bl实验5DNA的细胞化学
关于dna小实验报告
关于dna小实验报告实验目的本实验旨在通过提取和观察DNA分子，了解DNA分子的组成和结构，加深对基因遗传的理解。
实验材料- 成人口腔拭子- 高盐溶液- 去离子水- 酒精- 漂白剂- 冷冻乙酸- 盐酸实验步骤1. 将成人口腔拭子在高盐溶液中浸泡，让细胞在溶液中释放出DNA。
2. 将高盐溶液与漂白剂混合，静置5分钟，以使细胞膜溶解，并释放出更多的DNA。
3. 加入冷冻乙酸，使DNA分子凝聚成细长的白色颗粒。
4. 用玻璃棒将DNA颗粒取出，在离子水中漂洗，以去除漂白剂和杂质。
5. 将DNA颗粒转移到一根玻璃棒上。
6. 向玻璃棒上的DNA颗粒滴加盐酸，使其溶解。
7. 在离子水中稀释DNA溶液，使其变得透明。
实验结果实验所得的DNA溶液呈现透明状态，可以通过肉眼观察到DNA溶液的流动性。
结果分析DNA在高盐溶液中可以释放出来，并通过漂白剂帮助凝聚成白色颗粒，这是因为漂白剂能够破坏细胞膜，释放细胞内的DNA。
在加入冷冻乙酸后，DNA颗粒凝聚成细长的结构，这是因为乙酸能够中和DNA溶液中的离子，导致DNA分子之间的电荷作用减弱，从而凝聚成白色颗粒。
在加入盐酸后，DNA溶解，使其变得透明。
实验总结通过本实验，我们成功提取到DNA分子，并观察到了其凝聚成颗粒和溶解的过程。
这些实验结果有助于我们更好地理解DNA的组成和结构，对基因遗传有更深入的了解。
实验过程中使用的材料和操作简单，适合初学者进行，同时实验结果可以通过肉眼观察到，有助于学生直观地感受到DNA的存在。
精确和仔细的操作是保证实验成功的关键，同时实验过程中要注意安全，避免对身体产生伤害。
参考文献- 【1】Guo, J., Wang, W., Wang, D., Zhu, T., Cui, L., Zhao, X., ... & Wang, Q. (2016). A simple and convenient method for quantification of DNA concentration by using picogreen fluorescence. International Journal of Analytical Chemistry, 2016.。
提dna步骤及原理
提dna步骤及原理DNA提取是一种分离纯化DNA的过程，它可以用于分子生物学的各种实验和研究。
以下是DNA提取的步骤及原理：步骤1：细胞破碎首先，需要将目标细胞破碎以释放DNA。
这可以通过机械方式（如刮取细胞）或者化学方式（如孵育细胞在酶溶液中）来完成。
破碎细胞的目的是破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
步骤2：细胞溶解接下来，要将破碎细胞中的蛋白质和其他细胞组分溶解。
这可以通过加入表面活性剂（如SDS）来破坏蛋白质的结构，使其变为可溶解状态。
细胞溶解的目的是除去蛋白质和其他细胞成分，保留DNA。
步骤3：蛋白质沉淀通过加入盐类，可以使DNA溶液中的蛋白质形成沉淀。
盐类中的离子与蛋白质形成复合物，使其聚集在一起并沉淀到溶液底部。
这一步的目的是除去大部分蛋白质，净化DNA溶液。
步骤4：DNA沉淀将溶液中的DNA沉淀到管壁上，可以通过加入酒精或其他有机溶剂来实现。
这些溶剂改变了DNA溶液的物理性质，使DNA变得不溶于水而沉淀。
这一步的目的是分离纯化DNA。
步骤5：洗涤和纯化DNA最后，通过洗涤沉淀的DNA，可以除去残留的盐类和其他杂质。
洗涤可以使用乙醇或其他缓冲液。
洗涤后，可以用缓冲液溶解DNA并进一步纯化。
DNA提取的原理是基于DNA和其他细胞成分的物理和化学特性的差异。
其中，细胞破碎和溶解步骤破坏了细胞膜和核膜，并释放了DNA。
蛋白质沉淀和DNA沉淀步骤利用了盐类和有机溶剂对不同分子的溶解性差异，将蛋白质和DNA分离。
洗涤步骤则进一步清洁和纯化DNA。
整个过程旨在从复杂的细胞混合物中分离纯化出DNA，以便在后续实验中进行分析和应用。
实验报告DNA提取与纯化
实验报告DNA提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取和纯化DNA 的方法，并了解 DNA 的性质和特点。
通过实验操作，熟悉相关实验技术和仪器设备的使用，为后续的分子生物学研究和应用奠定基础。
二、实验原理DNA 是生物体内携带遗传信息的大分子物质。
在细胞中，DNA 与蛋白质等成分结合在一起。
提取 DNA 的基本原理是利用化学和物理方法破坏细胞结构，使 DNA 从细胞中释放出来，然后通过去除蛋白质、RNA 等杂质，达到纯化 DNA 的目的。
常用的方法包括：1、细胞裂解：使用裂解液破坏细胞膜和核膜，使细胞内容物释放。
2、去除蛋白质：加入蛋白酶或酚/氯仿等试剂，使蛋白质变性沉淀。
3、沉淀 DNA：通常使用乙醇或异丙醇等有机溶剂，使 DNA 沉淀出来。
三、实验材料与设备（一）实验材料1、新鲜的动物肝脏组织或植物叶片。
2、生理盐水。
3、裂解液（包含去污剂、盐等成分）。
4、蛋白酶 K。
5、酚/氯仿混合液。
6、无水乙醇、异丙醇。
7、 70%乙醇。
8、 TE 缓冲液（TrisEDTA 缓冲液）。
（二）实验设备1、离心机。
2、移液器。
3、恒温水浴锅。
4、涡旋振荡器。
5、冰箱。
6、微量紫外分光光度计。
四、实验步骤1、样本处理称取适量的动物肝脏组织或植物叶片，用生理盐水清洗干净，剪碎或研磨成匀浆。
2、细胞裂解将处理好的样本转移至离心管中，加入适量的裂解液，充分混匀，置于恒温水浴锅中孵育一段时间，使细胞充分裂解。
3、去除蛋白质加入蛋白酶 K，混匀后在适当温度下孵育，以降解蛋白质。
加入酚/氯仿混合液，涡旋振荡混匀，然后离心，使水相和有机相分离。
此时，蛋白质等杂质主要存在于有机相中，而 DNA 则在水相中。
4、 DNA 沉淀将上清液转移至新的离心管中，加入适量的无水乙醇或异丙醇，轻轻颠倒混匀，可见白色的 DNA 沉淀出现。
5、洗涤 DNA离心收集 DNA 沉淀，弃去上清液。
加入适量的 70%乙醇，轻轻洗涤沉淀，再次离心，去除乙醇。
实验二 细胞化学
五、参考实验结果
六、作业
在高倍镜下绘制一个洋葱内表皮细胞，标 注各部分结构（细胞壁、细胞膜、细胞质、 细胞核、核仁）以及DNA、RNA在细胞内的 分布（用括号标注在结构后面）。
三、实验材料：
新鲜洋葱、眼科镊、剪刀、载玻片、盖玻片、 搪瓷托盘、甲醇冰醋酸固定液、甲基绿-哌洛宁混合 染液、吸水纸
四、实验步骤：
剪取大约5×5mm的洋葱，用镊子取内 表皮置于载玻片上（叶肉面朝下） 滴加一滴甲醇冰醋酸固定液 待干燥后滴加甲基绿-哌洛宁混合染液 染色3~5min
Hale Waihona Puke 流水漂洗，充分去掉浮色实验二 细胞化学
细胞内DNA和RNA的显示
一、实验目的：
学会显示DNA、RNA的细胞化学方法，了解DNA、RNA在 细胞内分布情况。
二、实验原理：
甲基绿--DNA--绿色（蓝色） 哌洛宁--RNA--红色 碱性染料甲基绿和哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色 效果。甲基绿与高聚分子的DNA结合，使DNA分子染成绿色； 哌洛宁与低聚分子RNA结合，使RNA分子染成红色。这样就 能将细胞内两种核酸分布分别显示出来。
DNA实验流程范文
DNA实验流程范文
一、样品提取
1.收集生物样品，如血液、组织或细胞。
2.用适当的缓冲液将样品悬浮，破坏细胞膜和细胞核，释放DNA。
3.添加蛋白酶，降解蛋白质，避免其干扰DNA纯化和扩增。
4.加入盐溶液，促使DNA凝聚成块。
5.用离心操作，将DNA沉淀下来。
二、DNA纯化
1.用缓冲液洗涤沉淀的DNA，去除杂质。
2.将洗涤过的DNA重新溶解在适量的缓冲液中，获得纯化的DNA溶液。
3.使用比色法或分光光度计测量DNA的浓度和纯度。
三、PCR扩增
1.准备PCR反应体系，包括DNA模板、引物、酶、核苷酸和缓冲液等。
2.将PCR反应体系加入PCR仪器，并设置特定的温度程序以控制DNA
的变性、引物的结合和DNA的扩增。
3.重复PCR循环，在每个循环中，通过加热、降温和延伸等步骤，实
现DNA的扩增。
4.PCR反应结束后，分析PCR产物的扩增效果，可以通过琼脂糖凝胶
电泳或实时荧光定量PCR等方法进行。
四、DNA分析
1.将PCR产物用琼脂糖凝胶电泳进行分离，通过电流作用，按照DNA 分子大小将PCR产物分离成不同条带。
2.可以使用染料如乙溴橙染色来观察琼脂糖凝胶上的DNA条带。
3.可以使用DNA测序仪等设备对PCR产物进行测序分析。
4.根据DNA分析结果，可以判断目标基因或序列的存在与否，或者评估样品中DNA的纯度和质量。
DNA实验流程范文
DNA实验流程范文一、DNA提取1.收集样品：选择需要提取DNA的样品，如细菌、动物或植物组织等。
2.细胞破碎：将样品研磨或切碎，使细胞破碎释放DNA。
3.细胞溶解：将破碎的样品加入溶解液，溶解细胞膜和细胞器膜。
4.蛋白酶处理：加入蛋白酶，消化细胞蛋白质，释放DNA。
5.DNA沉淀：加入盐溶液，将DNA沉淀到溶液底部。
6.洗涤：反复用酒精洗涤DNA沉淀，去除杂质。
7.DNA溶解：用适量的缓冲溶液溶解DNA。
二、DNA纯化1. 加入酶：加入RNase（核糖核酸酶）酶，消化DNA上的RNA。
2.加入盐溶液：加入盐溶液，使DNA释放出来形成沉淀。
3.洗涤：用酒精洗涤DNA沉淀，去除杂质。
4.脱水：将洗涤后的DNA沉淀在常温下干燥。
三、DNA扩增（PCR）1.反应混合物制备：将待扩增的DNA样品与引物（特异性序列）和PCR反应缓冲液混合。
2.反应条件设定：设置PCR反应的温度和时间条件。
3.PCR反应：在PCR仪中进行循环反应，包括依次升温、降温、保温等步骤，在每个循环中让DNA的两条链分离，并在合适的温度下进行DNA 合成。
4.PCR产物检测：将PCR产物进行电泳分析，观察是否得到了目标DNA片段。
四、测序1.测序混合物制备：将PCR产物与引物和测序反应缓冲液混合。
2. 测序反应：将测序混合物放入测序仪中，通过荧光标记的 ddNTP （二氧异链苷酸）与待测序的DNA链末端的碱基进行连接。
3. 信号检测：测序仪会记录下每个ddNTP的荧光信号，并将其转化为序列。
五、序列分析1.序列校对：将测序仪测得的荧光信号转化为序列，并与参考序列进行比对，校对测序的准确性。
2.序列剪切：去除测序前后的引物序列。
3.序列分析：将测得的序列进行进一步的分析，如比对数据库相似序列、预测蛋白质编码区域等。
六、结果解读和报告1.分析结果：结合序列分析结果，解读DNA的特征和功能。
2.结果报告：将实验结果整理成报告，包括序列数据、分析结果和结论。
dna提取实验报告分析
dna提取实验报告分析DNA 提取实验报告分析一、引言DNA 提取是分子生物学研究中的一项基础且关键的技术。
通过从细胞中分离和纯化 DNA，可以为后续的基因分析、疾病诊断、遗传研究等提供重要的材料。
本次实验旨在探讨一种常用的 DNA 提取方法，并对实验结果进行详细的分析。
二、实验材料与方法（一）实验材料1、新鲜的植物叶片（如菠菜叶）或动物组织（如鸡血）。
2、提取试剂盒（包含裂解液、蛋白酶 K、缓冲液、乙醇等）。
3、离心机、移液器、微量离心管、水浴锅等实验设备。
（二）实验方法1、样本处理植物叶片：称取一定量的新鲜叶片，洗净、剪碎后放入研钵中，加入液氮充分研磨成粉末。
将粉末转移至离心管中。
动物组织：取适量的鸡血，加入抗凝剂，离心去除血浆，收集血细胞。
2、细胞裂解向离心管中加入裂解液和蛋白酶 K，充分混匀，在 55℃水浴中孵育一段时间，使细胞充分裂解，蛋白质变性。
3、 DNA 沉淀加入适量的缓冲液，混匀后加入预冷的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 絮状物沉淀出现。
4、 DNA 洗涤将离心管离心，倒掉上清液，保留沉淀。
加入适量的 70%乙醇洗涤沉淀，再次离心去除乙醇。
5、 DNA 溶解室温干燥沉淀后，加入适量的 TE 缓冲液或去离子水溶解 DNA，置于－20℃保存备用。
三、实验结果与分析（一）DNA 浓度和纯度的测定使用紫外分光光度计测定提取的 DNA 在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）。
通常，A260/A280 的比值在 18 20 之间表示DNA 纯度较高。
若比值小于 18，可能存在蛋白质污染；若比值大于20，则可能存在 RNA 污染。
实验中得到的A260/A280 比值为185，表明提取的DNA 纯度较好，基本没有蛋白质和 RNA 的污染。
同时，根据 A260 值，结合公式计算出 DNA 的浓度为_____ng/μL。
（二）琼脂糖凝胶电泳分析将提取的 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统中观察电泳结果。
细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内DNA和RNA的原位显示
6. 盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。
（弃入水槽中会引起下水道堵塞）
理（为什么？）
[结果观察]
酸性蛋白
碱性蛋白
DNA和RNA的
[作业]
1. 请回答细胞化学法在本次实验中的应用。 2. 通过本次实验学到哪些基本操作技能？ 3. 请描述本次实验的显微观察结果。
[小结]
• 评价本次实验的得失 • 本次实验需要巩固的概念
细胞化学法 • 本次实验需要掌握的实验技能
1. 血涂片制作方法 2. 染色的规范操作方法 3. 洗涤方法（流水冲洗） 4. 正确的镜检方法（显微观察技术）
2. 甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的 两种染色剂，由于其自身分子结构的特点， 它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性 结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA 的分布部位。
[实验用品]
✓ 95%乙醇 ✓ 三氯醋酸 ✓ 甲基绿-派洛宁 ✓ 0.1%酸性固绿 ✓ 0.1%碱性固绿
[操作流程]
暴露
第二次实验
Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示
[实验目的]
1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内 的分布情况；
2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应 的原理和方法。
[实验原理]
1. 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理
值日生工作：
1、检查显微镜
2、清点检查器材
3、清洁公共实验区、打扫卫生
镜检后作业与工作
1. 完成实验报告；
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二、实验原理
DNA是由许多单核苷酸聚合而成的多核苷酸 ， DNA 是由许多单核苷酸聚合而成的多核苷酸， 是由许多单核苷酸聚合而成的多核苷酸 每个单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成. 每个单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成.。 DNA经 mol/L盐酸水解 盐酸水解， DNA经1mol/L盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核 糖之间的键打开， 糖之间的键打开 ， 使脱氧核糖的第一碳原子上 形成游离的醛基 这些醛基与 Schiff试剂反应 游离的醛基， 醛基与Schiff 试剂反应。 形成 游离的醛基 ， 这些 醛基与 Schiff 试剂反应 。
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二、实验原理
Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚 Schiff 试剂是由碱性品红和偏重亚 硫酸钠作用，形成无色的品红液， 硫酸钠作用，形成无色的品红液，当无色 品红与醛基结合则形成紫红色的化合物。 品红与醛基结合则形成紫红色的化合物。 凡有DNA 的地方， 因此凡有 DNA的地方 都能显示紫红色。 因此 凡有 DNA 的地方 ， 都能显示紫红色 。 紫红色的产生， 紫红色的产生，是由于反应产物的分子内 含有醌基，醌基是一个发色基团， 含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具 有颜色。 有颜色。材料不经过水解或预先用热的三 氯醋酸或DNA 酶处理， DNA酶处理 氯醋酸或 DNA 酶处理 ， 得到的反应是阴性 从而证明了Feulgen反应的专一性 证明了Feulgen反应的专一性。 的，从而证明了Feulgen反应的专一性。
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五、 注意事项
1、Schiff试剂配制好后，应保存在低温避光 Schiff试剂配制好后， 试剂配制好后 使其红色退去，方能使用； 处，使其红色退去，方能使用； 2、该染色剂着色特强，注意不要洒出，戴手套操作； 该染色剂着色特强，注意不要洒出，戴手套操作； 3、配制亚硫酸水溶液一定要用自来水。 配制亚硫酸水溶液一定要用自来水。
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实验仪器、 三、 实验仪器、材料和试剂
3）Schiff试剂的配制及保存：称取0.5g碱性品红加入 Schiff试剂的配制及保存：称取0.5g碱性品红加入 试剂的配制及保存 0.5g 到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡， 100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡， 煮沸的蒸馏水中 ），时时振荡 继续煮5min 勿使之沸腾），使之充分溶解。 5min（ ），使之充分溶解 继续煮5min（勿使之沸腾），使之充分溶解。然后冷 却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 50℃时用滤纸过滤 HCl， 却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1mol/L HCl， 冷却至25℃ 25℃时 加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠）， 冷却至25℃时，加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠）， 充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h 24h（ 充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h（有 时需2-3d），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活 时需2 3d），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活 ），使其颜色退至淡黄色 0.5g 性炭，用力振荡1min 然后用粗滤纸过滤于棕色瓶中， 1min， 性炭，用力振荡1min，然后用粗滤纸过滤于棕色瓶中， 封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀， 封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于 4℃冰箱中备用 如有白色沉淀，就不能再使用， 冰箱中备用。 4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜 色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾， 色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变 为无色时，仍可使用。 为无色时，仍可使用。
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实验仪器、 三、 实验仪器、材料和试剂
⑴仪器、用具：显微镜、恒温水浴箱、温度计、解 仪器、用具：显微镜、恒温水浴箱、温度计、 剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、 剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸 水纸。 水纸。 材料：洋葱鳞茎或根尖 或根尖。 ⑵材料：洋葱鳞茎或根尖。 ⑶试剂 1mol/L盐酸的配制 盐酸的配制： 82.5ml密度 密度1.19 1）1mol/L盐酸的配制：取82.5ml密度1.19 g/ml 的浓盐酸加蒸馏水至1000ml 1000ml。 的浓盐酸加蒸馏水至1000ml。 亚硫酸水： 200ml自来水 自来水， 10ml10%偏重 2）亚硫酸水：取200ml自来水，加10ml10%偏重 亚硫酸钠（或偏重亚硫酸钾）水溶液和10ml 亚硫酸钠（或偏重亚硫酸钾）水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者于使用前混匀。 HCl，三者于使用前混匀。
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* 对照片
方法一：材料不经1mol/L盐酸水解， 方法一：材料不经1mol/L盐酸水解，直接放在 1mol/L盐酸水解 Schiff试剂中染色 然后按步骤4 制片观察。 试剂中染色， Schiff试剂中染色，然后按步骤4-7制片观察。 （方法二：先将材料放在5%三氯醋酸中90℃水浴 方法二：先将材料放在5%三氯醋酸中90℃水浴 5%三氯醋酸中90℃ min，主要把DNA抽提掉，然后按步骤1 DNA抽提掉 15 min，主要把DNA抽提掉，然后按步骤1-7制 片观察。） 片观察。）
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四、 方法与步骤
1.将洋葱鳞茎内表皮(或根尖)或放在1mol/L盐酸中， 1.将洋葱鳞茎内表皮(或根尖)或放在1mol/L盐酸中， 将洋葱鳞茎内表皮 1mol/L盐酸中 加热到60℃水解8 60℃水解 加热到60℃水解8-10min. 2.蒸馏水洗 蒸馏水洗3 每次1min 1min。 2.蒸馏水洗3次，每次1min。 3.Schiff试剂避光染色 试剂避光染色30 min。 3.Schiff试剂避光染色30 min。 4.用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗 用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3 每次1 min。 4.用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1 min。 5.蒸馏水洗 min。（ 蒸馏水洗5 。（或 每次1min 1min） 5.蒸馏水洗5 min。（或5次，每次1min） 。 6.将根尖放在载玻片上 镊子捣碎，盖上盖玻片， 将根尖放在载玻片上， 6.将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片， 压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 7.显微镜检查 细胞中凡是有DNA 显微镜检查， DNA的部位应呈现紫红 7.显微镜检查，细胞中凡是有DNA的部位应呈现紫红 色的阳性反应。 色的阳性反应。
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六、 作业
1.简图表示Feulgen反应的染色结果。 1.简图表示Feulgen反应的染色结果。 简图表示Feulgen反应的染色结果 2.说明Feulgen反应中设立对照组的必要性。 2.说明Feulgen反应中设立对照组的必要性。 说明Feulgen反应中设立对照组的必要性
实
验
七
DNA的细胞化学 DNA的细胞化学 —Feulgen反应 Feulgen反应
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一、实验目的
了解Feulgen反应的原理， 了解Feulgen反应的原理，掌握有关的操作 Feulgen反应的原理 方法。 方法。