微生物实验教案05(5)厦门大学 微生物 考研
微生物学实验教案
微生物学实验教案引言：微生物学是研究微生物的结构、生长、代谢、生态和应用等方面的科学。
微生物实验是微生物学教学中重要的一环，通过实验可以帮助学生深入了解微生物的特性和应用，提高学生对微生物学的兴趣和理解。
本教案将结合教学目标和实验内容，设计一系列的微生物实验，旨在培养学生的观察和分析能力，提高实验操作技巧，加深对微生物学知识的理解。
一、教学目标：1.了解微生物的概念、分类和特性；2.学习微生物的培养、观察和鉴定方法；3.掌握微生物的常用实验技巧和操作规范；4.培养学生的科学思维和实验设计能力。
二、实验一：微生物的分类与观察实验目的：通过观察不同类型的微生物，了解微生物的形态特征和分类方法。
实验材料与仪器：显微镜、玻璃载片、消毒剂、甲苯、甘露醇、无菌培养皿、细菌培养基、酵母菌培养基。
实验步骤：1.准备工作：（1）消毒显微镜和工作台，用无菌培养皿收集微生物样品。
（2）取适量的微生物样品，分别涂抹于玻璃载片中。
2.显微镜观察：（1）对比观察不同微生物的形态特征，如菌落形态、颜色、大小等。
（2）用不同放大倍数的镜头观察微生物细胞的结构特征。
3.制备细菌涂片：（1）取少量细菌培养液，挖取细菌菌落，均匀涂抹在玻璃载片上。
（2）用火焰烘烤杀灭细菌，用甲苯固定细菌。
4.观察细菌涂片：（1）用40倍镜头观察细菌涂片，观察细菌形态和排列方式。
（2）用100倍镜头观察细菌细胞的结构特征。
5.制备酵母涂片：（1）取酵母菌培养液，从菌落中取适量的酵母。
（2）用甘露醇固定酵母。
6.观察酵母涂片：（1）用40倍镜头观察酵母细胞的形态特征。
（2）用100倍镜头观察酵母细胞的结构特征。
实验结果：通过观察不同类型的微生物涂片，学生能够熟悉不同微生物的形态特征和细胞结构。
讨论与总结：1.微生物的形态特征对其分类具有重要意义。
2.不同微生物类群有不同的细胞结构。
3.观察微生物涂片的方法和技巧。
三、实验二：微生物的培养与鉴定实验目的：通过微生物的培养和鉴定，学习微生物的生长条件和鉴别方法。
微生物学与免疫学实验(厦门大学建设的慕课)
教学目标
通过该课程的学习，使学生能够掌握微生物学与免疫学的基本技术、方法，掌握创新、创业的本领，并能运 用所学的技能去解决实际问程被中华人民共和国教育部认定为首批“国家精品在线开放课程”。
教师简介
张连茹，女，厦门大学生命科学学院生物化学与生物技术系教授，硕士生导师。 陈毅歆，男，厦门大学生命科学学院，公共卫生学院，副教授。 陈航姿，男，厦门大学生命科学学院教授，博士生导师。 金利华，女，厦门大学副教授。 许晔，男，厦门大学生命科学学院助理教授。 郭慧玲，女，厦门大学生命科学学院助理教授。 王忠安，男，厦门大学高级实验师。
微生物学与免疫学实验（厦门大学建 设的慕课）
厦门大学建设的慕课
01 课程性质
03 教学目标 05 教师简介
目录
02 课程简介 04 所获荣誉
微生物学与免疫学实验课程是厦门大学建设的慕课、国家精品在线开放课程。该课程于2016年10月14日首次 在中国大学MOOC开课，授课教师是张连茹、陈毅歆、陈航姿、金利华、许晔、郭慧玲、王忠安等人。据2021年8 月中国大学MOOC官网显示，该课程已经开课10次。
该课程适合先修了微生物学理论课的在校大学一、二年级学生；本科非生物专业的生物专业的研究生；具有 高中生物等相应的知识的非专业学生；愿意学习的人均可参加本课程的学习；拟开展创新创业的人；喜欢探索生 命奥秘的人学习。
课程简介
该课程共十五周，主要内容包括从自身或环境中分离、培养微生物的技术和方法以及获得抗菌等活性菌株的 方法；典型微生物的形态观察与鉴定的方法；酿酒等微生物的发酵及其产物测定等技术；抗体的制备、检测等免 疫学最基本的实验技能等。
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该课程共十五周，主要内容包括从自身或环境中分离、培养微生物的技术和方法以及获得抗菌等活性菌株的 方法；典型微生物的形态观察与鉴定的方法；酿酒等微生物的发酵及其产物测定等技术；抗体的制备、检测等免 疫学最基本的实验技能等。
微生物学实验教案
微生物学实验教案 TTA standardization office【TTA 5AB- TTAK 08- TTA 2C】微生物实验教案实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察一、实验目的以染色玻片为例，熟练掌握显微镜油镜的使用方法。
二、实验原理1 显微镜油镜使用的原理（1）光学部分: 接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。
它使检视物放大, 造成物象。
（2）机械部分: 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。
它起着支持、调节、固定等作用。
2显微镜的放大倍数和分辨率（1）放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数（2）显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：D=λ/2n·sin(α/2 )式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。
λ：可见光的波长（平均μm）n: 物镜和被检标本间介质的折射率。
a：镜口角（即入射角）。
3油镜使用的原理油镜，即油浸接物镜。
当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。
若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。
三、实验材料1显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、酒精灯、火柴、玻璃铅笔、蒸馏水等。
2枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的玻片染色标本。
四、实验方法与步骤（1）用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。
（2）调节光亮度。
（3）低倍镜观察：先粗调再微调至物象清晰。
（4）转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。
（5）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋转转换器，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。
（6）绘出所观察到的细菌形态图像。
（7）、换片：另换新片观察，必须从（3）步开始操作。
微生物学(厦门大学提供的慕课)
课程定位
课程背景
适用对象
课程背景
21世纪，建立与时俱进的微生物学开放课程，有助于大学资源在微生物这一重要生物学应用领域对社会的贡 献，也有助于帮助需要了解相关知识进行科研工作的科技工作者以较短时间掌握相关信息。在此背景下，厦门大 学开设了微生物学课程。
课程大纲
课程大纲
（注：课程大纲排版从左到右列 ） （注：课程大纲排版从左到右列 ）
课前预备
预备知识
学习资料
预备知识
1.该课程的PPT课件是英语，学习者需要一定的英语水平。 2.学习者具备一定的细胞生物学和生物化学的基础（非强制要求）对该课程的学习有一定的帮助。
学习资料
（注：表格内容参考资料 ）
成绩合格及优秀的同学可根据实际需要申请认证证书。
所获荣誉
所获荣誉
2019年1月8日，该课程被中华人民共和国教育部认定为“2018年国家精品在线开放课程”。
教师简介
教师简介
郭峰，厦门大学生命科学学院副教授，主要从事自然与人工环境中具有重要功能的复杂微生物群落的相互关 系研究。
张连茹，厦门大学教授。 田蕴，厦门大学生命科学学院教授，研究方向：微生物生理，微生物分子生态。 袁晶，厦门大学生命科学学院教授。
微生物学（厦门大学提供的慕 课）
厦门大学提供的慕课
01
03 课程简介 05 课前预备
目录
02 开课信息 04 课程大纲 06 授课目标
07 证书要求
09 教师简介
目录
08 所获荣誉
基本信息
微生物学课程是厦门大学于2016年11月22日首次在中国大学MOOC开设的慕课、国家精品在线开放课程。该课 程授课教师是郭峰、张连茹、田蕴、袁晶。据2021年3月中国大学MOOC官网显示，该课程已开课6次。
微生物实验教案
微生物实验教案教案标题：微生物实验教案教案概述：本教案旨在通过进行微生物实验，帮助学生了解微生物的基本概念、特性和重要性，并培养学生的实验设计和科学观察能力。
本教案适用于中学生，适合在生物学或化学课程中进行。
教学目标：1. 了解微生物的基本概念、分类和特性。
2. 掌握微生物实验的基本步骤和安全操作规范。
3. 培养学生的实验设计和科学观察能力。
4. 培养学生的团队合作和沟通能力。
教材和资源：1. 教材：相关微生物实验的教科书章节或课堂讲义。
2. 实验材料：培养皿、琼脂培养基、试管、显微镜、标本玻片、酒精灯、消毒液等。
3. 安全设备：实验室手套、实验室口罩、实验室眼镜等。
教学步骤：引入：1. 向学生介绍微生物的概念和分类，并讨论微生物在生态系统中的重要性。
2. 引导学生思考微生物实验的意义和目的。
实验设计：1. 将学生分成小组，每个小组选择一个微生物实验的主题，如细菌培养、酵母发酵等。
2. 学生根据实验主题，设计实验步骤、所需材料和实验条件。
3. 引导学生考虑实验的控制组和实验组，以及结果的观察指标。
实验操作：1. 学生按照实验设计，准备实验所需材料和设备。
2. 引导学生进行实验操作，包括制备培养基、接种微生物、控制实验条件等。
3. 强调实验操作的安全规范，如佩戴实验室手套、避免直接接触微生物等。
观察和记录：1. 学生观察实验过程中微生物的生长情况，并记录观察结果。
2. 引导学生分析实验结果，比较控制组和实验组的差异。
3. 鼓励学生提出解释实验结果的假设，并进行讨论和探究。
总结和讨论：1. 学生总结实验结果，并与实验目标进行对比。
2. 引导学生讨论实验中遇到的困难、解决方法和改进意见。
3. 引导学生思考微生物实验的应用领域和未来发展方向。
扩展活动：1. 鼓励学生进行更复杂的微生物实验，如抗生素敏感性测试、微生物鉴定等。
2. 引导学生进行实验结果的统计和数据分析，培养科学研究的能力。
3. 鼓励学生参加科学竞赛或科研项目，拓展微生物实验的应用和创新。
微生物实验教案05(5)厦门大学 微生物 考研电子教案
实验一光学显微镜----油镜的使用一、实验目的1 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术2 了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。
二、实验材料和用具细菌三型的染色装片、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。
三、操作步骤(一)观察前的准备1．将显微镜置于平稳的实验台上。
2．调节光源。
(二)低倍镜观察染色装片首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。
移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。
(三)高倍镜观察眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相懂。
再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。
用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。
将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。
不要移动装片位置，准备用油镜观察。
(四)油镜观察1．提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。
在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴一滴香柏油。
2．从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。
3．将光线调亮，左眼从目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升(切忌反方向旋转)，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距。
如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作直至物像看清为止。
仔细观察并绘图。
4．再次观察提起镜筒，换上金黄色葡萄球菌染色装片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察，绘图。
重复观察时可比第一次少加香柏油。
(五)镜检完毕后的工作1．移开物镜镜头。
2．取出装片。
3．清洁油镜。
4．擦净显微镜，将各部分还原。
四、注意事项1．使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察。
2．下降镜头时，一定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，边观察边下降镜头的错误操作，以免压碎玻片而损坏镜头。
微生物学实验教案
微生物学实验教案第一篇：微生物学实验教案实验一显微镜的构造和使用方法一、实验目的及要求1.了解显微镜的构造和性能2.掌握显微镜的正确使用和维护方法二、原理微生物最显著的特点是个体微小，必须借助显微镜才能观察它们的个体形态和细胞构造，熟悉显微镜和掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。
本实验主要介绍目前微生物学研究中最常用的普通光学显微镜的结构和使用方法，目的在于使同学们通过本实验，对光学显微镜有比较全面的了解，并重点掌握明视野普通光学显微镜中油镜的使用。
三、显微镜的构造和性能1.构造（1）机械系统：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、推进器、调节螺旋。
（2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、反光镜、滤光片。
2.性能（1）分辨力和数值孔径分辨力用D表示，D=0.5×(λ/N.A)N.A=n×Sin(α/2)N.A为数值孔径；λ为入射光波长；n为介质折射率。
α为镜口角。
（2）放大倍数放大倍数 = 物镜的放大倍数×目镜的放大倍数四、实验器材显微镜、标本、擦镜纸、香柏油、二甲苯五、显微镜的使用方法1、对光：光强时用平面镜，光弱时用凹面镜，视野明亮即可。
2、镜检：低倍镜——定位；高倍镜——观察；油镜——观察3、镜检完毕后的工作：擦拭镜头（标本）等，还原显微镜，登记，洗手，离开。
4、总流程：安装—调光源—调目镜—调聚光器—镜检—擦镜头——复原—登记。
六、作业（可选）1、哪些方法可以提高显微镜的分辨率？2、2、为什么有时候在低倍镜下可看到的目标，换用高倍镜则无法看到？实验二细菌、放线菌的形态观察一、实验目的及要求1.掌握细菌的制片和染色技术2.掌握放线菌形态观察方法3.熟练油镜的使用方法二、细菌染色的基本原理 1.革兰氏染色G＋与G－细胞壁结构不同，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
微生物学实验教案
微生物学实验教案一、实验目的1.了解和熟悉微生物实验操作的基本步骤和方法；2.学习观察和鉴定微生物的基本技能；3.掌握微生物在不同条件下的生长特性；4.培养学生科学实验动手能力和观察分析能力。
二、实验原理微生物学是研究微生物形态、生理特性、发育规律及其与环境的关系等的一门基础学科。
本实验主要学习微生物的培养技术和鉴定方式。
三、实验器材与试剂器材：培养锅、洗耳球、移液管、显微镜、移液枪等；试剂：琼脂、无菌培养基等。
四、实验操作步骤1.实验前准备（1）清洗培养锅、显微镜及其他实验器材；（2）准备无菌试剂，如无菌培养基、琼脂等，保持无菌状态；（3）准备待测样品，如土壤、水样或其他微生物样本。
2.杂菌分离（1）取一支无菌试管，加入10ml无菌培养基；（2）取土壤或水样品，使用洗耳球采集样品，并将样品转移到培养基中；（3）培养管轻轻摇晃，使样品均匀分布；（4）用生物安全柜将培养管拧紧，并培养在25℃恒温器中。
3.培养菌液制备（1）取一支无菌试管，并加入10ml无菌培养基；（2）用移液枪吸取微生物样品（建议使用已鉴定的纯种菌株），转移至培养基中；（3）轻轻摇动试管，使菌液均匀分散；（4）用生物安全柜将试管拧紧，并培养在适宜的温度下。
4.培养基的制备（1）取一瓶无菌培养基，按照说明书的要求精确称量；（2）将称量好的培养基加入适量的蒸馏水中溶解；（3）使用琼脂将培养基点温和保温，搅拌溶解；（4）用生物安全柜将琼脂倒入培养锅中，并冷却凝胶。
5.微生物样本的观察和鉴定（1）将培养物放在显微镜下观察；（2）观察菌落的形态、颜色和边缘等特征，并进行记录；（3）准备挂片，使用适当的染色方法，如革兰氏染色或荧光抗体染色；（4）观察染色后的细胞形态、颜色和结构等特征，并进行鉴定。
6.培养条件的影响观察（1）准备含有不同营养成分的培养基；（2）将各种培养基接种相同的菌株，并培养在不同的条件下，如温度、光照、湿度等；（3）观察和记录菌落的生长情况，并比较不同条件下的差异。
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实验一光学显微镜----油镜的使用一、实验目的1 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术2 了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。
二、实验材料和用具细菌三型的染色装片、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。
三、操作步骤(一)观察前的准备1．将显微镜置于平稳的实验台上。
2．调节光源。
(二)低倍镜观察染色装片首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。
移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。
(三)高倍镜观察眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相懂。
再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。
用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。
将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。
不要移动装片位置，准备用油镜观察。
(四)油镜观察1．提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。
在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴一滴香柏油。
2．从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。
3．将光线调亮，左眼从目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升(切忌反方向旋转)，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距。
如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作直至物像看清为止。
仔细观察并绘图。
4．再次观察提起镜筒，换上金黄色葡萄球菌染色装片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察，绘图。
重复观察时可比第一次少加香柏油。
(五)镜检完毕后的工作1．移开物镜镜头。
2．取出装片。
3．清洁油镜。
4．擦净显微镜，将各部分还原。
四、注意事项1．使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察。
2．下降镜头时，一定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，边观察边下降镜头的错误操作，以免压碎玻片而损坏镜头。
3．使用二甲苯擦镜头时，注意二甲苯不能过多，以防溶解固定透镜的树脂。
4．注意保持显微镜的洁净，对金属部分要用软布擦拭，擦镜头必须用擦镜纸，切勿用手或用普通布、纸等，以免损坏镜头。
五、实验报告1．绘制油镜下的细菌三型图。
2．使用油镜应特别注意哪些问题？3．当物镜从低倍镜转到高倍镜和油镜时，对照明度有何要求？应如何调节？实验二培养基的配制一、实验目的1 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2 明确培养基的配制原理。
二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、NaCl。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。
三、操作步骤牛肉膏蛋白胨培养基的配制，其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH 7.4～7.61．称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
2．加热溶解此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
3．调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4．过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
5．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。
半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
6．加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。
棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。
有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。
有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。
7．包扎加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中，则应以5支或7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。
然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。
8．灭菌9．摆斜面灭菌后，摆斜面，便斜面的长度不超过试管总长的1/2。
10．无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。
四、注意事项称药品用的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。
调pH时要小心操作，避免回调。
不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。
五、实验报告1 记录本实验配制培养基的名称、数量。
2．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中应注意些什么问题?为什么?3．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查?实验三高压蒸汽灭菌一、实验目的1．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
2．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验器材牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿(6套一包)，立式高压蒸汽灭菌锅等。
三、操作步骤1．首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
切勿忘记加水，同时水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。
2．放回内层锅，并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加到逐渐上升。
当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
本实验用0.1Mpa，121.5℃，20min灭菌。
灭菌的主要因素是温度而不是压力。
因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。
5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。
否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。
6．将取出的灭菌培养基，需摆斜面的则摆成斜面，然后放入37℃温箱培养24h，经检查若无杂菌生长，即可待用。
四、实验报告l．高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？2．在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素?3．灭菌在微生物实验操作中有何重要意义?实验四细菌的革兰氏染色一、实验目的掌握细菌涂片方法及革兰氏染色法步骤。
二、实验材料和用具金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(E.coli)菌液，待测菌菌液1～2种。
革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液等)、香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。
三、操作步骤(一)制片1．涂菌用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。
涂菌后将接种环火焰灭菌。
2．干燥于空气中自然干燥。
亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。
3．固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。
此制片可用于染色。
(二)染色l．初染于制片上滴加结晶紫染液，染l min后，用水洗去剩余染料。
2．媒染滴加卢戈氏碘液，l min后水洗。
3．脱色滴加95%乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s 至l min)，水洗。
4．复染滴加石炭酸复红液复染l min，水洗。
5．滤纸吸干，油镜镜检。
(三)结果革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。
四、注意事项1. 涂片务求均匀，切忌过厚。
2．在染色过程中，不可使染液干涸。
3．脱色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使阳性菌被染成阴性菌；脱色不够，则会使阴性菌被染成阳性菌。
4．老龄菌因体内核酸减少，会便阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。
五、实验报吉(一)绘图1．大肠杆菌革兰氏染色视野图。
2．金黄色葡萄球菌或苏云金杆菌革兰氏染色视野图。
(二)问题和思考1．涂片后为什么要进行固定?固定时应注意什么?2．什么是革兰氏染色法?染色过程应注意什么?3. 革兰氏染色中哪一步是关键，为什么？应如何控制这一步？实验五霉菌的形态观察一、实验目的掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。
二、实验材料和用具产黄青霉(Penicfillium chrysogenum)、黑曲霉(Aspergillus niger)、黑根霉(Rhizopus nigrians)、总状毛霉(Mucor racemosus)等斜面菌种。
半固体PDA培养基、乳酸苯酚固定液、棉蓝染色液、20%甘油；培养皿、载玻片、U形玻棒搁架、盖玻片、圆形滤纸片、细口滴管、镊子、显微镜、接种环等。
三、操作步骤(一)霉菌的载玻片湿室培养1．准备湿室在培养皿底铺一张圆形滤纸片，其上放一“冂”形载玻片搁架，在搁梁上放一块载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，外用纸包扎，经12lC湿热灭菌30min后，置60℃烘箱中烘干，备用。
2．接种用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子至湿室内的载玻片上，每张载玻片可接同一菌种的孢子两处。
接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可(务必记住接种的位置)。
3．加培养基用无菌细口滴管吸取少量融化约60℃的培养基，滴加到载玻片的接种处，培养基应滴得圆而薄，其直径约为0.5cm(滴加量一般以l/2小滴为宜)。
4．加盖玻片在培养基未彻底凝固前．用无菌镊子将皿内盖玻片盖在琼脂块薄层上，用镊子轻压，使盖玻片和载玻片间的距离相当接近，但不能压扁，否则不透气。
5．倒保湿剂每皿倒大约3mL 20%的无菌甘油，使皿内的滤纸完全润湿，以保持皿内湿度，皿盖上注明菌名、组别和接种日期。