组织病理学制片技术共65页
组织病理技术(完整版)
一.标本的采集和处理 在组织病理学研究中，制做高质量的组 织切片是关键性的一步，切片质量的好 坏直接影响着病理诊断结果的准确性和 可靠性，而一张好的切片与标本的采集 和处理过程有着密切的关系。
二、标本的固定
将组织浸入某些化学试剂中，使组织、细胞尽 量保持其生活状态时的形态结构和位置，称为 固定。
三、取材 在具体实验过程中，我们不可能将所有 的病理组织都做成切片进行观察，所以， 为达到正确观察或诊断的目的，必须采 集适量的病例组织，这不仅要求标本材 料要尽可能新鲜，而且要有一定的数量 和质量，根据需要确定取材的部位和块 数。
切取组织时，应用锋利的刀、剪，刀刃 宜薄，足够长。一般标本切取的组织块 厚以0.2~0.3cm为宜，对于冰冻切片，取 材组织块略厚度可达0.3~0.4cm，也可根 据情况略作调整。若过厚则固定不好， 组织结构不佳，过薄则切片张数有限， 有漏掉病变部位的可能性。一般来讲， 常规组织病理染色，组织块大小以 1.5cm×1.5cm×0.2～0.3cm为宜
笨和二甲苯都可使组织透明，常用二甲 苯。
透明步骤：低
高梯度透明。
3、浸蜡
经过透明的组织块，进一步移入熔化的 石蜡内浸渍，其目的是以石蜡置换组织 块中的二甲苯，使较软的组织块变成有 一定硬度的组织蜡 中等硬度石蜡
熔化的硬蜡。
4、包埋
组织包埋的方法有多种，如石蜡包埋法、火棉 胶包埋法等；常用的为石蜡包埋法。
理论上，凡需要进行病理检验的各种组织都应 该进行固定。组织离开机体或机体死亡后，若 不固定，细胞在自身酶的作用下会溶解破坏， 结构消失，无法进行形态学检查。
正确的病理诊断是建立在对病理标本正确的 肉眼形态观察和显微镜形态观察之上的，切片 的质量直接影响形态学观察的准确性，而一张 好的切片与组织的固定和取材质量密切相关。
病理学中的组织切片技术
病理学中的组织切片技术病理学是医学领域中非常重要的一个学科，研究人体各个器官和组织的疾病变化及其发生、发展机制。
而组织切片技术是病理学中的基础操作，是为了观察和诊断疾病而必要的步骤之一。
本文将详细介绍组织切片技术的相关知识和方法。
一、组织切片技术的概述组织切片技术是指将人体组织切割成薄片并染色，以便于病理学家观察。
这项技术已经存在了很长时间，并且随着技术的发展和改进，已经成为了诊断和治疗疾病的重要手段之一。
组织切片技术可以被广泛应用于疾病的研究、诊断和治疗中。
二、组织切片技术的步骤组织切片技术的主要步骤包括取样、固定、脱水、包埋、切片和染色。
下面将对这些步骤进行详细的介绍：1. 取样组织切片的第一步是取样，即从人体组织中取出一小块，以便于后续的操作。
取样的方法根据不同的情况会有所不同，比如在手术中取样，就需要根据病变的部位和特点来选择取样点，而在活检中取样，就需要根据患者的症状和体征来确定取样点。
2. 固定取样后，需要用一种方法把组织中的细胞和结构固定住，以便于后续处理。
目前常用的固定剂是福尔马林，它可以迅速把组织中的蛋白质交联，使其不易变性，从而保持组织形态的完整。
3. 脱水在固定后，需要将组织逐渐从水中转移到酒精、乙醇等脱水剂中，以便于把组织中的水去除，使其硬化。
这是组织切片的关键步骤之一，如果脱水不彻底，切出的组织切片会变形或破损。
4. 包埋将脱水的组织置于熔蜡中，使其被包覆在蜡中。
这么做可以保持组织的形态，并使其更易于切割。
5. 切片蜡包埋后，组织需要被切成薄片。
切片可以使用手工或自动切片机完成，手工切片需要技巧和经验，而自动切片机可以更好地保证切片的厚度和质量。
6. 染色切片完成后，需要对组织进行染色，以便于病理学家对其进行观察。
目前常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂以及免疫组化染色剂等。
三、组织切片技术的应用组织切片技术在病理学中有广泛的应用，其中包括：1. 诊断和治疗疾病组织切片技术是病理学家进行诊断和治疗疾病的重要手段之一。
病理制片技术规范
病理制片技术规范病理制片技术的规范病理技术是病理学诊断不可分割的一部分，制片质量的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的病理诊断。
因此，保证和提高制片质量是每个病理技术员的责任。
为了保证制片质量，减少差错，防范责任事故，避免医疗纠纷，有必要加强对病理技术进行科学规范管理和制片的控制，为提高临床病理诊断水平，促进临床病理学事业的发展做出我们应有的贡献。
一、高素质技术人员的规范管理1．要有敬业精神，强烈的工作责任心、2．努力学习，刻苦钻研，掌握过硬的基本功，引进和学习新技术，工作精益求精。
3．领导重视，为技术人员提供进修学习和提高的机会。
4．技术员和医生，技术员与技术员互相团结，密切配合，发挥团队精神的作用、二、仪器设备分规范管理1．配备先进，高质量的仪器设备是保证和提高制片质量的重要条件、2．正确使用，定期维修保养，保证仪器设备在最佳的状态下工作、三、标本和资料档案的规范管理1．标本和送检单的接收检查标本和送检单的名字是否相符，有否标本，有没有病史。
标本补充固定液，送检单编号登记。
2．资料档案的规范管理诊断报告发出后，附有诊断报告记录的送检单、玻片和组织蜡块存档并专人保管。
建立严格的资料借出制度，确保档案资料不被丢失。
四、技术操作规范1. 及时固定组织：应采用10%~20%甲醛液（10%甲醛液即用浓甲醛液1份加蒸馏水9份稀释）固定组织，因甲醛易氧化成甲酸，因此多会偏酸性，最理想的是配成中性甲醛液。
巨大组织要切开固定，小块组织的固定时间约4小时左右，然后取材时修切成大小约22 x 22mm，厚不超过2mm的组织块进行脱水。
取材时必须注意核对编号是否与送检单上的病理号一致，并记录好对大体标本的描述，取材组织的形状和数量。
l 常规固定液的配制（1） 10%甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml(2 ) 缓冲中性甲醛液浓甲醛 10mlPBS缓冲液（Ph7.2） 90ml(3 ) 10%中性甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml碳酸钙加至饱和冷冻切片固定液(1) 乙醚酒精液无水乙醚 1份95%酒精 1份(2) 酒精—冰醋酸液95%酒精 100ml冰醋酸 3~5滴细胞学涂片固定液的配制(1) 酒精—冰醋酸液95%酒精 97ml冰醋酸 3ml(2) 乙醚--酒精液95%酒精 50ml乙醚 50ml冰醋酸 1ml(3) Carney`s液无水酒精 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml2. 脱水彻底：脱水液常用乙醇，用乙醇脱水要由低浓度逐级上行至高浓度（一般70%~100%的浓度），逐步置换组织内的水份。
《组织病理技术》课件
采用适当的固定液和保存方法，优化 染色流程，使用防脱片胶，提高制片 质量。
新技术的应用与展望
新技术
数字化病理技术、人工智能辅助诊断、 组织芯片技术。
VS
展望
数字化病理技术将使病理诊断更加便捷和 准确；人工智能辅助诊断能够提高诊断效 率和准确性；组织芯片技术可用于药物筛 选和疾病模型研究。
组织病理技术的伦理与法规问题
组织病理技术的发展历程
19世纪初
随着显微镜的发明和应用 ，人们开始对组织结构和 细胞形态进行研究。
20世纪初
石蜡切片技术的出现，使 得组织病理技术更加标准 化和规范化。
20世纪末至今
随着科技的不断进步和应 用，组织病理技术不断发 展和完善，应用领域也更 加广泛。
02
组织病理技术的基本原理
组织样本的获取与处理
。
恶性程度评估
组织病理技术可以评估肿瘤的恶性 程度，判断肿瘤的侵袭性和转移风 险，为制定治疗方案提供依据。
预后判断
通过组织病理技术对肿瘤的病理特 征进行分析，可以预测患者的预后 情况，帮助医生制定后续治疗方案 。
移植组织鉴定
组织匹配
在器官移植中，组织病理技术用 于检测供体和受体之间的组织匹 配程度，确保移植组织的兼容性
根据处理方法的不同，组织病理 技术可以分为石蜡切片技术和冷 冻切片技术等。
组织病理技术的应用领域
01
02
03
临床病理诊断
通过组织病理技术对病变 组织进行观察和分析，为 临床医生提供准确的病理 诊断。
药物筛选
利用组织病理技术观察药 物对病变组织的影响，为 新药研发提供实验依据。
毒理学研究
通过组织病理技术观察化 学物质对组织结构和细胞 形态的影响，评估其毒性 和安全性。
病理组织制片技术流程
病理组织制片技术流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!病理组织制片技术流程1. 标本采集: 从患者身上获取组织标本，如活检或手术切除标本。
标准病理组织制片和染色技术讲课文档
3. 尸体解剖组织（脏器）取材：略。
第16页，共118页。
三．固定（ fixalion）
固定：新鲜组织浸泡在适宜的化学试 剂内借助于化学试剂的作用，使组织或细 胞内蛋白质凝聚，沉淀，成为溶性并保持 组织细胞原有的形态结构：称为固定。所 使用的化学试剂配成的溶液，称为固定液。
第17页，共118页。
浓甲醛 75ml 冰醋酸 5ml (对组织收缩小，固定均匀、保存细微结构、软化皮肤、 肌健、结缔组织较好 )
第26页，共118页。
3、固定的原理
甲醛为例，甲醛与组织蛋白反应是多样而复杂的。
O
H
P CONH+HCH+P-CONH P -CON---C----P--CON 肽键 甲醛 H 亚甲基桥
蛋白质分子之进行交换，形成亚甲基桥，把蛋白质分子串 联起来，使蛋白变性，破坏了蛋白质的立体结构，达到固 定目的。
第27页，共118页。
四、洗涤
组织在固定后，一定要把渗透到 里面的固定液(沉淀物或结晶)洗去， 然后再进行下一步程序，洗涤必须彻 底，否则留在组织中的固定液有可能 妨碍染色。
第28页，共118页。
洗涤的原则：
1、固定液为乙醇或酒精混合液一般不要 冲洗。
2、固定液为水配制者，用水流水冲洗 3、凡含有铬酸、重铬酸钾的固定液-洗涤 4、含有苦味酸用乙醇配制的固定液-洗涤
2. 方法：
第45页，共118页。
3. (1) 最大平面向下压平 (2) 管状 束壁 皮肤 竖埋
第37页，共118页。
七、浸蜡（Infilftrition）
组织经过媒剂的透明作用后，移 入熔化的石蜡内浸渍称为浸蜡。
第38页，共118页。
１、 石蜡：
切片蜡___软蜡50℃以下，酶，保存抗原活性 (纯度高密度好) 硬蜡50℃以上-62∽64℃ 工业石蜡___质地较差，价格便宜
病理组织切片技术
可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现
象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
二、固定
定义
将组织浸入某些化学试剂。使组织细胞内所含 物质尽量保持在生活状态时形态结构和位置的过 程。
• 苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱 性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等； 伊红是一种酸性染料，可使组织中的嗜酸 性物质染成色，如多数细胞的胞质、核 仁等在H.E染色的切片中均呈红色。
H.E染色程序如下
• 脱蜡 • 脱苯 • • 染色 • • 透明 •
复水 脱水 封固
切片脱水透明要彻底
浸蜡的
注意事项
首先，应保证所用石蜡的质量，尽量不含杂质，否则易造成 切片刀刀口受损或切片破碎、划痕增多。
其次，浸蜡用的石蜡熔点应控制在55~58℃。蜡温过低，浸 蜡不良；蜡温过高回烫伤组织，是组织收缩、变硬、切片 时易脱片、卷片。
再次，要控制好浸蜡时间。时间过短，蜡没有完全渗入组 织、组织过软；时间过长，造成组织硬脆。两者均可造成 切片困难。另外，应尽量去除沾在组织上的二甲苯，在浸 蜡。
脱水的方法
自低到高溶度依次进行，使组织中 所含水分逐渐减少直至被脱水剂代 替。
脱 水 机
透明
定义
用某些化学试剂将组 织中的脱水剂置换 出来，以利于浸蜡 和包埋，因组织块 浸入这此试剂后常 呈半透明状
透明
目的
Ö透明是制片过程中很重要的环节。大 多数脱水剂不能和包埋剂（如石蜡） 混溶，而透明剂即可与脱水剂混溶， 又能和包埋剂（如石蜡）混溶，能起 到桥梁作用。
组织切片技术
骨磨片
第9页，共71页。
疏松结缔组织铺片
第10页，共71页。
上皮组织铺铺片片
第11页，共71页。
2、切片法
切片法是必须依靠切片机将组织切成薄片来进行观察的 方法。为了能清晰地观察到组织结构及细胞形态，必须先 经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬 以利于切成薄片，根据所用支持剂的种类不同，主要分为 石蜡切片法，火棉胶切法，冰冻切片法等类型，切成薄片后 还需要脱蜡，染色，脱水，透明等步骤，将其制成永久标 本。
组织切片技术
第1页，共71页。
大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观察的， 也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不易透过，另外 由于细胞内各个结构的折射率相差很小，即使光线可透过，也 难以辩明。
组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过固定， 脱水，透明，包埋等手续后，用切片机切成较薄的切片，再经不 同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及其中某些化学成份含 量的变化，组织切片也便于保存。
第16页，共71页。
2.1.2 动物组织标本的取材
动物的处死方式一般为活杀，组织标本来源较新鲜，10min内即可 完成固定和冷冻保存，脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后 固定。
制片所需的材料要求越新鲜越好，尤其是细胞学方面的研究对 材料的新鲜程度要求更严。因此，要从活的动物体上采取材料，在一 般情况下，要对动物施行麻醉，然后再割取材料加以固定。所用的麻 醉药品，必须以不影响细胞结构为原则。
甲醛渗透力强，固定均匀。但脱水后有较大收缩，在某些方法 中要求中性甲醛，可在原装瓶内放入碳酸镁，pH为7.6，能长期保 持中性。甲醛固定后，通常需在流水中冲洗24-48小时,否则影响染 色效果。
第26页，共71页。