小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策
小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备方法的优化
小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备方法的优化高振华;吴浩浩;赵志辉;许英梅;Aguzey Harry;程贵兰;生冉;许嫣红【摘要】将201只小鼠随机分为3组,分别采用1次固定(60 min)、2次固定(30、25 min)和3次固定(30、25和15 min),其他操作步骤相同.结果表明,与1次固定相比,2次固定和3次固定视野中骨髓细胞数量(P<0.05)和分裂相细胞数量显著增多(P<0.05),制片成功率分别高7.1和7.9百分点,固定时间分别增加5和30 min.1次固定整体效果不佳,或很难找到明确形态的染色体,或染色体形态不清晰、分散;2次固定染色体分散效果良好,染色体数目和形态都十分清晰,染色体结构完整;3次固定中期分裂相多,染色体集中且分散适度,染色体清楚可见,分布整齐不重.综合考虑,小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备的最佳固定次数为2次,适宜的固定时间为30、25 min.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2019(047)007【总页数】3页(P102-103,106)【关键词】小鼠骨髓细胞;染色体制片;固定程序优化【作者】高振华;吴浩浩;赵志辉;许英梅;Aguzey Harry;程贵兰;生冉;许嫣红【作者单位】广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088【正文语种】中文【中图分类】S-01细胞染色体是细胞核中稳定且重要的成分，是生物遗传物质的载体，其数目与形态是研究生物进化、遗传变异、个体发育、疾病预防、病因发生、疾病诊断和治疗等的基础手段[1-3]。
染色体标本的制备是进行染色体核型分析、带型分析和检测遗传学相关疾病的前提[4-7]。
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进
小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【摘要】目的改进小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备的方法,以利于在实验教学中应用.方法设定不同浓度梯度的秋水仙素,分别作用于小鼠4小时和14小时,调整低渗液浓度及低渗时间、预固定和固定时间、离心速度及离心时间、滴片高度等,制作出分散良好、形态清晰的染色体标本.结果经过多次反复实验比较,秋水仙素注射剂量为10 μg/g BW作用4小时和5μg/gBW作用14小时,低渗液处理15分钟,预固定2分钟,固定10分钟,2500转/分,离心5分钟,滴片高度50～80 cm,可获得理想的实验结果.结论改进后的实验方法不仅能有效地缩短实验操作时间,而且可以提高实验教学质量,可应用于相关实验教学.【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2015(033)018【总页数】2页(P101-102)【关键词】小鼠;骨髓细胞;中期染色体;制备方法【作者】刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【作者单位】遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041【正文语种】中文【中图分类】G424.31染色体的结构和数目是研究生物体遗传、变异、发育等的基础［1］，染色体制备对人类遗传病的研究和诊断有着非常重要的意义［2］，也是进行染色体原位杂交、染色体畸变、染色体核型分析和显带分析等研究的重要基础。
制备小鼠染色体标本是各大农业、生物和医学院校细胞生物学、遗传学、医学遗传学等实验课程中重要的实验内容之一。
通过实验，学生可了解小鼠染色体的数目及形态特征，掌握中期染色体制备的实验原理和方法。
该实验操作步骤简单，但每个步骤稍有不慎将导致实验失败，不能在镜下观察到清晰的、分散好的中期染色体。
另外，实验要求提前对实验动物进行预处理，因此对实验课程开设的时间有所限制。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
7、再固定：再加入固定液2－3滴，打匀。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
相，数一数有几条。
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原理
小鼠骨髓细胞用秋水仙素积累分裂相， 用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
小白鼠染色体的标本制备和观察实验不足之处
小白鼠染色体的标本制备和观察实验是细胞生物学和遗传学研究中非常重要的一环。
通过观察小白鼠染色体的结构和数量，可以更好地了解其遗传特性和遗传变异。
然而，在现有的研究中，我们发现了一些实验中存在的不足之处，这些问题可能会影响实验结果的准确性和可靠性。
有必要对现有的标本制备和观察实验进行深入的评估和改进。
以下是小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的一些不足之处：1. 标本制备不规范：在研究中，染色体标本的制备非常重要，影响着后续的观察和分析结果。
然而，在一些实验中，我们发现染色体标本的制备过程存在一些不规范的情况，比如处理时间过长、温度控制不当等问题，这些问题可能会影响细胞的完整性和染色体的展开情况。
2. 染色体观察方法不精准：在染色体观察实验中，常用的方法包括显微镜观察和染色体计数。
然而，在一些实验中，我们发现染色体观察的方法不够精准，特别是在染色体计数过程中存在误差较大的情况，可能会影响实验结果的可靠性。
3. 样本数量不足：在一些研究中，由于样本数量有限，可能导致实验结果的稳定性和代表性不足，不能充分反映小白鼠染色体的遗传特性和变异情况。
针对以上问题，我们提出了一些改进方案：1. 规范标本制备流程：在染色体标本制备过程中，需要严格控制处理时间和温度，确保细胞的完整性和染色体的展开情况，可以采用标准的化学方法或酶切方法来提高染色体的展开度和清晰度。
2. 优化染色体观察方法：在染色体观察实验中，可以采用先进的显微镜技术和染色体计数工具，提高观察结果的准确性和精准度，也可以结合计算机图像分析技术来进行数据处理和统计分析，减少人为误差的影响。
3. 增加样本数量：为了提高实验结果的稳定性和代表性，可以增加样本的数量，尽可能覆盖不同个体和不同遗传背景的小白鼠，从而更全面地了解染色体的遗传特性和变异情况。
通过改进小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的不足之处，可以提高实验结果的准确性和可靠性，为细胞生物学和遗传学研究提供更可靠的数据支持。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
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小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策
作者：刘涌涛， 马全祥， 刘慧娟
作者单位：新乡医学院基础部,河南新乡,453003
刊名：
生物学通报
英文刊名：BULLETIN OF BIOLOGY
年，卷(期)：2003,38(6)
被引用次数：5次
1.翟中和.王喜忠.丁明孝细胞生物学 2000
2.杨保胜.丰慧根医学遗传学实验方法与技术 1998
3.宋金丹医学细胞生物学 1997
1.杨小芝.刘国良.郭嘉林氟铃脲对小鼠骨髓细胞和生殖细胞染色体畸变作用分析[期刊论文]-现代预防医学2009(11)
2.李昇刚.方选.丛江螺旋藻片对小鼠骨髓细胞染色体致畸变实验[期刊论文]-中国药师 2009(1)
3.刘文静.杨月阳被动吸烟对小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换率的影响[期刊论文]-实验动物与比较医学 2008(1)
4.谭秀华.梁磊秋水仙素对小鼠骨髓细胞有丝分裂的影响[期刊论文]-中国现代药物应用 2007(5)
5.黄燕.赵小平.余红.陈绍坤动物骨髓细胞染色体标本制备失败的原因分析[期刊论文]-生物学通报 2006(1)
本文链接：/Periodical_swxtb200306033.aspx。