消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全
病原微生物实验室生物安全管理制度
病原微生物实验室生物安全管理制度一、病原微生物实验室概述二、实验室人员管理1.员工进入实验室前必须接受相关培训，掌握操作规程和安全知识。
2.严格执行实验室人员的资格审批制度，确保所有人员具备相应的资质和技能。
3.实行员工健康检查制度，定期对员工进行体检，确保他们身体健康，没有携带病原微生物。
三、实验室环境管理1.病原微生物实验室必须具备完善的通风系统，确保室内空气流通，防止病原微生物传播。
2.实验室内部设施必须经常进行维护和清洁，保持干净卫生。
3.常规消毒：实验室内表面、工作台、仪器设备等必须经常进行消毒，使用规定的消毒剂。
四、实验室操作规程1.所有实验人员必须佩戴防护用品，包括实验服、手套、口罩、护目镜等。
2.禁止在实验室内进食、喝水、抽烟等行为。
3.实验完成后，必须及时清理垃圾和废弃物，并按规定的方式处理。
4.严格遵守实验室内的标示和警示牌，不随意触摸或移动实验器材。
5.实验室内禁止使用非法、违禁物品和药品。
6.实验操作过程中遇到异常情况，要及时向上级报告，终止实验并采取措施防止事故扩大。
五、生物安全事故应急管理1.制定生物安全应急预案，规定各类生物安全事故的处理流程和责任分工。
2.配备必要的应急设备和药品，如生物防护柜、消毒剂等。
3.组织定期演练生物安全应急演习，提高员工的应急处置能力。
4.发生生物安全事故后，立即启动应急预案，采取有效措施进行应对，确保事故不扩散。
六、其他管理措施1.严格监控实验室内的废液、废弃物的处理情况，确保按规定的方式处置。
2.实施实验室出入管理，设置出入口和门禁系统，确保实验室的安全性。
3.加强对实验室物品和资料的管理，建立相应的登记和归还制度。
4.定期进行实验室的安全检查和评估，及时发现和纠正潜在的风险和隐患。
该病原微生物实验室生物安全管理制度是为了保障实验室工作的安全进行制定的，通过合理的组织、管理和培训，确保所有实验人员都能够遵守规定，正确进行病原微生物相关工作，最大限度地降低生物安全事故的发生概率。
生物安全实验室常规消毒灭菌
生物安全实验室常规消毒灭菌一、室内空气消毒具备排风净化功能的负压实验室，根据所操作的微生物因子不同，空气可以经高效过滤器过滤后排放，但应采取通风控制系统来防止实验室出现正压。
室内空气经高效过滤器过滤后排到建筑物以外并远离该建筑的进气口。
无排风净化功能的常压实验室，使用可汽化过氧化氢、气体二氧化氯对空间进行气体熏蒸或气溶胶喷雾等方法消毒，同时需做好个人防护与消毒后消毒剂残留的去除处理。
二、室内环境表面消毒若地面、实验台面等被明显污染，应立即用吸液布覆盖，喷洒消毒剂（从外向内）于吸液布上，使吸液布湿透，作用60min 后用清水擦拭干净。
实验台面、桌椅、门把手、生物安全柜和解剖柜台面、侧壁等可用消毒剂喷洒、擦拭。
表面消毒可使用含氯消毒剂，含有500～1 000mg/L有效氯溶液适于普通的环境表面消毒。
当处理高危环境时建议使用5 000mg/L有效氯溶液。
用于金属表面消毒处理时，消毒结束后应尽快使用清水清除表面残余消毒剂。
三、生物安全防护设备的消毒（一）生物安全柜消毒在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用中高效消毒剂进行擦拭，不触及送风滤器的扩散板。
75%乙醇消毒后需及时擦净水痕。
采用含氯消毒剂处理后，须用水擦拭干净，防止对生物安全柜的腐蚀。
试剂溢漏或泼洒后，立即消毒污染物及污染的表面。
生物安全柜在移动或更换过滤器之前，要使用汽化过氧化氢、二氧化氯气体或甲醛蒸汽对生物安全柜进行终末消毒。
（二）高效过滤器的消毒采用汽化过氧化氢消毒法或甲醛熏蒸法进行消毒。
消毒器应与排风过滤器排风箱体的消毒接口连接，利用循环气流带动蒸汽循环实现原位消毒。
消毒后可将滤器卸载，装入医用废物塑料袋中，进行压力蒸汽灭菌。
操作时做好个人防护。
（三）个体防护装备的消毒一次性帽子、口罩、手套，使用后应放入废物袋内高压灭菌。
防护鞋、防护眼罩、防护面具（半面具）、防护面罩（含正压面罩）表面用消毒剂喷雾或擦拭消毒，作用到预定时间后清洗晾干备用。
生物安全及消毒灭菌
病原微生物所致的安全问题，如病原微生物 实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大 传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最 现实的生物安全问题。 病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和 防感染。 关于病原微生物实验室生物安全，我国法令包 括对病原微生物的分类管理，对实验室的分级管 理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等。
1.高效消毒剂
可杀灭包括细菌芽胞在内的所有
微生物。 （1）含氯消毒剂 次氯酸钠，二氯异氰酸尿酸钠， 漂白粉（氯化钙+次氯酸钙）； （2）过氧化物消毒剂 过氧化氢，过氧乙酸， 二氧化氯； （3）醛类消毒剂 戊二醛，甲醛； （4）环氧乙烷 杂环类化合物。
2.中效消毒剂
不能杀灭芽胞，能杀灭细菌繁殖体，真 菌和大多数病毒。 （1）含碘消毒剂 碘酊，碘伏。 （2）醇类消毒剂 乙醇，异丙醇。
一、热力消毒灭菌法
• 热力杀菌的原理：高温对微生物有明显的致 死作用，其主要是通过使菌体蛋白变性或者 凝固，酶失去活性、核酸崩解及细胞膜破坏。 • 方法 （1）湿热消毒灭菌法 （2）干热灭菌法
湿热灭菌与干热灭菌的比较
同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好
• 细菌蛋白质在有水的情况下易于凝固变性。 • 湿热穿透力强。 • 湿热蒸气有潜热存在，水蒸汽凝固成水释 放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度。
高压蒸汽灭菌器
二、 辐射灭菌法
(一）日光与紫外线
1、杀菌原理：使细菌DNA形成胸腺嘧啶双聚 体，DNA复制被干扰，从而导致细菌死亡。 2、杀菌特点：265-266nm波长的紫外线杀菌 力最强，但穿透力较弱。 3、应用：物体表面和空气的消毒。
紫外线对人的影响
1.UV-A：波长在315-400nm，能使人的皮肤产生黑色素，使皮 肤变黑。 2.UV-B：波长在280-315nm的紫外线，UV-B能致癌，令皮肤起 皱纹老化。 3.UV-C：波长在200-280nm波段有杀菌、消毒效能。
消毒灭菌和病原微生物实验室生物安全
（三）低效消毒剂 1.季铵盐类消毒剂 （苯扎溴铵） 2.氯已定 3.高锰酸钾
第二节 消毒灭菌旳利用
医疗器械物品旳消毒灭菌 室内空气消毒灭菌 手和皮肤旳消毒 黏膜旳消毒 病人排泄物与分泌物旳消毒灭菌 病人污染物品旳消毒 饮水旳消毒 环境旳消毒
过程。 无菌(asepsis)和无菌操作：无菌是无活菌旳意思，多是灭菌旳成果。
预防细菌进入人体或其他物品旳操作技术，称为无菌操作。
第一节 消毒灭菌旳措施
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
干热灭菌法 湿热灭菌法
高效消毒剂 中效消毒剂 低效消毒剂
（一）热力灭菌法
菌种保存管
（五）化学消毒灭菌法
杀菌机制 增进菌体蛋白质变性或凝固。 干扰细菌旳酶系统和代谢。 损伤细菌旳细胞膜，使细胞膜通透性增长，胞外液内渗，
细菌裂解。
化学消毒剂旳种类
（一）高效消毒剂 1.含氯消毒剂 （次氯酸钠、漂白粉） 2.过氧化物消毒剂 （过氧化氢、过氧乙酸） 3.醛类消毒剂 （戊二醛、甲醛） 4.环氧乙烷
➢ 高压蒸汽灭菌法
在103.4kPa蒸气压下，温度到达121.3℃，维持15~20min
高压蒸汽灭菌器 用于一般培养基、生理盐水、耐热药物、手术敷料等。
（二）辐射灭菌法
非电离辐射: 紫外线 电离辐射: 、、γ、χ射线以及高能质子、 中子等
紫外线(ultraviolet ray, UV)
作用于DNA，使相邻旳胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，干 扰DNA复制。
1. 干热灭菌法 2. 湿热灭菌法 在同一温度下，湿热效力比干热大。 原因：（1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；
消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全
病原微生物所致的安全问题，如病原微 生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐 怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社 会所面临的最现实的生物安全问题。
病原微生物实验室生物安全的核心是防 扩散和防感染。
关于病原微生物实验室生物安全，我国 法令包括对病原微生物的分类管理，对实验 室的分级管理 ， 实验室感染的控制以及监督 和法律责任等。
实验室概况—布局及流程 ☜☜
一、二级实验室不得从事高致病性 病原微生物实验活动。三级、四级实验 室从事高致病性病原微生物实验活动。
从事高致病性病原微生物相关实验 活动应当有２名以上的工作人员共同进 行。在同一个实验室的同一个独立安全 区域内，只能同时从事一种高致病性病 原微生物的相关实验活动。应有健全安 全保卫制度 。
实验室相关感染的原因
接触感染材料（倾倒、溅开） 针头刺伤 破碎玻璃器皿损伤 被感染的动物或昆虫咬伤、抓伤 感染微生物气溶胶
气溶胶
是指悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001-100μm的固态或液态微小粒子形 成的相对稳定的分散体系。
微生物气溶胶特点：
◙ 无色无味，无孔不入，不易发现，难以预防; ◙ 容易发生病原体在人与人、人与动物、动物与
坡、我国台湾和北京先后发生实验室SARS冠 状病毒感染。
实验室感染的历史与现状
实验室感染可间接传播至社区人群：
◙ 1992年，荷兰从1名儿童体内分离出1株脊髓 灰质炎疫苗病毒,该儿童的父亲在工作中曾意 外接触过大量脊髓灰质炎疫苗病毒。
◙ 2002年11月至2003年3月，印度西部地区从7 例脊髓灰质炎患者体内分离到Ⅱ型实验室标 准株,推测可能为实验室感染。
第三章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全-临床执业医师考试医学微生物学重点培训讲义
第三章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全-临床执业医师考试医学微生物学重点培训讲义第三章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全第一节消毒灭菌的常用术语1、灭菌：杀灭生物体上所有微生物的方法。
2、消毒：杀死物体上或环境中的病原微生物，并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。
3、防腐：防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。
4、无菌：无菌即不存在活菌，多是灭菌的结果。
无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。
5、清洁：减少微生物数量的过程。
第二节消毒灭菌的方法一、物理消毒灭菌法：热力、辐射、滤过、干燥和低温等。
㈠热力灭菌法：分为干热灭菌和湿热灭菌1、干热灭菌法：一般细菌繁殖体在干燥状态下，80-100℃经1小时可被杀死，芽胞则需要更高温度才能被杀死。
①焚烧：废弃物、尸体②灼烧：接种环、试管口③干烤：(160~170℃，2h)利用干烤箱灭菌，一般加热至171℃经1h或160℃ 2h或1 21℃ 16h。
适用于高温下不变质、不损害、不蒸发的器皿(如：玻璃器皿)。
④红外线(0.7~1000um波长的电磁波)：医疗器械2、湿热灭菌法：最常用，在相同温度下湿热灭菌法比干热灭菌法效果更好，因为：ⅰ湿热中细菌菌体蛋白较易凝固变性;ⅱ湿热的穿透力比干热大;ⅲ湿热的蒸汽有潜热效应存在。
①巴氏消毒法：用较低的温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，以保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法(61.1-62.8 ℃ 30min 或71.7℃15-30s，主要用于牛乳消毒和酒类)。
②煮沸法(100 ℃，5min)食具、注射器等消毒③流动蒸汽消毒法(100 ℃ 15-30min)④间歇蒸汽灭菌法(100 ℃ 5-30min，37 ℃24h×3天)⑤高压蒸汽灭菌法：*压力—103.4KPa(1.05Kg/cm2)*温度—121.3 ℃*时间—15-20min*效果—杀灭包括芽孢在内所有微生物*应用—所有耐高温、高压、耐湿的物品㈡辐射杀菌法：①紫外线：波长240—300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以265—266nm最强。
第三章 消毒与灭菌
耐热药品、手术敷料等。
手提式高压蒸汽灭菌器
二. 辐 射
辐射：能量通过空间传递的一种物理现象。按辐
射对微生物的灭活作用分：
1.非电离辐射: 可见光、日光、紫外线 2.电离辐射: 、、γ 、χ 射线以及高能质子、 中子等
(一)非电离辐射
1.可见光: 指在红外线和紫外线之间的肉眼可见的光线，
其波长400～800nm。可见光线对微生物一般无多大影 响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，故
4. 何谓细菌素？
5. 毒性噬菌体和温和噬菌体的概念。 6. PFU的概念。
(2)巴氏消毒法 :以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物，
而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法 . 1.低温维持巴氏消毒法 63～65℃30min 2.高温瞬时巴氏消毒法 71～72℃15s 3.超高温巴氏消毒法 132℃1～2s
（3）流通蒸汽灭菌法 ：是一种常压蒸汽消毒法，细
菌繁殖体15-30分钟可杀灭，但芽孢不全部被杀灭。
培养细菌和保存菌种，均应置于阴暗之处。
光感作用 :指可见光具有微弱的杀菌作用，若将某些染料 如结晶紫、美蓝、汞溴红、伊红、沙黄等加到培养基或涂 在外伤表面，能增强可见光的杀菌作用 。
2.阳光: 直射日光有强烈的杀菌作用，是天然的杀菌因
素。许多微生物在直射日光的照射下，半小时到数小 时即可死亡。芽胞对日光照射的抵抗力比繁殖体大得 多，往往需经20h才死亡。日光的杀菌效力因地、因
（二）植物杀菌素 ：某些植物中存在的杀菌物质。
如黄连、大蒜、板蓝根等。
（三）细菌素 ：某种细菌产生的一种具有杀菌作用的
蛋白质，只能作用于与它同种不同菌株的细菌 以及与它亲缘关系相近的细菌，如大肠菌素 。
病原微生物实验室生物安全管理条例
病原微生物实验室生物安全管理条例第一章总则第一条为加强对病原微生物实验室的生物安全管理，保障实验室工作人员和社会公众的生命健康，根据《中华人民共和国传染病防治法》和相关法律法规，制定本条例。
第二条本条例适用于从事病原微生物相关工作的实验室，包括但不限于研究机构、医院、疾控中心等单位。
第三条病原微生物实验室应当建立完善的生物安全管理制度，明确责任分工，贯彻实施生物安全管理措施，确保实验室内部环境安全。
第四条实验室工作人员应当严格遵守实验室的相关规章制度，履行个人的生物安全管理责任，积极参与实验室的生物安全培训及演练。
第二章实验室建设第五条病原微生物实验室应当建设在符合国家相关标准的实验室场所内，设施设备符合实验室的实际需要。
第六条实验室应当设有专门的生物安全实验室主任，负责实验室的生物安全管理工作。
第七条实验室应当配备必要的生物安全设施和设备，包括生物安全柜、消毒设备、防护装备等，确保实验室内环境的安全。
第八条实验室应当制定完善的应急预案，随时做好突发事件的处置准备。
第九条实验室应当定期对设施设备进行检测维护，确保设施设备的正常运作。
第三章实验室管理第十条实验室应当建立规范的出入管理制度，对实验室人员的身份进行核实，并记录出入实验室的情况。
第十一条实验室应当建立规范的样本管理制度，对样本的来源、存储、处置进行规范管理。
第十二条实验室应当建立规范的废物处理制度，对实验过程中产生的废物进行分类、封存、处理，确保废物不对环境造成污染。
第十三条实验室应当建立完善的生物安全管理流程，对实验室的每个环节进行规范管理。
第十四条实验室应当建立完善的生物安全培训机制，定期对实验室人员进行生物安全知识的培训，增强实验室人员的生物安全意识。
第四章生物安全防护第十五条实验室工作人员应当按照规定佩戴防护装备，包括实验服、手套、口罩等，确保个人安全。
第十六条实验室应当建立规范的生物安全操作程序，对操作过程进行规范管理，减少生物安全风险。
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第五节
病原微生物实验室 生物安全
生 物 安 全 （ biosafety） 是 生 物 技 术 安 全 （ safety of biotechnology）的简称。
狭义地指现代生物技术的研究、 开发、应用及转基因生物可能对生物 多样性、生态环境和人类健康产生潜 在的危害。
广义地指与生物有关的各种因素 对社会、经济、人类健康及生态环境 所产生的危害或潜在风险。
第二节 消毒灭菌的方法
一、物理消毒灭菌法
热力灭菌法
干热灭菌法
高温杀灭細菌
焚烧----最彻底的灭菌方法 烧灼----直接用火焰灭菌方法 干烤----加热160-180℃ 2小时
湿热灭菌法
高压蒸汽灭菌法
最有效的灭菌方法 121 ℃ 20~30分钟
煮沸消毒法
水煮100 ℃ 5分钟(繁殖体)~2小时(芽胞)
对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病 因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，具有 有效的预防和治疗措施。
对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使 人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具 有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。
对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传 四级 播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗
手术室、传染病房、细菌实
验室
滤过除菌法
用物理阻留的方法 将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的
适用范围 血清、毒素、抗生素以及空气等的 除菌
二、化学消毒剂
种类及作用机制
影响消毒剂作用的因素
消毒剂
种类 浓度
菌龄
细菌
作用时间
种类
环境
有机物
温度
酸硷度
自学
¾第三节 消毒灭菌的运用
¾第四节 影响消毒灭菌效果的
措施。
一、二级实验室不得从事高致病性 病原微生物实验活动。三级、四级实验 室从事高致病性病原微生物实验活动。
第三章
消毒灭菌与 病原微生物实验室
生物安全
消毒
disinfecti on
杀死物体上病原微生物的方法, 并不一定能杀死含芽胞的细菌 或非病原微生物
灭菌 sterilization 杀灭物体上所有微生物的方法。
无菌
asepsis
不存在活菌的意思。防腐 防止或抑制体外细菌Fra bibliotek长繁殖的方法。
antisepsis
病原微生物所致的安全问题，如 病原微生物实验室的安全隐患、生物 武器、生物恐怖、重大传染病的暴发 流行等，也是人类社会所面临的最现 实的生物安全问题。
病原微生物实验室生物安全的核心 是防扩散和防感染。
二、病原微生物实验室的分级
级别
处理对象
一级 二级 三级
对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植 物致病的致病因子。
流通蒸汽消毒法
水蒸汽100 ℃ 15~30分钟(繁殖体)
间歇蒸汽灭菌法
反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌
巴氏消毒法
较低的温度（61 ℃ 30分钟）杀灭致病菌
辐射杀菌法
紫外线
波长200~300m的紫外线具有杀菌作用
杀菌机理：干扰DNA的复制与转录
特
紫外线穿透力较弱
点： 应用范围：空气不消耐毒热物品的表面消毒