慢病毒介导WWOX基因过表达对Jurkat和K562白血病细胞生物学特性影响的实验研究
慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响
中国组织工程研究第19卷第6期2015–02–05出版C hi n ese Jo urna l o f Tis sue Engineeri ng Res earch February 5,2015Vol.19,No.6www.CRTER.org王吉刚，男，云南省沾益县人，博士，副主任医师，主要从事白血病微环境对白血病生物学特性影响的研究。
通讯作者：周凡，硕士，主任医师，解放军沈阳军区总医院血液科，辽宁省沈阳市110016d oi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.06.006[http://www.crter.o rg]中图分类号:R394.2文献标识码:A 文章编号:2095-4344(2015)06-00849-05稿件接受：2015-01-03Wang Ji-gan g,M.D.,Associatech ief physician ,De partment of Hematology,the Gen eral Hospita l of Sh enya ng Military C omman d,Sh enya ng 110016,Liao nin g Province ,C hin a C orresp ond ing a uthor:Zh ou Fan ,Master,C hie f ph ysicia n,Depa rtme nt o f He matolog y ,the Gen eral Hospita l of Sh enya ng Military Co mmand ,She nyan g 110016,Liao ning Pr o vince ,C hin a53慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响王吉刚，张海婷，周凡，刘彦琴，白颖，刘景华，李敏燕(解放军沈阳军区总医院血液科，辽宁省沈阳市110016)文章亮点：1酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼的出现使慢性髓细胞白血病的治疗出现转机，伊马替尼耐药已成为困扰临床的主要问题。
翻译2013-12
Biochemistry. 2013 Dec 13. [Epub ahead of print]Molecular Origin ofthe Binding of WWOX Tumor Suppressor to ErbB4 Receptor Tyrosine Kinase.Schuchardt BJ, Bhat V, Mikles DC, McDonald CB, Sudol M, Farooq A.Author informationAbstractThe ability of WWOX tumor suppressor to physically associate with the intracellular domain (ICD) of ErbB4 receptor tyrosine kinase is believed to play a central role in downregulating the transcriptional function of the latter. Herein, using various biophysical methods, we show that while the WW1 domain of WWOX binds to PPXY motifs located within the ICD of ErbB4 in a physiologically relevant manner, the WW2 domain does not. Importantly, while the WW1 domain absolutely requires the integrity of the PPXY consensus sequence, nonconsensus residues within and flanking this motif do not appear to be critical for binding. This strongly suggests that the WW1 domain of WWOX is rather promiscuous toward its cellular partners. We also provide evidence that the lack of binding of the WW2 domain of WWOX to PPXY motifs is due to the replacement of a signature tryptophan, lining the hydrophobicligand binding groove, with tyrosine (Y85). Consistent with this notion, the Y85W substitution within the WW2 domain exquisitely restores its binding to PPXY motifs in a manner akin to the binding of the WW1 domain of WWOX. Of particular significance is the observation that the WW2 domain augments the binding of the WW1 domain to ErbB4, implying that the former serves as a chaperone within the context of the WW1-WW2 tandem module of WWOX in agreement with our findings reported previously. Altogether, our study sheds new light on themolecular basis of an important WW-ligand interaction involved in mediating a plethora of cellular processes.PMID:24308844[PubMed - as supplied by publisher]既往研究表明肿瘤抑制子WWOX通过与ErbB4的胞内结构域结合从而调控后者下游的转录功能。
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染对白血病细胞K562形态及增殖的影响
粒 细胞 一巨 噬 细胞 集 落 刺激 因子 转染 对 白血 病 细胞 Ｋ ５ ６ ２形 态 及 增 殖 的影 响
陈蓉 。 常晋 霞 ， 李 雪璐 ， 彭丽 娟 ， 朱红 （ 川北 医学 院 医学微 生物 学与免 疫 学教研 室 ， 四 川 南充 ６ ３ ７ ０ ０ ０ ）
摘要： 目的
观察重 组 Ｐ ｃ Ｄ Ｎ Ａ ３ ． １ 一粒细胞 一巨噬细胞集 落刺 激 因子 （ Ｇ Ｍ— ｃ ｓ Ｆ ） 、 外 源性 Ｇ Ｍ． Ｃ Ｓ Ｆ对髓 系 白血
病细胞 （ Ｋ ５ ６ ２ ） 形态及增 殖的影响 。方法 将 Ｋ ５ ６ ２细胞分为 ４组 ， 重 组质 粒组 、 外源性组 、 空质粒组细胞分别 以重
ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｉ ｅ ｕ ｋ ｅ ｍｉ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ Ｋ ５ ６ ２
Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｒ ｏ ｎ ｇ。 Ｃ Ｈ Ａ ＮＧ Ｊ ｉ ｎ ｘ ｉ ａ， Ｌ Ｉ Ｘ ｕ ｅ ｌ ｕ， Ｐ Ｅ Ｎ Ｇ Ｌ ￣ ｕ ａ ｎ ， Ｚ ＨＵ Ｈ ｏ ｎ ｇ （ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ Ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｆ ｏ Ｎ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ｎ Ｓ ｉ ｅ ｈ ｕ ａ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｎ ａ ｎ ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ６ ３ ７ ０ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
中图分类号 ： Ｒ ７ ３ ０ ． ５
文献标志码 ： Ａ
文章编号 ： １ ０ ０ ２ — ２ ６ ６ Ｘ（ ２ ０ １ ７ ） ３ １ － ０ ０ ０ ５ — ０ ４
慢病毒介导过表达组织蛋白酶S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的作用
慢病毒介导过表达组织蛋白酶S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的作用张智;朱广志;彭涛;赵国良;徐静【摘要】目的：建立慢病毒介导过表达组织蛋白酶S （cathepsin S，Cat S）基因的肝癌细胞株，观察Cat S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的影响。
方法利用Age I和EcoR I双酶切获得目的基因片段，构建靶向过表达Cat S基因的慢病毒载体pLVX-EGFP-3FLAG-Puro，通过人胚肾上皮293T细胞进行慢病毒制备并感染肝癌MHCC97H细胞。
使用嘌呤霉素加压筛选，建立稳定过表达Cat S 基因的肝癌细胞株。
通过RT-PCR、Western blot、MTT、Transwell和划痕实验研究稳定过表达Cat S基因对肝癌MHCC97H细胞增殖和迁移的影响。
结果成功包装靶向过表达Cat S基因慢病毒载体并感染肝癌MHCC97H细胞。
慢病毒感染后，与空载对照细胞Mock-MHCC97H相比，慢病毒Cat S-MHCC97H细胞Cat S mRNA、Cat S蛋白及MMP-2蛋白表达量明显升高（P<0.05），细胞增殖、迁移、侵袭能力亦明显增强（P<0.05）。
结论慢病毒介导的Cat S基因过表达可能通过上调MMP-2蛋白表达促进肝癌MHCC97H细胞增殖、转移，Cat S基因可能是治疗肝癌的一个潜在靶点，这为阐明肝癌增殖和转移的分子生物学机制及提高肝癌基因治疗提供了新的实验依据。
%Objective To construct a lentivirus expression vector to drive stable Cat S overexpression in the hepatocellular carcinoma (HCC)cell line MHCC97H,and to investigate the effects of overexpression on cell proliferation and migration. Methods The Cat S gene was inserted into the lentiviral expression vector pLVX-EGFP-3FLAG-Puro using Age I and EcoR I restriction enzymes and transfected into 293T cells to generate recombinant lentivirus. This virus was used to infectMHCC97H cells,and positive cells were selected using puromycin. Real-time quantitative PCR,Western blots,MTT assay,the transwell migration assay and the wound healing migration assay were used to assess the effects of Cat S overexpression on proliferation and migration ofMHCC97H cells. Results A lentiviral vector containing the Cat S gene was constructed,and an MHCC97H cell line stably overexpressing Cat S was established. Cat S overexpression was associated with significantly shorter cell doubling time,as well as significantly greater invasion and migration abilities. Conclusions Lentivirus-mediated Cat S overexpression can increase MHCC97H proliferationand migration,opening the door to future studies of molecular mechanisms of liver cancer invasion and metastasis.【期刊名称】《中国癌症防治杂志》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】7页(P244-249,250)【关键词】肝肿瘤;组织蛋白酶S;过表达;慢病毒;增殖;迁移【作者】张智;朱广志;彭涛;赵国良;徐静【作者单位】530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科;530021 南宁广西医科大学第一附属医院肝胆外科【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称“肝癌”）是世界范围内第五位常见癌症［1］，据统计全世界每年新增病例超过660 000例［2，3］。
过表达对K562细胞增殖、凋亡及Survivin、Cox-2表达的影响 ---
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� 通过对糖尿病肾病（ diabetic nephropathy, DN）病人临床穿刺 样本和 DN小鼠模型中肾脏组织以及肾脏细胞在模拟糖尿病肾病条件刺 激下的体外研究，探讨 NLRP3炎症体在糖尿病肾病病理条件下的表达 变化。方法：通过对 DN 病人穿刺样本进行免疫组化和 real-time RT-PCR检测，观察 NLRP3在 DN病人穿刺样本中的表达变化；通过 高脂喂养（ HFD ）/STZ 尾静脉注射联合建立 DN 小鼠模型，并通过 Western Blot和半定量 PCR 方法观察 NLRP3在DN 小鼠模型中的 表达变化；在体外实验中进一步探讨足细胞和系膜细胞在高糖、 TNFα 、TGF-β条件下 NLRP3蛋白的表达。结果： DN病人小鼠模型中肾 脏组织中的 NLRP3 表达水平显著升高；足细胞在高糖、 TNF-α或 TGF-β刺激下 NLRP3表达明显升高且具有统计学意义，而系膜细胞 在高糖刺激下 NLRP3蛋白表达升高，在 TNF-α 、TGF-β刺激下 NLRP3 蛋白表达没有显著的变化。结论： NLRP3炎症体的表达上调 在 DN的发病机制中可能发挥重要作用，对肾脏固有细胞的体外实验表 明 NLRP3的表达变化具有细胞特异性，深入研究 NLRP3炎症体的作 用机制将为糖尿病肾病的治疗提供新的靶点和思路。
表达对K562细胞增殖、凋亡及 Survivin、Cox-2表达的影响
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üppe样因子 Sp1样蛋白（ Sp1-like proteins）和 Kr Krü （ Kr üppel-like factors， KLFs) 是一个具有多个结构高度相似成 Krü 员的锌指蛋白家族，在真核细胞的基因转录调控过程中起着重要作用。 哺乳动物机体中包含这个家族的大部分成员，在人类基因组中至少编 码 21种Sp1-like/KLF蛋白。 KLF4 是目前研究较多的一个 KLF家族 成员，它能够通过与下游基因启动子区的 KLF4结合元件相结合，从而 直接调控下游基因的转录，是生物体内一种重要的转录因子。研究发 现， KLF4 在细胞增殖和分化、肿瘤发生和血管重构等生理、病理过程 中均起到重要作用。本文就 Sp1-like/KLF蛋白家族结构， KLF4的 结构特性及其生物学功能进行综述。源自大连废旧物资回收 lmqfj
K562与K562A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究的开题报告
K562与K562A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究的开题报告题目：K562与K562A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究研究背景：白血病是一种常见的血液恶性肿瘤，其治疗过程中常常出现耐药现象，严重影响着病人的生存质量。
目前已有研究表明，microRNA在白血病治疗过程中的起重要作用，其中一些耐药相关microRNA则被认为可以成为白血病治疗的潜在靶点，因此本研究将从K562与K562A02细胞株中筛选与白血病耐药相关的microRNA。
研究目的：本研究旨在筛选出K562与K562A02细胞株中与白血病耐药相关的microRNA，并探究其在白血病耐药治疗中的作用机制，为白血病治疗提供理论依据。
研究方法：1.细胞培养及处理将K562与K562A02细胞株分别培养在不同的培养基中，其中K562细胞株作为敏感基础对照组，K562A02细胞株作为耐药实验组。
对K562A02细胞株进行处理，包括化疗药物、RNA干扰、病毒转染等方式。
2. microRNA筛选使用高通量测序技术对K562与K562A02细胞株进行基因表达谱的测序，筛选出在K562A02细胞株中表达水平明显上调的microRNA。
3. 实验验证通过qPCR等技术手段对筛选出的microRNA进行鉴定，并分析其在白血病耐药中的作用机制。
4. 数据分析对测序数据进行生物信息学分析，对不同组间的差异进行比较，并使用GO、KEGG等数据库进行通路富集分析。
预期结果：筛选出与白血病耐药相关的microRNA，探究其在白血病治疗中的作用机制，为白血病治疗提供理论依据。
研究意义：本研究将从分子水平上深入探究白血病耐药的机制，为寻找新型治疗靶点提供新的线索，并有助于提高白血病治疗的效果。
慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定
【摘 要 】目的 : 筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病 ( CML ) K562细胞的寡核苷酸适体. 方法 : 体外合成长度为 88 个碱 筛细胞 ,利用指数富集的配基系统进化 ( SELEX)技术筛选出 与 CML K562细胞特异结合的适体. 将筛选得到的适体回收 纯化后连接 pGEM 2T质粒载体 ,经蓝白筛选后 ,随机挑选 24 个克隆子进行序列测定. 采用荧光标记引物法检测 ssDNA 文 库与 K562细胞的亲和力 ,并用 Clustal 2. 05和 DNA sis V 2. 5 软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测. 结果 : 经过 13 轮循环筛选 , CML K562 细胞适体 的 A 值 从 0. 12上升到 1. 25,至第 13轮 A 值无明显增高. 一级结构分析 无同源序列 ,但可分为 6个家族 ,其中 5个家族各自具有保守 序列 ,家族 6无保守序列. 二级结构分析表明 ,适体形成的茎 环 、凸环结构可能是与 K562 细胞特异性结合的结构基础. 结论 : 利用 SELEX技术成功筛选出高亲和性的 CML K562细 胞适体. 【关键词 】白血病 ,髓样 ,慢性 ; K562细胞 ; SELEX;适体 【中图号 】R34 【文献标识码 】A
0 引言
指数富集的配基系统进化 ( systematic evolution ligands by exponential enrichm ent, SELEX) 技术经过 多轮筛选可获得高亲和力 、强特异性的寡核苷酸片 段. 近几年来 SELEX技术在实验诊断和疾病治疗 [ 1 ] 等方面的应用取得了较大进展 ,目前 SELEX技术已 经成功运用于许多靶物质的筛选 ,如蛋白质 、核酸 、金 属离子等 ,成功运用于如炭疽芽孢杆菌等许多疾病的 实验室检测 ,一些适体药物已经进入临床前期或临床 期试验 ,并逐步成为一类新型药物 [ 2 ] . 由于有关以白 血病细胞为靶分子筛选适体的研究还少见报道 ,目前 临床尚缺乏慢性髓细胞性白血病 ( chronic myelognous leukem ia, CML ) 的 特 异 性 基 因 诊 断 技 术. 我 们 以
红白血病细胞系K562诱导外周血NK细胞凋亡机制的初步研究
红白血病细胞系K562诱导外周血NK 细胞凋亡机制的初步研究红白血病细胞系K562诱导外周血NK细胞凋亡机制的初步研究摘要：本研究旨在探索红白血病细胞系K562在外周血NK细胞中引起凋亡的机制以及调节性T细胞（Treg）数量的变化。
使用流式细胞术检测Treg和NK细胞的表型，并通过Annexin V/PI染色和细胞周期分析评价NK细胞凋亡。
对与凋亡相关的信号通路进行了进一步探讨。
同时，评价了癌细胞-免疫细胞交互作用的影响因素。
结果发现，K562导致外周血NK细胞凋亡，并与NF-κB信号通路相关。
此外，K562也可增加Treg的数量且减少T细胞激活标志物CD69的表达程度。
通过康复试验发现，NF-κB信号通路抑制剂Bay 11-7082可以降低K562诱导的NK细胞凋亡率，增加CD69表达和降低Treg数量。
这些结果揭示了红白血病细胞系K-562可以引起外周血NK细胞凋亡，并增加Treg数量的机制，为后续NK细胞免疫治疗策略的研究提供了基础数据。
关键词：红白血病，K562，NK细胞，T细胞，Treg，NF-κB，凋亡，免疫治疗引言：红白血病是一种常见的血液系统肿瘤，治疗难度大且效果不甚理想。
近年来，人们致力于寻找新的治疗策略，其中包括免疫治疗。
NK细胞作为具有天然杀伤活性的一类免疫细胞，可以通过杀伤癌细胞增强机体免疫力，因此，将NK细胞应用于治疗红白血病备受关注。
然而，前期研究发现，K562细胞系可以通过唤醒Treg增加NK细胞的凋亡率加重红白血病的症状。
因此，研究K562对NK细胞凋亡和Treg数量的调节机制，可以为NK细胞免疫治疗研究提供重要理论数据。
材料与方法：实验对象：红白血病患者外周血（11例），健康人外周血（8例）实验组：患者外周血中分离出NK细胞，细胞由K562处理24h，治疗前7h添加Bay 11-7082。
另外，还设置了Treg/Foxp3染色组、螺旋体多糖予以刺激组，制备了癌-T细胞共培养试验体系。
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目录中文摘要 (1)英文摘要 (3)前言 (6)第一部分WWOX基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定 (8)材料与方法 (8)实验结果 (16)讨论 (21)结论 (22)第二部分慢病毒介导的WWOX过表达对Jurkat及K562白血病细胞生物学特性的影响 (23)材料与方法 (23)实验结果 (29)讨论 (43)结论 (46)第三部分WWOX基因过表达诱导Jurkat及K562细胞凋亡的分子机制研究 (47)材料与方法 (47)实验结果 (53)讨论 (60)结论 (63)参考文献 (64)综述 (69)致谢 (78)慢病毒介导WWOX基因过表达对Jurkat及K562白血病细胞生物学特性影响的实验研究摘要目的：1. 构建WWOX基因过表达慢病毒重组质粒载体并完成相关鉴定；2. 研究上调WWOX基因对人Jurkat及K562白血病细胞生物学特性的影响；3. 初步探讨其生物学特性改变的相关分子机制。
方法：1. 通过PCR扩增获得目的基因WWOX 全长cDNA 片段，纯化后经Age I 酶切消化。
同时用Age I酶对载体质粒进行酶切、回收得到线性化载体片段。
经T4噬菌体DNA连接酶作用将WWOX连接至线性化载体，连接产物经转化、涂板、挑取克隆、扩增培养后，用质粒小量抽提试剂盒提取质粒，酶切后PCR凝胶电泳鉴定连接产物，并行序列测定。
将构建好的融合基因表达载体进行病毒颗粒包装，得到WWOX过表达慢病毒重组质粒载体系统（pGC-FU-WWOX-GFP和pGC-FU-GFP）。
采用qPCR、Western blot等方法对重组载体进行鉴定。
2. 采用CCK-8比色、集落形成实验、DAPI染色、DNA片段电泳、Annexin V PE/7-AAD双荧光标记、Western blot等方法，研究上调WWOX 对Jurkat和K562细胞生物学特性的影响。
3. 间接免疫荧光检测凋亡相关蛋白p53、p73、NF-κBp65及细胞色素C（Cytochrome C，Cyto C）等的表达及定位。
qPCR、Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyto C、Caspase-9、Caspase-3、p53、p73及NF-κB p65等凋亡相关蛋白的表达变化。
免疫共沉淀、Western blot检测WWOX 与p73、p53之间的相互作用。
结果：1. 测序鉴定结果与目标序列完全一致，包装后的慢病毒经qPCR测定滴度约为2×108TU/ml。
2. WWOX重组慢病毒质粒感染Jurkat及K562细胞48h 后，观察到GFP稳定表达。
qPCR显示pGC-FU-WWOX组细胞WWOX 在mRNA 水平表达增加。
Western blot 检测到约72kD的融合蛋白（WWOX融合GFP）表达，随时间延长，融合蛋白表达呈增加趋势。
CCK-8比色实验显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组的细胞生长较两对照组明显受抑制（P＜0.05）。
集落形成实验表明，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞集落形成率较两对照组显著降低（P=0.000）。
DAPI染色显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞核呈现Ⅱb晚期凋亡形态。
DNA片段电泳显示，Jurkat 和K562细胞中pGC-FU-WWOX组出现明显的梯状降解条带，并随时间延长梯状条带生成更加明显。
Annexin V PE/7-AAD双荧光染FCM检测显示，Jurkat和K562 pGC-FU-WWOX组细胞48h、72h、96h的凋亡率明显高于其他两对照组（P ＜0.001），主要为凋亡中、晚期细胞。
3. 间接免疫荧光染色可见，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞Cyto C在胞质中呈弥散或粗块状分布，而p53、p73及NF-κB p65均定位于胞质，较对照组表达差异不明显。
qPCR及Western blot 显示，Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组较其他两对照组Bcl-2表达呈下降趋势，Cyto C表达增加，同时两细胞均有Caspase-9和Caspase-3的剪接激活，而p53表达变化不明显。
K562 细胞中Bax表达呈上升趋势。
免疫共沉淀后SDS-PAGE电泳染色显示，Jurkat和K562细胞pGC-FU-WWOX组均于约73～74kD处出现浓染的蛋白条带，而其他两对照组蛋白条带染色为阴性。
蛋白印迹在两种细胞的pGC-FU-WWOX组均检测到p73及WWOX的表达，而未检测到p53蛋白的表达。
结论：1. 成功构建WWOX基因慢病毒重组载体。
2. WWOX过表达可明显抑制Jurkat和K562细胞增殖，诱导细胞凋亡。
3. WWOX过表达均可使Jurkat 和K562白血病细胞中Bcl-2表达下调，Cyto C表达增多，同时均可激活Caspase-9和Caspase-3的表达剪接，推测通过激活内源性线粒体途径可能是WWOX抑癌机制之一。
4. Jurkat和K562白血病细胞中，上调的WWOX可直接与p73结合，参与诱导细胞凋亡的过程。
关键词：WWOX基因，慢病毒载体，过表达，白血病，增殖，凋亡，分子机制Effects of lentivirus mediated-WWOX gene overexpression on biological properties of Jurkat and K562 human hematopoieticmalignant cellsAbstractObjective: 1.To construct a lentivirus mediated-WWOX overexpression system and verify its validity and infectious efficiency; 2.To investigate the effects of lentivirus mediated-WWOX gene overexpression on biological properties of Jurkat and K562 leukemia cells; 3.To explore the molecular mechanisms underlying the biological properties changes.Methods: 1.PCR technique was performed to obtain our target gene WWOX clones, the cDNA strands obtained in this process were digested by Age I enzyme. At the same time, pGC-FU vector was treated as in the same manner by Age I enzyme to make it linear enough. The linear WWOX cDNA strands and the linear vectors were bound together with the help of T4DNA ligase and followed by transformation, coated onto agar plate, picked clones and amplification, respectively. The combined plasmids were extracted and sent to sequencing. After sequencing, the lentivirus vectors combined full length WWOX cDNA strands were propagated and harvested after centrifugation, then pGC-FU-WWOX-GFP and pGC-FU-GFP overexpression system was completed. qPCR and Western blot were employed in the following evaluation tests. 2.The effects of WWOX gene overexpression on biological properties of Jurkat and K562 cell lines were estimated by cell counting kit 8(CCK-8), Clone forming assay, DAPI stain, DNA ladder electrophoresis Annexin V PE/7-AAD fluorescence test and Western blot, respectively. 3. Indirect immunofluorescence was employed to observe the expression and location of apoptosis related proteins such as p53, p73, NF-κB p65 and cytochrome C in Jurkat and K562 cells.The expression levels of apoptosis related proteins including Bcl-2, Bax, cytochrome C, Caspase-9, Caspase-3, p53 and p73 were identified by qPCR and Western blot after transfection. Immunoprecipitation and Western blot were used to analyze the mutual effectsbetween WWOX and p73, p53.Results: 1. The sequencing of the reconstruct plasmids were completely correct, and the virus titer measured via qPCR was 2×108TU/ml. 2. Stable green fluorescence was observed after infected for 48 hours in both two kinds of cell lines. The WWOX expression level of the overexpresion groups increased distinctly showed by qPCR and a 72kD fusion protein was also detected by Western blot technique. CCK-8 test showed the cell growth in pGC-FU-WWOX group of both Jurkat and K562 cells were inhibited remarkably than that of two control groups(P＜0.05). Clone forming assay revealed the cloning formation ability of pGC-FU-WWOX group cells of both Jurkat and K562 cells were significantly decreased. There were obvious ultrastructure changes of pGC-FU-WWOX group cells in Jurkat and K562 cells with the morpha of chromatin condensation, shrink in phraseⅡb exhibited by DAPI stain. DNA degradative fragments in pGC-FU-WWOX group of Jurkat and K562 cells were detected by DNA ladder electrophoresis, which also showed apoptosis degree of pGC-FU-WWOX group increased with time prolonged. Annexin V PE/7-AAD fluorescence test via FCM showed cells in pGC-FU-WWOX groups of Jurkat and K562 had a significant high apoptosis rate than that of two control groups (P＜0.001), which most of the cells were in late apoptosis stage. 3. Indirect immunofluorescence unfolded that cytochrome C of pGC-FU-WWOX group located in cytoplasm with a dispersive or block like distribution both in Jurkat and K562 cells, while p73, p53 and NF-κB p65 located in cytoplasm equably with no difference. qPCR and Western blot revealed that compared with the other two control groups the expression of Bcl-2 protein in pGC-FU-WWOX group of Jurkat and K562 cells decreased in a time-dependent manner and cytochrome C increased as well as the activation of Caspase-9and Caspase-3 compared with two control groups, while p53 changed unconspicuously. Bax protein of pGC-FU-WWOX group ascended only observed in K562 cells. SDS-PAGE of pGC-FU-WWOX groups in Jurkat and K562 cells exhibits a high concentration protein mixture on 73～74kD of the marker after immunoprecipitation, while the control groups were negative.At the same time, WWOX and p73 proteins were positive in the immunoprecipitation mixture of thetarget gene groups with the help of Western blot, while p53 protein was undetected.Conclusions: 1. Lentivirus mediated-WWOX overexpression system was constructed successfully. 2. Overexpression of WWOX gene exibits an antitumor effect by inhibiting the proliferation of Jurkat and 562 cells and induc ing their apoptosis. 3. Overexpression of WWOX gene in Jurkat and 562 cells could down-regulate the expression of Bcl-2 and increase cytochrome C as well as activate both Caspase-9 and Caspase-3. By activating the endogenous mitochondria pathways is one of the possible mechanisms in its tumor suppression activities of WWOX in Jurkat and K562 cells. 4. WWOX could combine with p73 directly in its apoptosis inducing activities in Jurkat and K562 leukemic cells.Keywords: WWOX gene; Lentivirus vector; Overexpression; Leukemia; Proliferation; Apoptosis; Molecular mechanism前言白血病是一类异质性的造血干细胞恶性克隆性疾病，通常会出现染色体或基因异常。