栽培忍冬茎叶活性成分含量测定及其抑菌活性研究

河南农业科学，２０１２，４１（３）：１３３－１３６　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ栽培忍冬茎叶活性成分含量测定及其抑菌活性研究韩　树１，张　云２，王俊儒３（１．郑州职业技术学院，河南郑州４５０１２１；２．郑州拓洋集团，河南郑州４５００００；３．西北农林科技大学理学院，陕西杨凌７１２１００）摘要：为了解栽培忍冬茎叶的药用价值及其粗提物的抑菌活性，采用分光光度法测定了栽培忍冬茎叶、忍冬花蕾及野生忍冬花蕾活性成分的含量，并采用滤纸片法测定了忍冬茎叶粗提物不同萃取部位对７种常见病原菌的抑制效果。

结果表明，忍冬茎叶中的总酚酸、总黄酮及可溶性总糖的含量分别为１２．７４ｍｇ／ｇ、２１．６４ｍｇ／ｇ、７７．４０ｍｇ／ｇ；不同样品总酚酸含量大小顺序是忍冬茎叶＜野生忍冬花蕾＜忍冬花蕾，总黄酮含量大小顺序是野生忍冬花蕾＜忍冬茎叶＜忍冬花蕾，可溶性总糖含量大小顺序是野生忍冬花蕾＜忍冬花蕾＜忍冬茎叶。

栽培忍冬乙醇提取物乙酸乙酯部分对辣椒疫霉病原菌、黄瓜枯萎病原菌、金黄色葡萄球菌等病原菌抑菌效果最好，抑菌环的直径分别为２．７２ｍｍ、３．１０ｍｍ、３．０５ｍｍ，其最小抑菌质量浓度分别为２０ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、１５ｇ／Ｌ。

人工引种栽培可有效提高忍冬药材内在品质；栽培忍冬茎叶粗提物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部分抑菌活性较强。

关键词：忍冬；活性成分；总酚酸；抑菌活性中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４－３２６８（２０１２）０３－０１３３－０４Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ａｃｔｉｖｅ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅＳｔｅｍｓ　ａｎｄ　Ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ．ａｎｄＴｈｅｉｒ　Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓＨＡＮ　Ｓｈｕ１，ＺＨＡＮＧ　Ｙｕｎ２，ＷＡＮＧ　Ｊｕｎ－ｒｕ３（１．Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０１２１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｕｏｙａｎｇ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ　＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ，ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕ－ｅｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ，ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ａｎｄ　ｗｉｌｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｓｅｖｅｎ　ｃｏｍｍｏｎ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｆｉｌｔｅｒ　ｐａｐｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌ，ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓｕｇａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａ－ｐｏｎｉｃａ　ｗｅｒｅ　１２．７４ｍｇ／ｇ，２１．６４ｍｇ／ｇ　ａｎｄ　７７．４０ｍｇ／ｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ＜ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ　Ｌ．ｊａ－ｐｏｎｉｃａ＜ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ；ｔｈｅ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　ｔｈｅｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ＜ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ＜ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ；ｔｈｅ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓｕｇａｒ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄＬ．ｊａｐｏｎｉｃａ＜ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ＜ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　Ｌ．ｊａ－ｐｏｎｉｃａ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｇａｉｎｓｔＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉｃｉ，Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．ｆ　ｓｐ．ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍａｎｄ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗｅｒｅ收稿日期：２０１１－１０－１５基金项目：教育部“新世纪优秀人才支持计划”基金项目（ＮＣＥＴ－０５－０８５５）作者简介：韩　树（１９８３－），男，湖北大悟人，硕士，主要从事天然药物化学方面的研究。

Ｅ－ｍａｉｌ：ｈａｎｓｈｕ１１０＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍｔｈｅ　ｂｅｓｔ，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ｒｉｎｇ　ｏｆ　２．７２ｍｍ，３．１０ｍｍ　ａｎｄ　３．０５ｍｍ　ｒｅｓｐｅｃｉｔｖｅ－ｌｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２０ｇ／Ｌ，１０ｇ／Ｌ，１５ｇ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａｃｏｕｌｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｉｔｓ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄ　ｔｈｅｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ｂｕｔａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐａｒｔｓ　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ；ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ；ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌ；ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ 忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｔｈｕｎｂ．）为忍冬科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）忍冬属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）植物，是我国传统常用中药，其茎、叶、花均可入药［１］，主治痈肿疗疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症［２］。

现代药理研究表明，忍冬还具有抗病原微生物、抗炎、解毒、免疫调节、保肝、降血脂等药理活性［３］，对植物病原菌也具有一定的抑制作用。

目前对栽培忍冬的研究多集中于花蕾，而对茎、叶等部位研究较少。

有研究表明［４］，栽培忍冬茎叶化学成分及药理活性与花蕾类似，富含酚酸、黄酮类成分，主要药理作用为消炎作用，并对多种致病性细菌有抑制作用。

鉴于此，测定了栽培忍冬茎叶中总酚酸、总黄酮及可溶性总糖含量，并与栽培忍冬花蕾及野生忍冬花蕾进行比较；采用滤纸片法测定了栽培忍冬茎叶粗提物不同萃取部分对７种常见病菌的抑制效果，探讨了栽培忍冬茎叶活性成分与药理活性的内在关系，为充分合理开发忍冬茎叶资源提供一定的理论依据。

１　材料和方法１．１　试验材料栽培忍冬的茎叶和花蕾于２００６年９月采于汉中市草堰乡金银花ＧＡＰ示范基地，野生忍冬花蕾于２００６年５月采于汉中市梁山，经西北植物所常朝阳副教授鉴定，均为忍冬（Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｔｈｕｎｂ．）。

样品经自然阴干后粉碎备用。

草莓枯萎病原菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｆｒａｇａｒｉａｅ）、辣椒疫霉病原菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｃａｐｓｉ－ｃｉ）、青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ，Ｐｅ）、黄瓜枯萎病原菌（Ｆｕ－ｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．ｆ　ｓｐ．ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ，Ｈ）、西瓜枯萎病原菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ａｘｙｓｐｏｒｕｍｆ　ｓｐ．ｎｉｖｅｕｍ，Ｘ）、大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）等７种病原菌均由西北农林科技大学无公害农药研究中心提供。

１．２　仪器及试剂ＨＨ－４恒温水浴锅，ＫＱ３２００型超声波清洗器，ＪＡＩ００３型千分之一天平，７５４型紫外分光光度仪，ＰＤＬ－４０Ｂ型离心机，２８０型手提式压力蒸汽灭菌锅，ＣＪ－１６８０型超净工作台，恒温鼓风干燥箱，９ｃｍ培养皿，打孔器，旋转蒸发仪，真空泵。

乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮等有机试剂均为分析纯，没食子酸、芦丁和葡萄糖均为标准品，其余无机试剂均为分析纯。

１．３　提取液制备及标准曲线制作１．３．１　提取液制备　总酚酸及黄酮提取液制备［５］：准确称取供试样品干粉０．１ｇ各３份于１０ｍＬ离心管中，加入８ｍＬ　７０％乙醇，超声３０ｍｉｎ，离心，残渣在相同条件下再提取一次，合并上清液于２０ｍＬ具塞刻度试管中，用７０％乙醇定容，振荡摇匀，标记为Ａ提取液。

可溶性总糖提取液制备：准确称取供试样品干粉０．１ｇ各３份于１０ｍＬ离心管中，加入４ｍＬ蒸馏水，超声１５ｍｉｎ，离心，残渣在相同条件下再提取一次，合并上清液于１０ｍＬ具塞刻度试管中，用蒸馏水定容，振荡摇匀，标记为Ｂ提取液。

１．３．２　标准曲线制作　没食子酸标准曲线制作：参照文献［６－７］中方法，制作没食子酸标准曲线，并进行线性回归计算出没食子酸标准曲线方程为：Ｙ＝０．１４４　１　Ｘ＋０．２９８，Ｒ２＝０．９９９　０，线性范围为１．０２～５．１０ｍｇ／Ｌ。

芦丁标准曲线制作：参照文献［８］的方法，制作芦丁标准曲线，并进行线性回归计算出芦丁标准曲线方程为：Ｙ＝１１．２０６　Ｘ－０．０１４　６，Ｒ２＝０．９９８　９，线性范围为０～０．１ｇ／Ｌ。

葡萄糖标准曲线制作：参照文献［５］的方法，制作葡萄糖标准曲线，并进行线性回归计算出葡萄糖标准曲线方程为：Ｙ＝０．００５　９　Ｘ＋０．０１９　８，Ｒ２＝０．９９０　３，线性范围０～１００ｍｇ／Ｌ。