生化分析与技术
生理生化分析
生理生化分析生理生化分析是一种广泛应用于医学、生物学、化学和其他相关学科领域的技术，用于研究和理解生物体的生物化学反应、代谢过程和功能。
通过对生物体内生化物质的成分、结构、功能及其相互作用进行分析，可以揭示生物体的生理状态、疾病诊断和治疗方案。
一、生理生化分析的意义生理生化分析是揭示生物体内各种物质和分子相互作用的重要手段。
通过分析生物体内的蛋白质、核酸、糖类等生化物质的含量、结构和功能，可以了解其代谢过程、反应机制以及生物体在不同生理状态下的差异。
这对于深入研究生物体的基本生命过程、发掘新的治疗方法具有重要的意义。
二、生理生化分析的方法生理生化分析涉及到多种实验方法和仪器设备，常用的方法包括：1. 分光光度法：通过物质对特定波长的光的吸收、发射或散射来确定其浓度或结构。
例如，紫外-可见吸收光谱法可以用于测定蛋白质、核酸和药物的浓度。
2. 气相色谱法：通过气相色谱仪对物质进行分离、检测和定量分析。
该方法对于分析有机化合物、药物代谢产物等具有很高的灵敏度和分辨率。
3. 液相色谱法：通过液相色谱仪对物质进行分离和分析。
可以通过改变柱材料、溶剂组成和流速等条件，实现对多种生化物质的分离和定量分析。
4. 质谱分析法：通过质谱仪对物质的质量-电荷比进行检测和分析。
质谱分析可以用于确定物质的分子结构、元素组成，以及定量分析等。
5. 核磁共振法：通过核磁共振仪对物质的核自旋和能级进行检测和分析。
核磁共振技术在蛋白质、核酸结构研究和药物设计中具有重要应用。
三、生理生化分析在医学领域的应用生理生化分析在医学领域具有广泛的应用，常见的应用包括：1. 临床诊断：通过检测血液、尿液等生物样本中的生化物质的含量和状态，可以辅助医生进行疾病的诊断和治疗。
例如，血糖检测可用于糖尿病的诊断和治疗监测。
2. 肿瘤标志物检测：通过检测血液或其他生物样本中的特定蛋白质、核酸等生化物质，可以辅助肿瘤的早期筛查和诊断。
常见的肿瘤标志物包括癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等。
生化检验技术实验报告
一、实验目的1. 掌握血糖测定的原理和方法。
2. 熟悉血糖测定仪器的操作流程。
3. 了解血糖在人体代谢中的重要性。
二、实验原理血糖测定是通过检测血液中的葡萄糖浓度来评估血糖水平。
常用的血糖测定方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖氧化酶-氧电极法等。
本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖测定。
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下分解为水和氧气，氧气在电极上还原，产生电流，电流大小与葡萄糖浓度成正比。
三、实验设备与试剂1. 实验设备：血糖测定仪、微量移液器、移液管、一次性采血针、酒精棉球、消毒液等。
2. 实验试剂：葡萄糖氧化酶试剂盒、葡萄糖标准品、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）准备标准溶液：将葡萄糖标准品用蒸馏水稀释成不同浓度的标准溶液。
（2）按照试剂盒说明书设置血糖测定仪，将标准溶液分别加入测定管中。
（3）开启血糖测定仪，依次测定各标准溶液的血糖浓度，记录数据。
（4）以葡萄糖浓度为横坐标，测定值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血糖测定（1）用酒精棉球消毒采血部位，用一次性采血针对准静脉，待血液流出后，用消毒液消毒采血针。
（2）用微量移液器吸取适量血液，加入测定管中。
（3）按照试剂盒说明书设置血糖测定仪，将测定管放入测定仪中。
（4）开启血糖测定仪，待测定仪显示血糖浓度后，记录数据。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制绘制标准曲线，得到线性方程：y = 0.0037x + 0.0035，R² = 0.9987。
2. 血糖测定本次实验测得血糖浓度为4.5 mmol/L。
六、实验讨论1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖测定，操作简便、快速，准确性较高。
2. 在实验过程中，要注意控制操作误差，如准确配制标准溶液、正确设置测定仪等。
3. 血糖测定对于糖尿病等疾病的诊断和治疗具有重要意义，本实验有助于加深对血糖测定原理和方法的理解。
生化知识点总结大全
生化知识点总结大全生物化学是研究生物分子、细胞和组织等生物学基本单位在化学层面上的结构、功能和相互关系的一门学科。
生物化学知识的掌握对于理解生物体内各种生理过程以及疾病的发生、发展和治疗都具有重要意义。
下面将对生化知识点进行总结，包括生物大分子、酶和代谢、细胞信号传导、遗传信息的传递和表达等内容。
一、生物大分子1. 蛋白质蛋白质是由氨基酸组成的大分子，是生物体内最重要的大分子之一。
蛋白质的结构包括一级结构、二级结构、三级结构和四级结构，分别代表了氨基酸序列、局部结构、全局结构和蛋白质的组装形式。
蛋白质在生物体内担任着结构、酶、携氧等多种重要功能。
2. 核酸核酸是构成生物体遗传信息的重要大分子。
核酸包括DNA和RNA两类，其中DNA是生物体内遗传信息的主要携带者，而RNA则参与了蛋白质的合成过程。
核酸的结构包括磷酸、核糖和碱基，它们通过磷酸二酯键相连而形成长链状结构。
3. 脂类脂类是一类绝缘性物质，其分子结构包含甘油酯和磷脂，具有水、油双亲性，是细胞膜的主要构成成分。
脂类还包括胆固醇和脂蛋白，它们在人体内参与了能量储存、细胞膜形成、传递体内信息等多种生理活动。
二、酶和代谢1. 酶的分类和特性酶是一类生物催化剂，可以加速生物体内的化学反应。
酶根据其作用的基质可以分为氧化还原酶、水解酶、转移酶等多种类型；根据作用反应的特点还可以分为氧化酶、脱氢酶、水合酶等。
酶的活性受到PH值、温度、离子浓度等因素的影响。
2. 代谢途径代谢是生物体维持生命活动所必需的化学反应过程，包括物质的合成、降解和转化等步骤。
常见的代谢途径包括糖酵解、三羧酸循环、氧化磷酸化等。
这些代谢途径通过调控酶的活性来维持生物体内各种代谢物质的平衡。
三、细胞信号传导1. 受体的结构和功能受体是细胞膜上的一类蛋白质，可以感知外界信号并将其转化为细胞内信号传导的起始物质。
受体的结构包括外部配体结合区、跨膜区和细胞内信号传递区，它可以通过配体结合激活下游信号分子，从而引发细胞内的生理反应。
《生化分析检测技术》PPT课件
❖ Pure protein of known absorbance coefficient. Use the following formula for a path length of 1 cm. Concentration is in mg/ml, %, or molarity depending on which type coefficient is used.
2.1.1 吸光光度法
Absorbance assays
❖ Absorbance Assay (280 nm)
❖ Considerations for use
❖ Absorbance assays are fast and convenient, since no additional reagents or incubations are required. No protein standard need be prepared. The assay does not consume the protein. The relationship of absorbance to protein concentration is linear. Because different proteins and nucleic acids have widely varying absorption characteristics there may be considerable error, especially for unknowns or protein mixtures. Any non-protein component of the solution that absorbs ultraviolet light will intefere with the assay. Cell and tissue fractionation samples often contain insoluble or colored components that interfere. The most common use for the absorbance assay is to monitor fractions from chromatography columns, or any time a quick estimation is needed and error in protein concentration is not a concern. An absorbance assay is recommended for calibrating bovine serum albumin or other pure protein solutions for use as standards in other methods.
生化检验的一般知识与技能
授课对象：06级检验1-5 班课时：2 学时生化检验的一般知识与技能目标： 1.掌握生化实验室规则，注意事项及应急处理2. 掌握常用容量玻璃仪器的规格和使用规则3. 了解常用清洗液的种类和应用4. 学会使用可调微量加样器实验用品：刻度吸管（1、2 ml、5 ml、10 ml）、容量瓶（各种规格）、微量加样器、洗耳球、试管架、试管（5ml ）等内容：一、实验室规则预习实验、明确目标、准备实验充分有序遵守纪律、听从指导、认真操作、深入思考爱护公物、厉行节约、注意安全、杜绝事故清理环境、保持整洁、及时上交实验报告二、实验室的安全及意外事故的处理实验室的安全，除要求实验人员严格遵守安全制度外，还应该在认真重视安全的基础上，养成一种安全工作的作风，必须具备预防事故发生的措施和对事故的现场处理等方面的基础知识及自救能力。
（一）实验室的安全：防火防爆防化学性危害防生物源性的危害废物的处理（二）事故的应急处理玻璃割伤的处理：（略）药品灼伤的处理：酸灼伤：皮肤---立即用大量自来水冲洗，然后用0.6mol/LNaHCO3 液洗涤眼睛---立即用蒸馏水和洗眼杯冲洗，然后用0.12mol/LNaHCO3液洗涤碱灼伤：皮肤---立即用大量自来水冲洗，然后用饱和硼酸溶液洗涤眼睛---立即用蒸馏水和洗眼杯冲洗，再用0.16mol/L 硼酸溶液洗涤溴灼伤：应立即用乙醇洗涤，再涂上甘油，用力按摩，使甘油渗入毛孔中毒处理：溅入口中尚未咽下的应立即吐出来，用大量请水漱口。
如吞下时，应根据毒物的性质给予解毒剂。
触电处理一旦发生触电事故，首先应立即切断电源，若一时找不到电闸，可用干木棍等绝缘物把导电物与触电者分开，然后进行抢救。
如触电者已停止呼吸，应立即施行人工呼吸。
以上仅是实验室的应急处理，对于重者症应及时送医院急诊处理。
三、用玻璃仪器的清洗（一）几种洗涤液的配制及应用1. 合成洗涤剂：市售，使用方便，去污力强，应用范围广，是常用的洗涤剂。
罗氏 干式生化
罗氏干式生化
罗氏干式生化（Roche Dry Chemistry）是由瑞士制药巨头罗氏（Roche）推出的一种干式生化分析技术。
与传统的液相生化分析技术不同，罗氏干式生化技术通过将试剂固定在干燥的化学芯片上，使其具有较长的保存期限，并且无需额外的试剂配置和仪器清洗步骤。
罗氏干式生化技术可以广泛应用于临床诊断、科研实验、医学检验等领域。
其主要优势包括快速、准确、高通量、自动化程度高等。
通过使用罗氏干式生化技术，可以实现对血液生化指标、肝功能、肾功能、心肌酶谱、糖代谢指标、血脂等多项生化指标的快速检测和分析。
罗氏干式生化技术主要通过罗氏干式分析仪器来实现。
该仪器采用先进的光学、电子和计算机技术，结合丰富的试剂芯片库存，能够在短时间内完成大量样本的快速分析。
同时，仪器还具有智能化的数据处理和结果解读功能，提供准确的分析结果和自动生成测试报告的能力。
总之，罗氏干式生化技术具有许多优势，是现代生化分析领域的重要技术之一，为临床医学和生命科学研究提供了强大的工具和支持。
生物化学分析技术在生物医学中的应用
生物化学分析技术在生物医学中的应用生物化学分析技术作为一种现代分析技术，近年来在生物医学领域得到了广泛应用。
生物医学领域的发展离不开这种技术的支持，它可以帮助人们更快、更准、更全面地了解生物体内的化学反应过程、生理生化代谢，为各类疾病的诊治提供了更加科学、有效的方法。
一、蛋白质组学蛋白质组学是研究细胞、组织和生物体中所有蛋白质的总量、组成、结构、功能及相互作用的学科。
生物化学分析技术可以快速分离、鉴定蛋白质，并对其性质和功能进行分析。
如今，在药物研发领域，蛋白质组学技术已成为一种非常有前景的筛选药物靶点的手段。
二、代谢组学代谢组学是一种从整体代谢水平研究生物组织或细胞状态的学科。
它能够通过涉足生物大数据挖掘，从血浆、组织或尿液等生物样本中全面、迅速地分析代谢产物，了解代谢途径的变化、寻找生物标志物或者进行疾病监测。
生物化学分析技术在代谢组学中的应用是基于其对代谢物质的测定和化学鉴定能力。
例如,对于一些不同类型的疾病，在血液中含有不同代谢物质成分，通过代谢组学可以快速、有效地鉴定寻找这些特殊成份，为疾病诊断和治疗提供依据和方向。
三、基因组学基因组学是一个研究基因组结构与功能的学科。
在工作原理上，它依赖于分离制备基因，并通过PCR、探针杂交等技术对其进行测序、比对和分析，以了解基因对染色体、遗传信息、生化反应等方面的影响。
同时，生物化学分析技术还可以用于控制基因表达、研究基因调控和功能以及基因转录过程，当然这也对进一步发展分子生物学、生物医学和生态学等领域都有重要推动作用。
四、免疫组学免疫组学是一类按照某一组特异性免疫分子的稳定性和组织学分布情况进行分类研究的学科。
免疫组学需要高敏度、高特异性的肽段检测技术，以快速鉴定特异标志物的含量、来源以及作用机理等信息。
在传统的生物医学研究中，生物化学分析技术被用于肿瘤、免疫疾病的标志物检测、细胞信号通路的调控研究、药效评估等领域。
综上，生物化学分析技术对生物医学的贡献不可忽略。
生化检验基础知识
生化检验基础知识目录一、生物化学概述 (2)1. 生物化学定义 (2)2. 生物化学研究内容 (3)3. 生物化学在医学中的应用 (4)二、生物分子结构与功能 (5)1. 氨基酸 (7)2. 蛋白质 (8)三、生化检验基本技术 (9)1. 样品采集与处理 (10)2. 分离技术与分析方法 (12)3. 生物传感器 (13)4. 高效液相色谱法 (14)四、生化检验项目及其临床意义 (16)1. 血糖与糖化血红蛋白 (18)2. 血脂与载脂蛋白 (18)3. 电解质与酸碱平衡 (20)4. 肾功能检测 (21)5. 肝功能检测 (22)6. 传染病标志物检测 (23)五、生化检验质量控制与标准化 (24)1. 质量控制体系 (26)2. 标准化操作程序 (27)3. 能力验证与结果评价 (27)六、生物化学检验的进展与挑战 (28)1. 新技术新方法的应用 (30)2. 个体化医疗与精准检验 (31)3. 生物安全与生物伦理问题 (33)一、生物化学概述作为医学领域的重要分支，深入研究了生物体内物质的组成、结构及其在维持生命活动中的各种化学反应过程。
它主要关注蛋白质、碳水化合物、脂类和维生素等生物大分子的结构与功能，以及这些大分子之间的相互作用如何影响细胞的代谢和功能。
在生物化学的研究中，通常会采用不同的技术手段，如色谱法、电泳、质谱分析等，来分离、鉴定和分析生物分子。
这些技术的发展和应用，极大地推动了生物化学领域的进步，使得我们能够更深入地理解生命的本质和疾病的机制。
生物化学还与其他学科有着密切的联系，如分子生物学、细胞生物学、遗传学等。
这些学科的交叉融合，不仅丰富了生物化学的研究内容，也为疾病的治疗提供了新的思路和方法。
在对抗生素的使用和耐药性问题时，通过深入了解细菌的生物化学过程，可以更有针对性地开发药物和制定治疗方案。
1. 生物化学定义生物化学（Biochemistry）是研究生物体内化学过程的科学，涉及蛋白质、碳水化合物、脂类和核酸等生物大分子的结构与功能，以及这些大分子之间的相互作用。
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拟南芥psrp．3基因的PCR 扩增与生物信息学分析
拟南芥psrp．3基因的PCR扩增与生物信息学分析 [摘要] 采用PCR法获得拟南芥叶绿体核糖体psrp．3基因序列并进行生物信息学分析．根 据psrp．3基因序列保守区设计2对引物，通过RT-PCR获得预期大小的基因序列，琼脂糖凝胶电泳鉴定目的片段．利用生物信息学软件对拟南芥psrp．3基因序列进行同源比对、氨基酸组成、功能域、二级结构、疏水性、蛋白质功能及系统进化分析和预测．结果表明，RT-PCR获得了一段753 bp的序列，psrp一3蛋白是等电点为9．27的亲水性稳定蛋白，包含一个结构域和一个区域，a螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件，p折叠和伸展链散布其中，和菠菜、葡萄、蓖麻、大豆等的psrp．3蛋白有较高的同源性．为进一步了解psrp．3基因的功能和作用机制打下基础． [关键词] 拟南芥；叶绿体；psrp一3基因 引言 叶绿体是植物细胞和真核藻类的重要细胞器，是植物进行光合作用的场所．叶绿体是半自主性细胞器，具有自身独立的遗传体系和蛋白质合成的全套机构，包括核糖体．叶绿体基因组是植物基因工程研究的热点u剖．至2006年底，已经公布了包括不同物种的叶绿体基因组数据82组，这其中包括同一个种的不同亚种∽J．研究发现，叶绿体70S核糖体含有58。62个核蛋白，其中约有2／3由核基因组编码，其余1／3由叶绿体基因组编码…1．虽然组成叶绿体的绝大多数蛋白质都是来自细胞质，但目前在各种植物的叶绿体中已确定了20个电子传递和光合固碳的基因：编码RuBP羧化酶的大亚基，Ps I的2个亚基，PsⅡ的8个亚基，ATP合成酶的6个亚基，细胞色素b／f复合物的3个亚基，这些都是叶绿体核糖体所合成的重要蛋白质∞剖．因而，研究叶绿体核糖体的重要基因，不仅可以在分子水平上阐明蛋白质之间的相互作用、光合作用各过程的调控，而且可以了解叶绿体的起源与进化、核质互作关系．在叶绿体核糖体中存在着6个特殊的蛋白质(质体特异性核糖体蛋白，plastid．specific ribosomalpro．teins，psrps)，它们都是由核基因编码．其中，psrp—l，psrp-2，psrp．3，psrp-4位于30S小亚基上，psrp-5，psrp-6位于50S大亚基上b4J．叶绿体核糖体只负责合成叶绿体DNA编码的不到一百个多肽，但是其中却包括一些在生物圈中含量最丰富的蛋白质．因而，叶绿体核糖体必须能够维持一个比较高的蛋白质合成率，并且必须具备响应光强度的变化而改变蛋白质合成速率的机制．为了满足光合成蛋白质的需要和核糖体功能的协调，在长期的进化过程中，叶绿体转录翻译发展了大量叶绿体特异的调控元件．定位于核糖体的psrps，就是这样的一套调控元件．psrps可能以总体的形式参与叶绿体中蛋白质合成调控，但目前作用机制并不清楚． Psrp-3基因在拟南芥存在两个同源基因，分别位于染色体I和染色体V(ATlG68590，AT5G15760)上．ATlG68590可以表达，AT5G15760不转录，有可能是伪基因或沉默基因，只在特殊条件下才会表达怕J．psrp．3基因所编码的psrp．3蛋白存在两种形式，一种是N．末端经过翻译后修饰，一种未修饰．这两种形式之间的比率是否固定目前尚不清楚，很可能依据光照强度和光照时间的改变而变化【3,6]．psrp．3蛋白质参与光介导的叶绿体蛋白合成，但其在光介导蛋白合成中的具体功能及作用机制，迄今尚无研究报道． 1材料与方法 1．1材料 1．1．1植物材料 拟南芥(Arabidopsis thaliana ecotype Columbia)Columbia生态型(col一0)．培养条件：光照强度I>3 000 Ix，光暗周期为12 h／12 h，温度为(25±1)℃，相对湿度约70％．生物信息学分析以NCBI数据库中的拟南芥psrp-3基因(ATl G68590)作为研究对象． 1．1．2茵株和质粒 大肠杆菌JMl09、质粒pBIl21载体由南京中医药大学第--I临i床学院针药结合实验室保存． 1．1．3试剂及工具酶TaqDNA聚合酶、反转录酶、dNTP、OligadT等购自宝生物工程(大连)有限公司和上海生工生物公司，DNA分子Marker、DNA回收试剂盒、琼脂糖等其他相关生化试剂购于上海生工生物公司．引物由大连宝生物公司合成． 1．2方法 1．2．1拟南芥总RNA提取 用Tfizol试剂法提取叶片总RNA：将0．3 g叶片放在180℃热处理过的研钵中，加入液氮，迅速研磨成粉末，然后将粉末放入装有l mLTrizol试剂的Eppendorf管中．用宝生物公司提供的RNAiso Reagent试剂盒提取总RNA，经琼脂糖电泳检测总RNA质量． 1．2．2引物设计与psrp-3基因的RT．PcR扩增反应 根据GenBank已登录的拟南芥psrp．3基因序列(ATlG68590)，设计合成引物【10]．并根据植物双元载体pBIl21的多克隆酶切位点，分别设计2条含有Sac I和XbaI限制性内切酶位点的PCR引物．上游引物R：5’．CGTCCA7唧AGACAcAAAA7rCTCCA田GT形硼盼3’，下游引物L：5 7．A’rCGAGAGCTCAA CI’cAGAGTrGCI'IGATG'IqqB3’．以拟南芥RNA为模板，R和L为引物，进行RT-PCR扩增．在PCR管中加入总RNA 8皿，Oligo dT 2皿置于70℃5 min，然后放于冰上；再依次加入5 x Buffer 4 gL，10 mmol／L dNTP 2ttL，AMV l汕，RNase Inhibitor 1肚，42℃放置60 min，冰上冷却，产物置于70℃保存．50μL PCR反应体系为：Ex-Taq25μL，cDNA2μL，引物R和L各1μL，去离子水补至50μL．反应条件为：预变性94℃，2 rain；循环参数，94℃，30 s；52℃，30 s；72℃，1 min 30 s；循环数35；最后延伸，72℃，5 min；4℃保存．PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下割取含有目的片段的凝胶，由试剂盒回收PCR产物，将回收的片段与pBll21载体连接，转化大肠杆菌JMl09，通过菌落PCR方法筛选重组子，提取阳性克隆的质粒DNA，由大连宝生物公司完成测序． 1．2．3蛋白序列同源性分析和系统进化树构建 利用NCBI数据库中的Blot软件将目的基因编码的氨基酸序列与GenBank中的氨基酸序列进行比对和相似性搜索，获得玉米、葡萄、大麦、蓖麻、水稻、拟南芥和大豆等物种的序列数据和信息．进而利用ClustXl．83软件进行多序列同源性比对和聚类分析【13-14]．聚类分析包含以下20个物种的序列：蓖麻(Ricinus communi8(castor bean)，XP-0025291 30)、毛果杨(Populus trichocarpa，XP-IX)23 15948)、葡萄(Vitisvinifem，CAN68341)、菠菜(Spinacia oleracea，P82412)、大豆(Glycine lI瞰，ACUl4369)、蒺藜苜蓿(Medicagotruncatula，ACJ86010)、北美云杉(Picea sitchensis，ABK26571)、玉米(zea mays，NP-001148519)、水稻(Ormsativa，NP-001052994)、高梁(Sorghum bicolor，XP-002446621)、醉蝶花(Cleome spinosa，ABD96848)、小立碗藓(Physcomitrella patens subsp．patens，XP．001778658)、大麦(Hordeum vulgare，048609)、绿球藻(Chlorokybus atmophytieus，m001019068)、紫红紫菜(Porphyra purpurea，NP-053961)、条斑紫菜(Porphyra yezoensis，YP-537032)、蓝细菌(Synechococcus sp．CC9902，m376514)、囊泡藻(Vauchefia litorea，ⅥL002327484)和赤潮异弯藻(Heterosigtm akashiwo，YP-001936340)．进化树使用MEGA4软件的邻接归并法(NJ法)构建，Kimum两 参数模型(Kimura 2-parameter)，自展检验(bootstrap analysis)重复l 000次． 2结果 2．1拟南芥psrp．3基因的PCR扩增及鉴定 提取的总RNA纯度高(见图1)，通过琼脂糖凝胶电泳观察，结果表明RNA有略微降解，28sRNA的亮度与18sRNA亮度相若．以提取的总RNA反转录的cDNA为摸板，用psrp．3基因的特异引物对cDNA进行PCR扩增，扩增产物经l％琼脂糖凝胶电泳鉴定(见图2)，得到的扩增条带为约750 bp的单一条带，与目的片段大小相同．所得产物回收后，将该片段连接到pBll21载体上，转化大肠杆菌JMl09，得到重组质粒，委托大连宝生物公司实验室测序，所得结果用BLAST软件在生物信息学数据库中进行搜索，发现和NCBI数据库中的拟 南芥psrp一3基因(ATlG68590)序列完全一致，说明所扩增的条带为psrp．3基因cDNA克隆． 2．2 psrp-3蛋白的基本理化性质分析 对基因序列及其氨基酸羊列进行分析发现，psrp．3基因cDNA全长753 bo，有1个开放阅读框(核苷酸59～556)，编码l条166个氨基酸残基的蛋白质，由l条44个氨基酸的转运肽和121个氨基酸的成熟蛋白组成．对所推测氨基酸序列进行分析表明，该蛋白相对分子质量为18 472．4，等电点为9．27，负电荷残基(Asp+Gh)总数为13，正电荷残基(Arg+Lys)总数为17，分子式为C,832H1333N2170‰&，原子总数为2 632，不稳定系数为38．35，该蛋白分类为稳定蛋白．脂肪系数为89．28，亲水性评估为一0．212，依据氨基酸分值越低亲水性越强和分值越高疏水性越强的规律，可见该蛋白为亲水性蛋白．该蛋白中相对含量比较多的氨基酸为Ser(18个，占10．8％)，含量比较少的氨基酸是Tyr(1个，占0．6％)．相较于藻类和光合细菌psrp．3，拟南芥成熟psrp．3有1个延长的N．末端和1个截断的c．末端． 2．3系统发育分析 我们将玉米、大麦、水稻、拟南芥、葡萄、苜蓿、菠菜、蓖麻、毛果杨、云杉和大豆等20个物种的psrp．3序列集合到一起，进行多重序列比对，根据psrp一3序列揭示的遗传分化 距离，采用邻接法构建并绘制了系统进化树．分析表明，供试物种的psrp．3序列具有非常高的同源性，这种高同源度在保守的功能结构区域——YcF65更为明显．从构建的进化树可以看出，供试的20个物种的psrp．3被聚成两个大类．囊泡藻和赤潮异湾藻的psrp。3聚为