细胞爬片技术汇总
细胞爬片固定及免疫荧光的操作步骤
细胞爬片固定及免疫荧光的操作步骤细胞爬片：1.埋板准备：准备含有合适培养基的细胞培养板或培养皿。
将培养基预热至适宜的温度。
2.细胞处理：将需要爬片的细胞株从库存中取出，用PBS（磷酸盐缓冲液）或无酶胰蛋白酶溶解细胞外基质粘附，用培养基洗涤细胞。
3.细胞计数：用血细胞计数板或细胞计数仪计数细胞浓度，然后根据需要调整到合适的细胞密度。
4.接种细胞：将适量的细胞接种到埋板中，根据实验要求可以采用单细胞克隆或稀释传代法。
5.培养细胞：将埋板放入细胞培养箱的适当环境中，通常为37°C、5%CO2的培养箱。
根据实验需要，培养时间可以从几小时到几天不等。
固定：1.筛选固定剂：选择适合的固定剂，常用的固定剂包括乙醛和甲醛等。
2.固定细胞：使用适当的浓度的固定剂，将培养的细胞浸泡在固定剂中，通常需要15-30分钟的固定时间。
3.洗涤细胞：使用PBS等缓冲溶液洗涤固定的细胞，去除多余的固定剂。
免疫荧光：1.孔板准备：将需要进行免疫荧光染色的细胞或组织培养在培养皿或孔板中。
2.阻断非特异性结合：用0.1-5%BSA或牛血清等蛋白质溶液阻断非特异性结合位点，减少假阳性信号。
3.一抗染色：加入适当浓度的一抗（具体浓度由厂家确定）到需要染色的细胞上，对于细胞表面的抗原，可以直接在细胞外孔板中加入一抗。
4.清洗：用PBS或相应的缓冲液洗涤一抗残余的溶液。
5.二抗染色：加入与一抗同种小鼠或兔子抗体的特异性抗体（如荧光素、奥林染色试剂等）到孔板中，适当的浓度需根据实验所需，与一抗使用的缓冲液一致。
6.清洗：用PBS或相应的缓冲液洗涤二抗残余的溶液。
7.成图：用荧光显微镜观察样品，利用相应的激发波长和荧光滤镜观察和拍摄免疫染色的图像。
细胞爬片、固定和免疫荧光技术的步骤可以根据具体实验的要求进行调整和优化。
这些操作步骤在细胞和分子生物学研究中非常重要，可以用于检测和观察各种细胞结构和分子的表达和分布。
整个过程需要细心和耐心，并且需要严格控制各个步骤的条件以确保实验结果的准确性和可重复性。
细胞爬片制作
细胞爬片全过程经验总结细胞爬片的制备是免疫细胞化学、免疫荧光、TUNEL凋亡检测的第一步，也是获得一份漂亮的实验结果的关键步骤。
Easylabs站长根据自已多年的经验，奉献此文，希望对大家的实验有所帮助。
【爬片的准备】1.爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；2.应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪时可用前护士输液用于打开玻璃安瓶的小沙轮，或者是口腔科的那种小沙轮，轻轻划一下后，稍用力一掰就分开了。
如果接种大皿的话，我一般不将盖玻片切开，直接清洁后放入培养皿中，到染色时再将之切开，这样既保证了细胞均一性，又可同时做几个指标的染色。
3.将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。
4.高压后取出放入烤箱中烤干，备用。
烤干后可放入超净台中。
5.关于多聚赖氨酸，很多人都将玻片用此处理，以使细胞与玻片结合更牢。
但我在做爬片时从来没用过多聚赖氨酸，细胞贴壁仍然很好，且在做后续的免疫细胞化学染色、TUNEL 等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。
【细胞爬片】1.胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。
2.加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。
整个过程注意无菌操作。
3.根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可4.待细胞贴壁后，可去上清加含药培养基。
5.按照实验设计，作用一定时间后取玻片。
取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，我一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。
如果要做诸如24h，48h，72h等这样时间点的实验的话，将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。
细胞爬片步骤
细胞爬片细胞爬片【玻片的准备】1. 爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；2．将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍，放在饭盒或者培养皿中烘干后进行高压消毒再烘干。
4.多聚赖氨酸处理玻片，以使细胞与玻片结合更牢。
【细胞爬片】1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。
2. 加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。
整个过程注意无菌操作。
3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可。
4. 待细胞贴壁后，可去上清加含药培养基。
5. 按照实验设计，作用一定时间后取玻片。
取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，我一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。
将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。
【细胞爬片的固定】1.细胞爬片取出后，一般用PBS洗x2遍，然后再做固定。
2.室温固定15分钟后，弃去固定液，PBS洗3x3min，洗尽液体。
3.将表面液体吹干，入-20℃保存以下为常用的固定液（1）. 多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。
主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存（2）. 甲醛(福尔马林)应用最广缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。
可造成假阴性的染色结果。
（3）. 冷丙酮可用于一般的免疫组化染色。
2 / 2（4）. 95％乙醇，可用于免疫组化。
优点：穿透性强、抗原性保存较好。
缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。
多聚赖氨酸细胞爬片处理原理
多聚赖氨酸细胞爬片处理原理
嘿，朋友们！今天咱来聊聊多聚赖氨酸细胞爬片处理原理。
这玩意儿啊，就像是给细胞准备了一个特别舒服的小窝。
你想啊，细胞就像一个个小精灵，它们也得有个安稳的地方待着不是？多聚赖氨酸就像是给它们铺上了一层温暖柔软的地毯。
细胞们在这上面能稳稳当当地待着，舒舒服服地生长、活动。
多聚赖氨酸为啥能有这效果呢？其实就是它有一种魔力，能和细胞相互吸引。
就好比你和好朋友，彼此之间有那种特别的吸引力，让你们喜欢待在一起。
细胞一碰到多聚赖氨酸，哎呀，就像找到了好朋友一样，紧紧地贴上去了。
这可太重要啦！要是没有多聚赖氨酸这层“魔法地毯”，细胞可能就到处乱跑，不好好待着，那我们还怎么观察研究它们呀？那我们的实验不就乱套啦？
而且啊，多聚赖氨酸的处理也有讲究呢！得恰到好处，不能太多也不能太少。
这就跟做菜放盐似的，放多了太咸，放少了没味道。
要掌握好那个度，才能让细胞在上面待得开心，我们也能得到满意的结果。
你说这多聚赖氨酸是不是很神奇？它就像一个幕后英雄，默默地为细胞提供着支持，让我们的科学研究能够顺利进行。
想想看，如果没有它，我们得费多大的劲才能让细胞乖乖听话呀！
所以啊，大家可别小看了这多聚赖氨酸细胞爬片处理。
它虽然看起来不起眼，但是作用可大着呢！它就像是打开细胞世界大门的一把钥匙，让我们能更好地了解细胞的奥秘。
怎么样，朋友们，现在是不是对多聚赖氨酸细胞爬片处理原理有了更清楚的认识啦？下次再看到相关的实验，你就知道这背后的小秘密啦！这就是科学的魅力呀，小小的一个处理，却蕴含着大大的学问呢！
原创不易，请尊重原创，谢谢!。
细胞爬片的一些小心得-概述说明以及解释
细胞爬片的一些小心得-概述说明以及解释1.引言1.1 概述细胞爬片是一种重要的实验技术，用于研究细胞的运动行为和其与周围环境的相互作用。
在细胞爬片实验中，通过操纵细胞底部的基质或表面，观察和记录细胞的迁移、粘附和膜形成等过程，从而揭示细胞的生物学特性和功能。
本篇文章将结合个人实践经验，总结细胞爬片的一些小心得，探讨其在生物医学研究中的应用和发展趋势，分享细胞爬片实验的技巧和注意事项，以期能够帮助读者更好地理解和运用这一实验技术。
述部分的内容1.2文章结构1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将会概述细胞爬片的相关内容，介绍文章的结构和目的。
在正文部分，将详细探讨细胞爬片的定义、原理、应用领域以及实验步骤，同时分析其优势、局限性和发展趋势，最后介绍细胞爬片的技巧和注意事项。
在结论部分，将总结细胞爬片的重要性，探讨对未来研究的启示，并分享个人的经验。
通过以上内容的展开，读者将能够全面了解细胞爬片的相关知识和技巧，为其在实验研究中的应用提供帮助。
1.3 目的本文的目的旨在分享细胞爬片的一些小心得，包括其定义、原理、应用领域、实验步骤等方面的知识。
通过深入了解细胞爬片的优势和局限性，以及技巧和注意事项，读者可以更好地掌握这一实验技术，并在实践中取得更好的效果。
同时，本文将总结细胞爬片的重要性，并探讨其对未来研究的启示。
通过分享自身的经验和心得，希望能够为正在进行细胞爬片实验的科研人员提供一些参考和借鉴，促进科学研究的进步和发展。
容2.正文2.1 什么是细胞爬片：细胞爬片是一种常用的细胞实验技术，通过利用细胞的黏附性和迁移性，在培养皿中观察和研究细胞在基质表面上的移动和形态变化。
该技术主要用于研究细胞的运动、黏附和侵袭能力，广泛应用于细胞生物学、癌症研究等领域。
2.1.1 定义和原理：细胞爬片是通过将细胞悬浮在含有适当培养基的培养皿中，让细胞依靠伸展和缩合细胞膜的运动，在培养皿表面上爬行和迁移的过程。
细胞生物学实验-细胞爬片
二、实验目的
1．巩固细胞传代技术。 2．掌握细胞爬片的方法。 3. 为细胞骨架的观察提供实验材料
三、实验材料及设备
1.细胞 CHO细胞、鸡胚成纤维细胞、HeLa
2.试 剂 DMEM培养基、血清、抗生素、胰酶
3.仪 器
超净工作台、CO2培养箱、倒置相差显微镜
4.其它用品： 盖玻片（无菌）、35mm细胞培养皿（六孔板）、 试管、移液管，滴管，酒精灯、75％酒精棉球、 废液缸。
细胞传代（II） -------细胞爬片
2018.10.19
一、实验原理
1.细胞爬片
细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在 玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，切片， 细胞涂片，原位杂交等。
细胞爬片采用的玻片可以是普通的盖玻片也 可以用细胞爬片专用玻片。使用普通盖玻片时， 要按照玻璃器皿的清洗方法进行清洗，并进行高 压灭菌。专用玻片通常已经过处理可直接使用。
6. 加两滴管含10%FCS的DMEM培养基反复冲瓶壁上 的细胞层，至全部冲下，滴管轻轻吹打，混匀，成 细胞悬液，细胞计数，将细胞稀释成1105/mL）
7. 在35mm培养皿中加入1 mL细胞悬液+1 ml完全培 养基，镜下观察细胞密度和状态，标记细胞名称及 操作者。
8. 将细胞放入5%CO2、37℃培养箱培养，至下次课 期间换液即可。
9. 整理实验用品。
下次课内容：细胞骨架及细胞核染色 11月2日：期中考试（已学操作，无菌规范）
四、实验步骤：
1. 将超净台内物品，按照无菌操作要求摆放。
2. 用灭菌小镊子将处理好盖玻片轻轻放入35mm培养 皿中。
3. 打开细胞瓶盖并在酒精灯上轻轻烧口消毒，倒掉 或吸出培养基。细胞层，弃胰酶，再加入一滴管胰酶，盖好瓶盖。
细胞爬片安全操作及保养规程
细胞爬片安全操作及保养规程前言细胞爬片是生命科学研究中常用的实验技术，用于观察细胞结构、功能和生理特性等方面。
同时，也是一项比较危险的活动，操作人员需要掌握正确的操作技能和保养知识，以避免意外事故的发生。
本文将介绍细胞爬片的安全操作及保养规程，供操作人员参考。
安全操作规程1. 空气消毒在进行细胞爬片前，首先要进行空气消毒，以保证空气的洁净。
消毒方法可以使用紫外线灯灭菌或使用酒精进行喷洒消毒。
2. 消毒操作台面和仪器设备在进行细胞爬片时，需要先进行台面和仪器设备的消毒。
消毒方法可以使用酒精进行喷洒消毒，也可以使用紫外线灯进行消毒。
3. 熟悉操作规程和流程在进行细胞爬片前，操作人员需要熟悉操作规程和流程，以避免误操作或操作不当导致意外事故发生。
4. 戴手套和口罩在进行细胞爬片时，操作人员需要注意穿着合适的工作服，并配戴手套和口罩，以避免细菌或病毒等的感染。
5. 避免污染和交叉感染在进行细胞爬片时，需要避免污染和交叉感染的发生。
可以采用单独使用仪器的方式，或者在不同实验之间进行彻底的消毒。
6. 注意爬片温度和时间在进行细胞爬片时，需要注意爬片温度和时间。
温度不宜过高，时间不宜过长，以避免对细胞产生伤害。
7. 注意观察细胞状态在进行细胞爬片后，需要注意观察细胞状态，及时发现异常情况并采取相应的措施。
8. 安全处理废弃物在进行细胞爬片后，需要将废弃物进行特殊处理，以避免对环境和人体的影响。
保养规程1. 定期清洁仪器设备在进行细胞爬片时，需要定期清洁仪器设备，以保证设备的洁净和正常的功能。
清洁方法可以使用酒精或者其他专用消毒清洁剂。
2. 维护仪器设备在使用仪器设备时，需要注意维护，定期检查设备的性能，及时发现并解决问题，以保证仪器设备的正常运行。
3. 存储细胞爬片的条件在存储细胞爬片时，需要注意存储温度和时间，同时要避免其受到污染和交叉感染。
可以将其存放在专用存储器中，或者使用专用包装袋进行封装。
4. 定期检查媒介液的温度和PH值在进行细胞爬片时，需要使用媒介液，定期检查媒介液的温度和PH 值，及时调整，以保证媒介液的质量。
细胞爬片的方法与心得
细胞爬片的方法与心得【爬片的准备】1、爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；2、应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板；3、将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是冲洗干净就可以了），放在饭盒或者培养皿（一定是玻璃的哦，要不然就……）中烘干后进行高压消毒。
【培养板的准备】1、泡酸过夜2、冲洗，烘干（1、2步骤与前大致相同）3、放入超净工作台用紫外线照1～2小时就可以用了（在照之前可以将爬片一并放入，若细胞贴壁能力不强，可经多聚赖氨酸浸片后放入。
贴壁能力强的话，就可以省略了，进行紫外线消毒）注：此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内，紧接着放入培养板内。
目的：浸过PBS的爬片依靠表面的液体，可以用培养板孔底贴和紧密，以利于细胞长到爬片上。
（自己刚开始做的时候，经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间，爬片上细胞罕见。
）【细胞爬片】1、胰酶消化细胞后计数2、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可3、第二天即可进行干预措施多聚赖氨酸的浓度要求应该不严格，主要就是将贴壁能力弱的细胞固定上去，如0.1％（w/)，消毒可用紫外线照射。
园子里搜到的玻片的处理方法：玻片泡酸，自来水冲洗数遍，去离子水冲洗，就像细胞培养瓶等的那种处理就可以。
然后放在小饭盒或者玻璃皿里高压灭菌。
再烤干备用。
将玻片用灭菌镊子放于培养皿中，加细胞。
整个过程注意无菌操作就是了。
也没啥难的。
要注意的是：1.泡过酸的玻片特别脆。
用镊子夹着过水。
要冲得充分，和那些细胞培养用玻璃管，瓶等的原则一样。
2.如果你觉得玻璃片太大。
可以在泡过酸，水冲洗过用磨石在玻璃片上划痕，掰开。
我曾将一个玻璃片分成4个小片，在12孔，24孔板里放一两片那种。
3.有个问题我一直没有解决好：就是加上培养基后玻璃片拿动培养皿时，玻璃片会窜，常会压到长在皿底部的细胞。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细胞爬片可以买专门的爬片，几块钱一小包的，爬片用前泡酸，高压消毒（包括镊子和枪头）。
把用过的24孔板清洗干净，一孔一片，很方便，又互不干扰。
把细胞培养到对数生长期，消化后再滴上去，爬1-2天贴壁后（中间可加适量培养液），可在板子里一直做完。
清洗时，将PBS滴在片子上即可，不要剧烈摇晃。
需要照相时候，再取出来，细胞面贴在载波片上，最好用50%甘油，中性树脂贴不好，容易毁坏细胞形态。
取爬片时候，可以用枪头和镊子，或者用以下战友的方法
看师兄做细胞爬片，需要从培养孔中取出爬好的片子，多半用的是小镊子
造成的结果不是片子划的乱七八遭，就是不小心把片子弄断，突发一念，做了一个小工具
现推这个小窍门给大家已经介绍给很多人，都在用，感觉很好。
所以把它介绍给大家。
取一个注射器针头，针头头部都会有一个斜面，把针尖背对斜面的一方弯曲成90度，记住只是针尖部位，形成一个小倒刺状。
取爬片的时候把培养板放倾斜，可在板子下支一个东西，左手拿小镊子，右手拿针头。
用针头头部弯好的倒刺，去勾爬片，很容易就会勾起来，
而且不会伤片子。
再用镊子把片子夹出来。
速度比原来提高很多，取一个板子的爬片只要一分钟。
说的不是很清楚画张图给大家吧。