性等优点，常用于组织切片、细胞表面抗原或抗体的检测。
3、放射免疫分析法：这种方法利用放射性同位素标记抗原或抗体，通过与样品中的抗原或抗体结合后，用放射性检测器检测放射信号，从而确定抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析法具有较高的灵敏度和特异性，但放射性物质可能对环境和人体健康造成影响，因此使用时需特别注意安全问题。
4、胶体金免疫层析法：该技术利用胶体金标记抗原或抗体，通过与样品中的抗原或抗体结合后，利用层析原理将结合物分离并富集，再用光学仪器检测胶体金颗粒的聚集程度，从而判断抗原或抗体的存在。
胶体金免疫层析法具有简便、快速、可视化等优点，常用于临床床快速诊断和食品安全等领域。
5、化学发光免疫分析法：这种方法利用化学发光物质标记抗原或抗体，与样品中的抗原或抗体结合后，利用化学反应产生光信号，通过检测光信号的强度确定抗原或抗体的浓度。
化学发光免疫分析法具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，因此在临床诊断和生物制品检测等领域应用广泛。
这些方法各有特点和使用范围，选择合适的抗原抗体检测方法要根据具体实验条件和要求而定。
同时，为保证检测结果的准确性和可靠性，操作过程中需遵循规范，避免污染和交叉反应等问题的发生。
抗原、抗体、核酸检测有什么不同
抗原、抗体、核酸检测有什么不同随着社会的不断发展和进步，医疗技术也在不断的进步，尤其是人们在检测方面，包括抗原检测、抗体检测、核酸检测等等，都是人们选择中的一大难题，不知道选择哪种检测才是最为有效的。
为此，文章将根据抗原、抗体、核算检测进行分析，并阐述三者之间的不同，希望能为您提供一定的参考。
什么是抗原检测抗原检测又称细菌抗原检测，主要是指已知细菌抗体检测患者体内有无相应抗原的方法，通常用于细菌感染性疾病的诊断，例如：脑膜炎纳瑟菌、淋病纳瑟菌、链球菌、沙门菌等检测。
其主要检测方法是通过选取患者带有的菌的血液、脑脊液、尿液等进行检测，用玻片、荧光素、酶素等进行试验。
医生会通过玻璃片凝集实验检测患者早期血液、脑脊液和其他液体中是存在抗原。
通过荧光素标记抗体或抗原，检测固定标本上的细菌抗原，这也是最为常用最直接的补体法，如果标本中有荧光出现则就说明被检标本中有细菌。
酶联免疫吸附实验是将准备好的抗体进行包被、洗涤、稀释、加酶等一些列步骤不检测抗体相应的抗原。
对人们抗原的检测均有一定的作用。
什么是抗体检测抗体检测最主要的目的就在于帮助临床进行诊断，例如：抗病原生物体的抗体、抗过敏源的抗体、抗HLA抗原的抗体以及血性抗体和患者自身抗体，在某些疾病中能够更好的进行观察从而进行及时的预防，抗体检测的方面主要有免疫测定法、凝集实验等，对预防接受的观察和传染病流行学调查中具有十分重要的作用。
什么是核酸检测核酸检测主要是检测患者的呼吸道、血液、粪便等是否收到病毒的感染，简单来说也就是检测患者是否被核酸病毒感染，尤其是在新冠病毒感染的方面。
因此只要一旦检测核酸成为“阳性”，就可证明患者体内是否有病毒的存在。
不仅如此，如果患者在感染新冠病毒后，患者的呼吸道内会堆积大量的病毒从而造成病毒在呼吸道进行繁衍，所以核酸检测还会通过一定的检查，如：痰液检查、咽拭子检查等核算检测来判断患者是否被感染上了病毒。
抗原、抗体、和核酸检测的不同1.适用的时间不同抗原检测对实验室的要求较低，通常可用于早期的筛查进行较早的诊断，适合于大规模的进行筛查，一般情况下15分钟以内就能得出结果。
ELISA的四种方法类型分别是
ELISA的四种方法类型分别是ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种广泛应用于生物化学和免疫学领域的实验技术，用于检测特定蛋白质或其他分子在样本中的存在量。
ELISA方法类型多样，包括直接ELISA、间接ELISA、竞争性ELISA和间接竞争性ELISA。
下面将分别介绍这四种ELISA方法类型的原理、步骤和应用。
直接ELISA是一种用于检测抗原或抗体的方法。
它的原理是将待检测的抗原或抗体直接吸附在固相载体上，然后加入与之特异性的酶标记的抗体或抗原，通过酶标记物的底物与酶的作用产生显色反应，从而测定待检测物的存在量。
直接ELISA方法简单、快速，适用于大规模样本筛查。
间接ELISA是一种用于检测抗体的方法。
它的原理是将待检测的抗体吸附在固相载体上，然后加入与之特异性的抗原，再加入酶标记的二抗，通过酶标记物的底物与酶的作用产生显色反应，从而测定待检测物的存在量。
间接ELISA方法灵敏度高，适用于检测抗体含量的变化。
竞争性ELISA是一种用于检测小分子化合物的方法。
它的原理是将待检测的小分子化合物与酶标记的抗原结合，然后加入抗体，抗体与酶标记的抗原竞争结合，从而测定待检测物的存在量。
竞争性ELISA方法适用于检测激素、药物等小分子化合物的含量。
间接竞争性ELISA是一种用于检测抗体的方法。
它的原理是将待检测的抗体吸附在固相载体上，然后加入与之特异性的抗原，再加入酶标记的抗原，抗原与酶标记的抗原竞争结合，从而测定待检测物的存在量。
间接竞争性ELISA方法适用于检测抗体的亲和力和亲和常数。
总之，ELISA方法类型多样，各自具有特定的应用场景和优势。
科研人员在选择ELISA方法时，应根据实验目的和待检测物的特性，合理选择适合的ELISA方法类型，以确保实验结果的准确性和可靠性。
抗原抗体反应检测的临床意义
抗原抗体反应检测的临床意义抗原抗体反应检测的最大优势之一是其高敏感性和高特异性。
抗原抗体反应检测能够通过检测体内特定的抗原或抗体来确定是否存在其中一种疾病或感染。
相比其他的诊断方法，抗原抗体反应检测方法的敏感性更高，能够及早发现病情的变化，为患者提供更早的治疗和干预。
另外，抗原抗体反应检测还能够帮助医生监测治疗效果。
在一些需要长期治疗的疾病中，如艾滋病、乙肝等，抗原抗体反应检测能够通过定期检测特定的抗原或抗体来评估治疗的效果，如果检测到抗原或抗体水平下降，就可以判定治疗取得了效果。
同时，抗原抗体反应检测还可以指导医生对治疗方案进行调整，以达到最佳疗效。
此外，抗原抗体反应检测在传染病的防控中也具有重要的意义。
通过检测抗原或抗体，可以迅速发现病原体的存在，从而及时采取相应的控制措施，以避免疾病的传播和扩散。
例如，在流感季节，通过对患者进行流感抗原抗体反应检测，可以迅速确认感染病毒的类型和变异情况，指导针对性的疫苗研发和接种，从而有效控制流感的传播。
抗原抗体反应检测还可以用于疾病的早期诊断。
有些疾病在早期并没有明显的症状，通过检测特定的抗原或抗体，可以尽早发现疾病的存在。
早期诊断能够给予患者更及时、更有效的治疗，提高治愈率和生存率。
例如，在乳腺癌的早期诊断中，通过检测乳腺癌特异抗原CA153的水平，可以尽早发现乳腺癌的存在，并采取相应的治疗措施，提高患者的治愈率。
此外，抗原抗体反应检测还可以用于血型鉴定、组织移植配型等方面。
通过检测个体血液中的特定抗体和抗原的反应，可以确定个体的血型，从而更好地进行输血和器官移植，减少并发症的风险。
综上所述，抗原抗体反应检测在临床中具有广泛的应用和重要的临床意义。
它能够早期发现疾病、监测治疗效果、预防和控制传染病，为医生提供科学的诊断依据，为患者提供更及时、更有效的治疗和预防措施。
随着科技的不断发展，抗原抗体反应检测将会在临床实践中发挥越来越重要的作用。
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抗原或抗体的检测————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期：抗原或抗体的检测一、检测的原理借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。
1．抗原与抗体的亲和力（afｆiｎitｙ)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应,而是非共价键的可逆的结合。
抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型,造成两分子间有较强的亲和力。
空间构型互补程度不同,抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。
互补程度高，则亲和力强。
此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响,抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。
高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。
2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点,对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。
定性和定位检测比较简单,即用已知的抗体和待检样品混合,经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生,就说明待检样品中有相应的抗原存在。
若无预期的现象发生,则说明样品中无相应的抗原存在。
同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
对抗原或抗体进行定量检测时,以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。
（1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量:在一定的反应条件下,加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定,反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。
也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。
可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体）的含量。
如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。
(2)抗原或抗体效价滴定的原理:当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。
在实际工作中,把浓度低的反应成分（抗原或抗体)的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。
例如用人血清作抗原免疫3只家兔,比较3只家兔产生抗体的多少,即滴定3只兔血清抗体效价,可用双向琼脂扩散法来滴定,例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度,分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/２０00，而丙免的是1/８00０则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高）。
也就是表示效价的稀释度越高,样品中所含待检成分越多。
因人血清(抗原)和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。
二、抗原或抗体检测的实用意义１．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。
抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。
临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLＡ抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体,对有关疾病的诊断有重要意义。
２．抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类:（1)各种微生物及其大分子产物:用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。
（２）生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白(如各类免疫球蛋白、补体的各种成分)、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。
在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。
（3）人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原(如CD抗原)、同种异型抗原（血型抗原或MHC抗原）、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。
检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。
（４）各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原,可以分别将它们偶联到大分子的载体上,组成人工结合的完全抗原。
用其免疫动物，制备出各种半抗原的抗体，应用于各种半抗原物质的检测,例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。
对运动员进行服用违禁药品的检测，都是应用半抗原检测的方法。
三、抗原或抗体检测的方法由于各种检测方法中所用的抗原性状不同,出现结果的现象也不同。
最广泛应用方法有下述几种:（一）沉淀反应可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。
在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应(preｃipitatiｏn ｎeaｃtｉon)。
1.环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0．5cm的小试管底部。
将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让抗原与抗体在两液体的界面相遇,形成白色免疫复合物沉淀环,故名为环状沉淀试验（riｎg prｅcipｉtaｔｉonｔest）,此法简便易行,需用材料较多是其缺点。
２.单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验（siｎgｌeｉmｍuｎodifｆｕsiｏn）是在凝胶中进行的沉淀反应。
将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上,制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散,与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。
当复合物体积增加到一定程度时停止扩散,出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。
本方法简便,易于观察结果,可测定抗原的灵敏度(最低浓度)约为10～20μg／ｍl,常用于定量测定人或动物血清ＩgG、ＩgＭ、ＩgA和C3等，其缺点是需１~２天才能看结果(图1)图1单向免疫扩散试验示意图3.免疫比浊法当抗体浓度高,加入少量可溶性抗原,即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物,它可使通过液体的光束发生散射，随着加入抗原增多,形成的免疫复合物也增多，光散射现象也相应加强。
免疫比浊法(ｉmmunｏnepｈeloｍytry）就是在一定的抗体浓度下，加入一定体积的样品,经过一段时间，用光散射浊度计(nepｈelometry）测量反应液体的浊度,来推算样品中的抗原含量。
本法敏感、快速简便，可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。
４，双向免疫扩散试验双免疫扩散试验（ｄouｂｌeｉmmunｏdifｆｕsiｏｎ)是在琼脂板上按一定距离打数个小孔,在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。
当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现２～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析(图2）。
图2 双向免疫扩散试验示意图5．对流免疫电泳对流电泳(ｃounｔｅrimmuｎoeｌecｔrophoresiｓ）是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。
将琼脂板放入电泳槽内,使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体,通电后,抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷,但因分子量大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。
只需1小时左右即可观察结果。
6.免疫电泳免疫电泳（ｉmmuｎｏｅleｃｔropｈorｅsis)的方法分成两个步骤,即先进行电泳，再进行琼脂扩散。
先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。
然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液,让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多答卷沉淀线。
常用此法进行血清的蛋白种类分析。
对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义(图３)。
图3 免疫电泳法基本步示决图７.免疫印迹法免疫印迹法（immuｎoblottｉng)又称为Westerｎ印迹法，用于ＡIDS的血清抗体检测。
第一步,为电泳分离HIV抗原，在电场中根据分子量大小不同病毒抗原各成分散开。
第二步，将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上（电印迹），然后将印迹有病毒抗原的硝酸纤维膜浸湿于病人血清中。
如果病人血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话，则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。
在洗去未沉淀的抗原和抗体后,在膜上加标记的抗人免疫球蛋白的抗体，此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应，最后加入显色底物（如果抗人Ig是用酶标记的）或做放射自显影（抗人Iｇ用125Ⅰ标记)以显示结果(图4）。
图４用免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体第一步:经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离；第二步:将已分离的抗原经电印迹转移到硝酸纤维膜上;第三步：将待检病人血清加入覆盖于硝酸纤维膜上；第四步:加入标记的第二抗体使之覆盖膜上;第五步:加入显色底物(或放射自显影)显现第二抗体(二)凝集反应细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原，当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成凝集团块,即称为凝集反应(aｇgluｔｉnatｉｏｎ）。
1.直接凝集直接凝集（direct aggluｔiｎation）是将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。
可用于传染病诊断如肥达氏反应(Widａl reａｃtioｎ)诊断伤寒病。
或利用血细胞凝集现象检查血型。
２.间接凝集间接凝集(indirect agglｕtinａtion)是用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体混合出现的凝集现象。
如用γ球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子，用甲状腺球蛋白包被乳胶颗粒用于检测甲状腺球蛋的抗体。
也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床标本中的抗原，如细菌或真菌性脑膜炎抗体包被的乳颗粒,一旦与含有相应抗原的脑脊液混合，便可发生凝集，可进行快速诊断。
故凝集反应即可测定抗原，也可测抗体,方法简便、敏感。
3．抗球蛋白试验抗球蛋白试验（antiglobｕlｉn teｓｔ,cｏomｂs tｅst）的原理为间接凝集试验。
例如应用于诊断自身免疫溶血性贫血症时，Ｒh＋红细胞与抗Rh血清间的反应。
因抗Rh抗体是IgG只有两个结合价，分子较小(不如ＩgM结合价多,分子大)很难直接引起Rｈ+红细胞凝集。
如果加入抗IｇG的抗体,就可帮助抗Ｒh的IgG的抗体凝集红细胞。
也就是经抗Ig的作用提高凝集反应的灵敏度。
（三）补体参与抗原抗体反应这一类反应主要包括溶血反应(hemolytｉc assａy)、补体介导的细胞毒试验(complement mediａted ｃytotoxicｕｔｙｔesｔ）及补体结合试验（cｏｍpｌemｅｎｔfi ｘaｔiｏn test)。
1．溶血反应抗体与红细胞表面抗原相遇，形成红细胞-抗体复合物即可使加入反应中的补体活化,导致红细胞溶解，此方法可用于红细胞的各种抗原或相应抗体的检测，此法比凝集反应敏感。