苦瓜MAP30基因克隆与鉴定

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苦瓜及其制品的研发

苦瓜及其制品的研发杜晓蓉，张宝元，张苗娟，张雯，周莹，朱婧芸甘肃农业大学食品科学与工程学院（730070）摘要:苦瓜营养丰富，果实含有丰富的蛋白质、糖、维生素等。

且其肉性寒，可清热解毒，明目，养血，滋肝，润肺补肾，抑制肿瘤，降血糖等保健作用。

因此研究苦瓜及其制品有很重要的价值。

关键词:苦瓜；工艺流程；操作要点；保健功能前言近年来，随着人们生活水平的提高，人们的保健意识也在不断增长。

由于苦味素具有降糖、排毒、祛火等功能，苦味食品也快速走上人们的餐桌。

苦瓜为葫芦苦瓜属的一种蔓性植物苦瓜的果实，是人们喜爱的常食蔬菜。

其营养丰富，果实中含有丰富的蛋白质、糖、维生素和多种人体所必需矿物质，特别是Vc含量居于瓜类蔬菜之首；苦瓜中还含有丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸等多种氨基酸和镁、铜、锰、锌等多种人体必需的矿物质。

明代李时珍在书中写道：“苦瓜气味苦、寒、无度，具有除邪热、接老法、清心明目、益气壮阳之功效。

”近年来，美国科学家发现苦瓜中还含有具有保健作用的苦瓜素和苦瓜蛋白，苦瓜素具有降低血糖作用，苦瓜蛋白能增强免疫细胞活性，抑制癌细胞增值或将其杀死，尤其是苦瓜中含有抗艾滋病病毒的功能成分苦瓜蛋白MAP30,它能阻止艾滋病病毒的合成，抑制艾滋病病毒的感染与生长。

由此苦瓜是一种优良的功能食品原料，具有极高的深加工价值。

1 苦瓜乳固体饮料加工技术研究[9，10，12，13]1.1 工艺流程苦瓜→清洗→切片→胶磨→过滤→澄清→过滤→浓缩→干燥→苦瓜干粉→配料→苦瓜乳固体饮料1.2 操作要点1.2.1 选瓜、清洗选取无病、无虫的7~8成熟的绿色新鲜苦瓜，去蒂后用流水洗去泥土、污物，对半分开，去瓤、去籽，沥干水分。

1.2.2 切片、热烫将苦瓜切成0.5cm厚的片，切后即侵入Ph4的柠檬酸缓冲溶液中。

然后将苦瓜片放入微波炉，选用30%微波热烫60s，热汤后用冷水冷却。

1.2.3 胶膜为防止榨汁时汁中成分氧化，可以在苦瓜片中加入0.1﹪的Vc及100mg/kg的葡萄糖酸锌护色，同时也可以提高成品中Vc的含量。

苦瓜保健功能的研究进展_陈敬鑫

苦瓜保健功能的研究进展陈敬鑫，张子沛，罗金凤，王健，丁晓雯*(西南大学食品科学学院，重庆 400716)摘要：苦瓜作为一种药食两用植物，其富含苦瓜多糖、皂苷、多肽、黄酮类化合物等多种活性成分，具有辅助降血糖、降血脂、抗氧化、增强免疫力及预防肥胖等保健功能。

文章综述了国内外学者对苦瓜活性成分和保健功能的研究进展，并对其进行了展望。

关键词：苦瓜；多糖；多肽；皂苷；降血糖；抗氧化Research Advances in Healthy Functions of Bitter GourdCHEN Jing-xin ，ZHANG Zi-pei ，LUO Jin-feng ，WANG Jian ，DING Xiao-wen*(College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400716, China)Abstract ：As a medicinal and edible plant, bitter gourd is rich in polysaccharides, saponins, peptides, flavonoids and other active ingredients, which execute auxiliary hypoglycemic, blood lipid-lowering, antioxidant, immune-enhancing and other healthcare functions. In this paper, recent domestic and international advances in studying active ingredients of bitter gourd and its healthcare functions are reviewed.Key words ：bitter gourd ；polysaccharide ；peptide ；saponin ；hypoglycemic ；antioxidant中图分类号：R151.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2012)01-0271-05收稿日期：2011-02-27作者简介：陈敬鑫(1985—)，男，硕士研究生，研究方向为食品安全与质量控制。

苦瓜DNA_分子标记研究进展

中国瓜菜2023，36（6）：10-15收稿日期：2023-01-14；修回日期：2023-02-11基金项目：国家物种品种资源保护项目（19200085）；农业农村部农产品质量安全标准体系建设（2130109）作者简介：苏国钊，男，在读硕士研究生，从事苦瓜品种分子鉴定技术研究和DNA 指纹库构建。

E-mail ：*****************通信作者：徐振江，男，高级实验师，从事植物品种身份真实性鉴定技术研究。

E-mail ：***********************.cn邓超，男，高级农艺师，从事植物新品种保护和品种测试研究。

E-mail ：********************DNA 分子标记指DNA 水平的遗传标记，可反映物种整个基因组的遗传多样性。

随着现代分子技术不断发展，DNA 分子标记技术已有数十种[1]。

从1980年Botstein 创立第一代基于分子杂交的标记RFLP （restriction fragment length polymor-phism ）[2]，到第二代基于DNA 片段PCR 扩增的分子标记RAPD （random amplified polymorphismDNA ）[3]、AFLP （amplified fragment length polymor-phism ）[4]、SSR （simple sequence repeat ）[5]、ISSR （intersimple sequence repeat ）[6]、SRAP （sequence-related amplified polymorphism ）[7]，再到基于高通量测序的第三代分子标记SNP （single nucleotide polymor-phism ）[8]等，各类分子标记被广泛应用在作物种质鉴定[9]、种子纯度鉴定[10]、遗传多样性分析[11]、重要农艺性状QTL 定位[12]等方面。

苦瓜MAP30基因启动子克隆与单倍型分析

苦瓜MAP30基因启动子克隆与单倍型分析刘子记;朱婕;牛玉;杨衍【摘要】为探明MAP30基因的表达调控规律,从苦瓜种质 Y5中克隆了 MAP30基因上游包括起始密码子在内1682 bp序列,选取转录起始位点上游1500 bp序列利用PlantCARE在线启动子预测工具进行分析,结果表明:MAP30启动子除了含有核心元件TATA-box和CAAT-box外,还含有大量的光响应元件、植物激素脱落酸响应元件、热胁迫响应元件、干旱应答元件、水杨酸应答元件等,该预测结果表明,MAP30启动子可能参与光、厌氧、逆境胁迫、脱落酸、水杨酸和乙烯等诱导,同时它还可能参与胚乳高效表达及昼夜节律调控.以30份苦瓜种质为材料,分析了MAP30启动子区域SNPs和InDels分布情况,共发现37个SNPs位点和6个InDels,SNPs分组发现,30份苦瓜种质资源MAP30基因启动子共存在3种单倍型,Y5、Y7、Y16、Y39、Y58、Y60、Y66、Y77、Y83、Y96、Y100、Y112、Y121属于第1组,Y43、Y50、Y90、Y108、Y113、Y115、Y140、Y141、Y144属于第2组,Y69、Y72、Y85、Y131、Y139、Y146、Y147、Y153属于第3组.结合顺式调控元件的位置,其中5个SNPs,342位点的T/C,584位点的A/G,783位点的G/T,872位点的A/G,1087位点的T/G,位于顺式调控元件内部,涉及的顺式调控元件分别为MBSI、ABRE、ARE、5UTR Py-rich stretch、GAG-motif、TC-rich repeats,SNP导致转录因子结合位点发生改变,可能对MAP30基因的表达调控有重要作用.为进一步揭示MAP30基因转录调控机制奠定理论基础.%In order to explore the expression regulation of MAP30 gene,the upstream sequence,1 682 bp in length including start codon of MAP30 gene was cloned in bitter gourd (Y5).1 500 bp upstream of the transcription start site was selected for analysis based on PlantCARE promoter predictiontools.The results showed that in addition to containing the core elements of TATA-box and CAAT-box,the MAP30 promoter also contained light response ele-ments,abscisic acid response element,heat stress response element,drought response element,salicylic acid response element etc.The prediction results suggested that MAP30 promoter might be involved in the induction of light,anaero-bic,stress,abscisic acid,salicylic acid and ethylene,and it might also play important roles in the efficient expres-sion in endosperm and circadian rhythm regulation. Take 30 bitter gourds germplasm as materials,the SNPs and In-Dels distribution in promoter region of MAP30 was analyzed.37 SNPs loci and 6 InDels were found.3 haplotypes were identified in MAP30 gene promoter through SNPs grouping.Y5, Y7, Y16, Y39, Y58, Y60, Y66, Y77, Y83, Y96,Y100,Y112 andY121 belonged to group 1,Y43,Y50,Y90,Y108,Y113,Y115,Y140,Y141 andY144 belonged to group 2,Y69,Y72,Y85,Y131,Y139,Y146,Y147 and Y153 belonged to group 3. Combining with the positions of cis regulatory elements,5 SNPs,including T/C in 342 loci,A/G in 584 loci,G/T in 783 loci,A/G in 872 loci,T/G in 1087 loci,located in the cis regulatory elements region,the involving cis regulatory elements were MBSI,ABRE,ARE,5UTR Py-rich stretch, GAG-motif and TC-rich repeats. The changes of the transcrip-tion factor binding sites caused by SNP may play important roles in regulating the expression of MAP30 gene. This study laid a theoretical foundation for further revealing the transcription regulation mechanism of MAP30 gene.【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2018(033)001【总页数】8页(P25-32)【关键词】苦瓜;MAP30;启动子;单倍型【作者】刘子记;朱婕;牛玉;杨衍【作者单位】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室,海南儋州 571737;海南大学热带农林学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室,海南儋州 571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室,海南儋州571737【正文语种】中文【中图分类】Q78;S642.5基因启动子是一段特殊的DNA序列，能与RNA聚合酶结合主导基因的起始转录位置[1]，根据转录方式不同，启动子主要包括3种类型，分别为组成型启动子、组织特异型启动子和诱导型启动子[2-3]。

苦瓜活性成分的提取和用途

苦瓜活性成分的提取和用途化学世界苦瓜活性成分的提取和用途王丰玲,张英锋孙,马子川.(1.北京师范大学化学学院,北京100875;2.河北省秦皇岛市第一中学,河北秦皇岛066000;3.河北师范大学化学与材料科学学院,北京050016)苦瓜(Momordicacharantia,MC)为葫芦科苦瓜属植物,因有特殊苦味而得名.作为药食同源的植物,苦瓜的根,茎,叶,花,果实,种子皆可入药.苦瓜具有清热解毒,降低血糖,抗突变,抗HIV,抗肿瘤,抗生育,抗菌,免疫调节等作用.苦瓜中的活性成分种类繁多,已经分得了三萜类,生物碱类,甾类化合物,糖类,蛋白质,有机酸类及微量元素等多种化学成分[1].其中,主要成分是三萜苷类,有效成分是水溶性蛋白质和三萜烯苷葫芦素衍生物类化合物等.?1苦瓜中活性成分的提取1.1工艺流程_2将鲜苦瓜切碎,晾干,粉碎成苦瓜粉,用溶剂浸提得到提取液.然后离心得上层清液,用乙醇沉淀上层清液,过滤分离.多糖类物质不溶于乙醇,在浓缩液中呈纤维状沉淀析出.沉淀经纯化,干燥得苦瓜多糖,滤液经脱脂,脱蛋白等进一步处理得苦瓜皂苷.苦瓜多糖是由鼠李糖,阿拉伯糖,甘露糖,葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖,水溶性,该多糖含有I)_ 吡喃糖苷键,是活性多糖.苦瓜皂苷包括甾体类皂苷和三萜类皂苷(主要是葫芦素烷型四环三萜和乌苏酸型五环二萜皂苷), 侧链含有糖基.其水溶液振摇时能产生大量持久的蜂窝状泡沫,与肥皂相似而得名.苦瓜活性成分提取综合提取工艺流程如图1所示.1.2提取1.2.1溶剂浸提法[3在苦瓜活性物质的综合提取工艺中,一般采用苦瓜粉一溶剂浸提一提取液一离心一乙醇沉淀上清液一滤液一过滤分液一乙醇沉淀,纯化,干燥树脂吸附苦瓜多糖乙醇洗脱一苦瓜皂苷图1苦瓜活性成分综合提取工艺流程水提,醇沉法.以水作为溶剂,在一定温度下,将苦瓜粉加热,回流,使有效物质得到充分浸提.再用乙醇沉淀多糖类物质,过滤分离.沉淀和滤液经精制, 纯化后分别为苦瓜多糖和苦瓜皂苷.影响有效成分提取的因素主要有:浸提温度,浸提时间,料水比等(如表1),用正交实验(表2)对提取工艺参数进行优化.最后,得出最佳工艺条件为70.C,水浴3h,料水比1:20.还可用乙醇作提取溶剂,但是综合提取苦瓜有效成分时,水提法在提取率上优于单独的醇提法,并且能保持其结构的完整性和生物活性.表l实验因素水平l602l:l0l27031:1S238041:2031.2.2酶提法[4取未成熟的新鲜苦瓜,洗净去籽,制成匀浆,然后加入蒸馏水,用柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液调pH 值,加入酶,在一定温度下水浴加热,使活性物质充. 分浸提该法选用酶液(一般是纤维素酶和果胶酶为主体的复合酶)来分解构成细胞壁和细胞间质的纤维素,半纤维素和果胶质,使其疏松,膨胀,崩溃,从而增大了有效成分的扩散面积,减小了传质阻力,提高了有效成分的得率.影响因素有pH,酶加量,提取温度,料水比等.酶解提取条件温和,减少了活性物质的损失和溶剂消耗.1.3分离,纯化_31.3.1膜分离膜分离是一种新型的分离技术.利用半透膜(微滤膜,超滤膜,透析膜等)作为选择障碍层允许某些组分透过而保留混合物中其它组分,而达到分离的目的.苦瓜皂苷的相对分子质量多为几百,苦瓜多糖的相对分子质量在8000左右,苦瓜蛋白的相对分子质量在10,20万左右.利用相对分子质量不同,采用不同孑L径的膜组件进行分离.研究表明,先用0.2m孑L径的混合纤维素微孔滤膜,再依次采用截流相对分子质量为6000,20000,100000的膜,从而将将苦瓜皂苷,苦瓜多糖,基金项目:河北省教育厅科学研究”十一五”规划课题No.06010288教育厅第6期化学世界表2正交实验结果14689) Kl(皂苷K2(皂苷)K3(皂苷)R(皂苷)Kl(粗多糖)K2(粗多糖)K3(粗多糖)R(粗多糖)1Z111.8571.5851.6590.2721..9771.9001.8220.1550.3440.3930.4070.6280.8710.7450.7620.7870.762备注:R吸光度的极差苦瓜蛋白等分开.膜分离法具有设备简单,操作方便,处理效率高,无化学变化,节约能源等优点.不仅避免了传统方法中有机溶剂除脂除蛋白等带来的溶剂浪费和环境污染,而且增加了其作为药品的安全性能.1.3.2大孔吸附树脂纯化大孔吸附树脂是一种难溶于一般有机溶剂的高分子化合物,其表面积大,颗粒均匀,能选择性吸附某些有机化合物,对皂苷提取液和多糖提取液的粗分离以及除水溶性色素,无机盐等杂质显示出独特的效果.当把结构不同的A,B两种物质的混合溶液加入到大孔吸附树脂层析柱时,注入适宜的洗脱.剂,控制流速使其下流,借助A,B两种物质对吸附剂结合力的差异性而分离.混合物在层析柱中的分离过程实际上是吸附,解吸附,再吸附的过程.大孔吸附树脂具有选择性好,稳定性强,成本低等优点. AB-8型大孔吸附树脂对苦瓜多糖有特异吸附性,适于吸附苦瓜多糖.静态吸附容量实验表明,每个树脂床体积(约38cm,柱径2cm),约可处理150 mL多糖粗提液.NKA型大孔吸附树脂对苦瓜皂苷有特异吸附性,适于吸附苦瓜皂苷.静态实验表明,每个上述相同的树脂床,约可处200mL皂苷粗提液..2苦瓜的用途2.1降血糖苦瓜果实中存在着多种降血糖活性成分,主要是三萜类,甾类,苷类和多肽类等.其高效低毒,稳定性好,作用强于合成药,可用于糖尿病的治疗,并有巨大的开发潜力.作用机制可能为:(1)刺激活性细胞分泌胰岛素,类胰岛素,促进肝糖元的合成,即增加肝脏对葡萄糖的利用.(2)调节某些酶在糖尿病小鼠中的含量和表达.另外,不同成分的降糖物质可能有协同作用. 2.2抗氧化汀生物体内SOD可清除,苦瓜活性物质中的少数几种核糖体失活蛋白有类SOD活性,可有效消除自由基,减少其对机体的氧化损伤.但是作用机理是否与S0D的催化机制完全相同,还待于进一步研究.苦瓜皂苷能显着抑制剧烈运动后各组织中的MDA升高且有剂量效应.它还能显着提高SOD活力和血清,肝脏中GSH—PX的活力,从而延缓生物体的衰老进程.2.3抗菌,抗病毒【8]’苦瓜具有广谱抗菌作用,对11种165株革兰氏阳性球菌,杆菌和革兰氏阴性杆菌等都有抑制作用. 苦瓜已成为一种天然抗菌食品,适合眼部,泌尿系统感染或有疖肿的患者食用.苦瓜的抑菌活性较强, 并具有良好的热稳定性和紫外光稳定性.苦瓜素能3Z7891245们盯曲?次B次cOOOOOOOOO主主28194417???加加舳舳跚踮盯曲M111O1221化学世界明显抑制柯萨奇(B.CVB.)病毒RNA复制,有望成为一种良好的抗柯萨奇病毒性心肌炎的治疗药物. 苦瓜籽中提取的MAP30蛋白不进入正常细胞,对人体正常细胞无毒性,但是却可以选择性地杀死被HIV感染的淋巴细胞和巨噬细胞.作用机制:(1) MAP30可以使病毒长末端重复序列(LTR)的超螺旋结构不可逆失活,从而干扰HIV一1病毒DNA的复制.(2)抑制HIV一1整合酶.2.4抗癌u”“苦瓜种仁中提取出来的a一苦瓜素,苦瓜素能干扰癌细胞的正常代谢,具有抗癌作用.研究表明, 两种苦瓜素对人胃癌NKM细胞株的DNA,RNA和蛋白质的合成均有明显抑制作用.苦瓜是抗癌物质VB17的重要来源,VB17能特异性地选择杀伤癌细胞,对正常的人体细胞却无破坏作用.核糖体失, 活蛋白(RIP)是一组糖苷酶,主要富集在种子,根茎及叶中.RIPs能使真核细胞核糖体28SrRNA的第4323位腺嘌呤糖苷键水解,断裂,蛋白质合成受到不可逆的抑制,从而导致癌细胞凋亡.2.5抗生育.苦瓜对生育有一定影响,从苦瓜中提取的一种植物蛋白可使小鼠睾丸萎缩,精子数量减少,睾丸核糖核酸及蛋白质含量减少.a,苦瓜素均可导致怀孕小鼠的流产.原因如下:a一苦瓜素在怀孕早期可影响到桑葚胚的发育,后期主要对滋养层细胞起毒害作用.苦瓜素在怀孕早期可抑制内胚层分化.二者对器官的早期发育均有致畸作用,原因可能是苦瓜素对内脏卵黄素有毒害作用所致.人们正试图利用苦瓜的抗生育作用来开发男性避孕药.3展望苦瓜种植广泛,兼有食用性和优良的药理活性,已引起人们的广泛关注.苦瓜全株均可入药,并且活性成分种类众多.苦瓜果实性寒,味苦,具有祛暑清热,明目,降火等功能.苦瓜籽可作为涂料原料的良好来源,苦瓜叶藤也有很高的药用价值.苦瓜特有的苦味与苦瓜苷和苦味素有关,可刺激胃液分泌, 提高食欲,促进消化.作为新一代疗效高,毒副作用小的天然药物,目前其主要用于治疗糖尿病和痢疾. 1998年,美国凯里博士从苦瓜中提取了极具生物活性的成分一高能清脂素,即苦瓜素(RPA).RPA只作用于小肠,通过改变肠细胞网孔,从而阻止多糖, 脂肪等高热能大分子物质的吸收,使摄取的脂肪和多糖大大减少,具有减肥瘦身的作用.RPA不进入人体血液,不参与人体代谢,无毒副作用,曾经一度风靡欧美,日本等国.目前,苦瓜已被制成苦瓜降糖胶囊,苦瓜茶,苦瓜冰激淋,苦瓜脯,苦瓜药酒,苦瓜保健啤酒等.随着分离和提纯技术的进步,苦瓜的药理活性必将更清楚地为人们所认识.参考文献:[1]潘国庆.青海科技[J],2004,(6):3031.[2]高晓明.苦瓜有效成分的提取,纯化工艺研究.西北大学硕士学位论文[D].2006.9.[3]韩慧.苦瓜活性成分的提取纯化及生物活性的研究.河北工业大学(硕士论文)[D].20—29.[4]高晓明,张效林,李振武.化学与生物工程[J],2006, 23(3):51-52.[5]吕丽红,赵余庆.中药材[J],2002,25(6):449—450.[6]傅明辉.药物生物技术[J],2001,8(5):248—249.[7]王先远,蒋与刚,金宏,等.解放军预防医学杂志[J],2001,19(5):317320.[8]向亚林,凌冰,张茂新.天然产物研究与开发[J], 2005,17(12):243-244.[9]李琛,温博贵,王云.中草药[J],2004,35(9):1069-1070.[1O]王楠,袁唯.食品科技[J],2006,(1):126—129. [11]郎海滨,糜漫天,程天民,等.第三军医大学学报[J], 2003.25(13):1】57—1】59.抗震救灾众志成城。

适用于新高考新教材备战2025届高考生物一轮总复习第10单元生物技术与工程课时规范练52基因工程的基

课时规范练52 基因工程的基本工具与操作程序必备知识基础练考点一重组DNA技术的基本工具1.(2023·广东汕头统考)“工欲善其事,必先利其器”,基因工程需用到多种工具。

下列关于基因工程的基本工具的说法,错误的是( )A.在构建基因表达载体时,通常用同种限制酶或能产生相同黏性末端的限制酶切割载体和含有目的基因的DNA片段B.E.coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶都能“缝合”黏性末端,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键C.基因工程中真正被用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行人工改造的D.基因工程中使用的载体还可以是各种病毒,如可以利用改造后的噬菌体将基因表达载体导入动物受精卵细胞2.下列有关限制酶和DNA连接酶的叙述,正确的是( )A.用限制酶酶切获得一个外源基因时得到两个切口,有两个磷酸二酯键被断开B.限制酶识别序列越短,则该序列在DNA中出现的概率就越大C.序列—CATG↓—和—G↓GATCC—被限制酶切出的黏性末端碱基数不同D.T4 DNA连接酶和E.coli DNA连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接3.(2023·北京海淀模拟)科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜,培育出转基因抗病毒番木瓜,Ti质粒结构模式如图所示。

下列叙述正确的是( )A.农杆菌的T-DNA与番木瓜基因发生重组B.构建重组质粒需要限制酶和DNA聚合酶C.含重组Ti质粒的农杆菌具有四环素抗性D.转基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性考点二基因工程的基本操作程序4.由于某目的基因酶切后的末端为平末端,载体E只有产生黏性末端的酶切位点,需借助中间载体P 将目的基因接入载体E。

据图分析,下列叙述正确的是( )A.通过PCR扩增获取目的基因是基因工程的核心工作B.为了便于该目的基因接入载体E,可用限制酶Eco RⅤ或SmaⅠ切割载体PC.载体P只能作为中间载体,是因为其没有表达该目的基因的启动子与终止子D.若受体细胞表现出抗性基因的相应性状,表明重组载体成功导入受体细胞5.(2023·福建龙岩模拟)为提高红豆杉细胞培养物中紫杉醇的产量,研究人员构建紫杉醇合成关键酶基因(Bapt)的超表达载体,并将其导入红豆杉细胞,具体流程如图。

苦瓜化学成分及其功能特性研究进展

苦瓜化学成分及其功能特性研究进展彭兴兴，林丽霞，彭飞飞，吴颖茹，陈晓丽，罗　珊（江门职业技术学院材料与食品学院，广东江门 529030）摘　要：苦瓜含有黄酮类、多糖类、皂苷、蛋白和多肽类等活性成分，具有降血糖、抗炎和抗氧化、免疫调节等功能。

本文旨在总结苦瓜营养成分、活性成分及其功能特性的研究进展，以期为苦瓜的进一步发展提供指导。

关键词：苦瓜；营养成分；活性成分；功能特性Research Progress on Chemical Components and Functional Characteristics of Momordica charantiaPENG Xingxing, LIN Lixia, PENG Feifei, WU Yingru, CHEN Xiaoli, LUO Shan(School of Materials and Food, Jiangmen Polytechnic, Jiangmen 529030, China) Abstract:Momordica charantia contains flavonoids, polysaccharides, saponins, proteins, peptides and other active ingredients, which have the functions of lowering blood sugar, anti-inﬂammatory and antioxidant, immune regulation and so on. The aim of this paper is to summarize the research progress of nutritional components, active components and functional properties of Momordica charantia, in order to provide guidance for further development of Momordica charantia.Keywords:Momordica charantia; nutrients; active ingredients; functional characteristics苦瓜是一种常见的蔬菜，具有丰富的营养价值和药用潜力，被广泛种植和消费，尤其在亚洲地区[1-2]。

苦瓜MAP30基因的密码子优化及在毕赤酵母中的表达

出版社，２００９：２５ — ４２．
ＳｔｕｄｙｏｎＣａｌｌｕｓＩｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄＨａｎｔｌｅｔＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＤｒａｃａｅｎａｇｏｄｓｅｆｆｉａｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴａｋｉｎｇｔｈｅｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔｓｏｆＤｒａｃａｅｎａｇｏｄｓｅｆｆｉａｎａａｓｅｘｐｌａｎｔ，ｔｈｅｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｐｌａｎｔｌｅｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
子（ｐＰＩＣ９）相比提高了安全性，适合应用到医药领域。
关键词：苦瓜；￣＇ＬＡＰ３０；毕赤酵母；ｐＧＡＰＨ０ｃ；优化基因
中图分类号：Ｓ６４２．５文献标识码：Ａ文章编号：１００１－０００９（２０１３）２４－０１１２－０４
摘
要：以苦瓜为试材，采用ＳＤＳ — ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ — ｂｌｏｔ的方法，研究经密码子优化后的苦
瓜ＭＡＰ３０（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａａｎｔｉ — ＨＩＶｐｒｏｔｅｉｎｏｆ３ＯｋＤａ）基因在新型毕赤酵母中的表达。结果表明：与未优化基因相比，优化基因在新型毕赤酵母中的表达量有所提高。ｐＧＡＰＨａ与甲醇诱导型启动

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２０１３年１月第１１卷第２期
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实验研究・５７
苦瓜ＭＡＰ３０基因克隆与鉴定
郝林姜波韩从辉庞慧
何厚光付昱张俊杰张培影
２徐州市中心医院中心实验室，江苏徐州２２１００９）（１徐州市中心医院泌尿外科，江苏徐州２２１００９；
【摘要】目的克隆苦瓜Ｉ型核糖体失活蛋白ＭＡＰ３０全长基因并构建其表达载体。方法提取苦瓜的基因组ＤＮＡ，根据Ｇｅｎｅｂａｎｋ中已公开发表的ＭＡＰ３０序列，设计出一对特异性引物。采用ＰＣＲ技术，从苦瓜的基因组ＤＮＡ中获得ＭＡＰ３０全长序列共８６０ｂｐ，克隆入ｐＥＴ－２８ａ（＋）
１Ｌ１ＵＬ１“Ｌ
调节等作用。苦瓜的活性成分种类繁多，包括苦瓜Ｉ型核糖体失活蛋
白（ＭＡＰ３０）、三萜类、生物碱类、甾类化合物、糖类、有机酸类及
２５ｕＬ
５０Ｌ
微量元素等。ＭＡＰ３０是苦瓜中相对分子质量为３００００的抗获得性免疫缺陷综合征病毒的蛋白质，它属于单链Ｉ型核糖体失活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＩＰ）家族Ⅲ ，此类蛋白普遍存在于高等植物中，因可使真核细胞核糖体失活而得名，它具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌等多
体积
２ｕＬ
１ＯｕＬ０．５ｕＬ０．５ｕＬ
２０¨Ｌ
① 引物设计：根据ＮＣＢＩ上的序列设计扩增引物：Ｆｏｒｗａｒｄ：
５’ ．ＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＴＧＡＡＡＴＧＣＴＴＡＣＴＡＣ．３’ ｌＲｅｖｅｒｓｅ：５’ ．ＣＣ
载体中，进行酶切及测序鉴定。结果克隆了ＭＡＰ３０全长基因，经测序证实与Ｇｅｎｂａｎｋ中收录的ＳＥＡ基因序列同源性迭１００％。结论本
研究成功地克隆了ＭＡＰ３０全长基因，为进一步研究ＭＡＰ３０基因的靶向抗肿瘤研究奠定了基础。
２×Ｓｏｌｕｔｉｏｎ
种生物活性。由于ＭＡＰ３０抗肿瘤活性强、毒性低，已成为近年抗癌药
物研究的热点。本研究克隆苦瓜Ｉ型核糖体失活蛋白（ＭＡＰ３０）全长基因，为进一步研究ＭＡＰ３０基因片段在抗肿瘤中的作用提供了实验基
础。
ｐＥＴ－２８ａ（＋）的连接反应体积
８ＨＬ１“Ｌ２Ｌ２０Ｌ
１材料与方法
１．１材料
￣１］ｄｄＨ２Ｏ至总体积
幼嫩苦瓜１个，大肠埃希菌ＤＨ５ａ和质粒ｐＥＴ－２８ａ（＋）为Ｓａｎｇｏｎ公司产品。Ｔ４ＤＮＡ连接酶，ＴａｑＤＮＡ聚合酶，限制性内切酶ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ均购自Ｔａｋａｒａ公司，质粒小量提取试剂盒购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，其余试剂均为分析纯。
｝ｇｌｄｄＨ２Ｏ至总体积
ＧｃＴＣＧＡＧＡＴＴＣＡｃＡＡＣＡＧＡＴＴＣｃ－３ ’，其中红色部分分别为限制性
３７℃作用２ｈ后１％琼脂糖凝胶电泳分析，各选择酶切鉴定正确的两个克隆送Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司测序。２结果
内切酶ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ酶切位点序列。②模板制备：刮取幼嫩苦瓜瓜皮，于液氮中研磨，按照植物基因组ＤＮＡ提取试剂盒进行苦瓜基因组
热解毒、降低血糖、抗突变、抗ＨＩＶ、抗肿瘤、抗生育、抗菌、免疫
表１ＰＣＲ扩增ＭＡＰ３０基因的反应体系成分模板上游引物（１０Ｍ）下游引物Ｐ（１０ “ Ｍ）２ＸＴａｑ酶ＰＣＲ反应混合物２１１ｄｄＨ：Ｏ至总体积体积
１．２苦瓜ＭＡＰ３０基因的扩增
１．４重组质粒的酶切鉴定和序列测定对重组质粒进行酶切鉴定，反应体系如表３。
表３ｐＥＴ－２８ａ（＋）一ＭＡＰ３０酶切反应体系成分１０ × 缓冲液重组质￣．ＤＮＡ
ＢａｍＨＩＸｈｏ１Ｉ
【关键词】苦瓜ｉ型核糖体失活蛋白；载体构建；序列分析
中图分类号：Ｒ３９４
文献标识码：Ｂ
文章编号：１６７１ — ８１９４（２０１３）０２－００５７－０２
苦瓜（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ，ＭＣ）为葫芦科苦瓜属植物，是一种药食同源的植物，其根、茎、叶、花、果实、种子皆可人药。具有清
将ＭＡＰ３０目的基因的ＰＣＲ产物与ｐＥＴ－２８ａ（＋）载体酶切产物进行连接，１６＂（２反应过夜。转化ＤＨ５ａ感受态细胞，涂氨苄抗性平板，３７＂Ｃ过夜培养，筛选克隆，反应体系如表２。
表２ＰＣＲ）￣物成分ｐＥＴ－２８ａ（＋）载体ＭＡＰ３０基因