探究斐林试剂和双缩脲试剂的使用条件
斐林试剂与双缩脲试剂的使用释疑
斐林试剂与双缩脲试剂的使用释疑王升友(江苏省赣榆县城头中学，222131)中学生物教学，2003年第6期在教学过程中，发现许多学生对于用斐林试剂鉴定可溶性还原糖与用双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验中存在着许多疑难问题，为便于学生理解和掌握，现归纳总结如下：1可溶性还原糖鉴定及蛋白质的鉴定原理不同1 1可溶性还原糖鉴定原理可溶性还原糖如葡萄糖、果糖、麦芽糖等的分子内都含有游离的具有还原性半缩醛羟基，当与新配制的一定浓度的Ｃｕ(ＯＨ)2悬浊液混合后，在加热的条件下，将Ｃｕ(ＯＨ)2还原为砖红色的Ｃｕ2Ｏ沉淀，而还原性糖本身则被氧化为相应的有机酸。
以葡萄糖为例的反应式如下：1 2蛋白质的鉴定原理在碱性溶液中，双缩脲能与Ｃｕ2+作用，形成紫色或紫红色的络合物。
故双缩脲试剂可鉴定双缩脲的存在，而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键。
因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。
2斐林试剂与双缩脲试剂的配制与使用不同2 1斐林试剂的配制甲液：质量浓度为0 1ｇ·ｍＬ-1的ＮａＯＨ溶液乙液：质量浓度为0 05ｇ·ｍＬ-1的ＣｕＳＯ4溶液使用时临时配制，将4滴～5滴乙液滴入2ｍＬ甲液中，振荡混合均匀后即可使用。
2 2双缩脲试剂的配制取10ｇＮａＯＨ放入量筒内加水至100ｍＬ，待充分溶解后倒入试剂瓶中配制成质量浓度为0.1ｇ·ｍＬ-1的ＮａＯＨ溶液，瓶口塞上胶塞，贴上标签，写上试剂Ａ。
取1ｇＣｕＳＯ4放入量筒中，加水至100ｍＬ，待充分溶解后倒入试剂瓶中配制成质量浓度为0.01ｇ·ｍＬ-1的ＣｕＳＯ4溶液，瓶口塞上胶塞，贴上标签，写上试剂Ｂ。
使用时，先向试管中加入2ｍＬ试剂Ａ，摇荡均匀，再向试管中加入3滴～4滴试剂Ｂ，摇荡均匀即可。
3反应过程中，出现的颜色变化及原因不同3 1用斐林试剂鉴定还原糖的实验因先加入刚配制的Ｃｕ(ＯＨ)2，故溶液变成浅蓝色;加热后，部分Ｃｕ(ＯＨ)2被还原为砖红色的Ｃｕ2Ｏ，因二者混合故呈现棕色;随着反应的继续进行，Ｃｕ(ＯＨ)2被全部还原为Ｃｕ2Ｏ，故而出现砖红色的沉淀。
斐林试剂和双缩脲氏试剂过程
斐林试剂和双缩脲氏试剂过程
斐林试剂和双缩脲氏试剂都是生物化学实验中常用的试剂，它们分别用于检测可溶性还原糖和蛋白质。
斐林试剂是由氢氧化钠和硫酸铜组成的混合溶液，使用时需要现配现用。
检测可溶性还原糖时，将斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入待测样液，水浴加热后出现砖红色沉淀。
这个反应需要加热，有时不加热也会发生反应。
双缩脲氏试剂是由氢氧化钠和硫酸铜组成的另一种混合溶液，用于检测蛋白质或多肽。
使用时，先加入双缩脲试剂A液（氢氧化钠溶液）1mL，摇匀后再加入双缩脲试剂B液（硫酸铜溶液）3~4滴，摇匀后观察现象。
这个反应不需要加热，只要摇匀即可。
如果出现紫色反应，就说明有蛋白质或多肽存在。
两种试剂的成分和使用方法不同，需要注意区分。
斐林试剂和双缩脲氏试剂都是用来检测生物组织中特定化合物的存在，是生物化学实验中常用的重要工具。
浅议斐林试剂与双缩脲试剂的使用
浅议斐林试剂与双缩脲试剂的使用斐林试剂和双缩脲试剂是两种常见的生物试剂，它们在化学反应和生物实验中发挥着重要的作用。
以下是关于这两种试剂的详细讨论：一、斐林试剂斐林试剂是由硫酸铜溶液和氢氧化钠溶液混合而成的，它是一种氧化还原反应指示剂。
在斐林试剂中，硫酸铜溶液中的铜离子被还原成亚铜离子，而氢氧化钠溶液中的氢氧根离子被氧化成氢氧根离子。
当斐林试剂与醛基或酮基反应时，它们会发生氧化还原反应，产生砖红色沉淀。
这个反应可以用来检测醛基或酮基的存在。
斐林试剂的使用方法是将斐林试剂滴加到待测溶液中，然后加热至沸腾。
如果待测溶液中存在醛基或酮基，斐林试剂就会与其发生反应，产生砖红色沉淀。
需要注意的是，斐林试剂只能用来检测醛基或酮基的存在，不能检测其他类型的有机化合物。
二、双缩脲试剂双缩脲试剂是一种用来检测蛋白质的生物试剂。
它由氢氧化钠溶液和硫酸铜溶液混合而成。
当双缩脲试剂与蛋白质反应时，会形成紫色络合物。
这个反应可以用来检测蛋白质的存在。
双缩脲试剂的使用方法是将双缩脲试剂滴加到待测溶液中，然后搅拌均匀。
如果待测溶液中存在蛋白质，双缩脲试剂就会与其发生反应，形成紫色络合物。
需要注意的是，双缩脲试剂只能用来检测蛋白质的存在，不能检测其他类型的有机化合物。
三、斐林试剂和双缩脲试剂的比较斐林试剂和双缩脲试剂都是生物实验中常用的试剂，它们在检测有机化合物方面有着不同的应用。
斐林试剂主要用于检测醛基或酮基的存在，而双缩脲试剂主要用于检测蛋白质的存在。
此外，斐林试剂和双缩脲试剂的成分也有所不同，斐林试剂主要由硫酸铜溶液和氢氧化钠溶液混合而成，而双缩脲试剂主要由氢氧化钠溶液和硫酸铜溶液混合而成。
四、使用斐林试剂和双缩脲试剂的注意事项在使用斐林试剂和双缩脲试剂时，需要注意以下几点：1.斐林试剂和双缩脲试剂都有一定的腐蚀性，使用时要注意安全。
2.斐林试剂和双缩脲试剂的成分中含有重金属离子，如果误食或长时间接触可能会对人体健康造成影响，因此在使用时要避免直接接触皮肤或吸入蒸汽。
人教版高中生物新教材常见实验材料使用注意事项总结
人教版高中生物新教材常见实验材料使用注意事项总结1.斐林试剂（甲液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH溶液，乙液：质量浓度为）：将斐林试剂甲液和乙液等量混合，再将混合后的斐林试剂0.05g/ml 的CuSO4注入待测组织样液，50-65℃水浴加热约2min，如待测组织样液中存在还原糖，则由蓝色转为砖红色沉淀。
2.双缩脲试剂（A液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH，B液：质量浓度为0.01g/ml）：向待测液中先注入双缩脲试剂A液1ml，摇匀，再向其中加入双缩脲的 CuSO4试剂B液4滴，摇匀。
如待测组织样液中存在多肽或蛋白质，则由浅蓝色转为紫色。
3.质量浓度为0.01g/ml的苏丹Ⅲ染液：取在花生子叶薄片上滴2-3滴苏丹染液，用吸水纸吸去染液，再滴加1-2滴体积分数为50%的酒精溶液，洗去浮色。
检测脂肪，可将脂肪染成橘黄色。
4.碘液：鉴定淀粉，淀粉遇碘液变蓝。
5.健那绿（活性染色剂）：用于检测线粒体，使线粒体染色呈蓝绿色。
6.酒精：①体积分数为50%的酒精溶液：在苏丹Ⅲ染液检测脂肪实验中用于洗去浮色。
②70%的酒精溶液：用于菊花组织培养实验中对操作者双手、超净工作台台面及流水冲洗后的外植体消毒。
③体积分数为95%的酒精溶液：和质量浓度为15%的盐酸等体积混合，作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分散开来；在低温诱导植物细胞染色体数目变化实验中，用于洗去卡诺氏液。
④预冷的95%的酒精溶液：DNA不溶于酒精，尤其是不溶于体积分数为95%的预冷酒精，而细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，据此可以用于DNA的粗提取。
⑤100%的酒精溶液（无水乙醇）：用于色素的提取。
7.盐酸：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输。
②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。
③物质的量浓度为0.01mol/L的盐酸：用于影响酶活性的条件实验；用于模拟生物体维持pH 稳定实验。
④质量浓度为15%的盐酸：和体积分数为95%的酒精溶液等体积混合作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分离开来。
高一生物 斐林试剂和双缩脲试剂
第1页 共1页 斐林试剂和双缩脲试剂新版高中《生物》教材中有“生物组织中可溶性还原糖、蛋白质、脂肪的鉴定”实验。
可溶性还原糖用斐林试剂鉴定，蛋白质用双缩脲试剂鉴定。
斐林试剂与双缩脲试剂都是由甲液（NaOH ）和乙液（4CuSO ）组成，但参加鉴定反应时，却是以不同的反应物出现。
不明白它们参与的反应，很容易把两者混淆，甚至误认为就是同一种试剂。
斐林试剂是指新制的()2OH Cu 悬浊溶液。
还原性糖与新制的()2OH Cu 在加热煮沸条件下，能生成砖红色的O Cu 2沉淀。
实验过程中，必须先把甲液（NaOH ）和乙液（4CuSO ）等量混合，让其反应生成()2OH Cu 后，才能加入到含还原性糖组织液中。
如果先后或者分别把NaOH 和4CuSO 溶液加入到含还原性糖组织液中，组织液中的有机酸会与NaOH 迅速反应，使反应物中没有()2OH Cu 或()2OH Cu 不足，从而使还原性糖与氢氧化铜的反应不能进行或现象不明显，影响了还原性糖的鉴定。
双缩脲反应是指具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与+2Cu 反应，生成红紫色的络合物。
所有的蛋白质均有此显色反应。
双缩脲试剂就是指能与具有两个以上肽键的化合物发生红紫色显色反应的试剂。
它是NaOH 和4CuSO 两种溶液。
在实验过程中，先在含蛋白质的溶液中加入等体积的NaOH 溶液，混合均匀后，再滴几滴4CuSO 溶液（量较少）。
即先后加入NaOH 和4CuSO 溶液。
如果在NaOH 中滴几滴4CuSO 溶液混合后，再加入到含蛋白质的溶液中，混合液中就没有+2Cu ”，显色反应就不会发生。
资料来源 《生物学教学》2003.3。
斐林试剂和双缩脲试剂区别
斐林试剂和双缩脲试剂区别
斐林试剂和双缩脲试剂都是化学试剂，常用于检测蛋白质和肽类等化合物。
它们的作用原理和使用方法有所不同，具体区别如下：
1. 作用原理不同
斐林试剂是一种酸性试剂，它可以与肽键中的氨基酸残基中的酰胺键发生反应，生成紫色的复合物。
这种复合物可以吸收特定波长的紫外线，因此可以用于检测蛋白质和肽类等化合物的存在。
双缩脲试剂则是一种氧化剂，它可以氧化肽键中的二肽键，生成紫色的氧化产物。
这种产物也可以吸收特定波长的紫外线，因此可以用于检测蛋白质和肽类等化合物的存在。
2. 使用方法不同
斐林试剂的使用方法比较简单，只需要将待测样品与试剂混合后，观察是否生成紫色复合物即可。
如果出现紫色，则说明样品中含有蛋白质或肽类等化合物。
双缩脲试剂的使用方法则比较繁琐，需要先将待测样品加入到缩脲试剂中，然后加入氢氧化钠溶液使其碱性增加，最后再加入氯化铜溶液进行氧化反应。
反应完
成后，需要用氢氧化钠溶液调节溶液的酸碱度，使其pH值在7左右，然后再用紫外分光光度计测定吸光度值，从而判断样品中是否含有蛋白质或肽类等化合物。
综上所述，斐林试剂和双缩脲试剂虽然都可以用于检测蛋白质和肽类等化合物，但其作用原理和使用方法有所不同。
在实际应用中，需要根据具体的实验要求和样品特性选择合适的试剂进行检测。
斐林试剂和双缩脲试剂使用方法
斐林试剂和双缩脲试剂使用方法斐林试剂是一种常用的化学试剂，可以用于检测还原糖和某些还原物质的存在。
使用方法：1. 准备样品：将待测样品溶解或悬浮在水中，并确保样品中没有明显的杂质。
2. 取少量样品：使用滴管或移液器取一定量的样品，通常为2-3滴。
3. 加入斐林试剂：将取得的样品滴加到一片白色的反应杯或试管中，然后滴加2-3滴斐林试剂。
4. 搅拌混合：用玻璃棒或试管摇杆轻轻搅拌混合样品和试剂，确保均匀混合。
5. 观察颜色变化：观察样品溶液的颜色变化。
正常情况下，如果样品中存在还原糖或还原物质，溶液颜色会变为深蓝色或蓝紫色。
双缩脲试剂也是一种常用的化学试剂，用于测定蛋白质的浓度。
使用方法：1. 准备标准曲线：使用已知浓度的蛋白质制备一系列浓度不同的蛋白质标准溶液，并将其分别标记。
2. 取少量标准溶液：使用移液器将一定量的标准蛋白质溶液移至白色的反应杯或试管中。
3. 加入双缩脲试剂：向标准溶液中滴加2-3滴双缩脲试剂。
4. 搅拌混合：使用玻璃棒或试管摇杆轻轻搅拌混合样品和试剂，确保均匀混合。
5. 显色：将反应杯或试管放置在恒温槽中，加热反应溶液至一定温度（通常为60-70°C），保持一定时间（通常为15-30分钟），使显色反应充分进行。
6. 冷却：将反应杯或试管取出恒温槽，放置冷却至室温。
7. 吸光度测量：使用分光光度计将样品的吸光度测量于一定波长下（通常为562nm）。
8. 绘制标准曲线：将不同浓度标准溶液的吸光度值作为纵坐标，对应的浓度值作为横坐标，绘制标准曲线。
9. 测定样品浓度：使用同样的方法和条件，测定待测样品的吸光度，并根据标准曲线确定样品中蛋白质的浓度。
斐林试剂和双缩脲试剂使用方法
斐林试剂和双缩脲试剂使用方法下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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实验材料：新鲜去皮的梨汁、生豆浆、熟豆浆。 实验试剂：斐林试剂 （甲液：质量浓度 0.1g/mL NaOH 溶液；乙液：质量浓度 0.05 g/mL CuSO4 溶液）、 双缩脲试剂（A 液：质量浓度 0.1 g/mL NaOH 溶液；B 液：质量浓度 0.01 g/mL CuSO4 溶液）、质量分数 8%的 盐酸、蒸馏水等。 器具：试管、试管架、试管夹、烧杯、量筒、滴管、酒 精灯、三脚架、石棉网、打火机等。 4 方法步骤及现象（表 1、表 2）
用顺序对实验结果有一定影响，但都能出现砖红色沉 淀，可能是待测液中的有机酸会中和一些 NaOH，使 产生的 Cu(OH)2 不足，所以 2 号试管砖红色沉淀会少 些。1、3 号试管现象说明斐林试剂实为新制的 Cu(OH)2 悬浊液，不需提供酸性环境，加入盐酸会将新的 Cu (OH)2 分解，致使还原糖无法和斐林试剂反应，所 以无砖红色沉淀。从 1、4 号试管现象可知，加热方式 不同对实验结果有一定影响，水浴加热比直接用酒精 灯加热更理想，受热更均匀，也更安全。1、5 号试管说 明只加乙液实验无法进行，即还原糖不能单纯的与 Cu2+发生反应并生成砖红色沉淀。
→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→→
表 3 不同浓度的 KNO3 溶液质壁分离及复原情况
KNO3 溶液浓 度/g·mL-1
0.01
0.03
0.05
0.07
引流法难易 易
易
程度
易
易
质壁分离程 不分离 分离较明显 度
分离明显 分离明 显
自动复原时 间
的盐酸
液各 1 mL，摇匀
mL，摇匀
50~65℃水浴中约 斐林试剂乙液 1 mL， 斐林试剂甲液和乙
直接酒精灯加热
2 min
摇匀
液各 1 mL，摇匀
蒸馏水 1 mL，摇匀
50~65℃水浴中约 2 50 －65℃ 水 浴 约 2
min
min
50~65℃水浴中约 2 min
砖红色沉淀
浅红色有少量沉淀 无砖红色沉淀
此次实验发现斐林试剂和双缩脲试剂的使用中，
试剂使用顺序对实验结果会有一定影响但不大，而试 剂的量（如双缩脲试剂 B 液）对实验结果的影响较大。 此外实验的水浴的温度、处理时间、溶液酸碱性条件、 加热方式等都有可能影响实验结果，所以实验过程中 要控制好无关变量。 6 实验设计及说明
本实验设计立足于高中生物实验“检测生物组织 中的还原糖、蛋白质”基础之上，但又加以改进和创 新：① 从斐林试剂的使用顺序、条件要求（酸碱性）、 加热方式等方面进行设计，通过实验让学生能更好的 理解相关的理论知识。② 针对双缩脲试剂的使用条 件及蛋白质检测中易出现的问题进行设计，通过变性 和未变性蛋白质对照，进一步说明双缩脲反应的本质 为“双缩脲试剂和肽键反应”，也提示双缩脲试剂不能 做为鉴定蛋白质变性的试剂。
一小时液泡变 一小时液泡变
大，但原生质 大，但原生质 不复原
层与细胞壁仍 层与细胞壁仍
有分离
有分离
存在明显不足之处，如溶液比较黏稠，使用引流法难 以吸引，污染镜头难以擦拭，而且营养丰富，易变质， 最好要现配现用。选用 0.05 g/mL 的 NaCl 溶液，引流 法易操作，质壁分离所需时间少，原生质体很快缩成 一团，现象明显，加清水后很快复原。选用 0.03 g/mL、 0.05 g/mL 的 KNO3 溶液，则会发生自动复原现象，但
表 1 斐林试剂的使用条件及还原糖检测
试管号
步骤
1
2
3
4
5
步骤① 步骤② 步骤③ 步骤④ 实验现象
2 mL 梨汁
2 mL 梨汁
2 mL 梨汁
2 mL 梨汁
2 mL 梨汁
斐林试剂甲液和 斐 林 试 剂 甲 液 1 2 mL 质量分数 8% 斐林试剂甲液和乙 斐 林 试 剂 乙 液 1
乙液各 1 mL，摇匀 mL，摇匀
诚然此实验时如果选材能更广些（用葡萄糖等）、 重复性再多些（如让好多班都做）、实验方案（如试管 多设置）等，或许得出的结论更有说服力。
参考文献：
［1］ 王镜岩等.生物化学·上册［M］.北京：高等教育出版社， 2002,22:163. ［2］ 刘红伟.斐林试剂和双缩脲试剂能否混用的剖析［J］.生物 学教学，2004（29）：44－45. ［3］ 赵玉柱.斐林试剂和双缩脲试剂的比较［J］.生物学通报， 2011（46）：15－16.
由表 2 的 1、2 号试管可知，双缩脲试剂使用顺序 对实验结果有一定影响。1、3 号试管说明加入的双缩 脲试剂 B 液（CuSO4）不能过量，否则蓝色的 Cu2+会遮 盖产生的紫色或致使试管底部余有 Cu2+。由 1、4 号试 管可看出，在碱性溶液中，蛋白质才能与双缩脲试剂 中 Cu2+反应，形成紫色络合物，也就是说蒸馏水不能 代替 NaOH 溶液。1、5 号试管可看出，豆浆经煮沸仍 可发生双缩脲反应，也进一步说明了双缩脲试剂是和 肽键反应，即使蛋白质变性了，空间结构破坏但肽键 未破坏，也能和双缩脲试剂出现颜色反应。
双缩脲试剂 A 液 1 mL
步骤③
双缩脲试剂 B 液 双缩脲试剂 A 液 1 mL， 双 缩 脲 试 剂 B 双 缩 脲 试 剂 B 液 4 双缩脲试剂 B 液 4
4 滴，摇匀
摇匀
液 1 mL，摇匀 滴，摇匀
滴，摇匀
实验现象
紫色
浅紫色
蓝紫色（试管底
部余有 Cu2+）
无紫色
淡紫色
5 对实验现象的分析 由表 1 的 1、2 号试管现象可看出，斐林试剂的使
尝试探究斐林试剂、双缩脲试剂的使用条件，进一 步将本实验完善，为日后教学工作的改进奠定基础。 2 实验原理
可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林 试剂发生作用，可生成砖红色的 Cu2O 沉淀。
葡萄糖+Cu(OH)2 水浴加热 葡萄糖酸+Cu2O↓（砖红
色）+H2O； 蛋白质＋双缩脲试剂→紫色。 蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。
开始砖红色，接着
棕褐色
无砖红色沉淀
表 2 双缩脲试剂的使用条件及蛋白质检测
试管号
步骤
1
2
3
4
5
步骤①
生豆浆 2 mL
生豆浆 2 mL
生豆浆 2 mL
生豆浆 2 mL
熟豆浆 2 mL
步骤②
双 缩 脲 试 剂 A 双缩脲试剂 B 液பைடு நூலகம்4 滴
双 缩 脲 试 剂 A 蒸馏水 1 mL
液 1 mL
液 1 mL
中学生物教学
探究斐林试剂和双缩脲试剂的使用条件
郭卫华 （广东省北江中学 广东韶关 512026）
人教版高中生物必修 1 的“生物组织中还原糖、 蛋白质的鉴定”实验对“斐林试剂”和“双缩脲试剂”的 使用作了要求：① 斐林试剂鉴定还原糖时，必须将甲 液和乙液混合均匀后使用，切勿分别加入生物组织样 液中进行检测。② 双缩脲试剂鉴定蛋白质时，先向蛋 白稀释液中加入 A 液（1 mL），均匀，再加入 B 液 3~4 滴。针对平时学生实验时反映出的很多问题，笔者进 行了探索，旨在探究剂的使用条件，改进实验，确保实 验顺利完成。 1 实验目的
所需时间过长，复原不彻底。根据预实验的情况，笔者 把自己操作过程中选取的试剂、相应的浓度、各步骤 所需时间、难易程度、遇到的问题、可能出现的错误等 作好记录，并与同一年级的其他生物教师分享，从而 有助于教师合理选取实验内容，有助于学生提高动手 操作能力和实验成功率。
实验课教学的出发点是希望学生能够通过动手 操作、小组合作等方式，来加深对教材理论知识的理 解、提高自身实验操作能力、培养严谨的科学态度。实 际教学中，如果教师只备课不做预实验；照本宣科，不 根据学生的思维和实验中出现的问题变换教学思路； 学生学习心态过于放松，实验操作中各种操作错误频 出，这样的实验课就成了走过场，不仅没有达到应有 的效果，还造成人力、财力、教学时间的浪费。鉴于此 种情况，教师应讲清理论知识，合理取舍教材，做好预 实验，从而切实提高实验课堂效率，真正做到有效教 学。