菌落总数(cfu)和大肠菌群(mpn)的区别复习过程
实验四食品中细菌菌落总数的测定
4、若所有稀释度平板菌落数均<30， 则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍 数计算。
5、若所有稀释度平板均无菌落生长， 则应按<1乘以最低稀释倍数计算。
6、若所有稀释度均不在30～300之间， 有的>300，有的又<30，则应以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
（四） 菌落计数报告方法
（二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察
，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在 记下各皿的菌落总数后，求出同稀释 度的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间，应立即计数。如果 不能立即计数，应将平板放置于0～4℃ ，但不要超过24h。
1、 平皿菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作
例如：
稀释度 1:100（第一稀释度） 1:1000（第二稀释度）
菌落数 232，244
33，35
232+244+33+35 (2+0.1×2) ×10-2
=544/0.022=24727
四舍五入表示为: 2.5 × 104
3、 若所有稀释度的平板菌落数均 >300，则取最高稀释度的平均菌落数乘 以稀释倍数计算。
酱油（GB/T2717-2003）： 细菌菌落总数： ≤30000 CFU/mL 大肠菌群： ≤30MPN/100mL 肠道致病菌： 不得检出
全脂奶粉、脱脂奶粉（GB5410-1999）：
特级 一级 二级
细菌菌落总数：≤20000 ≤30000 ≤50000
（CFU/ml）
大肠菌群
≤40
≤90
≤90
一、 目的
1、 学习并掌握食品中菌落总数测定方 法和原理。 2 、了解菌落总数测定在对被样品进行 卫生学评价中的意义 。
肉制品中大肠菌群的检验—第一法大肠菌群MPN计数法(19页)
大肠菌群MPN计数法
一、样品的采集和处理
2. 采样用品 采样箱、 灭菌采样杯、灭菌塑料袋、有盖搪瓷盘、灭菌刀、
剪子、镊子、灭菌带塞广口瓶、灭菌棉签、温度计、编号牌 （或蜡笔和纸）
大肠菌群MPN计数法
一、样品的采集和处理
3. 样品的采取和送检 1. 生肉及脏器的检样
如是屠宰场宰后的畜肉，可于开腔后，用无菌刀采取两腿内侧肌肉各 250g(或劈半后采取两侧背部最长肌肉各250g)，如是冷藏或销售的生肉， 可用无菌刀取腿肉或其他部位的肌肉250g/只（头），检样采取后放入无 菌容器内，立即送检；如果条件不许可时，最好不超过3h。送检时应冷 藏，不得加入任何防腐剂。检样送往化验室应立即检验或放置冰箱暂存。
大肠菌群MPN计数法
三、培养基和试剂
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤、 煌绿乳糖 胆盐（BGLB ）肉汤、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲 液、1mol/L氢氧化钠（NaOH ) 、 1mol/L 盐酸 （HCI ) 。
四、大肠菌群MPN计数检样程序
LST不产气（－） 小导管里无气泡
LST产气（+）
大肠菌群MPN计数法
一、样品的采集和处理
例如:n=5,c=2,m=100CFU/g,M=1000CFU/g。含义是从一批产品中采集5个 样品,
若5个样品的检验结果均小于或等于m 值(≤100CFU/g),则这种情况是允许的; 若≤2个样品的结果(X)位于m 值和M 值之间(100CFU/g<X≤1000CFU/g)， 则这种情况也是允许的; 若有3个及以上样品的检验结果位于m 值和M 值之间,则这种情况是不允许的； 若有任一样品的检验结果大于M 值(>1000CFU/g)，则这种情况也是不允许的。
菌落总数
检验步骤
1
样品的稀释
2
培养
3
菌落计数
4
倾注培养
5
计数和报告
样品的稀释
固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内， 8000r/min~r/min均质1min~2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min， 制成1：10的样品匀液。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求， 以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
概念
概念
菌落总数是食品检样经过处理，在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g(mL)检 样中形成的微生物菌落总数。
菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位 （colonyformingunit，CFU）表示。选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。 低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则 不宜采用，而应以无较大片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半 中菌落分布又很均匀，可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生 长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
3．为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转， 检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。。
第一章食品的腐败和变质(3P)
第一章食品的腐败变质一、腐败与变质1.腐败变质和发酵的区别和联系食品的腐败变质是指食品在一定环境的影响下，在微生物为主的各种因素作用下，所发生的食品成分与感官性状的各种变化。
发酵是指利用微生物或微生物的成分（如酶）产生各种产品的有益过程。
腐败变质和发酵都包含着微生物物质代谢的结果，区别是：对人类有益则称为发酵，无益甚至有害的则称之为腐败变质。
2. 引起食品腐败变质的原因。
（一）微生物的作用：是引起食品腐败变质的重要原因。
微生物包括细菌、霉菌和酵母。
（二）食品本身的组成和性质①理化性质：包括食品本身的成分、所含水分、pH值高低和渗透压的大小。
②食品种类：易保存的食品和易腐败变质的食品。
（三）环境因素温度、湿度、空气等自然条件，对微生物的生长繁殖有着重要的影响，在促进食品本身发生各种变化上起着重要作用，从而成为影响食品变质的重要条件。
二、腐败变质的化学过程食品腐败变质的化学过程包括：（1）食品中蛋白质的分解：蛋白质在微生物的作用下，首先分解为肽，再分解为氨基酸。
氨基酸在相应酶的作用下，进一步分解成有机胺、硫化氛、硫醇、吲哚、粪臭素和醛等物质，具有恶臭味。
★特别是有机胺，作为鉴定肉类和鱼类等富含蛋白质食品的化学指标之一。
（2）食品中脂肪的酸败：酸败是由于动植物组织中或微生物所产生的酶或由于紫外线和氧、水分所引起的，食品中的中性脂肪分解为甘油和脂肪酸。
脂肪酸进一步分解生成过氧化物和氧化物，过氧化物进一步分解为具有特殊刺激气味的酮和醛等酸败产物，产生所谓哈喇味。
★油脂含量丰富的食品腐败变质的特征：过氧化值上升，酸度上升，羰基反应呈阳性。
（3）碳水化合物分解：食品中的碳水化合物包括单糖、寡糖、多糖（淀粉）等。
含碳水化合物的食品主要有粮食、水果、蔬菜和这些食品制品。
主要以碳水化合物在微生物或动植物组织中酶的作用下，经过产生双糖、单糖、有机酸、醇、醛等一系列变化，最后分解成二氧化碳和水。
如：苹果久置腐烂含有酒味，主要是由于碳水化合物生成了醇类物质。
大肠杆菌实验结果与分析
2、实验结果与分析2.1、细菌总数检测结果2.1.2、细菌总数的计算与报告根据菌落总数的计算方法：1、若只有一个稀释度平板上的菌落术在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平均菌落数载适宜计数范围内时，按下式计算：N=∑c/[(n1+0.1n2)d]式中：N—样品中菌落数；∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1—第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2—第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d—稀释因子（第一稀释度）为1.75x107；在浓度10—6(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为1.60x107；在浓度10—7(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为2.01x107。
分析数据可知，在浓度10—7(g/ml)的时候，细菌总数远大于其他两个梯度，这与常理不符。
那么有可能是实验过程中的错误导致，可能是稀释不够、密封不紧、没有进行无菌操作等因素有关。
2.2、大肠菌群检测结果2.1.1、初发酵各浓度梯度阳性管数统计附：检验原始记录检验原始记录检测记录与结果培养基配制：样品配制：1、 固体样品，无菌称取25g 样品加225ml 生理盐水，均质。
2、 液体样品，需稀释的，吸取25ml 于225生理盐水，混匀。
菌落总数：检验依据：GB/T4789.2-2008大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003注：“P ”表示阳性结果，“N ”表示阴性结果检验起止时间：2011年09月25日至2011年09月27日检测人:复核人：。
大肠菌群测定—食品中大肠菌群的测定方法
培养特性： 大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄 糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃， 在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
➢ 在普通营养琼脂上有3中菌落形 态：
➢ 1）光滑型：菌落边缘整齐， 表面有光泽、湿润、
➢ 光滑、呈灰色，在生理盐水 中易分散；
计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳 糖胆盐发酵管。
•
接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml
以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠
杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。
• 置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管 都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产 气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进 行。
4、 大肠菌群最可能数（MPN ）的报告
➢ 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录
B ) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的 MPN 值。 ✓注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，
表内的数也应相应减少或增加。
大肠杆菌 0157显色 培养基上 的菌落
在伊红美兰乳糖琼脂（EMB）上
大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征
设备和材料
食品中大肠菌群测定
参考 GB4789．3-2010
➢主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌 属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属 的Ⅲ亚属细菌组成。
3、大肠杆菌的生物学特性
基本形态
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.50.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但 不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛， 但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体 动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微 荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良 好，革兰氏染色阴性。
mpn法检测大肠菌群的原理
mpn法检测大肠菌群的原理【MPN法检测大肠菌群的原理】嘿，朋友们，你们知道吗？在咱们的厨房里，有一个“隐形的战士”默默地守护着我们的健康。
它就是我们常说的“大肠杆菌”，也就是我们常说的“大肠菌群”。
今天，我就来给大家科普一下，MPN法是怎么检测大肠菌群的，保证让你对这门技术有一个全新的认识。
首先得提提MPN法，这可是个高大上的词儿，全称是最小抑菌单位计数法。
简单来说，就是通过观察微生物在特定培养基上的生长情况，来判断它们的数量。
想象一下，如果把细菌比作小士兵，那么MPN法就像是指挥官，通过观察士兵们的排列阵型，就能判断出整个队伍的规模。
那么，这些“小士兵”是怎么被选中的呢？这就要靠显微镜了。
科学家们会用显微镜仔细观察培养皿中的液体，看哪一群“小士兵”长得最壮、最整齐。
这些长得最“威猛”的“小士兵”就是大肠杆菌了，因为它们是大肠菌群中最大的成员。
接下来，科学家就会把这些“小士兵”送到实验室的大锅里去煮一锅大餐——培养。
他们会把“小士兵”们放在营养充足的培养基上，就像给它们准备一顿丰盛的晚餐，让它们吃饱喝足，然后观察它们的生长情况。
在这个过程中，科学家们会密切关注“小士兵”们的动态。
他们会记录每个“小士兵”的增长速度、生长速度以及最终的数量。
通过这些数据，科学家们就能计算出整个大肠菌群的数量。
这个过程就像是一场盛大的宴会，科学家们就像是宴会的策划者，通过观察和计算，就能准确地计算出宴会的规模。
当科学家们计算出了整个大肠菌群的数量后，就可以得出结论了。
如果数量过多，可能就意味着我们的肠道不太健康；如果数量过少，可能就需要检查一下自己的饮食习惯了。
总的来说，MPN法就像是一场精密的科学盛宴，通过观察和计算，科学家们就能准确地计算出整个大肠菌群的数量。
这不仅让我们对大肠菌群有了更深入的了解，也提醒我们要保持良好的饮食习惯，保护我们的肠道健康。
下次当你看到那些“小士兵”们在培养基上茁壮成长时，不妨想一想，这都是科学家们用智慧和耐心换来的成果。
综训-大肠菌群计数
大肠菌群MPN计数【实验目的】通过本实验学习和掌握食品中大肠菌群计数的方法。
【实验原理】大肠菌群，即在一定培养条件下（37℃、24h之内）能发酵乳酸，产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
主要包括大肠埃希杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸盐杆菌和副大肠杆菌。
水中的病原微生物主要来自人和温血动物的分辨，但是水中的病原微生物分析难度大，对分析者也有危害，大肠菌群在水中生存时间与病原菌基本相同，而且在粪便中数量最多，检出技术上也较为方便，最适合充当水污染的卫生指标。
目前检测大肠菌群的标准分析方法是多管发酵法，以最可能数（most probable number，MPN）来表示检测结果。
MPN是基于泊松分布的一种间接计数法。
我国《生活饮用水卫生标准》规定：生活饮用水中大肠菌群数1L不能超过3个。
【设备和材料】除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃冰箱：2℃～5℃天平：感量0.1g无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头菌锥形瓶：容量500mLpH计或pH比色管或精密pH试纸菌落计数器【培养基和试剂】月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录A 中A.1煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录A 中A.2 无菌生理盐水：见附录A 中A.3无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.4无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.5【检验程序】【操作步骤】1 样品的稀释1.1 以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
1.2 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节。
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菌落总数(c f u)和大肠菌群(m p n)的区别
摘要：菌落总数和大肠菌群是食品中安全性指标，针对食品微生物检测中茵落总数结果很高但大肠菌群很低进行分析。
关键词：菌落总数；大肠菌群；食品
我国的国家标准绝大多数食品都制订了菌落总数和大肠菌群的指标，并对其数量做了详细的规定，菌落总数和大肠菌群是食品中安全性指标，是影响产品质量问题的常见指标，常常受到生产企业和消费者的高度父注，菌落总数的报告单位是cfu／g (ml )，大肠菌群的报告位是mpn／100g ( ml)，那么cfu，mpn 是什么含义呢，有的食品微生物检测中菌落总数结果很高但大肠菌群很低，有关企业对此不太理解，现在将做一下解释说明。
L菌落总数(cfu)
菌落总数是用来判定食品在被加工过程中被污染的程度及卫生质量的重要指标，食品的生产加工过程叶中，卫生质量的高低首先决定食品原料的来源．原料的卫生与否，是否被污染过，这是根本原因，其次是环境卫生水平的高低，再次就是加工人员和加工工具的卫生状况，要保证食品卫生安全就必须保证所加工的原料来源，环境，加工工具和人员符合卫生标准，但是如何判定食品生产加工过程中是否符合卫生要求，以便对被检产品做出一个科学的评价，菌落总数的多少在一定程度上反映出卫生质量的优劣，也可以用这一方法观察出食品中细菌的繁殖动态，以便于对被捡样品进行卫生评价时提供科学依据。
菌落总数中的菌落英文意思是(colony)，定义为细菌和其他几种做微生物在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物，它是由数以万计的相同细菌聚集而成的，故又有细菌集落之称。
各种细菌的菌落各自具有一定的特征，按其特征的不同可以在某种程度上鉴别某种细菌，为卫生检验提供依据，菌落总数是指在被检样品的单位重量( g )．体积(m1) 或表面积(clni) 内所含能于某种固体培养基上在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。
其培养的原理是以检样在被稀释到一定体积后，吸取一定量的检样，检样中的细菌细胞和培养基混合后，每个细菌细胞部形成一个肉眼可见的菌落的假设为基础的．由于检验中采用的是37℃有氧条件下培养。
因而并不能测出每克或每毫升样品内的实际活菌数，其中的微嗜氧菌，厌氧菌，冷营养菌在此条件下都不能生长，有特殊营养要求的一些细菌的生长也受到了限制，因此培养的只是一群能在普通营养琼脂中发育中发育的嗜中温的需氧兼性厌氧的细菌总数，只有具备每种细菌生长要求的特定的环境条件，才能将所有细菌全部培养出来，因此要的到全部的茼落总数应将检样接种到不同的培养基上，但国家的食品卫生标准对食品中菌落总数的规定并不需要接种不同的非选择性培养基，原因就是标准所规定的数值全部是在37℃有氧条件下测定得出的。
Cfu是colong forming units的英文缩写，意思是菌落形成单位数，鉴于食品检样的细菌
细胞是以单个，成双或链状，葡萄状或成堆的形式存住，因而在营养琼脂出现的菌落可以来源一个细胞群，也可以是一个单个细胞，因此平板汁数不报告活菌个数，而是以单位重量，体积或表面积内形成单位数(cfu) 报告，cfu／g ( m1 ) 表示每克或每毫升样品中含有多少个菌落形成单位。
2大肠菌群(mpn)
人肠菌群足根据卫生学方面的要求提出的由于大肠菌群的细菌是动物及人类肠道内常居微生物，自然界的大肠菌均来自粪便的污染，之所以对产品卫生状况以大肠菌群来判定依据是大肠菌群严重污染时，肠道内致病菌污染的机会增加，必须看做对人和动物具有潜在的危险性，所以检验大肠菌群作为判断食品产品是否被粪便污染的重要指标，由于大肠菌群在微生物学中的生化特性和血清学方面并非完全一致，因此为了规范统一定义为一群需氧兼性厌氧37℃能够发酵乳糖产酸产气革兰氏染色阴性的无芽孢杆菌，大肠菌群的高低反映加工过
程中粪便污染的程度，是评价产品及食品卫生质量的重要指标，目前以被世界广泛应用于食
品卫生工作中。
Gb4789．3—2003《大肠菌群的测定》是采用三个稀释度九管法根据证实为大肠菌群阳性的发酵管数，查表检索报告每l00 ml样品中大肠菌群的最可能数，稀释度的选择是根据对样品中细菌总数的估算，它是根据样品中大肠菌群在不同浓度试管中的反应分布情况。
MPN是英文most probable number的缩写，是对样品中活菌密度的估计，是一个最可能数，以mp n／1 00ml (g)表示，大肠菌群( mpn ) 越大表示污染越严重，说明产品卫生质量越差。
总之，微生物检验中，由于培养的时问，培养基，环境温度不同，产生的结果多种多样，大肠菌群是菌落总数所检细菌中的一小类细菌，出现菌落总数很高但大肠菌群数很低的检测结果是很正常的现象。
作者：贾强《科技论坛》
作者单位：昌黎县产品质量监督检验所，。