Masson 三色染色液染色步骤及注意事项
Masson染色的操作
贝博Masson染色试剂盒利用不同阴离子染料先后作用完成染色，根据组织不同的渗透 性，选择分子大小不同的阴离子染料进行染色，区分不同组织成分。操作简捷，性能稳定， 显色清晰。
注意事项： 1、 每个染色步骤均要保持玻片湿润。 2、 分色后不需冲洗，直接复染。 3、 镜检观察时若胶原纤维部分蓝色着色太浅，可用复染液复染 2-3 分钟，至颜色合适 为止。复染液染色时间不宜过长，否者颜色过深会造成对比不强烈。 4、 若整体染色效果不佳，可用水浸泡 60-90 分钟，褪色后，再重复染色。
传真：021-60853530
本产品仅供科学研究使用！
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BestBio-贝博
3、水合：蒸馏水中浸泡 2 分钟。 4、漂洗：30-40℃水漂洗两次，每次 30-60 秒。
产品说明书
样本的染色 1、 用蒸馏水润湿玻片 30-60 秒。 2、 核染液染色 60 秒左右，冲洗液冲洗 30 秒。 3、 浆染液染色 30-60 秒，冲洗液冲洗 30 秒。 4、 分色液分色 6-8 分钟。 显微镜下观察，样本中胶原纤维部分褪成淡的粉红色为 宜。如果褪色效果不佳，可适当延长时间。 5、 复染液染色 5 分钟，用无水乙醇冲洗干净。 6、 吹干后，用封固剂封片。 7、 结果观察。染色试剂盒
产品组成：
产品编号 试剂组分 核染液 浆染液 分色液 复染液 冲洗液
403023 20ml * 8
20 ml 20 ml 20 ml 20 ml 20ml * 4
储存条件： 室温保存。
有效期： 一年。
产品简介： Masson染色是用于显示组织中纤维的染色方法之一，是胶原纤维（collagen fiber）染
Masson三色染色试剂盒说明书
Masson三色染色试剂盒说明书Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）【产品介绍】Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。
分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
淡绿分子量最大。
因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【用途】主要用于胶原纤维染色。
【产品特点】①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。
固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。
切片：所有类型。
【产品组成】编号名SBJ0126（7×50ml）SBJ0126（7×100ml）SBJ0126（7×500ml）Storage试剂（A）A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RTA2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。
试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】1、切片脱蜡至水。
2、试剂（A）染色5min～10min。
3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。
Masson三色法
Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
Masson三色染色液G1006
Masson 三色染色液30ml+20ml*5RT产品简介：由Mallory 三色染色改造，利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。
根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。
包装内容：产品货号产品名称规格G1006-1重铬酸钾媒染剂30ml G1006-2Weigert 铁苏木素A 液20ml G1006-3Weigert 铁苏木素B 液20ml G1006-4丽春红酸性品红染液20ml G1006-5磷钼酸溶液20ml G1006-6苯胺蓝染液20ml保存条件：室温保存，有效期1年。
操作说明：1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min ，自来水洗。
2、重铬酸钾染色：切片入重铬酸钾浸泡过夜，自来水洗。
3、铁苏木素染色：铁苏木素A 液与B 液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素3min ，自来水洗，盐酸酒精溶液分化，自来水冲洗。
4、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红浸染5-10min ，自来水漂洗。
5、磷钼酸染色：磷钼酸水溶液浸染1-3min 。
6、苯胺蓝染色：磷钼酸之后不用水洗，直接入苯胺蓝染液染3-6min 。
7、分化：切片用1%冰醋酸分化，两缸无水乙醇脱水。
8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min ，二甲苯5min 透明，中性树胶封片。
9、显微镜镜检，图像采集分析。
染色结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色。
弹力纤维呈棕色。
肌纤维、纤维素和红细胞染红色。
细胞核染蓝黑色。
G 1006注意事项：1、Weigert铁苏木素分A、B两液，临用前将两液等比例混合使用。
不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而失去染色力。
2、重铬酸钾染完后水洗要稍快，切片洗干净即可。
3、根据切片的数量对铁苏木素染液进行更换，也可以现配现用；4、丽春红的染色程度要控制好，胶原部分不能是红色或者太红，会影响后续苯胺蓝的着色；5、冰醋酸分化苯胺蓝的过程中，若是分化过度，胶原蓝色太浅，若分化不足，易与丽春红的颜色叠加呈紫蓝色。
masson染色步骤(临床医学研究中心总结)
试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。
如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡；2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min）水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。
4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。
5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。
（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色）6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。
（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色）7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。
（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。
建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间）8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5-10min。
（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微）9、弱酸溶液处理 2min。
10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。
然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。
使用中性树脂封片。
注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。
Masson染色技术
胶原纤维染色（Masson三色染色法）胶原纤维：是三种纤维中分布最广泛，含量最多的一种纤维。
广泛分布于各脏器内。
在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。
胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。
应用意义：定性定量胶原纤维在体内分布广泛。
HE染色不能以不同颜色将其显示出来，而胶原纤维定性特染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研究用中具有实用价值.如：1．显示组织，器官的损伤或炎症的修复与纤维板化程度2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色，胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色，心肌纤维呈黄色。
3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。
4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。
5. 对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。
胶原纤维染色结果：胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色。
组织样品应为：4%多聚甲醛固定组织，石蜡切片。
天狼猩红：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其它成分呈黄色。
V.G染色法 : 胶原纤维：鲜红色,肌纤维：黄色，红细胞：黄色。
细胞核：蓝黑或灰色。
Nagar-Olsen染色观察心肌缺氧早期改变，是早期心肌病变组织染色：显色结果：缺氧心肌红细胞呈现红色，正常心肌呈黄色或棕黄色，细胞核呈蓝色。
丽春红（Ponceau S）新法染色首先采用维多利亚蓝将细胞核染成绿色，再用Ponceau S 丽春红复合物将胶原纤维染成红色，肌肉成黄色。
实验流程一、实验试剂1. Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。
将苏木精加入蒸馏水内加温溶解，冷却后加入酒精和甘油，放数日后即可应用；2. Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml；3. 0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml；4. 1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml；5. 苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml；6. 1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml。
弹性纤维染色方法
改良Masson三色染色法在胶原纤维中的应用中华首席医学网 2006年05月24日11:05:41 Wednesday648作者：王珏, 朱礼国，唐幕湘, 张健《郧阳医学院学报》2006年2月25卷1期实验技术加入收藏夹【关键词】胶原纤维[关键词] 改良；Masson三色染色法；胶原纤维目前，Masson三色染色法仍是胶原纤维染色的主要方法之一。
它在临床外检和科研教学等方面有着重要的意义。
在实际工作中，我们认为传统的Masson三色染色法[1]操作程序多，染色效果欠佳，且不太稳定，对其做了改进，现将做法介绍如下。
1 方法1.1 染液的配制Harris苏木素、1%盐酸酒精、丽春红酸性品红、1%磷钼酸、2%苯胺蓝.1.2 染色方法石蜡切片3~4 μm脱蜡至水,Harris苏木素染3 min流水冲洗,1%的盐酸酒精分化3~5 s流水冲洗,温水返蓝1 min流水冲洗, 丽春红酸性品红加温染3 min，蒸馏水冲洗,1%磷钼酸分化1 min，不洗，擦净载玻片上的磷钼酸残液，2%苯胺蓝复染1 min，95%的酒精冲洗，95%酒精及无水酒精脱水，冷风吹干，中性树胶封片。
2 结果胶原纤维呈蓝色，肌纤维胞质呈红色，细胞核呈蓝褐色。
3 讨论通过长期实践探索，我们摸索出一种程序更简洁、组织着色效果更好，且性能稳定的改良Masson三色染色法。
其原理是利用苏木素，酸性品红和苯胺蓝对结缔组织和神经嗜银颗粒、胶原纤维等组织染色，使时间缩短，步骤简便。
改进后的方法，将传统的Masson三色染色法作了如下调整和改动：Bowin氏液由10%中性固定液[2]代替，省略了0.5%碘酒精作用10 min，5%硫代硫酸钠作用5 min和1%冰醋酸处理1min及地衣红染30~60 min 等过程，然后将原丽春红酸性品红，1%磷钼酸，2%苯胺蓝的染色时间分别由15 min，5 min,5 min,缩短为加热3min,1 min,1 min.通过对以上各步的调整和改进，使染色时间由原来的近3 h，缩短为30 min左右，且颜色对比度好，层次清楚，胞核胞浆着色均匀。
马松三色染色原理masson.
马松三色染色原理masson.Masson染色(2010-09-02 14:43:20转载标签:杂谈分类:实验日志masson 染色原理Masson三色法(根据Masson,1929试剂配制(一Weigert氏铁苏木素液(见苦味酸——酸性品红法(二丽春红酸性品红液丽春红(Ponceau 2R 0.7g酸性品红(acid fuchsin 0.3g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml(三 1%磷钼酸水溶液磷钼酸(phosphomolybdic acid 1g蒸馏水加至 100ml(四 2%苯胺蓝液苯胺蓝(aniline blue 2g冰醋酸(glacial acetic acid 2ml蒸馏水加至 100ml(五亮绿液亮绿(light green 1g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml操作方法1. 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。
2. 切片脱蜡至水。
如用Zenker氏液固定者,应进行除汞处理,其步骤如下:(1 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。
(2 稍水洗(3 5%硫代硫酸钠作用5分钟。
(4 流水冲洗10分钟3. Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
4. 流水稍洗。
5. 1%盐酸酒精分化。
6. 流水冲洗数分钟。
7. 丽春红酸性品红液染5-10分钟。
8. 蒸馏水稍冲洗。
9. 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。
10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。
11.1%冰醋酸处理1分钟。
12.95%酒精脱水多次。
13.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固结果:胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染或绿色(用亮绿复染。
胞质、肌纤维和红细胞红色。
胞核蓝褐色。
注意事项:1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。
如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37。
C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。
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Masson三色染色液染色步骤及注意事项
号：G1340
规格：7×50ml/7×100ml
有效期：12个月有效
产品简介：
结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。
Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
Masson试剂盒的特点：◆染色稳定；◆分化时间短，1-2秒；◆色彩清楚鲜艳；◆使用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；◆所染切片保存时间长且不易褪色。
产品组成：
规格
名称
7×50ml7×100ml Storage
试剂(A):Weigert 铁苏木素染色液A1:Weigert染液A25ml50ml RT避光A2:Weigert染液B25ml50ml RT
临用时，取A1、A2等量混合，成为Weigert铁苏木素染色液，不可预先配制后放置。
试剂(B):酸性乙醇分化液50ml100ml RT
试剂(C):Masson蓝化液50ml100ml RT
试剂(D):丽春红品红染色液50ml100ml RT避光
试剂(E):弱酸溶液50ml100ml RT
试剂(F):磷钼酸溶液50ml100ml RT避光
试剂(G):苯胺蓝染色液50ml100ml RT避光
使用说明书1份
自备材料：
固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液、蒸馏水、系列乙醇、二甲苯、染缸
操作步骤（仅供参考）：
1、切片常规脱蜡至水。
2、用配制好的Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。
3、酸性乙醇分化液分化5-15s，水洗。
4、Masson蓝化液返蓝3-5min，水洗。
5、蒸馏水洗1min。
6、丽春红品红染色液染色5-10min。
7、在上述操作过程中按蒸馏水：弱酸溶液=2:1比例配置弱酸工作液，用弱酸工
作液洗1min。
8、磷钼酸溶液洗1-2min
9、用配置好的弱酸工作液洗1min。
10、直接放入苯胺蓝染色液中染色1-2min。
11、用配置好的弱酸工作液洗1min。
12、95%乙醇快速脱水。
13、无水乙醇脱水3次，每次5-10s。
14、二甲苯透明3次，每次1-2min。
15、中性树胶封固。
染色结果：
细胞核、胶原纤维/蛋白蓝色
细胞浆、肌肉、红细胞红色
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。
2、取A1、A2等量混合，成为Weigert铁苏木素染色液，一般24h失去染色能力。
3、组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延长或缩短染色时间。
4、经典masson三色染色中，用Harris苏木精染核，但Harris苏木精染核后切
片颜色不够鲜艳，本染液采用Weigert染细胞核，因为染色的目的主要在于区分胶
原纤维和肌纤维，一般也可以省略该染色步骤。
5、酸性乙醇分化时间应该依据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。
6、弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配置0.1-0.3%乙酸溶液予
以替代。
7、磷钼酸分化时要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可。
分
化时间根据染色深浅而定，一般1-2min。
8、Masson蓝化液亦可自行配制Scoot促蓝液或0.1-1%碳酸锂水溶液予以替代。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。