红景天对低氧体外大鼠骨髓破骨细胞、OPG和TNF-α基因表达的影响
红景天苷对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞SP和NK-1 R表达的影响
组未 检测 到 Ｎ Ｋ 一 １ Ｒ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的表达 ， 各剂量红景天苷组骨髓 细胞 中 Ｎ Ｋ 一 １ Ｒ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的表达水平 随用药剂量 的增加 而升高。结论 ：
Ｅｆ ｆｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｓ ａ ｌ ｉ ｄ ｒ ｏ ｓ ｉ ｄｅ ｏ ｎ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｓ ｕ ｂｓ ｔ ａ ｎｃ ｅ Ｐ ａ ｎｄ ｎｅ ｕ ｒ ｏ ｋ ｉ ｎｉ ｎ一 １ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐｔ ｏ ｒ ｏ ｆ ｂｏ ｎｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｂｏ ｎ ｅ ｍａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｄｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ａ ｎｅ ｍｉ ａ ｍｉ ｃ ｅ
高外周血血小板 （ Ｐ Ｌ Ｔ ） 数（ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） 。免疫组化结果 显示 ， 与对照组相 比， 模 型组骨髓细胞中 ｓ Ｐ表达明显降低 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， Ｎ Ｋ 一 １ Ｒ的表达有所降低 （ Ｐ ＞ ０ ． ０ ５ ） ； 低剂量 、 中剂 量和高剂 量红景天苷组骨髓细胞 中 ｓ Ｐ及其 受体 Ｎ Ｋ 一 １ Ｒ表达 明显增强 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） 。
（ Ｎ Ｋ 一 １ Ｒ） ｏ ｆ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍ ａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ （ Ｂ ＭＣ ｓ ） ｉ ｎ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍ ａ ￣ ｏ ｗ（ Ｂ Ｍ） ｄ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ａ ｎ ｅ ｍ ｉ ａ ｍ ｉ ｃ ｅ ， ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｉ ｔ ｓ ｒ ｏ ｌ ｅ ｓ ｆ ｏ ｒ ｈ ｅ ｍ ａ ｔ ｏ ｐ ｏ ｉ ｅ ｔ ｉ ｃ
红景天实验报告
一、实验背景随着全球气候变化和人类活动的影响，高海拔地区缺氧问题日益严重，导致许多高海拔相关疾病的发生。
急性暴露于高海拔地区由于缺氧导致认知功能障碍，且重度缺氧性脑损伤（HHBI）可引起一系列病理反应，如不及时治疗，会迅速发展并危及生命。
因此，迫切需要进一步研究高海拔相关疾病的预防和治疗措施。
红景天作为一种著名的藏药，在高海拔缺氧疾病治疗中具有脑保护作用。
然而，它对高海拔缺氧脑损伤（HHBI）的代谢影响仍不完全清楚。
本研究旨在探讨红景天抗缺氧作用及相关机制。
二、实验目的1. 通过体内和体外实验，研究红景天提取物（RCE）和红景天苷（Sal）对HHBI小鼠模型的保护作用。
2. 分析RCE和Sal对HHBI小鼠脑组织损伤、血脑屏障功能障碍的影响。
3. 探讨RCE和Sal的抗缺氧作用及相关机制。
三、实验材料与方法1. 实验动物：清洁级HHBI小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由成都中医药大学实验动物中心提供。
2. 实验药物：红景天提取物（RCE）、红景天苷（Sal）、RCE标准品、Sal标准品，均由成都中医药大学药学院提供。
3. 实验仪器：荧光显微镜、图像分析系统、酶标仪、液相色谱-质谱联用仪、凝胶成像系统等。
4. 实验方法：（1）分组与处理：将HHBI小鼠随机分为4组，分别为正常组、HHBI组、RCE组、Sal组。
RCE组和Sal组分别给予RCE和Sal干预，剂量分别为100mg/kg和50mg/kg，连续给药7天。
（2）脑组织损伤检测：采用H&E染色和TUNEL染色观察HHBI小鼠脑组织损伤情况。
（3）血脑屏障功能障碍检测：采用EB染色法检测血脑屏障通透性。
（4）代谢组学分析：采用液相色谱-质谱联用技术对HHBI小鼠脑组织进行代谢组学分析。
（5）相关机制研究：通过Western blot技术检测HHBI小鼠脑组织中相关蛋白的表达水平。
四、实验结果1. RCE和Sal改善HHBI小鼠脑组织损伤：H&E染色结果显示，HHBI组脑组织切片有严重病理损伤，神经元核固缩、深染并形成空泡。
红景天苷体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化及其分子机制
红景天苷体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化及其分子机制红景天苷体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化及其分子机制摘要：干细胞是一类有着自我更新和多向分化潜能的细胞，广泛应用于组织工程和再生医学领域。
本研究旨在探究红景天苷在体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞髓样细胞发展为神经细胞的作用机制。
实验结果显示，红景天苷能够促进骨髓间充质干细胞增殖和神经分化，并且通过转录因子的调控和信号途径的激活参与这一过程。
这一研究对于深入了解细胞发育和神经分化机制具有重要意义，并为干细胞研究以及神经修复治疗提供了新思路。
关键词：红景天苷；骨髓间充质干细胞；神经细胞；分化；分子机制引言：干细胞是一类特殊的细胞，具有自我更新和多向分化潜能，能够分化成各种细胞类型，引起广泛的关注。
骨髓间充质干细胞是一种重要的干细胞种类，具有良好的增殖能力和多向分化潜能，可用于组织再生和修复等领域。
因此，研究干细胞的分化机制对于促进组织工程和再生医学的发展具有重要意义。
红景天苷是红景天草药中的有效成分，已被证实具有多种生物活性。
研究发现红景天苷具有促进神经细胞分化的潜能，但其作用机制尚未完全阐明。
因此，本研究旨在探究红景天苷在体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的分子机制。
材料与方法：1. 实验动物：使用小鼠骨髓作为实验动物。
2. 细胞培养：将小鼠骨髓间充质细胞分离，并进行培养。
3. 实验组设：将小鼠骨髓间充质细胞分为红景天苷处理组和对照组。
4. 细胞分化检测：利用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR技术检测细胞分化情况。
5. 分子机制探究：通过Western blot和实时荧光定量PCR技术检测关键转录因子和信号途径的表达。
结果与讨论：实验结果显示，红景天苷处理组的骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的速度明显加快，且分化效率较对照组显著提高。
进一步的实验发现，红景天苷显著促进了神经分化相关基因的表达，如神经元特异性标志物β-III-tubulin和神经营养因子BDNF的表达。
红景天苷对大鼠急性心肌缺血和乳鼠心肌细胞的保护作用(精)
红景天苷对大鼠急性心肌缺血和乳鼠心肌细胞的保护作用作者：颜天华马莹杨伟王秋娟贾莹潘志伟【摘要】目的研究红景天苷对大鼠急性心肌缺血的保护作用，以及对乳鼠心肌细胞于缺氧/复氧损伤和氧化损伤下的影响。
方法以垂体后叶素（pituitrin）制备大鼠急性心肌缺血模型，观察急性心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图的变化。
体外作者：颜天华马莹杨伟王秋娟贾莹潘志伟【摘要】目的研究红景天苷对大鼠急性心肌缺血的保护作用，以及对乳鼠心肌细胞于缺氧/复氧损伤和氧化损伤下的影响。
方法以垂体后叶素（pituitrin）制备大鼠急性心肌缺血模型，观察急性心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图的变化。
体外培养原代乳鼠心肌细胞，采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤和过氧化氢(H2O2)诱导造成氧化损伤模型。
MTT法测定细胞存活率并测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)浓度。
结果红景天苷能显著抑制垂体后叶素所造成的心电图T波抬高和J点升高；能明显提高缺氧/复氧模型和氧化损伤模型下的细胞存活率，降低培养液中的LDH和CK浓度。
结论红景天苷对急性心肌缺血损伤、缺氧/复氧损伤和氧化损伤均有较好的保护作用。
【关键词】红景天苷急性心肌缺血心肌细胞缺氧/复氧氧化损伤红景天为景天科景天属Rhodiola L.多年生草本植物，主要生长于高寒、缺氧的地区，因此具有极强的环境适应能力和生命力。
在我国红景天的应用已有悠久历史，在西藏被誉为“高原人参”，为藏族习用药材。
红景天主要有效成分有红景天苷、酪醇，此外含有淀粉、蛋白质和具有生物活性的多种微量元素，国内外的研究主要集中在红景天苷、红景天素和酪醇上［1，2］。
近年来的研究结果表明，红景天具有抗肿瘤、抗衰老、抗缺氧、抗寒冷、抗辐射等多种功能。
本实验研究红景天苷对急性心肌缺血损伤的影响以及对缺氧/复氧损伤和氧化损伤的心肌细胞的影响，为开发具有临床应用价值的抗心肌缺血新药提供依据。
1 器材1.1 药品与试剂注射用红景天苷，由成都恒基医药科技有限公司提供，纯度大于90%；葛根素注射液，北京协和药厂生产；注射用盐酸地尔硫卓（合贝爽），天津田边制药有限公司进口分装；垂体后叶素注射液，上海第一生化药业有限公司生产；连二亚硫酸钠，天津市福晨化学试剂厂生产，分析纯；溴化-(4、5二甲基-2-噻唑基)-2、5二苯基四氮唑(MTT)，美国sigma公司出品；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及肌酸激酶(CK)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；其它试剂均为市售分析纯。
红景天对卒中后抑郁大鼠海马细胞因子干预作用的实验研究
红景天对卒中后抑郁大鼠海马细胞因子干预作用的实验研究隋汝波;张磊;臧丽娥【摘要】目的:探讨红景天对卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)大鼠海马细胞因子的干预作用.方法:各组进行行为学观察和测试、海马组织HE染色及TNF-α、IL-1β、IL-6含量测定.结果:与PSD组比较,红景天低、中、高剂量组均能不同程度减少海马组织TNF-α、IL-1β含量而提高IL-6的含量,减少海马神经细胞的受损程度,提高抑郁的行为学评分.其中,中、高剂量组较低剂量组作用更明显.结论:PSD大鼠海马组织细胞因子网络稳态发生改变,红景天对PSD大鼠海马有保护作用.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2010(016)009【总页数】3页(P816-818)【关键词】卒中后押郁;海马;细胞因子;红景天【作者】隋汝波;张磊;臧丽娥【作者单位】辽宁医学院附属第一医院,神经内科,辽宁,锦州,121001;辽宁医学院,辽宁,锦州,121001;辽宁医学院附属第一医院,神经内科,辽宁,锦州,121001【正文语种】中文【中图分类】R285.5PSD是脑卒中后的一个常见的并发症，显著增加了卒中患者的病死率、致残率，降低了患者的生存质量，给患者及其家庭乃至社会带来了十分沉重的负担，已越来越引起学者的关注。
目前虽已有各种药物用于临床，但疗效均不理想，无效率仍高达20%～40%［1］。
近年的研究提出海马损伤及炎症因素参与了PSD的发生发展，故如果能减少PSD时的海马损伤及稳定细胞因子网络，将能够有效治疗PSD。
红景天已有多年临床应用经验，在治疗缺血性心脏病及缺血性脑血管病等方面已取得了良好疗效。
对其在 PSD中的作用国内报道少见，而其对PSD时海马组织细胞因子的影响更尚未见报道。
本文根据红景天免疫双向调节功能的中医理论，观察其对大鼠PSD时海马组织细胞因子 TNF-α、IL-6及IL-1β水平的影响，以及海马组织的改变及其对PSD大鼠行为学的影响，从而为PSD的治疗提供新的思路及理论基础。
红景天苷对高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71+有核红细胞凋亡的影响
第 49 卷第 5 期2023年 9 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.5Sep.2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230510红景天苷对高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71+有核红细胞凋亡的影响郭勇1, 王生艳2, 易静静1, 崔森3（1. 青海大学研究生院，青海西宁810000；2. 青海卫生职业技术学院临床医学系，青海西宁810000；3. 青海大学附属医院血液科，青海西宁810000）［摘要］目的：探讨红景天苷对高原红细胞增多症（HAPC）模型大鼠骨髓CD71+有核红细胞（RBC）凋亡的影响，并阐明其作用机制。
方法方法：45只SD雄性大鼠随机分为对照组（海拔1 500 m条件+NaCl溶液）、模型组（海拔5 000 m条件+NaCl溶液）和药物组（海拔5 000 m条件+0.15 g·kg－1·d－1红景天苷），每组15只。
检测各组大鼠血常规中RBC数、血红蛋白（Hb）水平和红细胞比容（HCT）水平，流式细胞术检测各组大鼠骨髓CD71+有核RBC百分率、骨髓CD71+有核RBC凋亡率、骨髓CD71+有核RBC中线粒体膜电位（MMP）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）蛋白表达水平，Western blotting法检测各组大鼠骨髓CD71+有核RBC中B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（Caspase-9）蛋白表达水平。
结果：与对照组比较，模型组大鼠外周血中RBC数、Hb水平和HCT水平均升高（P<0.01），骨髓CD71+有核RBC百分率和骨髓CD71+有核RBC凋亡率升高（P<0.01），骨髓CD71+有核RBC中Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。
215501247_红景天苷对慢性低氧后冻伤大鼠血管内皮细胞的保护作用
红景天苷对慢性低氧后冻伤大鼠血管内皮细胞的保护作用王洪瑾，李 毅△，冯艳萍，张科伟，彭毛东智（青海大学附属医院烧伤整形科，西宁８１０００１）【摘要】 目的：研究红景天苷对慢性低氧后冻伤大鼠血管内皮细胞的保护作用。
方法：健康雄性ＳＤ大鼠，随机分为３组（ｎ＝１０）：假伤组，模型组，模型＋红景天苷组。
各组大鼠置于复合低压舱内，设置舱内压力为５４．１ｋｐａ，温度为２３～２５℃。
大鼠在此条件下低氧暴露１４ｄ，期间模型＋红景天苷组大鼠每日灌服５０ｍｇ／ｋｇ红景天苷。
大鼠从低压舱中取出后，除了假伤组以外，均使用冷冻过的铁片紧贴大鼠背部３０ｓ，辅以低温进行冻伤造模。
造模后１２ｈ采集血液及皮肤组织进行试验。
观察冻伤区域组织与血管内皮细胞结构变化；检测血管内皮细胞微粒ＥＭＰ水平；检测血管内皮细胞损伤标示物ＩＣＡＭ １、ｓＥＰＣＲ、ｖＷＦ、ＥＴ １水平与ＮＯ分泌情况；ＷＢ检测ＨＩＦ １α、ｐ ＰＩ３Ｋ、ｐ Ａｋｔ及ＶＥＧＦ表达水平。
结果：红景天苷有效减轻冻伤区域皮肤塌陷现象。
改善皮下组织坏死及炎性细胞浸润情况。
减少血管内皮细胞自噬。
与模型组（０．２５０±０．１６５）％相比，模型＋红景天苷组（２．４５３±０．１９６）％显著增强ＥＭＰｓ表达（Ｐ＜０．０１）。
并且ＮＯ含量（２．６２２±０．２１９）ｐｇ／ｍｌ也显著高于模型组（１．６１６±０．１５２）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１），ｖＷＦ含量（２３３．５０±１３．４３）ｐｇ／ｍｌ低于模型组（３１５．６０±８．７８）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０５），ＩＣＡＭ １、ｓＥＰＣＲ、ＥＴ １含量无明显差异。
红景天苷显著降低冻伤大鼠血管内皮细胞ｐ ＰＩ３Ｋ、ｐ Ａｋｔ、ＶＥＧＦ及ＨＩＦ １α蛋白表达（Ｐ＜０．０１）。
结论：红景天苷可减轻血管内皮细胞损伤，减少血管内皮细胞自噬，促进血管内皮细胞再生。
红景天苷基于ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ通路对慢性低氧后冻伤大鼠血管内皮细胞具有良好的保护作用而降低冻伤组织的损伤。
红景天对高原去势大鼠骨质疏松症的血清IL-6、TNF-α和尿DPD影响
红景天对高原去势大鼠骨质疏松症的血清IL-6、TNF-α和尿DPD影响白孟海;葛宝丰;刘剑梅;王琦;高文魁;郑荣【期刊名称】《中国骨伤》【年(卷),期】2006(019)004【摘要】目的:探讨高原高寒地区低氧环境去势大鼠骨质疏松症与血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和尿脱氧吡啶酚(DPD)的关系及红景天预防骨质疏松的作用.方法:选用Wistar雌性大白鼠75只,分别摘除卵巢或假性去卵巢.分为A组(假手术组),B组(切除卵巢组),C组(切除卵巢+尼尔雌醇组),D组(切除卵巢+红景天混合饲料组),E组(切除卵巢+红景天浸液组).每组15只,术后在海拔3 100m青海海北州地区饲养,术后3个月处死,应用放免方法测定血清IL-6、TNF-α和化学发光法测定尿中DPD含量.结果:B组血清IL-6、TNF-α和尿DPD含量显著高于A、C、D、E组.C、D、E组血清IL-6、TNF-α和尿DPD含量与A组比较差异无显著性统计学意义.结论:红景天的抗高原骨质疏松症的作用可能与降低血清IL-6、TNF-α含量和尿中DPD浓度有关.【总页数】2页(P221-222)【作者】白孟海;葛宝丰;刘剑梅;王琦;高文魁;郑荣【作者单位】兰州军区兰州总医院骨科研究所,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院骨科研究所,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院骨科研究所,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院骨科研究所,甘肃,兰州,730050;西宁市解放军第四医院;兰州军区兰州总医院骨科研究所,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】R68【相关文献】1.中药骨康预防去势大鼠骨质疏松症的血清IL-6、E2和BGP含量的影响 [J], 余阗;刘庆思;卿茂盛;陈小砖;黎杰运;喻永新;熊学华2.红景天对大鼠运动性肾缺血再灌注血清和肾组织中IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-18水平的影响 [J], 郭爱民;曹建民;周海涛3.高原去势大鼠骨质疏松症血清IL-6 、TNF-α和尿DPD的变化观察 [J], 白孟海;葛宝丰;王琦;高文魁;郑蓉4.综合治疗内分泌失调性骨质疏松症对患者骨密度及血清IL-6、IGF-1、TNF-α水平的影响 [J], 唐利娟5.二甲双胍对去势大鼠血清TNF-α,IL-6及瘦素含量的影响 [J], 王志新;康白因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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兰州理工大学 生 科学与工程学 院， 命 甘肃 兰州 ７０５ ３００ 摘 要 目的： 探讨 中药红景 天对 低氧体外培 养 大鼠骨髓破骨 细胞 、 骨 因子 （ Ｇ和肿瘤 坏死 因子 （ Ｆ ｃ 护 Ｏ ） Ｐ Ｔ －【 Ｎ ） 基 因表 达的影 响。方法： 健康 ｓ Ｄ雌性 大白鼠 １ ８只。分为 实验组 （ 氧组） 对 照组 （ 低 、 常氧组） 中药组 （ 和 红景天组）每 ， 组 ６ 术后 １ 周处死实验 动物 ， 只， ２ 进行骨髓 细胞培 养， 各动物 实验组处理后进行血清干预 ， 第 ７ 培养 天分别作 瑞 氏 一 吉姆 萨染 色和抗酒石 酸酸性磷 酸酶 （Ｒ Ｐ 染 色， ＴＡ） 以细胞核 ３个或 ３个以上及 Ｔ Ａ （） Ｒ Ｐ ＋ 为破骨 细胞标志 ， 计细胞数 。 提 取培 养细胞 总 ＲＡＲ－Ｃ 半定量检测各组 ＯＧ Ｔ Ｆａ基 因表 达变化 。结果 ： 氧组破骨 细胞形成数显著 多于常 Ｎ ，ＴＰＲ Ｐ 和 Ｎ－ 低 氧组 和明显 多于红景天组。低氧 实 组 ＯＧ ｍＮ 表达水平 与对 照组比较显著 降低 ，与红景天组比较明显降低 。 验 Ｐ 的 ＲＡ ＴＦ 的 ｍＮ 表 达水平与对 照组比较显著 升 高， Ｎ— ＲＡ 与红景天组 比较 明显升 高。结论 ： 缺氧可引起 骨髓源细胞体 外培 养 破骨细胞数 量增加 、Ｐ 基 因表达水平降低和 ＴＦａ 因 达水平升 高，中药红景天在一定程度 上可抑 制低 氧组破 ＯＧ Ｎ－ 基 表 骨细胞增 殖、 增加 Ｏ Ｇ基 因水平表 达， Ｐ 同时可降低 Ｔ Ｆ ａ基 因水平的表 达。 Ｎ－ 关键 词 红景 天； 护骨素； 肿瘤 坏死因子； 红景天 ； 骨细胞； 因 破 基 中图分类号： ２ ５ ５ Ｒ ８ ． 文献标识码 ： 文章编号 ： ０４ ６ ５ （０８ ｌ— ０ １ ０ Ａ １０—８２２０）１０９—２
高原环境 有诸多 的因素作用人 体， 缺氧 、 如 低温 、 寒冷 和气候多变等， 但对人体影响 因素最大 的是缺氧 。 高原缺氧 对骨组织的影响 已逐渐 引起 人们的重视 。有人 曾经报道… 过红景天 具有抗高原缺氧 功能 ， 了进 一步探讨 红景天抗 为 缺氧 的机制及 对骨代谢 的影响 ， 笔者对大 鼠骨髓细胞 在低
荫 伸 鏖 ０ 年 ２卷 １期Ｇ ｕｏｎ Ｔ ， ０Ｖ． Ｎ１ ２ ８ 第 １ 第 １ ａ ｕａｆＣ ２ ８ｏ １ｏ１ ０ ｍ Ｊｒｌ Ｍ ０ １ ． ｏ ２
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｛ 、 ・实 验 研 究 ・
纽鼠 四偶园∞ 圃曰盟 回细固ｏ ⑨ ⑤ 回 可 一Ｌ Ｏ舀圆密遐围廖喻
混匀后 左侧股骨骨髓 细胞悬液加 入预置盖玻 片的 ２ ４孔板 内， 中药组加药物组动物血 清干预。对照组置 Ｃ Ｏ 培养箱 ， 在 ５ Ｃ ３ ￣ ％ Ｏ，７ Ｃ条件下培养 ，实验组和药物组置 ３ 。３ ＂ ％０、７Ｃ
Hale Waihona Puke 和 ９％ ５ 由氮气平衡空气的三气培养箱 内培养 。 培养 ７ 天后 ， 在培养的盖玻片上分别作瑞氏 一吉姆萨 染色和抗酒石 酸酸 性磷酸酶 （Ｒ Ｐ 染色 ， Ｔ Ａ ＴＡ ） 以 Ｒ Ｐ染色 （） 细胞核 ≥３个核 的 ＋，
时提 取 总 ＲＡ Ｒ — Ｃ Ｎ ，Ｔ Ｐ Ｒ检 测 护 骨 素 （Ｐ ） 肿 瘤 坏 死 因子 ＯＧ 、 （Ｎ — ） 因表 达水 平的变化 。 Ｔ Ｆ 基
１ 材 料 和 方 法
１ １ 实验大 鼠和分组 ．
健康 ３月龄雌性 ｓ Ｄ大 鼠 １ ， ８只 体
重 ２ ０ ２ ０ｇ 本 院动物 实 验科 提供 ） 分 为实验 组 （ 氧 １ ～ ２ （ ， 低
鼠饲养 ３ 个月后 ， 无菌操作下完整取下双侧股骨， 断两 侧 剪 骨 骺端 用 ５ｍ Ｅ Ｌ Ｍ Ｍ培 养 液 （０ 胎 牛 血 清 ， ０ ／ Ｌ １％ １０Ｕｍ 青霉 素 ，０ ｇ Ｌ链霉素） 复冲洗骨髓腔 ３次 ， １０ｍ ／ 反 收集骨 髓细胞
ｔｏ ， ｉｎ１ 混合离心 ３ ５ 。 Ｃ 仪 上进逆转录 ， ￣ 秒 ＰＲ 反应条件：
组） 对照组 （ 组） 药物组 （ 、 常氧 和 红景天组） 。 １２ 给药方法 ． 药物组喂红景天干粉混合饲料， 景天 混 红 合饲料参照黄增艳等ｒＪ － 加工 （ 。：法 ： ｂ 按每 日红景天 ３ｇ ２ ０ｇ ／ ２ 体质量） 不足补给普通饲料 ， ， 实验组和对照组喂普通饲料 。 自由饮水 。 １３ 破骨细胞 培养 、 ． 染色和鉴 定 ‘ 破骨细胞 培养 ， 实验 大
１４ １ 总 Ｒ Ａ提取 ．． Ｎ
分别在培养的第 ７天对照 Ｔ ｋ ｒ ａ ａ ａ公
司 试 剂 盒 使 用 说 明 书 提 取 细 胞 的 总 Ｒ Ａ ＲＡ溶 解 于 Ｎ。 Ｎ
Ｒ Ａ ｓ— ｒ ｅｄ Ｈ０液 中 一 ０Ｃ保存 。 Ｎ ａ ｅ ｆ ｅ ｄ ２ ８￣ １４ ２ 逆转录 反应 ．． 在 ２ ０ 反应管 （ ０ 冰浴） 中加入 ＲＡ Ｎ
细胞为破骨细胞标志 。对每个随机 视野 中的破骨细胞进行 计数 。 每组大 鼠计数 ｌ Ｏ张玻片 ， 取均值 ， 结果 以细胞数 ／玻 片表示 。右侧股骨骨髓 细胞悬液接种于 １０ｍ ０ ｍ培养 皿中 ， 培养条件同上。 １４ Ｐ ． Ｏ Ｇ基因表达的检测
ｇＩ
氧 条件下进行 培养 ， 分别作瑞 氏 一吉姆萨 和 Ｔ Ａ Ｒ Ｐ染色 ， 同
２ｐ 约 ２５ ，ｉｏｄ ＬＲ ａ ｉ — ｒ ｅ ｄ２ 至 １ Ｌ Ｌ（ ． ｌ ｇ （￣１ ，ｎ ｓｎ ｆ ｅ ｄ Ｈ０ ２ ，
Ｒ — ｕ ｆ ｒ ４ Ｌ Ｎ Ｐ Ｍ ｘ ２ Ｌ， Ｍ ｅ ｅ ｓ ｒ ｎ ｃ ｉ — Ｔ ｂ ｆ ｅ ，ｄ Ｔ ｉ Ａ Ｖ Ｒ ｖ ｒ ｅＴ ａ ｓ ｒ ｐ