细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结)
细胞培养员个人工作总结

细胞培养员个人工作总结作为一名细胞培养员,我在过去一年中取得了许多进展和成就。
通过我的努力和专业知识,我对细胞培养的技术和操作有了更深入的了解,也使我在实验室工作中变得更加熟练和有效率。
在这一年中,我参与了多个细胞培养实验项目的设计和实施。
我学会了如何选择合适的细胞培养基和添加剂,以及如何进行无菌操作和细胞传代。
我也积累了丰富的细胞培养实验经验,能够独立完成各种类型的培养细胞,包括肿瘤细胞、干细胞和原代细胞等。
除了实验室操作技能的提高,我还注重了实验室安全和环境卫生。
我始终保持实验室的整洁和无菌环境,定期进行设备消毒和清洁,确保实验过程的准确性和可靠性。
在日常工作中,我也注重团队合作。
我与实验室同事合作紧密,共同解决实验中出现的问题和挑战。
我积极分享自己的经验和见解,与大家一起不断提高工作效率和质量。
通过这一年的工作,我对细胞培养技术和实验室管理有了更深入的了解,也提升了我的综合实验能力和团队合作能力。
我将继续努力,不断学习和提高自己的专业水平,为细胞培养实验工作贡献力量。
作为一名细胞培养员,我深知自己的责任是保证实验室中的细胞培养工作顺利进行,以支持科学研究和生物医学领域的发展。
通过不断学习和实践,我逐步完善了自己的技能和知识体系,获得了丰富的实验经验和专业能力。
在实验室工作中,细胞培养技术是最基础也是最核心的技能之一。
我始终严格遵循无菌操作的标准,确保细胞培养过程中的无菌、洁净和可靠性。
我熟练掌握了细胞传代和培养基配制等操作技能,能够有效地处理不同类型细胞的培养需求。
在肿瘤细胞的培养中,我理解了细胞株的特性和应用,有效地控制了细胞培养的质量和稳定性。
除了技术和操作方面的提升,我也不断完善自己的理论知识,并一直关注行业动态和前沿技术。
我积极参加各类学术讲座和学术会议,结合实验室工作实际需求,不断学习和探究最新的细胞培养技术和方法。
我了解到了一系列先进的培养技术和细胞处理工具,如细胞冷冻和解冻技术、细胞分选技术等,这些技术的应用有助于提高细胞培养效率和保证细胞的生物学特性。
细胞培养心得

养了很久的细胞,有一些经验和体会总结一下,和大家分享一下。
关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。
1.不同的细胞,喜欢的环境是不一样的。
这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。
有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。
这种一般是属于生长速度慢的细胞。
譬如内皮细胞。
而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。
尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。
并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。
如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。
所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。
2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。
这个其实是有一个方法可以改善的。
对于贴壁细胞,如果细胞形态不好,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。
这时侯再开始正式的消化、吹打。
(巨噬细胞我们只吹打,不消化的)其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。
10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。
选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml 新培养基再轻轻洗一次。
然后加入完全培养基培养。
后续观察细胞生长情况以及形态。
我称之为“二传”。
呵呵。
如果一次效果还不理想,可重复多次。
直到找到细胞完美形态。
其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。
喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。
反之亦然。
这个是我师兄发明的,谢谢他了。
药厂细胞培养个人工作总结

药厂细胞培养个人工作总结在药厂细胞培养工作的过程中,我通过艰苦的努力和认真的学习,取得了一定的成绩。
在过去的一段时间里,我主要负责细胞培养实验的设计、操作和数据分析,同时也参与了一些实验室的管理工作。
在实验设计方面,我根据要求和研究目的,选择了合适的培养基、细胞系和实验条件,确保了实验的可靠性和有效性。
在实验操作中,我养成了严谨细致的工作习惯,严格按照操作规程进行操作,保证了实验结果的准确性和可重复性。
在数据分析方面,我使用了多种统计方法和相关软件,对实验结果进行了系统的分析和总结,为后续研究提供了重要的参考。
除了实验工作,我还积极参与了实验室的日常管理工作。
我负责了实验室的卫生消毒和新设备的引进安装,并为实验室的管理提出了一些有效的建议和改进措施,提高了实验室的工作效率和安全性。
通过这段时间的工作,我不仅提高了自己的实验操作技能和数据分析能力,还学到了很多实验室管理和团队合作的经验。
在未来的工作中,我会继续努力学习,提高自己的专业知识和技能,为药厂细胞培养工作做出更大的贡献。
在药厂细胞培养工作中,我经常面对不同的挑战和困难,但我始终保持着乐观的态度和坚定的信念,不断克服困难,努力提升自己的细胞培养技能和实验操作水平。
在实验中,我时刻牢记安全第一的原则,严格遵守实验室的安全操作规程,确保自己和同事的人身安全。
在实验室管理方面,我尽力保证实验室的整洁卫生,确保实验环境的清洁与有序。
我对于实验室设备的维护也非常重视,经常对实验设备的状态进行检查和维护,及时发现并解决设备故障,确保实验设备的正常运行。
在团队合作方面,我和同事之间形成了良好的合作关系,互相支持,共同进步,共同完成实验室的各项工作,促进了实验室的协调运行。
在今后的工作中,我将继续加强对细胞培养技术的学习和研究。
不仅要熟练掌握基本的细胞培养技能,还要努力学习新的细胞培养方法和技术,以适应不断发展的科学研究需求。
同时,我还会关注行业前沿的细胞培养方面的研究成果,不断提高自己的科研创新能力。
细胞培养技术心得体会范文

细胞培养技术心得体会范文细胞培养技术是现代生物科学研究中非常重要的实验技术之一,它可以使科研人员对细胞进行体外培养和研究。
在我进行细胞培养技术学习的过程中,我深深感受到了它的重要性和应用的广泛性。
下面是我对细胞培养技术的一些心得体会。
首先,细胞培养技术是一门基础的实验技术。
在进行任何与生物学相关的实验研究时,细胞培养技术都是不可或缺的。
通过细胞培养技术,科研人员可以获得大量的特定类型细胞,并对其进行后续的实验操作。
比如,通过细胞培养技术,可以获得肝细胞、肺细胞等特定细胞,然后可以对这些细胞进行药物检测、基因转染等实验,从而研究细胞的生命活动和相关机制。
因此,细胞培养技术是生物学等学科的基础。
其次,细胞培养技术对实验操作的要求非常高。
在进行细胞培养的过程中,需要严格控制培养液的成分、温度、湿度、CO2浓度等多个参数,以保证细胞能够正常生长和繁殖。
同时,需要注意培养器具的消毒和无菌操作,以避免培养过程中的细菌和真菌污染。
因此,细胞培养技术对科研人员的实验技术和操作规范要求非常高,这也是我在学习过程中深受启发的地方。
另外,细胞培养技术需要耐心和细心。
由于细胞生长和繁殖的周期相对较长,所以在进行细胞培养实验时,需要耐心等待细胞的生长和繁殖。
此外,由于细胞对环境的变化非常敏感,稍有不慎可能导致细胞的死亡或繁殖异常。
因此,细胞培养技术需要科研人员具备细心和耐心的品质,随时观察和调整培养条件,以保证实验的顺利进行。
此外,细胞培养技术也存在一定的风险。
细胞培养液中的成分和培养条件可能会对细胞产生毒性影响,导致细胞的死亡或繁殖异常。
此外,细胞也可能会被真菌、细菌等微生物污染,从而影响实验结果。
因此,在进行细胞培养实验时,需要对培养液和培养条件进行严格控制和检测,以降低实验风险。
细胞培养技术不仅在科研领域中有广泛应用,在医学领域也有重要的应用价值。
通过细胞培养技术,可以获得人体细胞,并进行药物筛选和毒理学评价等实验。
细胞培养个人工作总结范文

细胞培养个人工作总结范文细胞培养是生物学实验中非常重要的一个环节,我在进行细胞培养工作中取得了一些经验和收获,现做以下总结:首先,在进行细胞培养实验时,我要保证实验室环境的洁净,经常对实验设备进行消毒和清洁,以防止细菌或其他有害物质的污染。
同时,在进行细胞培养时,要注意无菌操作,避免外界微生物的污染。
其次,我在培养细胞过程中,掌握了种植细胞的最佳条件和方法。
比如,在细胞培养的过程中,我严格控制培养基的pH值、营养物质的添加和细胞密度的控制,以保证细胞的健康生长和增殖。
另外,在细胞培养过程中,我也注意到了细胞的形态学变化和生长速度等指标的监测和记录,及时发现细胞的异常情况,以便及时调整培养条件。
最后,我在细胞培养实验中,还积累了大量的实践经验和技能,这些都将对我今后的科研工作产生积极的影响。
总而言之,通过细胞培养的个人工作总结,我进一步加深了对细胞培养工作的理解,提高了细胞培养技能,为今后的科研工作奠定了更加扎实的基础。
希望在今后的科研工作中,我能够不断积累经验,提高专业素养,为科学研究做出更多的贡献。
在细胞培养的工作实践中,我还学会了如何选择合适的细胞培养基和添加剂,以促进细胞的健康生长。
同时,我也学会了如何判断细胞的状态和纯度,并且掌握了一些常见的检测方法和技术,如细胞计数、细胞鉴定、细胞凋亡检测等。
这些技能不仅为我日常的细胞培养工作提供了坚实的保障,也为我未来的科研探索和学术研究奠定了基础。
在进行细胞培养的工作中,我还注意到了实验中的一些常见问题和解决方法。
比如,细胞在培养过程中出现的感染、细胞质纺锤体形成异常、细胞黏附不良等情况,这些都需要我们认真研究问题的根源,并采取相应的措施解决。
通过对实验过程中遇到的问题进行分析和总结,我得以不断提高自己的动手能力和解决问题的能力,使得我在工作中更加得心应手。
在实验的过程中,我发现了培养过程中一些可能的改进点。
比如,改进培养基的配方、优化培养条件、探索新的细胞培养技术等,这些都是我在细胞培养工作中不断努力的方向。
细胞培养技术个人总结

总结---细胞培养一.基本理论概论原代培养: 也叫初代培养,指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。
传代培养:将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
细胞系:原代培养物成功传代后,则称之为细胞系。
(如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系;已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系,称连续细胞系或无限细胞系。
)细胞株:通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
培养类型:细胞培养,组织培养,器官培养。
细胞生长的方式:贴附生长,悬浮生长培养细胞的形态(形态不一定,环境改变形态可能改变):成纤维性型细胞,上皮型细胞(单层膜样生长),游走性细胞(游散生长,常有伪足跟突起)二.培养过程及要点(切记无菌操作)(一)工作环境的处理1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
吸管口切勿碰到容器瓶口4. 工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
细胞培养员的工作总结

细胞培养员的工作总结
作为一名细胞培养员,我深知这项工作的重要性和复杂性。
在细胞培养领域,
我们的工作是至关重要的,因为细胞培养是许多生物医学研究和药物开发的基础。
在这篇文章中,我将总结一下作为一名细胞培养员的工作内容和重要性。
首先,作为一名细胞培养员,我们的主要工作是负责培养和维护各种类型的细胞。
这包括从动物组织中分离细胞、培养细胞、检测细胞的健康状况以及进行细胞传代。
这些工作需要高度的技术和实验操作技能,因为细胞的生长和健康状况对于后续的实验结果至关重要。
其次,细胞培养员需要严格遵守实验室的操作规程和安全标准。
在细胞培养实
验室中,我们需要确保实验室的清洁和无菌操作,以防止细胞培养过程中的污染。
此外,我们还需要定期检查和维护实验室设备,确保其正常运行。
另外,作为一名细胞培养员,我们还需要与其他研究人员密切合作。
我们需要
根据研究项目的需求,为科研人员提供高质量的细胞培养服务,并确保实验结果的准确性和可重复性。
因此,良好的沟通和团队合作能力也是我们工作中的重要素质。
最后,作为一名细胞培养员,我们需要不断学习和更新自己的知识和技能。
细
胞培养技术是一个不断发展和更新的领域,我们需要及时了解最新的实验方法和技术,以提高我们的工作效率和实验质量。
总的来说,作为一名细胞培养员,我们的工作是非常重要和复杂的。
我们需要
具备扎实的实验操作技能、严格的实验室管理能力、良好的沟通和团队合作能力,以及不断学习和更新自己的知识和技能。
只有这样,我们才能为生物医学研究和药物开发做出更大的贡献。
细胞培养年度总结范文(3篇)

第1篇一、前言随着生物科学技术的不断发展,细胞培养技术在医学、生物学、药物研发等领域发挥着越来越重要的作用。
在过去的一年里,我国细胞培养技术取得了显著成果,为我国生物科技事业的发展做出了重要贡献。
现将本年度细胞培养工作总结如下:一、工作回顾1. 技术研究与创新(1)成功研发了新型细胞培养支架,提高了细胞贴壁生长能力,为细胞培养提供了更好的条件。
(2)优化了细胞培养培养基配方,提高了细胞生长速度和稳定性。
(3)创新了细胞培养方法,实现了细胞在高密度培养条件下的稳定生长。
2. 项目实施(1)承担了多项国家级、省部级细胞培养相关科研项目,取得了良好的研究成果。
(2)与国内外知名高校、科研院所建立了良好的合作关系,共同开展细胞培养技术研究。
(3)积极参与国内外学术交流活动,推广我国细胞培养技术。
3. 人才培养与团队建设(1)组织开展了细胞培养技术培训,提高了团队成员的专业技能。
(2)选拔优秀人才参加国内外学术会议,拓宽了团队成员的视野。
(3)加强团队内部沟通与协作,形成了良好的团队氛围。
二、工作亮点1. 成功培养了多种细胞系,为我国生物科技事业提供了丰富的细胞资源。
2. 在细胞培养技术领域取得了一系列创新成果,为相关研究提供了有力支持。
3. 培养了一批高素质的细胞培养技术人才,为我国生物科技事业的发展奠定了基础。
三、存在问题及改进措施1. 存在问题(1)细胞培养技术设备更新换代较慢,影响实验结果的准确性。
(2)部分细胞培养技术人才储备不足,制约了细胞培养技术的发展。
(3)细胞培养技术在国际竞争中的地位有待提高。
2. 改进措施(1)加大资金投入,更新细胞培养技术设备,提高实验水平。
(2)加强人才培养,提高细胞培养技术人才的整体素质。
(3)积极参与国际合作,提升我国细胞培养技术在国际竞争中的地位。
四、展望展望未来,细胞培养技术在医学、生物学、药物研发等领域将发挥更加重要的作用。
我们将继续努力,不断提高细胞培养技术水平,为我国生物科技事业的发展贡献力量。
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细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结)一、消化与吹打版上很多朋友讨论细胞培养问题,见到很多很好的经验总结,这里说一些我个人的经验,因为一些比较特殊的原因,我自己培养接触过近300种细胞,常用于做实验的,累积有百余种,可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。
这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题,并不是因为细胞消化最重要,而是近期看到大家频繁讨论这个话题,我就抛砖引玉,下面几点拙见,可能与其它朋友总结的一些经验有点出入,仅供大家参考。
许多同学对细胞消化做了许多研究,得出了很多有价值的经验,也见到很多人的困惑。
其实细胞培养,尤其是细胞系的培养,就消化而言,不是太难,做得多了,善于总结经验,就能把细胞越养越好。
一般的程序步骤,细节操作,我这里就不讲了,只讲一些基本操作背后的知识,如果不对之处,欢迎指正,一起讨论:1,其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。
对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。
简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。
2,什么算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般你肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙壮移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。
一般能移动了,说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了,细胞之间的附着也已经消失了,细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。
这个时候应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。
细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性,无论死活的细胞都是如此,你可以尝试,准备100%的单个细胞悬液,贴壁后观察细胞,仍然是几个几个细胞聚集在一起。
一些悬浮培养细胞也是如此,容易聚集,不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑,这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误,以为悬浮培养就是一个一个分开)。
细胞只要能从基质上脱离下来,这个时候即使是成片的(比如Calu-3细胞),吹打不超过20次后(一般10次即可),成小规模聚集(10个细胞左右),是正常的,不要试图再去延长消化时间,或者象有的同学那样吹打1h,等待单细胞悬液出现。
3,另一个帖子里提到一个比较复杂的四步消化法,这个挺有意思,我也是第一次听说,应该是网友自己发展出来的方法,很有参考价值。
但我估计这个方法可能对付少数非常怪异的细胞才需要这么复杂的程序。
我目前养过的近300株细胞里面,还没遇到这么怪异的。
比如Caco2其实是很好消化的细胞,不需要胰酶孵育即可,只是有点成片分布。
不要以为成片分布是自己没养好,这个视细胞而定。
如果和标准形态不一致,那可能是自己没消化好导致的,但如果消化方法正确,仍然成片分布,甚至完全吹打成单细胞悬液,贴壁后仍然成片分布,这是细胞的特性,是因为贴壁过程中重新聚集了。
这个时候你拼了命要去让它均匀分布,你的细胞之后会对你越来越不好。
4,比较难消化的细胞(润洗方法5min还不能消化),就以colon cancer为例,比如HCT15, LS411和KM12,这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100 mm dish,一次最多加入500ul,就足够了,一般我加300ul。
即使这样难消化的细胞,一般不超过5min,即可见细胞成片移动,就应该停止消化。
一些正常细胞也会有难消化的时候,比如tsDC细胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙状移动。
5,常规的细胞实验(增殖,凋亡,迁移,分化之类的),受消化影响不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。
但少数实验,比如病毒包装,对细胞代数,对细胞状态要求极高。
这个时候,胰酶消化,就是润洗,都会对细胞包装病毒的能力有影响,传代次数一多,细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。
这个时候都不用胰酶消化,用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。
这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性,来使得细胞脱离基质附着表面,但不切割任何蛋白。
6,EDTA的作用。
许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用trypsin/EDTA 联合作用。
这里要明白,trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,作用于Integrin的活性,所以EDTA 的作用更加温和。
有的人在trypsin里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,就是这个道理。
一般不要试图延长消化时间(如果10min还消化不彻底的话),而应该想其它办法。
7,PBS洗涤。
消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为Serum 含有抑制trypsin的蛋白。
但这里面也有学问可以讲,对于一些难消化细胞,那么可以配制不含Ca,Mg离子的PBS,因为这些离子也会抑制trypsin的活性。
但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞,不需要配制如此溶液。
总结下来,虽然这个帖子是关于消化的,但其实消化并不是细胞培养的关键所在(虽然很重要),关键所在是细胞来源,血清质量和水源(自己配制溶液的话)。
我看到版上许多人养细胞遇到各种各样的问题,很多时候bottleneck没有找到,虽然通过其它方法有所改善,但仍然是事倍功半。
因为人们往往注意自己的操作,总觉得自己没有经验,而忽视试剂,溶液尤其是细胞的质量,后者其实才是许多细胞培养实验室常见的问题。
从最基础的地方教起,一步一步详细介绍细胞培养技术,非常好的开门教程常用设备准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台。
配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。
培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。
必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。
无菌操作无菌室的灭菌:定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。
CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备:肥皂洗手。
穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋用75%酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示:凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面靠近酒精灯火焰操作。
器皿使用前必须过火灭菌继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。
各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消:一、新的玻璃器皿的洗消:自来水刷洗,除去灰尘。
烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
刷洗、烘干:12小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干。
泡酸、清洗:用清洁液(重铬酸钾120g:浓硫酸200ml:蒸馏水1000ml)浸泡12小时,然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次,最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。
烘干、包装:洗干净后先烘干,然后用牛皮纸(油光纸)包装。
高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子,打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关闭安全阀,当指针指向15磅时,维持20-30分钟。
高压消毒后烘干二、旧的玻璃器皿的洗消:刷洗、烘干:使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中,泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净,然后烘干。
泡酸、清洗:烘干后泡入清洁液(酸液),12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗),再用蒸馏水冲洗3次。
烘干、包装:洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装,以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。
高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内,盖好盖子,打开开关和安全阀,随着温度的上升安全阀冒出蒸气,当蒸气成直线冒出3-5分钟后,关闭安全阀,气压表指数随之上升,当指针指向15磅时,调节电开关维持20-30分钟即可。
(玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上)烘干备用:因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿,所以要放入烤箱内烘干备用。
金属器械洗消:金属器皿不能泡酸,洗消时可先用洗涤剂刷洗,后用自来水冲干净,然后用75%酒精擦拭,再用自来水,然后用蒸馏水冲洗,再烘干或空气中晾干。
放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压(30分钟)消毒,再烘干备用。
橡胶和塑料:橡胶和制品通常处理方法是:先用洗涤剂洗刷干净,再分别用自来水和蒸馏水冲干净,再用烤箱烘干,然后根据不同品质进行如下的处理程序:针式滤器帽不能泡酸液,用NaOH泡6-12小时,或者煮沸20分钟,在包装之前要装好滤膜两张,安装滤膜时注意光面朝上(凹向上),然后将螺旋稍微拧松一些,放入铝盒中在高压锅内15磅30分钟消毒,再烘干备用。
注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。
胶塞烘干后用2%氢氧化钠溶液煮沸30分钟(用过的胶塞只要用沸水处理30分钟),自来水洗净,烘干。
然后再泡入盐酸液30分钟,再用自来水,蒸馏水,三蒸水洗净,烘干。
最后装入铝盒内高压消毒,烘干备用。
胶帽,离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时(切记时间不能过长),自来水洗净,烘干。
然后再泡入盐酸液30分钟,再用自来水,蒸馏水,三蒸水洗净,烘干。
最后装入铝盒内高压消毒,烘干备用。
胶头可用75%酒精浸泡5分钟,然后紫外照射后使用即可。
塑料培养瓶,培养板,冻存管:其他消毒方法:有的物品既不能干燥消毒,又不能蒸气消毒,可用70%酒精浸泡消毒。
塑料培养皿打开盖子,放在超净台台面上,直接暴露在紫外线下消毒。
也可用氧化乙烯消毒塑料制品,消毒后需要用2—3周时间洗除残留的氧化乙烯。
用20000—100000rad的r射线消毒塑料制品效果最好。
为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆,可在纸包装后,用密写墨水作好标记。