固相萃取_反相高效液相色谱法测定西藏红豆杉叶中紫杉醇的含量
不同部位及生长年限云南红豆杉中紫杉醇含量的测定
不同部位及生长年限云南红豆杉中紫杉醇含量的测定【摘要】：目的研究云南红豆杉不同部位中紫杉醇的含量以及不同生长年限对云南红豆杉枝叶中紫杉醇含量的影响。
方法采用HPLC法,Hypersil ODS2色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-水(20∶30∶50),柱温30 ℃,检测波长227 nm,比较云南红豆杉的树皮、针叶、小枝和树根中紫杉醇的含量,以及不同生长年限对云南红豆杉枝叶中紫杉醇含量的影响。
结果云南红豆杉树皮中紫杉醇的含量最高,根中最少,小枝、针叶中含量较高；随着生长年限的增加,云南红豆杉枝叶中紫杉醇的含量逐渐增加。
结论云南红豆杉枝叶的采摘以5年生以上为佳。
【关键词】云南红豆杉紫杉醇高效液相色谱法Abstract：Objective To study the content of taxol in different parts of Taxus Yunnanensis and the effects of different growth time on taxol content. Method A HPLC method was developed for the detetmination of taxol content in bark, needle, twig, root from Taxus Yunnanensi, and the effects of different growth time. Results Taxol content in bark was the highest, that in root was the lowest and that in needle and twig were higher. Taxol content was higher with the growth time in needle and twig of Taxus Yunnanensi. Conclution It was significant to take taxol from needle and twig of Taxus Yunnanensis which is more than five years growth time.Key words：Taxus Yunnanensis；taxol；HPLC紫杉醇是从红豆杉树皮中分离的一种二萜类化合物,能有效地治疗晚期乳腺癌、卵巢癌等,被认为是癌症治疗的重大进展之一。
高效液相色谱法测定东北红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量
高效液相色谱法测定东北红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量张艳平;刘同祥
【期刊名称】《贵阳中医学院学报》
【年(卷),期】2009(031)006
【摘要】目的:建立东北红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法(HPLC)法,选用C18色谱柱,流动相为乙腈:水(60:40),检测波长227nm,柱温25℃,对东北红豆杉愈伤组织中紫杉醇的含量进行了测定.结果:紫杉醇在
19.5～97.6μg·mL-1之间呈良好的线性关系,紫杉醇平均回收率为
100.41%,RSD=1.62%(n=6).结论:该含量测定方法准确可行,可以作为测定东北红豆杉愈伤组织培养中紫杉醇含量的高效液相色谱方法.
【总页数】2页(P81-82)
【作者】张艳平;刘同祥
【作者单位】河南中医学院药学院,河南郑州,450008;中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京,100081
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定红豆杉中紫杉醇及多烯紫杉醇的含量 [J], 周斌;周美;王道平;杨小生;王俊杰
2.超高效液相色谱法测定紫杉肽中紫杉醇含量 [J], 李京峰;孟志云;朱晓霞;甘慧;顾
若兰;吴卓娜;窦桂芳
3.高效液相色谱法测定甘草酸修饰脂质体中紫杉醇含量 [J], 刘海萍;曾锐
4.超高效液相色谱-串联质谱法测定保健酒中紫杉醇的含量 [J], 杨晓聪;刘正才;吕佳乐;林永辉;王丹红;姚闽娜
5.反相高效液相色谱法测定紫杉醇固体分散体中紫杉醇的含量(英文) [J], 刘祥瑞;吴科春;张春晖;张烜;张强
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
改进的HPLC法测定红豆杉植物和细胞培养物中紫杉醇的含量
维普资讯
植物资源与环境学报
２ｏ ． １１ ： 一 ４ ０ ２ １ （） ５
ＪｕｎｌＤ ／ｎ ￣ ｕｃ ｎ ￣ ｏｒｏ ａｔ ，Ｐ ｔｅ ａ ｄＥ ｓ
ｎ ｎ ｍｅｔ
改进 的 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 测 定 红 豆 杉 植 物 和 细 胞 培 养 物 中 紫 杉 醇 的含 量
ｃ Ⅱｃ Ｉ ｅ ｌ １
（脚 ｅ Ｉ ） ｈｎ ｔ ． Ｆ ；ｚ ｇ 僦 （ ）Ｒ Ｉ ． Ｌ ６ ｅＬ ｃ ｅｇｅ Ｌ Ｋ ｕ ｎｌ ｅｄ ； Ｉ
。
中图分类号 ： ５７ １ ； ６７ ７ ｓ６ ． ９ ０ ５ ．
文献标识码 ：Ａ
文章编 号 ： ∞㈣ １
８ ａ０ ）１ 晒３０ （０２Ｏ ． ．２ ０
紫杉醇 （ ￣ｏ） Ｔ １是一种 新型 的抗癌 药物 。由于紫杉 醇在 红豆 杉属（ 删 ｌ Ｌ） 物 中的含 量根 低 ， 且运 用植物 细胞 植 而 培养技术生产紫 杉醇仍 处实 验阶段 ， 因此 ， 对于 紫杉醇 含量 甚微的样品 ， 寻找 一种精 确 、 灵敏 、 速的检 测方法就显得 尤 快 为重要 。本实 验 采用 改进 的 ｔ Ｌ ｔ Ｃ法 对 南方 红豆 杉 ［ 肌 Ｐ Ⅱ ｖｒ ｅ－ ｋ哪葩ｅ ｄ． 即ｇｅ Ｌ Ｆ ］ 和 丑．ｍ Ｚ ／（ ｅ Ｉ ）０Ｉ 【 ．Ｋ ｕ 枝 叶， 以及 中国红豆杉 【 ｚ ｒ 帆 （ 即）Ｋ Ｉ ．细胞培 养 瑚日 ｅｄ ］ Ｉ 物 中的紫杉醇含量进行 了测定 。
Ｉ 实验 方法
１１ 实验 材 料 ．
渡 ５ｍ１直接加 ５ｍ ． ， Ｌ二氰 甲烷萃取 ３ ， 次 收集二氯 甲烷溶液
121013-紫杉醇的检测方法
121013-紫杉醇的检测⽅法药典⽅法：本品，精密称定，加⼄腈溶解并定量稀释制成每lml中约含0. 5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，分别⽤⼄腈定量稀释制成每lml中约含2.5иg、 0.5иg；^的溶液，作为对照溶液（1)与对照溶液（2);另取紫杉醇、三杉尖宁碱（杂质I )与7-表-10-去⼄酰基紫杉醇（杂质 II)对照品适量，加⼄腈溶解并稀释制成每lml中约含紫杉醇0. 5mg 、杂质1与杂质U均为2. 5Mg的溶液，作为系统适⽤性试验溶液。
照⾼效液相⾊谱法（附录V D)试验，⽤⼗⼋烷基硅垸键合硅胶为填充剂，以⼄腈-⽔为流动相进⾏梯度洗脱，初始流动相为⼄腈-⽔（40 = 60)，待紫杉醇主峰洗脱完毕后（约35分钟），⽴即按下表进⾏线性梯度洗脱，流速为每分钟1. 5ml ，柱温为30°C,检测波长为227rm！。
取系统适⽤性试验溶液与对照溶液（2)各10(J注⼈液相⾊谱仪，紫杉醇峰与杂质H峰之间的分离度应⼤⼲1. 2,对照溶液（2)信噪⽐应不⼩于10。
精密量取供试品溶液与对照溶液（])各，分别注⼈液相⾊谱仪，记录⾊谱图。
供试品溶液⾊谱图中如有杂质峰，杂质I (杂质I峰⾯积乘以校正因⼦1.26)与其他单个杂质峰⾯积均不得⼤于对照溶液（1)主峰⾯积（0. 5%),各杂质峰⾯的和不得⼤于对照溶液（1)主峰⾯积的3倍（1.5%)。
期刊：分析测试学报名称：反相HPLC法分析红⾖杉树⽪和树叶中紫杉醇及其类似物含量的研究⽅法：期刊：现代中药研究与实践2010年第24卷第4期名称：⾼效液相⾊谱法测定南⽅红⾖杉中紫杉醇的含量⽅法：期刊：林业科学研究名称：⾼效液相⾊谱-质谱联⽤技术测定⽑榛中的紫杉醇含量⽅法：期刊：⾊谱名称：苯基-硅胶⾊谱介质的合成及其在紫杉醇提纯中的应⽤⽅法：期刊：Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae名称：HPLC法测定加拿⼤紫杉中紫杉醇的含量⽅法：期刊：⾷品与⽣物科技学报名称：D4020⼤孔树脂提纯发酵液中紫杉醇的研究⽅法：期刊：Journal of Chinese Medicinal Materials名称：HPLC测定⽐较曼地亚红⾖杉和南⽅红⾖杉不同部位的紫杉醇含量⽅法：期刊：中国职业药师‘质量控制名称：HPLC法测定南⽅红⾖杉种⼦中紫杉醇的含量⽅法：期刊：天津医科⼤学报名称：HPLC法测定紫杉醇⾎药浓度条件的筛选⽅法：期刊：河南科学名称：RP－HPLC 法测定新乡种植红⾖杉树⽪中的紫杉醇⽅法：期刊：⽣物技术通报名称：SPE-HPLC法快速检测发酵液中紫杉醇的含量⽅法：期刊：中南药学名称：⾼效液相⾊谱法测定不同⽣长年限南⽅红⾖杉中紫杉醇的含量⽅法：期刊：时珍国医国药名称：云南红⾖杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱含量的测定⽅法：期刊：⽣物⼯程学报名称：正相和反相柱层析组合分离纯化紫杉醇⽅法：期刊：哈尔滨商业学报名称：正相⾊谱法分离纯化紫杉醇⼯艺过程的研究⽅法：期刊：解放军药学学报名称：中性氧化铝固相萃取-HPLC法测定紫杉醇含量⽅法：期刊：中国药科⼤学学报名称：紫杉醇⾼产菌发酵产物的分离、纯化和鉴定⽅法：。
iData_从红豆杉中提取紫杉醇的工艺研究_金洪顺
第42卷第10期2014年5月广州化工Guangzhou Chemical Industry Vol.42No.10May.2014从红豆杉中提取紫杉醇的工艺研究金洪顺，楼惠琴，蒋世春，白骅(浙江海正药业股份有限公司，浙江台州318000)摘要：紫杉醇（Taxol ）是从红豆杉树皮中分离得到的一种二萜化合物，具有独特疗效的抗癌物，现已被多个国家批准应用于临床治疗卵巢癌和乳腺癌等疾病。
由于红豆杉中的紫杉醇含量非常低（仅为0.010% 0.013%），而且大量结构类似的紫杉烷类物质存在，使得紫杉醇的分离纯化非常困难。
本文通过对比5种不同提取方法（液液萃取、固相萃取、硅胶层析、氧化铝层析、薄层层析），提出一种新的以氧化铝层析结合固相萃取工艺，具有紫杉醇高回收率的特点。
关键词：紫衫醇；红豆杉；提取；纯化；HPLC 中图分类号：TQ914.1文献标志码：B文章编号：1001－9677（2014）010－0088－04作者简介：金洪顺（1976－），男，工程师，主要从事药物研究与应用。
通讯作者：蒋世春。
Study of Technology of Isolated Paclitaxel from Taxus ChinensisJIN Hong －shun ，LOU Hui －qin ，JIANG Shi －chun ，BAI Hua（Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zhejiang Taizhou 318000，China ）Abstract ：The antineoplastic agent paclitaxel （Taxol ），a diterpene －derivative isolated from Taxus chinensis Bark ，was used in the treatment of ovarian cancer and /or breast cancer in many countries.Because of the trace amount of paclitaxel （only 0.010% 0.013%）and a amount of similar structural taxanes in Taxus c .，paclitaxel was difficult to obtain from Taxus c ..A new high －paclitaxel －recovery process with Al 2O 3chromatography －SPE process was presented by comparison of LLE ，SPE ，silica chromatography ，Al 2O 3chromatography ，and TLC.Key words ：paclitaxel ；Taxus chinensis ；extraction ；purification ；HPLC紫杉醇（paclitaxel ，商品名Taxol ）是当今重要的抗癌新药。
紫杉醇HPLC分析方法按USP要求
紫杉醇HPLC分析检验方法测试方法1：（适用于天然提取的紫杉醇）1、试剂：1.1乙腈1.2甲醇1.3磷酸1.4乙酸1.5纯化水2、溶液：2.1稀释剂：甲醇-乙酸混合溶液（1000:1 V/V）。
2.2系统适用性溶液：精密称取紫杉醇对照品和10-去乙酰-7-差向紫杉醇对照品，用稀释剂溶解，浓度约为（0.1+0.1）mg/ml。
2.3标准溶液：标准溶液A：精密称取紫杉醇对照品，用稀释剂溶解，可采用逐步稀释的方式，浓度约为0.1mg/ml。
标准溶液B：精密称取紫杉醇对照品，用稀释剂溶解，可采用逐步稀释的方式，浓度约为0.01mg/ml。
2.4供试液：供试液①：取约5mg紫杉醇样品，准确称重，置于5ml的容量瓶中，用稀释剂溶解、定容，混合。
供试液②：取约5mg紫杉醇样品，准确称重，置于50ml的容量瓶中，用稀释剂溶解、定容，混合。
3、流动相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸的水（45:5:50 V/V），需混合、脱气及过滤。
4、色谱条件：4.1检测波长：227nm4.2色谱柱： 4.6- mm×25.0-cm，5-μm ，L43填料（PFP，五氟苯基）。
4.3流速：1.2ml/min4.4柱温： 20℃～25℃4.5 运行时间:约30min5、要求：5.1系统适用性试验：5.1.1精密度：取系统适用性溶液进样10μl至液相色谱系统，记录色谱图，连续5次进样紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差（RSD％）≤2%；5.1.2分离度：紫杉醇与10-去乙酰-7-差向紫杉醇的分离度(Rs)≥1.5；5.1.3拖尾因子：紫杉醇峰的拖尾因子≤1.5。
5.2标准溶液测试：5.2.1重复进样标准溶液A的紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差≤2%。
5.2.2重复进样标准溶液B的紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差≤15%。
5.2.3检测极限：相关物质的检测定量限为0.005％。
5.2.4相关物质的相对保留时间（RRT）和相对响应因子（f）:6、相关物质分析：将标准溶液B和供试液①分别进样10μl至液相色谱系统，记录色谱图，并按色谱图上各相关物质峰面积以外标百分比方法计算相关物质含量（以无水、无溶剂干基计）。
紫杉醇的分离与纯化
摘要目的：探索红豆杉中紫杉醇的提取纯化工艺。
方法：将新鲜的红豆杉树皮干燥后用甲醇浸泡，陶瓷膜进行固液分离，纳滤膜浓缩，再用大孔树脂HZ818层析，洗脱液浓缩结晶，再活性炭脱色后甲醇重结晶，再硅胶正向层析，洗脱液浓缩后正已烷结晶，再真空干燥得成品。
结论：按本方法从红豆杉中提取的紫杉醇纯度为97.5%，收率为十万分之八。
关键词红豆杉，紫杉醇，提取纯化，树脂，硅胶目录一、紫杉醇目前的一些分离纯化方法。
................................................. 错误!未定义书签。
（一）液相萃取。
.................................................................................... 错误!未定义书签。
（二）固相萃取法。
............................................................................... 错误!未定义书签。
（三）树脂层析法。
............................................................................... 错误!未定义书签。
（四）活性炭脱色。
............................................................................... 错误!未定义书签。
（五）硅胶正向层析。
.......................................................................... 错误!未定义书签。
（六）结晶纯化。
.................................................................................... 错误!未定义书签。
紫杉醇提取实验方案
实验名称：紫杉醇的提取实验探究条件：1、原材料：红豆杉树枝、红豆杉树皮、红豆沙树叶、三者混合；2、烘干时的温度：40℃、60℃、80℃；3、粉碎状态：完全不粉碎、粉碎至40目、粉碎至60目、粉碎至80目、粉碎至100目；4、有机溶剂选取：95%甲醇、95%乙醇、乙酸乙酯：丙酮=1:1；5、层析介质选取：硅胶、氧化铝、C18、苯基柱、树脂。
实验器材：实验仪器：实验原料：实验过程1、红豆杉枝叶、树皮、树枝：采集新鲜的红豆杉树枝、树皮、叶，用清水洗净；2、干燥与粉碎：于60℃烘箱内干燥至恒重，用粉碎机粉碎至100目，分别准确称取过筛后的各种样品2g，置50mL磨口具塞三角瓶中；3、有机溶剂提取：加入95%乙醇20mL，超声萃取30min，留上清液，沉淀复加20mL 95%乙醇，重复操作；4、浓缩：浓缩温度控制在45±5℃，真空度控制在-0.07±00.1Mpa，浸提液浓缩至比重达到0.95~1.05时，将浓缩液放出到专用的储罐中；5、萃取：将计量后的浸提浓缩液注入萃取罐，加入醋酸乙酯（按物料：醋酸乙酯=1：1），萃取三次，将醋酸乙酯层重液排入指定贮罐，将贮罐内的醋酸乙酯液抽入浓缩锅进行初浓缩预处理，温度控制在45±5℃，待浓缩液比重达到1.40±0.05时，将浓缩后的醋酸乙酯液排入指定贮罐中。
6、浸膏：合并上清液，过滤除渣，滤液于30℃减压蒸干，得浸膏；下层清液作为10-DAB 的原材料保存好，详细步骤见最后；7、固液萃取：浸膏用20mL甲醇溶解，加入石油醚(60～90℃)(体积比1∶1)，振荡30min，脱脂；8、液液萃取：萃取余液用三氯甲烷(体积比2∶1)振荡30min，褪色，若褪色不彻底应反复进行；9、沉淀：由于紫杉醇有在正己烷中沉淀这一特性，所以向液液萃取后得到的紫杉醇乙酸乙酯溶液中加入体积比为10：1的正己烷溶剂，将紫杉醇沉淀下来。
（较少时，紫杉醇不能完全沉淀；较多时，不但没有提高杂质去除量，还会造成正己烷使用量过大，溶剂浪费。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
固相萃取)反相高效液相色谱法测定西藏红豆杉叶中紫杉醇的含量吴 江1,卢永昌2,朱小军2(1.青海民族学院科技处,青海西宁 810007;2.青海民族学院化学系,青海西宁 810007)摘 要:目的 建立固相萃取)反相高效液相色谱法测定西藏红豆杉叶中紫杉醇含量的方法.方法:以中性氧化铝富集待测组份,用Kromasil-C18(250mm@416mm,5Lm)色谱柱,检测波长227nm、柱温35e、流速018mL#min-1时,以MeOH和'2O(含0104%H3PO4)65B35洗脱.结果:紫杉醇富集在氯仿:甲醇(100B5)(VBV)洗脱液中,线性范围为0125~1.5Lg(r=019996),加标回收率为9813%(RSD=1146%).结论:测定方法快速,结果准确、可靠.关键词:西藏红豆杉;紫杉醇;固相萃取;RP)HPLC中图分类号:O629 文献标识码:A 文章编号:1001-7542(2006)03-0071-03
红豆杉(Taxus)中的紫杉醇(Taxol)是一种有效的抗癌新药,对晚期卵巢癌,转移性乳腺癌和非细胞性肺癌等多种癌症有显著疗效.目前国内外紫杉醇的供药主要依靠从红豆杉属植物中提取得到.关于紫杉醇的HPLC分析,国内外已有不少报道[1~5],但由于红豆杉属植物种类繁多,且红豆杉中紫杉醇含量均极低,还含有大量化学结构和极性等与紫杉醇结构相似的其它紫杉烷类化合物,因此给分离检测工作带来很大困难,同时,红豆杉树叶提取物中往往含有大量的蜡、脂类物质等,这些杂质的存在,严重影响了色谱柱的寿命.我们在对西藏产红豆杉树叶的研究中,建立了固相萃取)反相高效液相色谱法测定其中紫杉醇含量的方法,该法简便快速,准确度高,收到满意的效果1
1 仪器、试剂及样品采集Agilent1100高效液相色谱仪(配置:手动进样器、在线脱气机、高压二元梯度泵、恒温柱温箱、DAD检测器、Agilent1100色谱工作站);Kromasil-C18(250mm@416mm,5Lm)色谱柱;KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);SZ-97自动三重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂).甲醇:高效液相色谱专用试剂(山东禹王实业有限公司禹城化工厂);水:自制三重蒸馏水;磷酸:AR级(北京红星化工厂).紫杉醇对照品购于瑞士百灵威公司(批号A017040001),纯度大于99%.样品采集:西藏红豆杉树叶于2003年8月采于西藏樟木.所有样品均由中科院西北高原生物研究所胡凤祖副研究员鉴定,阴干后粉碎过80目筛,冷藏保存.
2 溶液配制211 对照品储备液 准确称取对照品紫杉醇110mg,置于110mL容量瓶中,以甲醇溶解并定容,配制成相应浓度的对照品储备液,使用时稀释成所需浓度.212 样品溶液 准确称取粉碎至80目的样品5g,加入甲醇20mL,超声提取1h,抽滤,以甲醇洗涤滤渣2次,每次1mL.滤渣重复上述操作,所得滤液与前一次滤液合并,回收大部分溶剂后,与2g中性氧化铝吸附混合,干燥1小时装入预先装填好的中性氧化铝(10g)小柱上,用氯仿100%淋洗至流出液无色,然后用三氯甲烷)甲醇(100:5)洗脱至绿色带至柱底层止,温水浴挥干,残渣用甲醇溶解并定容至2mL,即得供试品溶液.3 色谱条件
收稿日期:2006-03-20作者简介:吴江(1963-),男(汉族),浙江绍兴人,青海民族学院副教授.
2006年第3期 青海师范大学学报(自然科学版)JournalofQinghaiNormalUniversity(NaturalScience) 2006No13 色谱柱:Kromasil)C18(250mm@416mm,5Lm)柱;流动相:甲醇:水为65:35;流速018mL#min-1;检测
波长为227nm;柱温35e.该色谱条件下紫杉醇被洗脱且达到基线分离,保留时间为2410min(见图1).
图1 紫杉醇对照品(A)和样品(B)色谱图Fig11 ChromatogramsofTaxol(A)andsampleofTaxus(B)
4 线性关系考察准确称取紫杉醇标准品1100mg,定容于1mL甲醇中,稀释得0.100mg#mL-1浓度的甲醇溶液,然后在确定的测试条件下分别进样215LL、510LL、715LL、10LL、1215LL、15LL,测得标准工作曲线为:A=446139x)56105(A:色谱峰面积.x:紫杉醇绝对含量),相关系数r=019996,线性范围:0.25~115Lg.
5 检测限在选定的色谱条件下,分别以不同浓度当信噪比S/N=3时,测得该条件下紫杉醇最低检测限为215ng.
6 精密度试验浓度为0101mg#mL-1对照品重复进样6次,每次10LL,测定各次色谱峰面积的RSD%=212%,表明仪器精密度良好.
7 重复性试验同一样品重复进样6次,测得RSD%=312%,表明方法重复性良好.8 回收试验回收率:准确称取粉碎的红豆杉树叶样品5g,加入011mL的标准品1同212制备1(见表1)
表1 回收率测定值Table1 Recoveryoftaxol
样品量(g)标准品加入量(mg)回收率(%)平均回收率RSD%5100010295135.00010297125.00010210315981311465.00010298175.0001029614
72 青海师范大学学报(自然科学版) 2006年表2 红豆杉树叶样品中紫杉醇的含量(%,n=3)Table2 ContentsofTaxol(%,n=3)样品(sample)紫杉醇含量(TaxoL)101005522010065230100674401004715010058260100743
9 稳定性试验准确称取粉碎的红豆杉树叶样品5g,按/2120项下方法操作,分别在0,2,4,6,8h时分别进样,测定紫杉醇的峰面积,计算得RSD分别为211%,212%,216%,311%,214%(n=5).表明样品溶液在8h内稳定.10 测定结果取/2120项下制备的样品溶液按上述色谱条件进行分析,经DAD检测器检测紫杉醇的峰纯度且其紫外光谱与对照品一致后,按外标法以峰面积积分值计算,得紫杉醇的含量(每个样品重复进样3次,取平均值).结果见表2.
11 讨论1111 检测波长的确定 上述对照品溶液进样后,利用DAD检测器在190~400nm扫描其吸收光谱,对照品均在227nm波长处有较高的吸收,选择该波长为检测波长.1112 提取方法确定 比较了超声及热回流两种提取方法对分析结果的影响,结果表明,热提取3次以及超声提取2次以后,继续增加提取次数对提取率已无明显影响,但超声次数少,提取率比热回流提取法略高,故本试验采用超声提取法.1113 富集方法的确定 样品经212处理后,与2g中性氧化铝吸附混合,减压干燥1小时,装在事先装好的中性氧化铝小柱上(10g),先以30mL氯仿淋洗掉低极性杂质,继以氯仿:甲醇100:5洗脱,每馏分15mL,依次收集洗脱液(紫杉醇洗脱液),将收集的洗脱液温水浴挥干,再以甲醇定容至2mL后过0145Lm滤膜,在选定色谱条件下分析紫杉醇含量,结果发现,紫杉醇富集在氯仿:甲醇100:5洗脱液的第1、2份中,第3份洗脱液中未检到紫杉醇,可知紫杉醇全部富集于前30mL氯仿:甲醇100:5洗脱液中.
参考文献:[1] 余琨、丁艳涛,孟宪境,等1紫杉醇在我国的应用近况[J]1肿瘤防治杂志,2001,8(4):440-443.[2] 张志强,苏志国1氧化铝催化7)))表策杉蘑转化为策杉蘑的机理探索[J]1生物工程学报,2000,16(3):378.[3] 苏应娟,王艇,李雪雁,等1南方红豆杉不同部位紫杉醇含量的分析[J]1天然产物研究与开发,2001,13(2)19-211[4] 张鸿,杨明惠1国产红豆杉各部位紫杉醇含量分析[J]1中草药,2000,31(6):434-4351[5] 邱德有,李如玉,韩一凡1紫杉醇提取分离方法的研究进展[J]1中国药学杂志,1996,31(11):646-6481
DeterminationofTaxolinLeafofYewfromXizangbySolid-phaseExtractionandRP-HPLCWUJiang,LUYong-Chang,ZHUXiao-jun(11TheDepartmentofScienceandTenchnologyofQinhaiNationlitiesUniversity,Xining810007,China;21ChemistryDepartmentofQinghaiNationalitiesUniversity,Xining810007,China)Abstract:Objective:ToestablishaquantitativemethodofTaxolinLeafofyewbysolid-phaseextractionandRP-HPLC.Method:ThesamplewereextractedbyneutralAI2O3solidphasecolumnandelutewithchloroform-methanol(100B5);ThetaxoLwasseparatedonthecolumnofKromasil)C18(250mm@416mm,5Lm)whichelut-edwithmethanolandwater(0104%phosphoricacid)65:35;UVdetectorat227nm,flowrateat018mL1min-1,columntemperatureat30e1Results:ThetaxoLwasenrichedatchLoroform-methanoL(100:5),TheLinearrangesoftaxoLwas0125~115Lg(r=019996)recoverywas9812%(RSD=1146%),Conclusions:Themethodisrapidandprecise1Keywords:TaxusfromXizang;Taxol;solid-phaseextraction;RP-HPLC
73第3期 吴江,等:固相萃取)反相高效液相色谱法测定西藏红豆杉叶中紫杉醇的含量