脂肪鉴定 脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法) 实验报告
脂肪鉴定实验之苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ性质配制及使用方法

脂肪鉴定实验之苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ性质配制及使用方法前几天,有学生问我,“老师关于课本中的脂肪的检测观察实验有两种方案,其中方案一是向花生子叶制作的组织样液里滴加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ来检测和观察,但是苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ本来就是有颜色是不是有颜色干扰,如果苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ本身颜色就是橘黄色和红色,那我怎么判断脂肪被染色了呢?”其实关于这个知识点,以前教书都是一笔带过,平时练习考试中也没有出现过这种类型的考题,也就没有真正的去探讨这个问题。
学生的刁钻问题就不得不让我更深入地去了解加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ两种染料了,下面分享我从网络上整理的加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ相关知识。
1、苏丹III是一种化学染色剂,红棕色粉末;生物染色剂,如脂肪及其类似物质染色。
主要是用于石油、机油和其他的一些工业溶剂中,目的是使其增色,也用于鞋、地板等的增光;具有致癌性,对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。
2、苏丹Ⅳ为深褐色,苏丹Ⅳ可用于检验脂肪(脂肪被染成红色)。
对脂肪的亲和力比苏丹III好。
从这里可以看出,两种染色剂本身的颜色和与脂肪染色后的颜色还是有区别的,所以可以利用制作的组织样液里滴加苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ来检测和观察。
3、苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ的配制方法:苏丹红Ⅲ配制:取0.1g苏丹Ⅲ,溶解在20ml95%酒精中。
苏丹Ⅳ溶液的配制称取0.1 g苏丹Ⅳ干粉,溶于50 mL丙酮中,再加入体积分数为70%的酒精50 mL,充分混合后即可使用。
4、什么是浮色,为什么用酒精洗?因为苏丹Ⅲ本身有颜色,它碰到脂肪后,会变成橘黄色,与遇脂肪前的颜色不同,所以要检验组织中的脂肪,就必须要除掉那些未与脂肪接触的多余的苏丹三染液,以免对检验结果造成影响。
这个浮色就是指那些没有与脂肪接触而变色的多余的苏丹三染液的颜色。
苏丹三不溶于水,易溶于酒精,所以要用酒精洗,才能把多余的苏丹三溶解并洗净。
5、为什么苏丹Ⅳ比苏丹III染色时间短?苏丹Ⅲ和苏丹Ⅳ染色时间不能太长,时间太长染色太深,反而影响观察。
检测生物组织中的脂肪实验报告

学校
金五中
科目
生物
班级
时间
实验名称
检测生物组织中的脂肪
指导教师
实验目标或原理
某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。
实验器材或药品
材料:浸泡过的花生籽粒(3-4h)
用具:滤纸,小刀,载玻片,盖玻片,显微镜,毛笔,培养皿,自制切片工具
试剂:苏丹Ⅲ染液,质量分数为50%的酒精溶液,蒸馏水
结论:
实验小组组员签名:
实验小组组长签名:
清洗:用吸水纸吸去染液,再滴加1~2滴体积分数为50%的酒精溶液,洗去浮色。
盖片:用吸水纸吸去薄片周围的酒精,滴1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片,制成临时装片。
观察:在低倍镜下寻找花生子叶薄片的最薄处,移到视野中央,将影像调节清楚后换高倍镜观察。在视野中可以清晰地看到被染成橘黄色(或红色)的脂肪颗粒。
现象:
实验探究过程
现象及结论(分析)
取材:取一粒浸泡过的花生种子,去掉种皮。
切片:用自制切片工具把花生子叶的横断面上平行切下若干薄片,放入盛有清水的培养皿中待用。
制片
选材:从培养皿中选取最薄的切片,用毛笔蘸取放在载玻片中央。
染色:在花生子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ染液,染色3 min(如果用苏丹Ⅳ染液,染色1 min)。
土豆脂肪染色实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的通过本次实验,旨在探究土豆中脂肪的分布情况,学习使用苏丹Ⅲ染色法对脂肪进行定性检测,并观察土豆组织中的脂肪颗粒,加深对植物细胞中脂肪积累现象的理解。
二、实验材料与试剂1. 实验材料:- 新鲜土豆- 无水乙醇- 苏丹Ⅲ染液- 70%乙醇- 50%乙醇- 生理盐水- 剪刀、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、显微镜等2. 实验试剂:- 苏丹Ⅲ染液:配制浓度为0.5%的苏丹Ⅲ染液。
- 70%乙醇:用于脱色处理。
- 50%乙醇:用于清洗载玻片。
三、实验方法1. 取新鲜土豆,用剪刀切去两端,沿切面用解剖针挑出小块土豆组织。
2. 将挑出的土豆组织放入载玻片中央,用解剖针轻轻压扁。
3. 向载玻片上滴加苏丹Ⅲ染液,覆盖整个土豆组织,染色时间为5分钟。
4. 取出载玻片,用50%乙醇清洗载玻片,去除多余的染液。
5. 观察染色后的土豆组织,用显微镜观察脂肪颗粒。
6. 将显微镜下观察到的结果记录在实验报告中。
四、实验结果在显微镜下观察,发现土豆组织中的脂肪颗粒呈红色,分布不均匀。
部分细胞内脂肪颗粒较大,部分细胞内则没有明显脂肪颗粒。
五、实验分析1. 土豆作为一种常见的食用作物,其脂肪含量相对较低。
通过苏丹Ⅲ染色法观察,可以清晰地看到土豆组织中的脂肪颗粒。
2. 实验结果表明,土豆组织中的脂肪颗粒主要分布在细胞内,且分布不均匀。
这可能是因为土豆在生长过程中,脂肪的积累与植物的光合作用、呼吸作用等生理过程有关。
3. 在观察过程中,部分细胞内脂肪颗粒较大,这可能是因为这些细胞在生长过程中积累了较多的脂肪。
六、实验讨论1. 本实验使用苏丹Ⅲ染色法对土豆组织中的脂肪进行检测,结果表明该染色法适用于植物组织中脂肪的定性检测。
2. 土豆作为一种低脂食品,其脂肪含量相对较低,但仍然存在一定的脂肪积累。
在日常生活中,适量食用土豆有助于保持身体健康。
3. 本实验结果表明,土豆组织中的脂肪颗粒分布不均匀,这与植物的生长发育过程有关。
第四次实验 脂类化学—苏丹III染色法

在铺片时应掌握好力度,若用力过大,则肠系膜容易被撕破,铺片不成功;若用力过小,则细胞不能被铺呈单层,影响染色及观察。
【实验步骤】
1、断头法处死小鼠,置于解剖盘中,剪开腹腔,用镊子提起小肠,将盖玻片紧贴于肠系膜,用剪刀连同盖玻片和其上粘附的肠系膜剪下,反扣与载玻片上,由盖玻片一边滴入甲醛,使其渗入盖玻片与载玻片间的空隙里,固定20min。
2、吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗,用滴管不断吸去液体,以除去固定液。
3、用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作,再进行一次冲洗。
苏丹染料是偶氮染料,它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料,易溶于乙醇但更易溶于脂肪,所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时,苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂,丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂,这样可以染色大的脂肪积累块,但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂,可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质,但是能溶解染料,是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀,防止蒸发,因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料,然后再用水洗,可以防止多余的染料在材料中沉淀。
㈡实验中注意事项有:
1.在抓握小鼠时,应迅速掐住其两耳之间的皮肤,使其头部不可扭动,并用同一只手掐住其背部至尾巴的皮肤,使小鼠整个腹部皮肤紧绷,不能反击。
实验报告 脂类的化学——苏丹三染色

姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx 科目细胞生物学实验题目脂类的化学——苏丹Ш染色组别第2组一.实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二.实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质,根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪,游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内,比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合,将细胞质及细胞核挤到一旁,如脂肪细胞。
脂肪不溶于水,易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等,因此制作脂类标本一般不用石蜡切片,而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类,固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂,丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂,这样可以染色大的脂肪积累块,但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂,可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质,但是能溶解染料,是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀,防止蒸发,因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料,然后再用水洗,可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体,可用于石蜡切片,但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋,而用如下方法:冰冻切片,明胶包埋冰冻切片,铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类,而使脂类显色的原理显示脂类,使用时,要注意选择溶剂,要求既要溶解苏丹染料,又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料,它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料,易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时,苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三.实验仪器及试剂1.仪器解剖盘,解剖剪,镊子,盖玻片,载玻片,显微镜,胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液,甲醛钙溶液,70%乙醇溶液,蒸馏水3.材料小白鼠一只四.实验步骤1.断头法处死小鼠,置于解剖盘中。
脂肪鉴定 脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法) 实验报告

细胞生物学实验报告脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法)1.实验目的:用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色,观察细胞颜色,掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法.2.实验用品:(1)仪器及器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管(2)实验药品:蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液(3)实验材料:小鼠3.实验原理:(1)由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类,这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物.脂类是机体内的一类有机大分子物质,它包括范围很广,大体上可以分为类脂和油脂两大类。
类脂包括磷脂(phospholipids),糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三类。
而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。
这几种脂类化学结构有很大差异,生理功能各不相同。
其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂,在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。
(2)在固定细胞时,通常使用脂溶性固定液。
然而,鉴定的材料是脂肪时,脂溶性的固定液会溶解脂肪,致使把切片放到显微镜下观察时,观察不到被染色的脂肪,只能看到脂肪细胞中有很大的空洞.最好的固定材料是甲醛类的固定液.如医学上保存尸体采用的是福尔马林,即40%的甲醛水溶液,本次实验采用的则是甲醛钙溶液。
(3)光学显微镜的切片多是石蜡切片。
在熔接石蜡时,需要用到脂溶性溶剂,而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪,因此本次实验不可采用石蜡切片.但是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂,可以采用石蜡切片。
(4)制作切片有多种方法,如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。
(5)脂类染色的原理是,染料溶于脂类显色.选择溶剂时应注意,溶剂必须既溶解的染料,又不溶解掉脂类。
4.实验步骤:(1)用断头法处死小鼠,置于解剖盘中.剪开腹腔,用镊子提起小肠,使盖玻片紧贴于肠系膜。
脂肪鉴定的实验。观察细胞质流动实验

二、显微镜的结构:
目镜
粗准焦螺旋
镜筒
细准焦螺旋 镜臂
压片夹
载物台 遮光器与光圈 反光镜物镜镜柱镜座实验三:在显微镜下观察字
1.在载玻片上写下字母 A 2.放在显微镜下观察
实验材料
1.菠菜叶 2.显微镜 3.蒸馏水
实验步骤:
1.取菠菜叶稍带叶肉细胞的下表皮,放在载 玻片上 2.滴一滴蒸馏水,盖上载玻片 3.放在显微镜下,先用低倍镜下找到绿色菠 菜叶,再用低倍镜观察
实验现象
实验分析:
未观察到细胞质流动的原因: 温度过低,新陈代谢慢,细胞质流动不明 显 细胞切片太厚,观察不明显
实验一:脂肪的鉴定
实验原理
苏丹Ⅲ为一种脂肪染色剂(易溶解于酒精,不 溶解于水)。苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄 色。其反应式为:
脂肪
苏丹Ⅲ
橘黄色
实验材料
浸泡过的花生一粒,苏丹Ⅲ染液,质量分 数为50%的酒精溶液,滤纸,小刀,显微 镜
实验步骤
取材:花生种子(浸泡3h),去皮,将削成薄片 从培养皿中选取最薄的切片,用毛笔蘸取放 在载玻片中央; 在薄片上滴加苏丹Ⅲ 染液3滴,染色2min
制片:
滴加体积分数为50%的酒精溶液2滴,洗去浮色 吸去余液,滴1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片
观察: 先在低倍镜下找到已着色的薄片,后用高倍镜观察
结果: 有被染成橘黄色的脂肪微粒
实验现象
拓展实验
将羊油放入试管中,滴入五滴苏丹Ⅲ染液, 另取一试管,滴入五滴苏丹Ⅲ染液,
实验二:观察细胞质流动
实验原理 叶绿体一般是绿色的、扁平的椭球形或球行, 可以用光学显微镜的高倍镜观察得到。 活细胞的细胞质是流动的,有助于新陈代谢 物质的转换,但是细胞质是胶质,不易观 察到它的流动,我们一般以其它的细胞器 为参照物来观察细胞质的流动。
实验报告脂类的化学——苏丹三染色

一.实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二.实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质,根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪,游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内,比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合,将细胞质及细胞核挤到一旁,如脂肪细胞。
脂肪不溶于水,易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等,因此制作脂类标本一般不用石蜡切片,而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类,固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂,丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂,这样可以染色大的脂肪积累块,但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂,可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质,但是能溶解染料,是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀,防止蒸发,因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料,然后再用水洗,可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体,可用于石蜡切片,但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋,而用如下方法:冰冻切片,明胶包埋冰冻切片,铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类,而使脂类显色的原理显示脂类,使用时,要注意选择溶剂,要求既要溶解苏丹染料,又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料,它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料,易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时,苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三.实验仪器及试剂1.仪器解剖盘,解剖剪,镊子,盖玻片,载玻片,显微镜,胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液,甲醛钙溶液,70%乙醇溶液,蒸馏水3.材料小白鼠一只四.实验步骤1.断头法处死小鼠,置于解剖盘中。
剪开腹腔,用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜,并在其下放置一载玻片,用剪将连同载玻片和其上粘着的肠系膜取下。
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细胞生物学实验报告
脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法)
1.实验目的:用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色,观察细胞颜色,掌握苏丹Ⅲ染液的
染色方法。
2.实验用品:
(1)仪器及器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管
(2)实验药品:蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液
(3)实验材料:小鼠
3.实验原理:
(1)由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类,这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物。
脂类是机体内的一类有机大分子物质,它包括范围
很广,大体上可以分为类脂和油脂两大类。
类脂包括磷脂(phospholipids),
糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三
类。
而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。
这几种
脂类化学结构有很大差异,生理功能各不相同。
其共同物理性质是不溶于水
而溶于有机溶剂,在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。
(2)在固定细胞时,通常使用脂溶性固定液。
然而,鉴定的材料是脂肪时,脂溶性的固定液会溶解脂肪,致使把切片放到显微镜下观察时,观察不到被
染色的脂肪,只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。
最好的固定材料是甲醛类
的固定液。
如医学上保存尸体采用的是福尔马林,即40%的甲醛水溶液,本次
实验采用的则是甲醛钙溶液。
(3)光学显微镜的切片多是石蜡切片。
在熔接石蜡时,需要用到脂溶性溶剂,而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪,因此本次实验不可采用石蜡切片。
但是
锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂,可以采用石蜡切片。
(4)制作切片有多种方法,如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。
(5)脂类染色的原理是,染料溶于脂类显色。
选择溶剂时应注意,溶剂必须既溶解的染料,又不溶解掉脂类。
4.实验步骤:
(1)用断头法处死小鼠,置于解剖盘中。
剪开腹腔,用镊子提起小肠,使盖玻片紧贴于肠系膜。
用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下,反扣于已
滴加甲醛钙的载玻片上,固定15分钟,
(2)吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗,用滴管不断吸取液体以去除固定液。
(3)用70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤,进行冲洗。
(4)用苏丹Ⅲ染液染色30mins。
(5)染色结束时,用吸水纸吸去多余染液。
擦净盖玻片周边及表面,用显微镜观察。
5.实验结果:脂肪细胞被苏丹Ⅲ染液染成橘红色。
细胞周围有溢出的脂肪粒,呈圆形,橘
红色。
10*4显微镜下观察:
10*10显微镜下观察:
10*40显微镜下观察:
6.分析与讨论
(1)结果分析:脂肪细胞中含有大量脂肪,脂肪被苏丹Ⅲ染液染成橘红色,因而使整个细胞呈现橘红色。
某些脂肪细胞破裂,而使脂肪溢出,呈橘红色
的圆球状。
(2)注意事项
①在用盖玻片贴肠系膜:由于小鼠的肠系膜很小,因而应该提前缩小盖玻片的尺
寸。
可以用剪刀剪或用手掰小,并尽量使最后的盖玻片呈正方形。
②肠系膜的选择:肠系膜是一层包裹在小肠外的很细的薄膜,这层膜的大部分地
方是没有脂肪细胞的。
但是,肠系膜血管的周围有一些起保护作用的脂肪细胞。
因此,选材时应注意选择含有血管的肠系膜。
但是有一些血管周围的脂肪细胞
非常厚,肉眼可见呈白色。
这样的地方是无法观察的,所以选材时还要注意材
料的透明度。
③染色:染色过程为30mins,在这一过程中,染料中的水分很有可能蒸发,因此
在染色过程中应不时向载玻片中滴加染料。
④观察:在把物镜由10倍转为40倍时,应考虑到物镜变长,可能会使镜面蹭到
小鼠的小肠。
在观察时可先将小肠切除,只观察肠系膜。
⑤观察:观察时如果血管呈红色,是由于放血时没有放干净,下次实验应该注意
(3)作业:糖类的鉴定
Molisch反应(α- 萘酚反应):此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。
它的原理是:糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用,形成红紫色复合物。
由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环,因此又称紫环反应。
α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替,麝香草酚溶液比较稳定,其灵敏度与α- 萘酚一样。
除了糖类之外,各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。
因此,阴性反应证明没有糖类物质的存在;而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。
此反应不能鉴别多聚糖如淀粉,纤维素等。
Benedict反应:班氏试剂是斐林试剂的改良(也是含有Cu2+的碱性溶液),能使具有自由醛基或酮基的糖类氧化,其本身则变成砖红色或黄色的Cu2O,可用来测定还原糖的存
在。
它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,其碱性比斐林试剂弱,灵敏度高,干扰因素少,因而在实际应用中有更多的优点。
Bial反应(甲基间苯二酚反应):戊糖与浓盐酸加热形成糠醛,在有Fe3+存在的条件下,它与甲基间苯二酚(地衣酚)缩合,形成深蓝色的沉淀物(此沉淀物溶于正丁醇)。
己糖也能发生反应,产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。
Molisch反应(α- 萘酚反应):此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。
它的原理是:糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用,形成红紫色复合物。
由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环,因此又称紫环反应。
α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替,麝香草酚溶液比较稳定,其灵敏度与α- 萘酚一样。
除了糖类之外,各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。
因此,阴性反应证明没有糖类物质的存在;而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。
Seliwanoff反应:同样的原理,将糖与浓酸作用后再与间苯二酚反应,若是酮糖就显鲜红色,若是醛糖就显淡红色,由此可鉴别酮糖和醛糖。
蒽酮反应:糖类经浓酸水解,脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮(10-酮-9,10-二氢蒽)反应生成蓝绿色复合物。
Barfoed test :检验单糖的一种试验。
将5ml的Barfoed试剂煮沸,在保持其沸腾情况下缓慢地加入待检物。
单糖还原比混合物,形成红色沉淀物;而双糖虽亦能还原,但反应甚慢,可与前者区别。
脂肪的鉴定:脂肪可用苏丹Ⅲ染液、苏丹Ⅳ染液、油红染色进行鉴定
蛋白质的鉴定:常用的试剂是双缩脲试剂。
其原理是:碱性条件下,双缩脲H2N-CO-NH-CO-NH2可以和Cu离子作用生成紫色沉淀。
蛋白质中有很多和双缩脲结构相似的肽键,所以可以用双缩脲试剂来鉴定蛋白质。