中华按蚊实验室品系对杀虫剂的敏感性测定
蚊虫抗药性检测方法 生物测定法
蚊虫抗药性检测方法生物测定法1 范围本标准规定了测定蚊虫对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等杀虫药剂抗药性的诊断剂量法和敏感基线法。
本标准适用于淡色库蚊、致倦库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊等蚊虫抗药性的生物测定。
2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1敏感基线所测蚊虫的敏感品系对某种杀虫剂的毒力回归线。
2.2诊断剂由敏感品系的敏感基线计算得到的与死亡率99%或99.9%相对应的杀虫药剂剂量值(LC99或LC9⒐9),一般以2倍LC99或LC9⒐9值区别抗性和敏感种群。
2.3 F1代采集的样本繁殖后的第一代蚊虫。
3 试虫样本多点采集。
幼虫浸渍法采用F1代四龄幼虫。
成蚊接触筒法采用野外采集的幼虫或蛹羽化后,3d~5d 未吸血雌蚊。
4 试剂丙酮、乙醚、白油、杀虫剂原药等。
5 仪器蚊笼、滤纸、吸蚊器。
6 测试条件温度:25℃±1℃,光周期:⒕L:10D,相对湿度:60%~80%。
7 敏感基线法7.1 原理依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程,以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线作为敏感基线。
以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比,来确定待测种群的抗性水平。
具体是比较两条毒力回归线的D 值变化以及回归线计箅得到的半数致死量的变化。
7.2 操作步骤7.2。
l 幼虫浸渍法每只烧杯量入149mL脱氯自来水。
待测药用丙酮等比例或等差稀释至一个系列浓度,通过预实验确定药剂浓度系列范围最低浓度时幼虫死亡率小于20%最高难度大于8O%,然后吸取1mL已配制好的药液滴入水面上，用玻璃棒搅匀，然后把另一杯中预先挑选的幼虫（30只）连同50mL%~80%的水全部注人烧杯内,合计200mL水溶液整个实验保持在25℃±1℃, 相对湿度60%~80%的温室内,24h后检查死亡数死亡率剂量取对数、将死亡率转换为概率单位进行回归，求出LD50值。
7.3 死亡判断7.3.1 幼虫浸渍法轻轻触动幼虫,以不能逃避剌激视7.4 结果表述结果用抗性倍数表述,抗性倍数=待测种群LC50值/敏感种群LC5°值。
中华按蚊对菊酯类杀虫剂的抗性及kdr突变
基金项目： 国家科技重大专项子课题（ 编号： 2012ZX10004219 ） 。 作者简介： 谭伟龙（ 1973 － ） ， 男， 湖南汩罗市人， 副主任医师， 主要从事消毒与媒介生物防治研究工作 。 E － mail： zhaotongyan@ 263． com 通讯作者： 赵彤言， ． 中华卫生杀虫药械， 2015 ， 21 引用格式： 谭伟龙， 朱长强， 艾乐乐， 等． 中华按蚊对菊酯类杀虫剂的抗性及 kdr 突变［J］
Abstract ： Objective Province． Methods
To understand the pyrethroid insecticides resistance level and mutations in the para type sodiAn． sinensis adult mosquitoes were collected in primarily milk cowsheds and pigsties of coun-
um channel gene that confers kdr in Anopheles sinensis from malaria endemic areas along the Hongze Lake in Jiangsu tryside Jiangsu Province from August to September in 2012 － 2013． The insecticide resistance bioassays were performed on adult mosquitoes by using the pesticide impregnated mesh WireBalls assay． MultiplePCＲ method was used to distinguish the mosquito species and genotyping the kdr mutations． Ｒesults All the mosquitoes collected in the five counties were An． sinensis． The average KT50 s of the three pyrethroid insecticides were 16. 92 min to permethrin， 16. 53 min to beta cypermethrin and 22. 98 min to deltamethrin in the five population respectively． The Ｒ / S values were 4. 61 ， 5. 45 ， 4. 60 which suggested that the five populations were resistant to the insecticides． There were two kinds of substitutions （ L1014C and L1014f ） and seven genotypes （ TTG / TTG， TTG / TTT， TTG / TTC， TTG / TTG， TTT / TTT， TTT / TTC， TGT / TGT） in the para sodium channel based on the multiplePCＲ method． The mutation frequencies of 1014F and 1014C were 72% － 87% and 12% － 21% respectively． Conclusion The mosquito population from the five regions around the Hongze Lake all develope resistance to the tested insecticides． High genotyping
杀虫剂室内生物测定
理的物件上。(2)喷粉桌的中央作
为转盘，可以徐徐旋转(每分钟8-
12转)，这样可以校正了喷出不完
全垂直的不均匀情况。
教学ppt
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毒力测定的仪器
1. 喷粉器 4）真空喷粉（抽气喷粉钟罩）：是
采用带塞玻璃钟罩，按放在垫有橡皮 垫和接有通气管的平台上。在玻璃钟 罩顶端开口处，复以代有小管的金属 盖，小管突出盖面约1cm，并用橡皮 塞塞住。目标昆虫及植物体放入钟罩 内，将称好的药粉放于金属小盘内， 然后抽气，当减压到240mmHg时停止 减压，迅速揭开金属小盘上的塞子。 借空气压力把药粉撒开，使药粉沉降 到被测目标昆虫及植物体上，然后取 出被测物体，置于正常的环境条件下， 于规定时间内观察记载试虫的死亡情 况，计算死亡率。
教学ppt
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毒力测定的仪器
1. 喷粉器 3）转盘沉淀喷粉器：原理同上。
两个改进（1）在喷洒接受粉剂的
表面上，加一玻璃板；喷粉之后，
粉剂开始降落时，不是立即落在被
处理物件上，而是落在玻璃板上。
由于先沉淀的粉粒都是比较重大的
颗粒，因而在沉降一定时间后(1—
2分钟)，将玻璃板抽出，使细小均
匀而后来沉降下来的粉粒落在被处
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二、影响杀虫剂毒力测定的因素
2-2、昆虫的性别与生殖状态
性别的影响主要表现在成虫期，在毒力 测定中，对多数昆虫，一般都规定只用 一个性别。
雌虫往往耐药性更强。
雌虫产卵后，对杀虫剂变得敏感些。这 可能与体重、脂肪含量和代谢能力有关 。
教学ppt
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二、影响杀虫剂毒力测定的因素
2-3、昆虫的生理因素 越冬虫：耐药性较高 体内脂肪含量影响敏感性 新陈代谢率越高，呼吸率越高，对杀虫
关于杀虫剂分析检测
关于杀虫剂分析检测中国化工科学技术研究所（国家重点成分分析实验室）杀虫剂。
英文：Pesticide. Insecticide ，次要用于防治农业益虫跟都会卫生益虫的药品．使用汗青久远、用量大、种类多。
在二十世纪，农业的迅速开展，杀虫剂令农业产量大升。
然而，多少乎一切杀虫剂城市严峻地转变生态体系，大局部对于人体无害，其它的会被集中在食品链中。
咱们必需在农业开展与环境及安康中获得均衡。
目次1简介2分类按作用方式按毒理作用按起源3留意事项4最新产物新产物简介制备法子5影响6胎儿影响7敏感度8毒力测定9区别10开展标的目的11惯例常识杀鼠剂卫生杀虫剂12蚊香1简介英文: Pesticide. Insecticide次要用于防治农业益虫跟都会卫生益虫的药品．使用汗青久远、用量大、种类多。
在二十世纪，农业的迅速开展，杀虫剂令农业产量大升。
然而，多少乎一切杀虫剂城市严峻地转变生态体系，大局部对于人体无害，其它的会被集中在食品链中。
咱们必需在农业开展与环境及安康中获得均衡。
按起源可分为生物源杀虫剂跟化学分解杀虫剂两类。
2分类按作用方式可分类为：①胃毒剂。
经虫口进入其消化体系起鸩杀作用，如敌百虫等。
②触杀剂。
与表皮或附器接触后渗入虫体，或侵蚀虫体蜡质层，或梗塞气门而杀死益虫，如拟除虫菊酯、矿油乳剂等。
③熏蒸剂。
应用有毒的气体、液体或固体的挥发而产生蒸气鸩杀益虫或病菌，如溴甲烷等。
④内吸杀虫剂。
被动物种子、根、茎、叶排汇并输导至全株，在必然时代内，以原体或其活化代谢物随益虫取食动物组织或吸吮动物汁液而进入虫体，起鸩杀作用，如乐果等。
按毒理作用可分类为：①神经毒剂。
作用于益虫的神经体系，如滴滴涕、对于硫磷、呋喃丹、除虫菊酯等。
②呼吸毒剂。
按捺益虫的呼吸酶，如氰氢酸等。
③物感性毒剂。
如矿物油剂可梗塞益虫气门，惰性粉可磨立益虫表皮，使益虫致死。
④特异性杀虫剂。
惹起益虫生理上的反常反响，如使益虫离作物远去的驱避剂，以性诱或饵诱诱集益虫的诱致剂，使益虫味觉受按捺没有再取食致使饥饿而死的拒食剂，作用于成虫生殖性能使牝牡之一没有育或两性皆没有育的没有育剂，影响益虫成长、失常、生殖的虫豸成长调理剂等。
白纹伊蚊对3种拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性调查
根据 WHO 区分剂量标准进行测定，分别接触
开，将恢复筒内蚊虫对光轻轻吹入接触筒，迅速关闭 药膜 60 min 后，在恢复筒中以 5% 的葡萄糖水棉球
隔板，将筒平放，使成蚊与药纸充分接触，开始计时， 饲养 24 h，广州市 3 个区白纹伊蚊成蚊对 3 种常用
接触 60 min。④接触完毕后再抽开隔板，将全部蚊 拟除虫菊酯类杀虫剂的校正死亡率（ 表 1） 。
虫吹入恢复筒门关上隔板、取下接触筒。⑤将恢复
表 1 广州市部分地区白纹伊蚊对 3 种拟除虫菊酯的抗药性
地点
测试药物%）
校正死亡率 （ %）
抗性级别
荔湾区
0． 75% 氯菊酯
杀虫剂生物测定技术
LD50的计算方法
作图法 Excel法 最小2乘法
Байду номын сангаас
例：用点滴法测定辛硫磷对玉米螟5龄幼 虫的毒力，试虫平均体重为0.046g/头，每 头试虫点滴0.8μl药剂丙酮液，48h检查试 虫死亡率，结果如表1-1。试计算辛硫磷对 玉米螟5龄幼虫的LD50。
熏蒸作用（fumigation action）测定方法
定义 杀虫药剂以气体的方式通过害 虫的呼吸系统进入虫体，而起到毒杀的作 用称熏蒸作用。
目的 熏蒸作用毒力的测定的目的主 要有2个：一是用鉴别杀虫剂有无熏蒸作 用；二是测定熏蒸剂的杀虫毒力。
注意 要求在一个密闭的条件下进行， 且药剂不与试虫接触。
触杀作用（contact action）测定方法
点滴法 药膜法或残膜法 浸液法
点滴法
室内定量测定触杀毒力最常用的方法。在测定 触杀毒力时，应尽量避免药剂从口器或气孔进入虫 体。直接将药液点滴到昆虫的某一部位。多为幼虫 的前胸背板，溶剂迅速挥发，药剂在体壁上形成药 膜而侵入体内。
药膜法或残膜法
用喷雾法及喷粉法将药剂定量地分布于一 定表面上，如滤纸、玻璃容器内壁及植物叶片 等而形成一层均匀的药膜。使昆虫在药膜上接 触一定时间（4~24h），检查击倒率或死亡率。 求出药剂对试虫的毒力。
浸液法
对于水生昆虫（蚊幼虫、螨类和蚜虫） 将药剂配成5~7个不同浓度有药液，摘取有一 定数量蚜虫的豆苗叶片，在不同药液中浸 3~5s，取出后，用吸水纸吸去多余的药液， 统计叶片上的蚜虫数量，对照用清水处理。 保湿24h，检查蚜虫的死亡数，计算死亡率及 校正死亡率，求出LC50。
内吸作用（Systemic action）的试验方法
资料 全国蚊虫抗药性监测方案(试行)
附件2全国重要病媒生物抗药性监测（试行）方案第二部分埃及伊蚊、白纹伊蚊中国疾病预防控制中心传染病预防控制所二〇一四年七月全国重要病媒生物抗药性监测（试行）方案第二部分埃及伊蚊、白纹伊蚊1 背景 (3)2 监测目的 (3)2.1 掌握抗药性水平，指导科学防制 (3)2.2 制定控制预案，提高疾控能力 (3)3 监测的组织、分工和职责 (3)3.1 监测网络 (3)3.2 分工和职责 (4)3.2.1 中国疾病预防控制中心传染病所 (4)3.2.2 省(自治区，直辖市)疾病预防控制部门 (4)4 监测内容和方法 (4)4.1 监测蚊虫 (4)4.2监测点的选择 (4)4.3 监测时间 (4)4.4 试虫采集、鉴定和饲养 (4)4.4.1 试虫的采集 (4)4.4.2 试虫的鉴定 (5)4.4.3 试虫的饲养 (5)4.5 监测药剂 (5)4.6 设施和器材 (5)4.7 监测方法 (5)4.7.1 幼虫浸渍法 (5)4.7.2 成蚊接触桶法 (6)5 统计与计算 (6)6 质量控制 (6)6.1 抗药性监测药剂统一、方法统一、试虫统一 (6)6.2 实验室参考品系 (6)6.3 抗药性水平的核查 (6)表1. 蚊类抗药性测定所需设施和器材 (8)表2. 试虫的采集地信息收集项目.............................................................. 错误！未定义书签。
表3. 抗药性毒力回归线法测定原始记录表.. (9)1 背景登革热是我国重要的蚊媒传染病，近年来由于受东南亚等高发地区输入病例的压力影响，我国多地出现本地暴发，发生范围有进一步扩大趋势。
由于目前尚无有效疫苗预防，也没有特效治疗药物，防控埃及伊蚊和白纹伊蚊是防控登革热的唯一有效措施。
在登革热媒介伊蚊的防控中，化学防治因能快速高效杀灭媒介蚊虫是蚊虫综合治理的主要措施。
研究表明，杀虫剂的长期大量使用会使蚊虫产生抗药性，由此能影响登革热的预防控制效果。
有害生物防制知识练习1000题(中级)
有害生物防制知识练习1000题（中级）保知识一、判断题1．人类生存的地球至今已有40多亿年（）2．人类出现在地球上只有几百万年的历史（）3．联合国第一次人类环境会议是1992年在巴西里约热内卢召开的（）4．到2004年底联合国已召开过3次环境发展大会（）5．人类生产活动对环境的污染物主要是人工合成的各种有机化合物和每天排放出的废弃物（）6．环境污染的原因是来自于人类的生产活动和生活活动（）7．含铅、砷、铜、汞杀虫剂在土壤中残留时间较长，它们的半衰期要达2-4年（）8．杀虫剂污染环境主要表现在污染大气（）9．DDT是一种有效的杀虫剂，但不易分解，而易扩散的化学物质，长期使用，害虫产生抗药，危害生态系统（）10．DDT杀虫剂流入海水中，易在生物体积累通过食物链，到银鸥能浓缩上万倍（）11．1982年我国对DDT、六六六已经禁止生产使用（）12．氟乙酰胺不仅是禁用的灭鼠剂，也是禁用的杀虫剂（）二、单选题1．人类出现在地球上已有多少年历史（）（A）几十万年（B）几百万年（C）几千万年（D）几亿多年2．西方工业发达国家的人民群众发出“保护环境、防治污染”的强烈呼声于20世纪（）年代（A）20 （B）40 （C）60 （D）803．联合国至2004年底已召开几次环境大会（）（A）2次（B）3次（C）4次（D）5次4．联合国召开的第一次环境会议是哪年（）（A）1962年（B）1972年（C）1992年（D）2002年5．有机氯杀虫剂在土壤中残留，其半衰期为（）（A）0.1-0.2年（B）2-4年（C）5-10年（D）10-30年6．目前世界上每年生产的杀虫剂原药数量为（）（A）20多万吨（B）200多万吨（C）2000多万吨（D）2亿多吨7．含重金属杀虫剂在土壤中的半衰期为（）（A）2-4年（B）5-10年（C）10-30年（D）30-40年8．喷洒杀虫剂约有多少要落到土壤里（）（A）90% （B）70% （C）50% （D）30%9．据测定DDT从海水到银鸥体内，其含量要扩大多少倍（）（A）上万倍（B）10几万倍（C）上百万倍（D）上千万倍10．农牧渔业部、卫生部（82）农字第4号《农药安全使用规定》中，不准用于蔬菜、茶叶、果树、中药材等作物及防制卫生害虫的高毒杀虫剂有多少种（）（A）15种（B）25种（C）35种（D）45种11．下列哪种既是禁用的杀虫剂也是禁用的灭鼠剂（）（A）磷化锌（B）磷化铝（C）氟乙酰胺（D）氯化苦12．下列哪种是禁用的灭鼠剂（）（A）氯丹（B）四亚甲基二砜四胺（C）磷化铝（D）巴沙三、多选题1．1997、1999年农业部规定，对茶叶虫害防制禁止使用（）（A）溴氰菊酯（B）氯氰菊酯（C）三氯杀螨醇（D）三氟氯氰菊酯 E）氰戊菊酯（F）苯氰菊酯2．禁用的灭鼠剂有（）（A）立克命（B）毒鼠强（C）氟乙酸钠（D）氟乙酰胺（E）鼠立死（F）硫酸铊四、匹配题1．匹配各类杀虫剂在土壤中残留时间的半衰期（年）（A）有机磷杀虫剂 0.02-0.1年（）（B）有机氯杀虫剂 10-30年（）（C）重金属杀虫剂 2-4年（）（D）有机氮杀虫剂 0.02~0.2年（）五、填充题1．联合国第一次人类环境会议于年在瑞典斯德哥尔摩召开。