根癌农杆菌介导的香蕉高效遗传转化系统的建立

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根癌农杆菌介导红颊草莓遗传转化体系的建立

ｃｎｅｔｔｎｗｓ０Ｄ６＝０４，ｔｅｉｅｔｎｔｓｎ２０ｍｇｂｗａｓｄａｅａｔａｔｒａａｔｉｔｓ５ｍｇＬｈｇｏ — ｏｃｎｒｉａ０ａｏ０．ｈｎｃｉｍｅｗａｍｉ，５／ＬＣｓｕｅｓｔｎｉｃｅｉｌｉｏｉ，／ｙｒｍｙｆｏｉ６ｈｂｂｃｎ
ｔａｉｎｏｎｉｉｔｃｒｔｏｆａｔｂｏｉｓ，ａｒｂａｔｒａｏｃｎｒｉｎ，ｉｆｃｉｎｔｍｅａｄＣｇｏｃｅｉｌｃｎｅｔａｔｏｎｅｔｏｉｎＯ— ｃｌｕｅｔｍｅＴｈｅｕｔｈｗｅｈａｅｈｇｏｃｅｉｌｕｔｒｉ．ｅｒｓｌｓｓｏｄｔｔｗｈｎｔｅａｂａｔｒａｒ
达到２％。５
关键词：遗传转化；莓；颊草红中图分类号：３６文献标识码：：编号：０１８８（０２０ — ０ｌ０￥３Ａ丈章１０ — ５１２１）３０１一４
ＥｓａｉｈｍｅｔｏｒｂｃｅｉｎｔｂｌｓｎｆＡｇｏａｔｒｕｌ—ｍｅａｅａｓｒｔ０ｄｉｔｄＴｒｎｆｍａｉｎｏ
江西农业学报
２１，４３：１４ＡｇｉｕｕａｉｎｘｔｒｈｒｅＪａｇｉｃ
根癌农杆菌介导红颊草莓遗传转化体系的建立
古成彬王翡，，高志红
摘
，乔玉山，镇林之林糜林李金凤章，，，
Ｋｅｒｓｙｗｏｄ：Ｇｅｅｉｒｎｆｒｔｎ；Ｓｒｗｅｒｎｔｔｓｏｍａｉｃａｏｔａｂｒｙ；Ｂｎｈｐｅｉｏｅ

根癌农杆菌介导CMO基因在96-Ⅱ喜树中的遗传转化

究以根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导抗旱ＣＭＯ基因进行初步研究，旨在建立稳定、有效的９６一Ⅱ喜树遗传转化系统，为将目的基因导入喜树奠定基础。
１材料与方法
１．１材料
将无菌苗顶端完全伸展的叶片剪成直径０．５ｃｍ的叶盘，接种在愈伤组织诱导培养基上，每个处理３Ｏ个外植体，预培养０— ７ｄ。用Ｄ为０．２～１．０的菌液侵染预培养后的外
植体，以未被侵染的外植体作对照。侵染期间不断摇动，使农
脂、ｐＨ值为５．８，培养温度为（２５４－２）℃ ，光源为日光灯，光
照时间为１６ｈ／ｄ。根癌农杆菌菌株ＬＢＡ４４４、０质粒ｐＢＩ１２１（含有单拷贝ＣＭＯ基因，用于转化）来源于大连理工大学生物工程研究所。
该植物表达载体含有ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动的辽宁碱蓬胆碱
单加氧酶ＣＭＯ基因以及１个嵌合ＮｏｓＮＰＴＩ１基因（图１）。用液氮冻融法将ｐＢＩ１２１一ＣＭＯ导入菌株ＬＢＡ４４０４。工具酶购自ＴａＫａＲａ公司，ＤＩＧ标记试剂盒购自Ｒｏｃｈｅ公司，用于分子检测的ＣＭＯ基因引物由生工生物工程（上海）有限公司合成。其他常规试剂均为国产分析纯。
江苏农业科学２０１３年第４１卷第４期

香蕉农杆菌介导高效转化体系

中图分类号：６８．；３６文献标识码：Ｓ６１Ｓ３Ａ
Ｏｔｚｔｎｏｅｏｄｔｎｒａａａ（ｓｐ．ｇｎｔｐｉａｉｆｈｎｉｓｏｎｎＭｕａｓｐ）ｅｅｃｍｉｏｔｃｏｆｂｉ
ｔａｓｏｍａｉｎｍｅｉｔｙＡｒｂｃｅｉｍｕｆｃｅｓｒｎｆｒｔｄａｅｂｇｏａｔｕｔｍｅａｉｎｏｄｒ
ｓｏｔ￣ｅｅｔｎａｄｈｇｅｔｎｉｔＳｅ煳ｗｅＴＣ雎ｕｅＴｅｐｅｅｔ｛ｇｏａｔｍｑｉ，Ｈｏ目ｈｏｎｒｉｎｉｈｒｒｓｎＧＵｒａｏａｅ印ｈｎｔＬｓｄｈｒｒ￣ｒ０Ａｒｂｃｅｔｍｅｔｔ￣ｕｌｕｐｆｅ坩一ｉｄｒ
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Ｋ：ｗｒｓｍａａＡｒｂｃＨｍｕｆｃｅｓＧｎｔｒｓｒｔｎｔｂｅｔｉｃｌｌｒｔＣ．ｏｄ：ｎ：ｇｏａｔｎｔｍｅａｉ；ｅｅｉｔａｆｍａｉ；ｍｗｓｈｎｅｌ．（ＴＬ）ｅｎｃｎｏｏｒ￣ａ
香蕉农杆菌介导高效转化体系
陈廷速，～张军，定夏宁部，曾，陈丽娟０陈如凯李杨瑞０，，
５００；福建农业大学，３０７３福
｛厦门大学肿瘤细胞工程教育部重点实验室，１福建厦门３１０；．６０５２广西农业科学院，广西南宁
建福州３００）５０２
香蕉的转基因植株获得始于１９年＿２．９５告基因转入并获得植株。李华平等人以香蕉茎尖为材料，用基因枪（先金粉包含有外源基因的ＤＮＡ质粒）击并培养３轰ｄ之后，再用农杆菌进行转化，得了转基因植株ｌ。国内近年来获３Ｊ

根癌农杆菌介导的苜蓿遗传转化体系的建立

（东北师范大学草地科学研究所，长春１０２）３０４
摘要：苜蓿基因型是限制遗传转化的关键因素之一。从１３份苜蓿材料中筛选出一份具有高频再生潜力
的基因型一公农１号，以该品种为受体转化Ｎ＋＋向转运蛋白基因，化了遗传转化条件，并ａ／逆Ｈ优建立了农杆菌介导的苜蓿遗传转化系统，得了大量的转基因植株，子检测证实目的基因已经整合到苜蓿基因组中。获分关键词：苜蓿；因型；基遗传转化
中图分类号：５１￥４文献标识码：Ａ
ＥｓａｉｈｎｆＧｅｅｉａｓｏｒａｉｎＳｙｔｔｂｌｉｉｇＡｇｒｂｃｅｒｍ — ｓｃＵｓｎｏａｔｉｕ
ｍｅｉｔｄｉＡｌｌＭｅｉａｏｓｔａｄａｅｆｆｎａａ（ｄｃｇａｉ）ｖ
ａｆｌａｗｎｉｈｉｈｒｕｅｙ —ｅｎｒｔｏｐｏｅｉｌｌａｆｏｎｇｇｆｅｑｎｃ —ｒｇｅｅａｉｎｔｎｔａｗａｓｒｅｄｒｍ１ｃｓｃｅｎｅｆｏ３ｕｈｉａｓｆｌａｆ．Ｗｅｖｒｏａｆｌａｏｔｍｉｅｈｅｔｃｔａｆｒｔｏｎｆｃｏｒ，ａｕｃｅｄｅｎｅｔｂｌｓｉｇｇｎｅｉｒｎｆｒｔｏｙｓｅｐｉｚｄｔｅｇｎｅｉｒｎｓｏｍａｉａｔｓｎｄｓｃｅｄｉｓａｉｈｎｅｔｃｔａｓｏｍａｉｎｓｔｍｕｓｎｇＡｇｏａｃｅｉｉｒｂｔｒｕｍ—ｍｅａｅｎｔｓｃｄｉｔｄｉｈｉｕｈｉａ．Ａｍｏｔｏｒｎｓｅｃｐａｎｓｗｅｅｏｔｉｄ，ａｌｃａｖｒｕｎｆｔａｇｎｉｌｔｒｂａｎｅｎｄｍｏｅｕｌｒａｓｙｒｓｔｎｃｔｄｔｔｇｅｆｉｅｅｓｓｉｅｒｔｄｉｏｇｎｏｆａｆｌａ．ｓａｅｕｌｓｉｄｉａｅｈａｎｅｏｎｔｒｔｗａｎｔｇａｅｎｔｅｍｅｏｌａｆ

根癌农杆菌介导ACS反义基因转化香蕉的研究

热带作物学报２０１４，３５（１）：０１７ — ０２３
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＣｒｏｐｓ
根癌农杆菌介导ＡＣＳ反义基因转化香蕉的研究
黄玉吉，赖钟雄，林玉玲，陈裕坤
片进行筛选．共获得５个转ＡＣＳ反义基因的抗性芽系：经ＧＵＳ组织化学法及ＰＣＲ检测，ｇｕｓ基因已整合进香蕉
薄片；根癌农杆菌；ｃ５反义基因；转化
￥６６８．１文献标识码Ａ
福建农林大学园艺植物生物工程研究所．福建福９。１，１３５０００２
摘要以香蕉（Ｍｕｓａｓｐｐ．）品种 ‘ 天宝蕉 ’（Ｍｕｓａｓｐｐ．，ＡＡＡ类群）为试材，对以根癌农杆菌介导法的香蕉遗传
转化体系进行较全面的研究。并以该系统进行了ＡＣＳ反义基因转化香蕉的研究。结果表明：不经预培养的香蕉
茎尖横切薄片，侵染前用附加０．１ｍｇ／Ｌ甘露醇的高渗固体培养基前处理４ｈ，农杆菌重悬液浓度为ＤＤ在１．０左右，重悬液中含１００ｇ／Ｌ蔗糖，接菌时间为１Ｏ～１５ｍｉｎ。于２６℃黑暗条件下共培养４ｄ，共培养培养基ｐＨ值为５．８是较为适合的转化条件：采用附加１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素、２ｍｇ／ＬＡｇＮＯ筛选培养基对共培养后的香蕉横切薄

根癌农杆菌介导法原理

根癌农杆菌介导法原理引言根癌农杆菌介导法是一种常用的基因转化技术，广泛应用于植物遗传工程领域。

它利用植物根癌农杆菌接触感染时产生的植物激素和DNA导入技术，将外源基因导入植物细胞，实现对植物基因组的改造。

本文将全面、详细、完整地探讨根癌农杆菌介导法的原理、应用以及优缺点。

根癌农杆菌的特点1. 根癌农杆菌简介根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) 是一种通过植物接触感染的土壤细菌，在植物遗传工程研究中具有重要的应用价值。

它能够将其自身的T-DNA（转座子DNA）片段导入植物细胞，并在植物细胞中稳定表达。

2. 根癌农杆菌的感染机制根癌农杆菌感染植物的过程包括以下几个步骤：1.识别和结合：根癌农杆菌通过识别植物伤口释放的酚类化合物，结合到植物细胞表面。

2.感染透入：根癌农杆菌产生的信号分子诱导植物细胞产生细胞壁降解酶，使其自身进入植物细胞。

3.T-DNA转移：根癌农杆菌通过特殊的转移螺旋（vir蛋白）将T-DNA从细菌自身转移到植物细胞中。

4.T-DNA整合：转移的T-DNA片段在植物细胞染色体上整合，并导致植物细胞的遗传改变。

根癌农杆菌介导法原理根癌农杆菌介导法利用根癌农杆菌的感染机制，将外源基因导入植物细胞，从而实现对植物基因组的改造。

1. 构建适合的转化载体在根癌农杆菌介导法中，首先需要构建适合的转化载体。

转化载体通常包括以下几个重要组成部分：•T-DNA：携带待转化的外源基因片段。

•选择标记基因：用于筛选转化成功的植物细胞。

•根癌农杆菌起始核酸序列（ori）：用于在根癌农杆菌中复制转化载体。

2. 根癌农杆菌感染植物将构建好的转化载体导入根癌农杆菌中，然后让根癌农杆菌感染植物组织。

通常可以通过以下步骤实现：•制备根癌农杆菌感染液：将构建好的转化载体导入根癌农杆菌中，培养至菌体达到一定浓度。

•植物组织处理：将待转化的植物组织浸泡在根癌农杆菌感染液中，利用真空处理或共振法促使菌体进入植物细胞。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展植物真菌是一类重要的微生物，在自然界中具有重要的地位，它们可以在植物体内或外引起多种作物的病害。

为了有效防治和控制植物真菌的病害，基因转化技术已经成为一种重要的手段。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术具有高效、简单、灵活等特点，在植物真菌遗传改良研究中得到了广泛应用。

本文将对根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展进行综述。

根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术是利用根癌农杆菌T-DNA插入真菌染色体中，实现外源基因的导入。

根癌农杆菌T-DNA在感染植物组织过程中，T-DNA的两侧的重复序列对应产生质粒的头部和尾部，T-DNA插入到植物基因组中去除了生发区和生殖区基因的调节因子，导致细胞无法分化造成根癌，自然或人工去除这些基因后，再将目的基因嵌合到T-DNA后导入目标植物组织并在细胞层或组织层产生效应。

1. 研究目的明确根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术的研究目的是为了利用该技术将外源基因导入真菌细胞中，从而使真菌获得新的性状或功能。

目前，根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术已被成功应用于多种真菌，如白僵菌、酿酒酵母、木霉等。

这些研究表明，根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术在真菌改良中具有广阔的应用前景。

2. 技术改进在根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术的研究过程中，研究人员还对该技术进行了不断改进，以提高其转化效率和稳定性。

通过对根癌农杆菌T-DNA的结构和功能进行深入研究，研究人员已成功构建了一些具有高效转化能力的根癌农杆菌株系，并利用这些株系进行了真菌遗传转化研究。

研究人员还对真菌遗传转化的各个环节进行了逐一优化，从而取得了一系列令人满意的研究成果。

3. 应用领域拓展三、面临的挑战与未来展望尽管根癌农杆菌介导的真菌遗传转化技术在植物真菌遗传改良研究中取得了一系列的进展，但在实际应用中仍然面临着一些挑战。

由于真菌的遗传特性复杂，其遗传转化技术相对于细菌和植物来说较为困难，因此对真菌的遗传机制和代谢途径的研究仍需要进一步加强。

农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号生理小种转化体系的优化

农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号生理小种转化体系的优化高剑;肖苏生;王文华;曾涛;曾会才【期刊名称】《基因组学与应用生物学》【年(卷),期】2009()6【摘要】香蕉枯萎病是世界范围内香蕉种植区最为严重的病害之一,严重威胁和影响着香蕉产业的发展。

本文针对香蕉枯萎病病原菌的4号生理小种,建立了农杆菌介导的转化体系,确定了影响转化效率主要因子的优化体系是:农杆菌在IM培养基诱导前农杆菌OD600为0.15、农杆菌经IM液体培养基诱导的时间为7h、乙酰丁香酮(AS)浓度为150μmol/L、Focr4孢子浓度为1×106个/mL、共培养时间为48h、培养温度为25℃、诱导培养基pH值为5.5。

在此条件下,转化效率能达到700～800个转化子/106个香蕉枯萎病菌孢子。

PCR验证表明外源的T-DNA已经成功随机地整合到该病原菌基因组中。

目前,应用该转化体系已获得2300多个转化子,为后续克隆相关致病基因打下了良好基础。

【总页数】7页(P1197-1203)【关键词】香蕉枯萎病;4号生理小种;T-DNA插入;优化体系【作者】高剑;肖苏生;王文华;曾涛;曾会才【作者单位】中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室【正文语种】中文【中图分类】S436.68;Q93【相关文献】1.根癌农杆菌介导的香蕉枯萎病1号生理小种遗传转化体系的优化 [J], 戴青冬;毛超;郭立佳;杜和禾;汪军;潘江禹;黄俊生2.香蕉枯萎病菌4号生理小种农杆菌介导遗传转化体系的建立及T-DNA插入突变体的筛选 [J], 毛超;戴青冬;汪军;刘一贤;杨腊英;郭立佳;黄俊生3.香蕉枯萎病菌4号生理小种农杆菌介导遗传转化体系的建立及T—DNA插入突变体的筛选 [J], 毛超;戴青冬;汪军;刘一贤;杨腊英;郭立佳;黄俊生;4.香蕉枯萎病菌1号生理小种遗传转化体系的建立 [J], 林妃;曾涛;曾会才5.农杆菌介导的棉花枯萎病菌转化体系的优化 [J], 刘叶;阿依保他·托合达白;郭楠楠;柳自清;张博然;朱琦;顾爱星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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ＨｉｔｃｅｃｌｓｏｈｍｉａＧＵＳａｓｙｄｍｏｓｒｔｄｔａｌｏｔｌｔｅＥｒａｓｏｍｅｅｌａｔｒ３ｇｎｒｔｎｕｃｌｓａｅｎｔｅｔｍｓａｌｈＣＳｗｅｅｔｎｆｒｄｃｌｆｅｅａｉｓｓｂｕ — ａｈａｒｓｅｏｔｒｅｉａｃｃｅｎｎ．ｅｓｃｅｓｕｌｂａｎｄｔｅｍａｕａｉｎｒｓｓａｃｏｔｍｂｙｓｂｍｂｏａ — ｕｅｒｓｓｎｅｓｒｅｉｇＷｕｃｓｆｌｏｔｉｅｈｔｒｔｅｉｔｎｅｓｍａｉｅｒｏｙｅｒｎｌｎｔｙｏｃｙｉ
ｗｅｅＣ — ｕｔｖｔｄｆｒ７ｄａｓａｄｔｎｃｌｉａｅｎＭ２ｓｌｃｉｅｌｉｄｕａｄｓｂｕｌｕｅｖｒ１ａｓｒＯｃｌｉａｅｏｙｎｈｅｕｔｖｔｄｉｅｅｔｖｉｄｍｅｉｍｎｕｃｔｒｄｅｅｙｄｙ．ｑｕ０
分子植物育种，００年，８，１，１２１８页２１第卷第期第７—７
ＭｏｅｕａｌｎＢｅｄｎ，０１，１，．，７ —１８ｌｃｌｒａｔｒｅｉｇ２０Ｖｏ．Ｎｏ１１２７Ｐ８
技术改进
ＵｐｇａｅｃｎｏｏｙｒｄｄＴｅｈｌｇ
ｓｌｃｉｎｃｎｅｔａｉｎｏｙｒｍｙｉｎＭ２ｌｕｄｍｅｉｍｕｔａｉｎｏＣＳｗａｍ．ｈｎｅｔｄＥｅｅｔｏｃｎｒｔｆｈｇｏｃｎｏｉｉｄｕｃｌｖｔｆＥｓ５ｍｇｏｏｑｉｏＴｅｉｆｃ和筛选方法两方面进行了优化。研究结果表明，蕉悬浮系在Ｍ２液体培养下从贡潮霉素的适合筛选浓度为５ｍｇ／Ｌ。将液体共培养７的贡蕉胚性悬浮系转接到Ｍ２液体筛选培养基进行ｄ后
培养，１每０ｄ继代一次。ＵＳ组织染色表明，Ｇ经过３代抗性筛选的ＥＳ几乎全为转化细胞。过３个月的胚Ｃ经
关键词香蕉，根癌农杆菌介导转化法，液体共培养
ＥｔｌｈｎｆａＨｇｆｃｎｏｒｍｔｍｆｃ — ｄａｄｓｂｉｍｅｔｏｉＥｉｔＡｒｂｃｅｉｕｅａｎＭｅｉｅａｓｈｉｅｇａｔｕｉｓｅｔ
ＴｒｎｆｒａｉｎＳｓｅｆｒＢａａａａｓｏｍｔｏｙｔｍｏｎｎ
ＨｈｎｕＷｅＹｅｏｇｉａｊｎＨａｇｉｇｈＨｕｎｏｇｏｇｕＣｕｈａｉｕｒｎＹｎｕｕｎｎｚｉＧＢａｇｎｈｎＹ
Ｆｕｔｓａｃｎｔｔｔ，ａｇｏｇＡｃｄｍｙｏＡｇ／ｕｔｒｌｃｅｃ，ａｇｈｕ５１６０ｒｉＲｅｅｒｈＩｓｉｅＧｕｎｄｎｕａｅｆｒｃｌａＳｉｎｅＧｕｎｚｏ，０４ｕ
Ｃｒｅｐｎｉｇａｔｏ，ｉｎｕ＠ｖｐ１３ＯＩｏｒｓｏｄｕｈｒｙｇｊｎｉ．．Ｉｎａ６ＣＴ
ＤＯＩ０３６／ｂ．０．０７：１．９９ｍｐ０８００１２
ＡｂｔａｔＩｉｒｓａｃ，ｅｍｐｏｅｌ—ｏｅ－ｅｉｅｒｏｅｉｃｌｓｓｅｓｎＥｓｏＭｕａｃｍ－ｓｒｃｎｔｓｅｅｒｈｗｌｙｄｈｅｍａｆｗｒｒｄｅｙｇｎｃｅｐｎｉｓＥ）ｆｓｕｉｅｌｄｖｍｂｌｕｏｆａｎｔｒＰｓｎｓＡａａｓｒｔｎｒｃｐｏ，ｎｔｚｄｔｅｅｅｉｔｎｆｒｔｎｓｓｍｆａａａａａａ．ｉｇＭａ（Ａ）ｓｒｎｆｍａｏｅｔｒａｄｏｉｅｎｔａｓｍａｉｔｏｎｎｖａｔｏｉｅｐｍｉｈｇｃｒｏｏｙｅｂ
ｇｏａｔｉｍｔｍｆｉｎ．ｄａｄｇｎｔａｓｒａｏｓｍｒａａａＴｅｅｕｔｓｏｄｔａｅｕｔｌｒｂｃｅＭｅｃｅｓｍｅｉｅｅｅｉｔｎｆｍｔｎｓｔｆｎｎ．ｈｓｌｗｅｔｈｉｂｅｒｕａｔｃｒｏｉｙｅｏｂｒｓｈｈｔｓａ
诱导培养获得成熟抗性体细胞胚，平均抗性体细胞胚得率为４８个／Ｃ同时，０ｍＬＰＶ。５转化苗的ＰＲ检测结果Ｃ
表明，ｕ因已整合到贡蕉基因组中。本研究表明液体筛选系统有利于转化胚性悬浮细胞的增殖，ｇｓ基大大地提高了香蕉转基因的转化效率。
ｆｏａｐｃｓｏｙｒｍｙｉｅｅｔｎｃｎｅｔｔｎａｄｓｌｃｉｎｍｅｈｄｉｒｅｓｂｉｈａｈｇｆｃｅｔ — ｒｍｓｅｔｆｇｏｃｎｓｌｃｉｏｃｎｒｉｎｅｅｔｔｏｏｄｒｔｅｔｌｉｈｅｉｎｈｏａｏｏｎｏａｓｉＡ—
根癌农杆菌介导的香蕉高效遗传转化系统的建立
胡春华魏岳荣易干军黄秉智黄永红
广东省农业科学院果树研究所，州，１６０广５０４通讯作者，ｉａｊｎｉ．６．ｒｙｇｎｕ＠ｖｐ１３ｏｃｎ
摘要为建立根癌农杆菌介导的香蕉高效遗传转化系统，本研究以雄性花诱导产生的贡蕉胚性悬浮系为