香蕉叶绿体分离及叶绿体DNA提取方法

合集下载

香蕉DNA的粗提取实验

香蕉DNA的粗提取实验广州市第一一三中学马敏贤一、实验目的1、学习DNA的粗提取方法2、学习DNA的化学鉴定方法二、实验原理1、研磨能够破坏细胞结构，释放其中含有的DNA，清洁剂中含有的SDS(十二烷基磺酸钠)具有使蛋白质变性，与DNA分离的作用。

2、DNA可以溶解在一定浓度的NaCl溶液中，3、DNA在酒精中不溶解，所以加酒精后DNA可以析出4、甲基绿为碱性染料，它易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。

三、材料器具器具：研钵、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒（10ml 一支）、滴管、试管（20ml两支）材料：香蕉、洗洁精、95%酒精、蒸馏水、0.015mol/L的NaCl溶液、2mol/l的NaCl溶液、甲基绿试剂四、方法步骤1、制备材料切取一段2厘米长的香蕉，切碎，置于研钵内加入2毫升洗洁精，充分研磨加入10毫升2mol/l的氯化钠溶液，继续研磨2、过滤将研钵内的香蕉糊用漏斗和纱布过滤到烧杯中。

3、提取DNA往上述液体中加入到约两倍体积的95%的酒精，轻轻摇动或用玻璃棒轻轻搅拌，很快就会看到白色纤维状粘稠物质从滤液中析出来，这就DNA粗提取物。

4、鉴定方法一：取两支试管，分别编为1号、2号，各加入0.015mol/L的NaCl溶液2ml，将所得的白色絮状物质取出一部分放入1号试管，搅拌使其溶解，然后向两支试管中分别加入两滴甲基绿试剂，1号试管呈现绿色，则说明白色絮状物是DNA。

方法二：用玻璃棒卷起白色絮状物，并在白色絮状物中直接滴加甲基绿染液，用蒸馏水洗去浮色，絮状物呈现绿色，说明该白色絮状沉淀为DNA。

五、实验结构与结论研磨能够破坏细胞结构，释放其中含有的DNA，清洁剂中含有的SDS(十二烷基磺酸钠)具有使蛋白质变性，与DNA分离的作用。

DNA在氯化钠溶液中的溶解度在2mol/L时最大，因而在香蕉碎的研磨过程中加入洗洁精和2mol/L的氯化钠溶液，主要目的是让香蕉的DNA 与蛋白质分离并溶解。

提取植物DNA方法

提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来，以便进行进一步的研究。

以下是常用的植物DNA提取方法：1. CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种表面活性剂，可以溶解脂质，破坏细胞膜，从而释放DNA。

首先，将植物样品粉碎，加入CTAB缓冲液中并进行润湿，然后加入蛋白酶，破坏细胞膜。

接下来，加入CTAB-蛋白酶混合液，室温静置，使DNA与CTAB结合。

之后，将混合液经过苯酚-氯仿提取，将DNA从其他组分中分离出来。

最后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。

2. 硅胶柱法：硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。

首先，将植物样品粉碎，加入提取缓冲液中，并加入蛋白酶进行细胞壁降解。

接下来，将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上，使用重力流动分离DNA。

然后，使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。

最后，使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱，并收集纯化的DNA。

3. 高盐法：高盐法适用于粗提植物DNA。

首先，将植物样品细碎，加入高盐缓冲液中，其中含有高浓度的盐和蛋白酶。

高盐浓度可以破坏细胞膜，并使DNA 从蛋白质中解离出来。

然后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。

4. 快速提取法：快速提取法是一种高效和便捷的方式，适用于大规模提取植物DNA。

首先，将植物样品经过快速研磨处理，将DNA释放到提取缓冲液中。

然后，使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀，然后洗涤并溶解。

这些方法在植物科学研究中被广泛使用。

在选择提取方法时，需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。

植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整，以获得满意的结果。

需要注意的是，植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。

样品应在低温下保存，以保持DNA的完整性。

此外，处理样品时要避免污染和酶解，以确保提取的DNA质量。

不同物种的DNA提取方法

不同物种的DNA提取方法摘要DNA作为遗传微粒，为生物体的遗传信息复制和传递做出了巨大的贡献，而1953年J.Watson和F.Crick提出的双螺旋结构模型不仅解释了有关DNA 的性质，而且也清楚地解释了DNA的各种生物功能，进而使DNA的研究进入到了分子水平。

然而DNA是如何具体在生物体内发挥其作用的，到现在还是一个热门课题，为了研究其作用，就需要从各种物种中提取DNA，由于不同物种结构的复杂性不同，导致提取DNA的方法也是各不相同，为此，我整理了一些物种的DNA提取方法。

关键词：物种、DNA提取1、月季DNA的提取方法：之所以提取高质量的月季DNA有难度，是因为其体内富含多糖及多酚类的物质，在一般的DNA提取方法中，很难被分离，这就严重干扰了提取月季DNA的纯度以及完整性。

为了解决这个问题，北京市园林科学研究所采取五种提取方法，在其最后的实验结果表明：Draper法提取月季DNA的纯度最高，完整性最好。

2、大麦小孢子DNA的提取方法：要想分离提取小孢子的DNA，就需要降解小孢子壁，而小孢子壁由外壁和内壁组成，内壁主要由纤维素和果胶组成，这类物质能够被相应的酶所水解，而外壁的主要成分是类胡萝卜素和类胡萝卜酯的氧化多聚化的衍生物，化学物质非常稳定，到目前为止，还没有相应的酶可以水解。

因此外壁便成为提取高质量的大麦小孢子DNA的一个“拦路虎”。

对此，莱阳农学院展开了研究，他们通过“收集大麦的花药”、“分离小孢子”、“分离小孢子”。

最后“DNA的提取”等一系列的步骤，在最后的统计结果中，发现CTAB法和微量快速提取法取得不错的效果，而且DNA的得率和质量几乎一样。

这也证明了上述两种方法是有效而可行的，当然在这个研究过程，首次采用超声波法进行破壁，收到出乎意料的效果，也为CTAB法和微量快速提取法提供了必要的条件。

所谓的CTAB，其中文名是十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。

植物提取dna的步骤及原理

植物提取dna的步骤及原理以植物提取DNA的步骤及原理为标题，本文将介绍植物提取DNA 的基本步骤以及相关原理。

植物提取DNA是指从植物细胞中分离出DNA分子的过程。

植物细胞中的DNA包含了植物的遗传信息，因此提取植物DNA对于遗传研究和基因工程具有重要意义。

下面是植物提取DNA的基本步骤：步骤一：准备样品需要选择一种适合的植物样品。

可以选择新鲜的叶片、茎段或种子作为样品。

样品应该尽可能新鲜，并且避免受到污染或损伤。

步骤二：打碎细胞将样品放入冰冻细胞研磨器中，加入研磨缓冲液，并用研磨器将样品研磨成细胞悬浮液。

研磨缓冲液中的盐和洗涤剂有助于破坏细胞壁，并释放细胞内的DNA。

步骤三：溶解细胞膜将研磨后的细胞悬浮液转移到离心管中，并加入含有洗涤剂的细胞裂解液。

洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。

步骤四：沉淀DNA将细胞裂解液置于高速离心机中进行离心，离心过程中，DNA会被沉淀到离心管底部形成一个白色的沉淀物。

离心后，将上清液倒掉，只保留沉淀物。

步骤五：洗涤DNA使用75%乙醇溶液洗涤DNA沉淀物，以去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。

洗涤后，用吸管或微量移液器将乙醇溶液完全抽尽，避免干燥过程中DNA沉淀物溶解。

步骤六：溶解DNA将洗涤后的DNA沉淀物用适量的溶解液溶解，常用的溶解液包括TE缓冲液或纯净水。

溶解后的DNA溶液可以用于后续的实验操作，如PCR扩增、酶切等。

以上就是植物提取DNA的基本步骤，下面将简要介绍相关的原理。

DNA提取的原理主要基于细胞的破坏和DNA的溶解。

在打碎细胞的过程中，使用研磨缓冲液破坏细胞壁，释放细胞内的DNA。

细胞裂解液中的洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。

离心过程中，DNA分子由于其较大的分子量而沉淀到离心管底部，而其他细胞碎片和杂质则在上清液中。

洗涤过程中使用的乙醇溶液能够去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。

最后，将DNA沉淀物溶解在适当的溶解液中，得到DNA溶液。

叶绿体色素提取与分离实验

类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能的色素和结构
（一）捕获光能的色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素叶绿素b
（黄绿色）含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素（黄色）胡萝卜素（橙黄色）
含量约占卜素主要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素的提取和分离实验中在滤纸条上扩散速度最快的色素是（） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
4、在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素分析，会得到近似，同心的四个色素环，排到在最里圈的色素是（） A、橙黄色 B、蓝绿色 C、黄色 D、黄绿色
练习
1、在植物实验室的暗室内，为了尽可能地降
低植物光合作用的强度，最好安装（ B）
A、红光灯 B、绿光灯 C、白炽灯 D、蓝光灯
2、为提高大棚蔬菜的产量，哪项措施更有效
5、下图是叶绿体色素的提取与分离实验中所用的材料与用具。请回答：分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色的溶液：深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表示加，“—”表示不加。
处理二氧化硅（少量）碳酸钙（少量） 95%乙醇（10ml）蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
C、安装绿色透光薄膜 D、安装无色透光薄膜
练习
3．在圆形滤纸的中央点上粘叶绿体的色素滤液，进行色素分析，会得到近似同心环状的四个色素圈，
排在外圈的色素呈 [ A]

香蕉dna的粗提取实验

香蕉dna的粗提取实验
香蕉是一种常见的水果，在细胞学和基因组学研究中常常作为材料使用。

下面介绍一种简单的香蕉DNA粗提取实验。

材料：
- 香蕉1个
- 酒精（95%）100毫升
- 活性炭1块
- 盐1/2勺
- 水100毫升
- 鸡蛋清2个
步骤：
1. 将香蕉去皮，切成小块，放在搅拌机中打碎成泥状。

2. 将100毫升酒精倒入一个干净的玻璃瓶中。

3. 将香蕉泥倒入瓶中，盖上盖子，轻轻摇动瓶子，让酒精和香蕉充分混合。

4. 将瓶子放在冰箱里，冷藏4小时，使得DNA得以沉淀。

5. 将玻璃瓶放在架子上倾斜45度，倒去大部分酒精，但是留下一些酒精，以保证沉淀不会被扰动。

6. 加入10毫升盐水，用手轻轻摇晃，让DNA从沉淀中脱离。

7. 用滤纸将溶液过滤，去除残渣，使得溶液更加清澈。

8. 将溶液倒入另一个干净的玻璃瓶中，加入2个鸡蛋清，慢慢摇晃瓶子，直到DNA凝聚成白色不透明的物质。

9. 用吸管或者挖勺将DNA提取出来，放在一个小瓶子里，保存在冰箱里。

解释：
酒精可以被用来分离DNA和其他的蛋白质、碳水化合物等生物大分子，因为DNA在酒精中不溶解。

加入盐可以增加DNA对水的亲和力，从而被水溶解，这样就可以轻易地从酒精中提取DNA了。

加入鸡蛋清可以帮助DNA聚集成大块，容易观察。

注意事项：
- 操作要注意瓶子的卫生和干净。

- 在分离和提取DNA的过程中要尽量避免搅动和摇晃溶液，以免扰动沉淀和聚集的DNA。

- 实验中使用的器材和吸管要消毒，避免其他物质的污染。

叶绿体的分离实验报告

一、实验目的1. 学习叶绿体的分离方法。

2. 观察叶绿体的形态和结构。

3. 了解叶绿体在植物细胞中的分布。

二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器，主要分布在植物的叶片细胞中。

叶绿体含有叶绿素等色素，能够吸收光能并将其转化为化学能。

本实验通过研磨植物叶片，利用叶绿体在水中溶解度低、在丙酮中溶解度高的特性，将叶绿体从细胞中分离出来。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜叶）。

2. 实验仪器：研钵、研杵、蒸馏水、丙酮、载玻片、盖玻片、显微镜、酒精灯、镊子等。

四、实验步骤1. 取新鲜植物叶片，用剪刀剪成小块。

2. 将叶片放入研钵中，加入适量蒸馏水。

3. 用研杵充分研磨叶片，使细胞破裂，叶绿体释放出来。

4. 将研磨液过滤，去除叶片碎片。

5. 取少量过滤液，加入等体积的丙酮，充分混合。

6. 静置一段时间，待叶绿体在丙酮中沉淀。

7. 用镊子取出沉淀，滴在载玻片上。

8. 将载玻片放在显微镜下观察叶绿体的形态和结构。

五、实验结果与分析1. 观察到载玻片上的叶绿体呈绿色，呈扁平的椭球形或球形。

2. 叶绿体在显微镜下具有明显的网状结构，其中包含类囊体、叶绿素等成分。

3. 通过比较实验前后叶绿体的形态和结构，可以判断叶绿体在植物细胞中的分布。

六、实验讨论1. 实验过程中，为什么加入丙酮可以使叶绿体沉淀？答：叶绿体在水中溶解度低，在丙酮中溶解度高，加入丙酮可以使叶绿体从溶液中沉淀出来。

2. 实验过程中，为什么研磨叶片时需要加入蒸馏水？答：蒸馏水可以破坏细胞结构，使叶绿体释放出来，同时保持实验液的清洁。

3. 实验过程中，为什么需要过滤研磨液？答：过滤可以去除叶片碎片，保证实验结果的准确性。

4. 实验过程中，为什么需要观察叶绿体的形态和结构？答：通过观察叶绿体的形态和结构，可以了解叶绿体的基本特征，进一步了解其在植物细胞中的分布和功能。

七、实验结论本实验成功分离出植物叶片中的叶绿体，并观察到叶绿体的形态和结构。

一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法

一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法柴娟;冯仁军;史后蕊;任梦云;王静毅;张银东【摘要】在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA).结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3体积和2/3体积的KAc得到总RNA,添加1/3体积无水乙醇处理得到总DNA.该结果获得一种简单、快速,能在1次实验中添加不同试剂提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2014(035)001【总页数】6页(P104-109)【关键词】香蕉叶片;总核酸;总RNA;总DNA;快速提取【作者】柴娟;冯仁军;史后蕊;任梦云;王静毅;张银东【作者单位】海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101【正文语种】中文【中图分类】S668.1doi10.3969/j.issn.1000-2561.2014.01.017从植物组织中提取RNA和DNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

ｒａｈｄ１５８ｇｇｗｉｈｃｕｄｂｉｃｌｕｅｓｉｔｎａａｙｉ．ｈｔｏａｅａｖｎａｅｅｃｅ．７／，ｈｃｏｌｅｄｒｔｓｄｉｒｔｃｉｎｌｓＴｅｍｅｄｈｓｔｄａｔｇｓｅｙｎｅｒｏｓｈｈ
ａｌｓ．ｍｙａｅ
ＫｅｒｓａａａｃｌｒｐａｔｃＤＮ；ｓｌｔｏｙｗｏｄ：ｂｎｎ；ｈｏｏｌｓ；ｐＡｉｏａｉｎ
香蕉（ｓｐ）Ｍｕａｓ．是世界上最重要的水果之一，ｐ全球香蕉每年的产量大约为１００ｔ是热带３０万，区４亿多人口的重要粮食作物，其中有１Ｏ万ｔＯ用于国际贸易（Ａ，０）我国是香蕉重要生产国，６ＦＯ２６。０
维普资讯
第３Ｏ卷第３期
２００８年６月
江西农业大学学报
ＡｃａＡｇｉｕｔｒｅＵｎｖｒｉａｉｉｎｇｅｉｔｒｃｌｕａｉｅｓｔｔｓＪａｘｉｎｓｓ
Ｖｏ．０，．１３Ｎｏ３
中图分类号：６８１Ｑ４￥６．；９３文献标识码：Ａ
ＴｈｅｈｏｏｓｌｔｏｆＢａａａＣｈｏｏａｔａｄｃＤＮＡｅＭｔｄｆｒＩｏａｉｎｏｎｎｌｒｐｌｓｎｐ
ＬＯＮＧｎ，ＥＮＧｉ— ＷＵ，ＨＵＡＮＧＢｉｇ — ｚｉ，ＸｉｇＺＪｎｈＨＵＡＮＧＹｏｇ — ｈｎｎｏｇ，
蕉在我国已有２０００多年的栽培历史，长期的系统演化加上多变的自然地理条件，成我国品种繁多的形品种（。系）香蕉种质资源的起源与分类研究，经历形态学、细胞学、生物化学和分子生物学不同水平，分类方法和手段不断完善。ｉｍｏｓＳｍｄ分类方法仅仅只能将香蕉栽培品种分为四大种类；一些分子标记技术
ｏｉｈｒｙｅｄ，ｂｔｒｑａｉａｄｉｌｍａｉｕａｉｎｍｏｅｖｒｔａｎｄｍａｄｆｒｘｅｓｖｆｈｇｅｉｌｅｔｕｌｔｎｓｍｐｅｅｙｎｐｌｔｏ，ｒｏｅｉｈｓｏｅｎｅｐｎｉｅｏｉｓｒｍｅｔｎｔｕｎ．Ｍｅｎｉ，ｔｅｍｅｈｄｉａｓｉｆｒｉｏａｉｎｏｈｏｏｌｓＮＡｏｏｈｒｐａｔｉｉｈａｗｈｌｅｈｔｏｓｌｏｆｔｏｌｔｆｃｌｒｐａｔＤｓｏｆｍｔｅｌｎｓｗｔｈｇｒｈ
体分离及叶绿体ＤＡ提取的方法，Ｎ应用该方法获得的香蕉叶绿体ＤＡ纯度高，Ｎ香蕉叶绿体ＤＡ的产率达到Ｎ
１５８ｇｇ该叶绿体ＤＡ可直接用于限制内切酶酶切分析。．７／，Ｎ方法简便，对仪器要求不高，成本低，同样适用也
于其它叶片糖分含量高的植物。关键词：香蕉；叶绿体；叶绿体ＤＡ；Ｎ提取
Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ａｃｏｄｎｅｃａａｔｒｓｉｓｏａａａｌａｅ，ｔｅｍｅｈｄｆｒｓｌｔｎｏｌｎｐｃｒｉｇｔｔｈｒｃｅｉｔｆｂｎｎｅｖｓｈｔｏｏｏａｉｆａｔＤＮＡｏｈｃｉｏｐｃｈｓｂｅｒｖｄｂｓｎｉｈｉｎｃｓｒｎｔｎｃｍｂｎｔｏｔｏＨｕｅｏｉｏａｅｃｌｒｐａｔａｅｎｉｏｅｙｕｉｇｈｇｏｉｔｅｇｈｉｏｉａｉｎｗｉｌｗｐｂｆｒｔｓｌｔｈｏｏｌｓｍｐｈａｄｃＤＮＡｏｂｎｎｉｈｍｐｏｅｔｏｅｏｔｉｅｐｎｐｆｍａａａｗｔｔｅｉｒｖｄｍｅｈｄｔｂａｎｄｃＤＮＡｓｏｉｈｒｐｒｔｎｔｉｌｒｈｈｗａｆｈｇｅｕｉａｄｉｙｅｄｙｓ
ＹＩＧｎ—ｊｎ，ＣＮＪｎ—ｙｎ，ＸＡＲｉａｕｈＨＥｉｉＩｕ
（．ｒｉＲｓａｃｎｔｕｅＧｎｄｎｃｄｍｙｏｇｉｌｒｌｃｅｃ，ｕｎｚｏ６０Ｃｉａ１ＦｕｔｅｅｒｈＩｓｔｔ，ｏｇｏｇＡａｅｆｒｕｔａＳｉｎｅＧａｇｈｕ５０４ｈｎ；ｉＡｃｕ１２Ｃｌｇｆｇｏｏ，ＡＮｎｈｎ３０５Ｃｉａ．ｏｌｅｏｒｎｍｙＪＵ，ａｃａｇ３０４，ｈｎ）ｅＡ
Ｊｎ．，０ｕ２０８
文章编号：０２８（０８００３１０— ２６２０）３— ５４—００４
香蕉叶绿体分离及叶绿体ＤＡ提取法Ｎ
龙兴，曾继吾黄秉智，，黄永红易干军ｈ，，陈金印，夏瑞
（．１广东省农业科学院果树研究所，广东广州５０４２江西农业大学农学院，１６０；．江西南昌３０４）３０５摘要：根据香蕉叶片自身的特点，对植物叶绿体ＤＡ的提纯方法（Ｎ高盐低ｐＨ法）进行改进，建立适宜香蕉叶绿