单克隆抗体与免疫荧光染色技术
免疫荧光技术名词解释细胞生物学
一、免疫荧光技术概述免疫荧光技术是一种通过荧光显微镜观察细胞或组织中特定分子的方法。
它利用抗体与待检测分子结合后，再加上荧光标记的二抗或荧光标记的直抗，通过荧光显微镜观察标记分子的位置和数量。
免疫荧光技术在细胞生物学和免疫学研究中得到了广泛应用，为研究生物分子的定位、表达和相互作用提供了重要技术支持。
二、免疫荧光技术的原理1. 抗体结合在免疫荧光技术中，首先需要用特异性抗体与待检测的分子结合。
这些抗体可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，通过它们与目标分子的结合，实现对待检测分子的高度特异性识别。
2. 荧光标记待检测分子与抗体结合后，需要加入荧光标记的二抗或直抗，使得待检测分子与荧光物质结合形成复合物。
通常使用的荧光分子有FITC、TRITC、Alexa Fluor等，它们在不同激发波长下显示出不同的荧光颜色。
3. 观察和分析最后通过荧光显微镜观察标记的细胞或组织样品，根据荧光信号的强度和分布情况，可以判断待检测分子的位置和数量，从而了解其在细胞内的表达和功能。
三、免疫荧光技术的应用1. 细胞膜标记免疫荧光技术可用于标记细胞膜上的特定蛋白，例如细胞黏附蛋白、受体蛋白等，从而观察它们在细胞膜上的分布情况和动态变化，揭示细胞膜的结构和功能。
2. 细胞器定位通过标记特定的蛋白或抗体，免疫荧光技术可以用于观察细胞器的定位，如线粒体、内质网、高尔基体等，帮助研究者了解细胞器在细胞内的分布和相互作用。
3. 蛋白相互作用免疫荧光技术也被广泛应用于研究蛋白之间的相互作用关系，通过标记不同的蛋白并观察它们在细胞内的共定位情况，可以揭示蛋白间的相互作用网络和信号传导路径。
4. 细胞功能研究通过观察细胞内荧光标记物的动态变化，免疫荧光技术可以帮助研究者了解细胞的代谢活动、信号转导和细胞周期等重要的生物学过程。
四、免疫荧光技术的发展和趋势1. 自动化和高通量随着技术的发展，免疫荧光技术已经向自动化和高通量方向发展。
自动化的设备和流程使得实验操作更加标准和高效，而高通量的技术则可以同时观察大量样品，加快研究进程。
免疫荧光染色一抗的成分
免疫荧光染色一抗的成分
免疫荧光染色一抗的成分，主要包括抗体、缓冲液、防腐剂和辅助试剂等。
免疫荧光染色是一种常用的实验技术，用于检测和定位特定蛋白在细胞或组织中的表达情况。
一抗作为免疫荧光染色的重要组成部分，其成分和特点对于实验结果具有重要影响。
首先，一抗的主要成分是抗体。
抗体是一种特异性蛋白质，能够与特定的抗原结合。
在免疫荧光染色中，一抗的选择对于实验结果至关重要。
一抗的种类和来源多种多样，包括单克隆抗体和多克隆抗体，不同的抗体对于不同的蛋白具有不同的特异性。
其次，一抗的成分还包括缓冲液。
缓冲液是用来稀释和稳定抗体的溶液，可以帮助维持适当的pH值和离子强度，保证实验条件的稳定性。
另外，一抗中还会添加一些防腐剂，如NaN3等。
防腐剂的作用是防止抗体在存储和使用过程中受到污染和降解，保证抗体的稳定性和活性。
此外，一抗中可能还包括一些辅助试剂，如牛血清白蛋白（BSA）、牛血清或羊血清等。
这些辅助试剂可以帮助稀释和稳定抗体，减少非特异性结合，并提高实验的灵敏度和特异性。
总之，免疫荧光染色一抗的成分包括抗体、缓冲液、防腐剂和辅助试剂等。
这些成分共同作用，确保了免疫荧光染色实验的准确性和可靠性。
在进行免疫荧光染色实验时，科研人员需要根据具体的实验要求和条件选择合适的一抗，并合理配置相关成分，以获得准确可靠的实验结果。
免疫荧光染色(多标)步骤
免疫荧光染色(多标)步骤一、免疫荧光染色的多标技术简介免疫荧光染色的多标技术是通过同时使用多个荧光染料，标记不同的抗体，从而实现对多个目标分子的检测。
该技术广泛应用于生物医学研究、免疫组化和细胞生物学等领域，可以提供更全面的信息和更准确的结果。
二、免疫荧光染色的多标步骤免疫荧光染色的多标步骤主要包括标本处理、抗原修复、非特异性结合阻断、一级抗体处理、荧光二抗处理和显微镜观察等。
1. 标本处理将待检样品制备成组织切片或细胞涂片，并固定在载玻片上。
可以使用多种组织固定剂，如乙醛、甲醛等。
固定后，需进行脱水、透明化处理，以便后续步骤的进行。
2. 抗原修复组织样本经过固定处理后，可能导致抗原的空间结构发生改变，影响后续的抗原-抗体结合。
因此，需要进行抗原修复处理，如热解、酶解等方法，以恢复抗原的免疫原性。
3. 非特异性结合阻断为减少假阳性结果的产生，需要对标本进行非特异性结合阻断。
可使用一些蛋白质，如牛血清蛋白、鱼胶蛋白等，与标本中的非特异性结合位点结合，阻断后续试剂的非特异性结合。
4. 一级抗体处理将标本与一级抗体一起孵育，使一级抗体与目标抗原结合。
一级抗体通常是由小鼠、兔子等动物制备的，可以识别与特定抗原结合的抗体。
一级抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。
5. 荧光二抗处理将与一级抗体不同动物来源的荧光标记的二级抗体与标本一起孵育。
荧光二抗能与一级抗体特异性结合，从而实现对目标抗原的荧光标记。
不同荧光染料的荧光二抗可以同时使用，以实现多标的目的。
6. 显微镜观察将处理好的标本放置在显微镜下观察，可使用荧光显微镜或共聚焦显微镜等设备进行观察。
通过不同的荧光染料，可以同时检测多个目标分子的位置和表达水平。
三、免疫荧光染色的多标技术应用免疫荧光染色的多标技术广泛应用于生物医学研究中，如疾病诊断、蛋白质定位和分析、细胞信号通路研究等。
通过同时检测多个目标分子，可以提供更全面的信息，有助于深入了解生物过程的机制。
免疫荧光三色染色步骤
免疫荧光三色染色步骤免疫荧光三色染色是一种常用的免疫组化技术，用于检测和定位细胞或组织中的特定抗原。
通过使用三种不同的荧光染料，可以同时检测三种不同的抗原，从而在同一样本中获得更多的信息。
下面是免疫荧光三色染色的步骤：1. 样本处理：首先需要准备好待检测的细胞或组织样本。
可以通过固定、切片和脱脂等步骤来处理样本，以便于荧光染料的渗透和抗原的暴露。
2. 抗原修复：某些细胞或组织中的抗原可能会经历一定程度的损伤或变性，需要进行抗原修复以恢复其免疫反应性。
常用的抗原修复方法包括热处理、酶解和化学修复等。
3. 阻断非特异性结合：为了避免荧光染料的非特异性结合，需要使用适当的阻断剂来防止非特异性结合。
常用的阻断剂包括牛血清蛋白、小鼠或兔子血清等。
4. 一抗染色：选择合适的一抗，加入到样本中与目标抗原结合。
一抗可以是单克隆抗体或多克隆抗体，根据实验的需要选择合适的一抗。
5. 二抗染色：二抗是与一抗结合的抗体，通常是兔抗小鼠或小鼠抗兔的抗体。
二抗上标记有荧光染料，常见的有荧光素、荧光素同工酶和荧光素同工酶等。
6. 染色显色：将标记有荧光染料的二抗加入到样本中，与一抗所结合的抗原发生特异性反应，形成荧光染色的复合物。
7. 洗涤：染色完成后，需要进行多次洗涤以去除未结合的抗体和荧光染料，减少背景信号的干扰。
8. 封片：将处理好的样本用适当的封片剂封装在载玻片上，然后使用适当的封片胶或胶带固定样本。
通过以上步骤，可以实现免疫荧光三色染色的目的。
这种技术可以在细胞或组织中同时检测和定位多种抗原，为科研工作者提供更多的信息和数据。
需要注意的是，在进行免疫荧光三色染色时，要选择合适的一抗和二抗，以及荧光染料的激发和发射波长。
此外，还需要进行严格的实验控制，包括阴性对照和阳性对照，以确保实验结果的准确性和可靠性。
免疫荧光三色染色技术在生命科学研究中具有广泛的应用，可以用于研究细胞分子机制、疾病诊断和治疗等方面。
随着技术的不断发展和改进，相信免疫荧光三色染色技术将在未来的研究中发挥更大的作用。
免疫荧光染色方法
免疫荧光染色方法免疫荧光染色方法是一种广泛应用于生物学研究领域的技术，可以用于检测和定位特定抗原分子在细胞或组织中的分布和表达情况。
该方法利用抗体与特定抗原结合，并利用荧光染料标记抗体，通过显微镜观察荧光信号来确定抗原的位置和表达量。
免疫荧光染色方法具有高灵敏度、高分辨率和广泛的应用范围，因此在细胞生物学、分子生物学、免疫学等领域得到了广泛应用。
首先，需要固定样品以保持细胞或组织的形态和结构。
常用的固定剂包括乙醛、甲醛和氯酸等，可以在细胞或组织中形成交联结构，固定抗原。
固定剂的选择应根据具体实验目的和样品类型来确定。
接下来，渗透化步骤是为了提高抗体与抗原的结合效率，并使抗体能够穿透细胞或组织进行染色。
常用的渗透剂包括甲醇、乙醇、Triton X-100等。
渗透化的时间和条件需根据样品的特性和实验要求来确定。
最后，通过荧光检测来观察和分析抗原在样品中的分布和表达情况。
荧光检测通常利用荧光显微镜来观察光信号。
在荧光染色中，主要有两种常用荧光染料，一种是荧光素和异硫氰酸荧光素（FITC），另一种是罗丹明（Rhodamine）。
这些染料在特定波长下能产生荧光，并且可以选择性地与抗体结合，形成荧光复合物。
通过荧光显微镜观察这些标记的复合物，可以确定抗原在样品中的位置和表达量。
除了基本的免疫荧光染色方法，还有一些其他的变种方法可供选择，例如间接免疫荧光染色、多重免疫荧光染色、双标记荧光染色等。
这些方法可以进一步提高检测的敏感性和分辨率，并提供更多的信息。
总的来说，免疫荧光染色方法是一种重要的生物学研究工具，可以用于检测和分析抗原的表达和定位。
随着技术的不断发展，免疫荧光染色方法在细胞和分子生物学研究中的应用前景将更加广阔。
抗体免疫荧光染色 pcr
抗体免疫荧光染色 pcr
抗体免疫荧光染色（Antibody Immunofluorescence Staining）和聚合酶链式反应（PCR）是两种不同的生物学技术，它们在研究和诊断领域中都有广泛的应用。
抗体免疫荧光染色是一种用于检测和定位细胞或组织中特定蛋白质的技术。
该技术利用特异性抗体与目标蛋白质结合，然后通过荧光染料标记的二抗来可视化抗体-蛋白质结合的位置。
这种技术可以用于研究蛋白质的表达、分布和功能，以及在细胞和组织水平上进行诊断。
PCR 则是一种用于扩增特定核酸序列的技术。
它通过在体外进行一系列的温度循环，使目标核酸序列在短时间内大量复制。
PCR 可以用于基因克隆、基因分型、基因表达分析等领域，也在分子诊断和遗传学研究中发挥着重要作用。
抗体免疫荧光染色和 PCR 可以结合使用，以实现更全面的分析。
例如，在细胞或组织中进行抗体免疫荧光染色后，可以通过 PCR 对同一样本中的特定核酸序列进行分析，从而提供有关细胞或组织的分子信息。
这两种技术在生物学研究和临床诊断中都具有重要的应用价值。
它们各自具有独特的优势，可以为研究人员提供不同层面的信息，帮助我们更好地理解生物过程和疾病机制。
免疫组织化学与免疫荧光技术
免疫组织化学与免疫荧光技术是现代免疫学中不可或缺的技术。
这些技术无论在实验室还是临床应用中都具有重要的意义。
本文将详细介绍免疫组织化学和免疫荧光技术。
一、免疫组织化学免疫组织化学是通过免疫染色技术来检测组织中特定的蛋白质。
这种技术是以抗体和免疫反应的基本原理为基础的。
其原理是识别特定抗原与其结合的抗体。
免疫组织化学在检测肿瘤中常被广泛应用，具有诊断和分型作用。
例如，在乳腺癌中常用到人类表皮生长因子受体2（HER2）的免疫组织化学诊断。
通过使用HER2单克隆抗体来检测HER2蛋白质，可以帮助医生确定病人的治疗方案。
另一个例子是在诊断食管癌时，免疫组织化学可以检测局部淋巴结中是否存在HER2的阳性表达，以协助决定术前的治疗方案。
二、免疫荧光技术免疫荧光技术是一种通过利用荧光染料来检测特定蛋白质的技术。
该技术同样以抗体和免疫反应的基本原理为基础。
免疫荧光技术被广泛应用于微生物、细胞和组织的检测中。
免疫荧光技术可以检测甲型流感病毒、腺病毒等病毒的感染，同时也可以对肺炎支原体等细菌进行检测。
在医学检测中，免疫荧光技术在快速确诊上具有优势。
此外，免疫荧光技术也被广泛用于检测自身免疫疾病，如系统性红斑狼疮（SLE）、肌无力等疾病。
在SLE的治疗中，抗核抗体“ANA”是常用的诊断标志物，免疫荧光技术能够检测出ANF。
通过免疫荧光技术来检测ANF，可以帮助医生对SLE患者进行诊断。
总结免疫组织化学和免疫荧光技术是现代免疫学中不可或缺的技术。
这些技术可以帮助医生进行生物分子的检测，并为患者的治疗提供准确的诊断。
在这个时代，免疫学将会成为一个重要的领域，并在未来发挥越来越重要的作用。
通过更加深入的研究和使用，我们可以更好地理解免疫系统，并开发出更多免疫学技术，为疾病的早期诊断和治疗提供支持。
免疫荧光染色技术及应用
免疫荧光染色技术及应用人类在面对各种疾病时，免疫荧光染色技术是一项十分重要的检测手段。
该技术利用荧光染料与抗体结合，并显示在微管中，从而帮助研究人员快速高效地检测出特定蛋白质及其存在的位置。
本文将介绍这一技术的基本原理、使用方法及其在生物医学领域中的应用。
一、免疫荧光染色技术基本原理免疫荧光染色技术（Immunofluorescence staining technique）是利用抗体特异性与组织靶分子相结合，再用荧光染料标记，进而检测特定蛋白质的位置。
该技术的基本原理是先用特异性的一抗（一种PECAM-1抗体）结合靶蛋白，再用荧光标记的二抗特异性结合第一抗体，从而形成荧光染色物，进一步观察其荧光信号的分布位置，同时判定靶分子的种类和分子量大小。
二、免疫荧光染色技术的使用方法首先，准备抗原或刺激物的样本，在荧光显微镜下将样品观察，选择合适的荧光标记，分别标记标本中要检测的特定蛋白质和待测试的抗体。
通过荧光显微镜观察这两种荧光染色物表现的方式和位置，如果两者在同一位置，则说明这种蛋白质与该抗体正好配对，是检测对象。
荧光显微镜的不断升级和发展，使得直接观察荧光成像成为一种非常高效且准确的技术。
三、免疫荧光染色技术在生物医学领域中的应用免疫荧光染色技术在生物医学领域中有广泛应用，其中包括诊断、治疗和预防疾病方面。
1.免疫组织化学分析免疫组织化学分析是免疫荧光染色技术的一种应用方式，它可以通过检测已知层面上蛋白质是否存在来帮助诊断疾病。
例如，LE会知道，如果一人有强直性脑脊髓炎，其免疫系统经常锁定GAD65（钩状攻角度分布并通过卷积峰在从35°到70°的较宽范围内）这种抗体。
该技术可以帮助诊断出很多常见疾病，如糖尿病、强直性脑脊髓炎、乳腺癌、白血病等。
2.病毒学方面的应用另外，在病毒学领域，免疫荧光染色技术也有着广泛的应用。
例如，利用该技术可以定量测定患者身上病毒负荷、病毒流行病学的强度、病毒分布情况，还可以分析病毒种群，为研究病毒的散布做出贡献。
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单克隆抗体与免疫荧光染色技术
刘健宏 ! 王 标 # 庄向生 ! 王长兵 ! 周伦江 ! 刘玉涛 !
! 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 "%$$!" # 福建省农业厅农业执法总队 "%$$$!
自从 &’()* 和 +,)-./,0 于 !12% 年首创杂交瘤技术 以来，单克隆抗体已应用于免疫学、生理生化、药理学、 组织学、肿瘤学、微生物学等不同的学科，其应用之广、 发展之快，促使医学、生物学领域起着巨大的变革。单 克隆抗体是利用细胞融合技术，在体外大量培养融合 细胞，由融合细胞产生大量的抗体。由于单克隆抗体只 识别某一特定的抗原决定簇，所以它具有特异性强、成 分均一、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等优点而 明显优于多克隆抗体。目前世界上己建立的单克隆抗 体品种数以万计，其中数千种已经上市。
《福建畜牧兽医》#$$! 年第 #% 卷增刊
个试验期间将细胞保持在 "7 或加叠氮钠，可将这些过 程减少到最小限度。由于不能改变温度以适应不同亲
和性抗体的需要，可能不得不改变温育时间。对于大多
数抗体来说，"7 温育 %$9:; 是适宜的，但在这样的条件 下，低亲和性的抗体可能达不到平衡，因而需要更长的
!"
定、定位和示踪各种抗原或抗体成分。所以对标本的基 本要求是抗原的形态变化尽可能地小，不溶解或不变 性，原有位置不扩散或不移位。因此，对标本的处理一 般速度要快、温度要低，恒冷切片和涂片较为理想。此 外，抗体溶液的 -. 和反应温度越低，孵育的时间越长， 一般 %47 时需要 #3 8 1$9:;。若要作细致观察或者当天 不能进行染色标本的观察，可在 37 中过夜，但染色标 本最好是当天观察。 #2 ! 抗体 与多克隆抗体（即 常规血清）比较，单抗具有理化性质的一致性。就是这 种单抗的均一性，才体现出其应用价值，但是也存在不 利的方面。那就是：在标记反应过程中（包括纯化过 程），单抗的失活可能性远大于多抗的失活可能性。单 抗愈纯，愈易失活。均一的理化性质，就必然引起标记 的均一性。由于抗体与 /<=> 的结合势必引起抗体结构 的改变，特别是当单抗多变区（属 ?.# 端的游离氨基） 的结合，就显然影响到抗体抗原的反应，甚至使抗体完 全失活。比如 &’( @ %$ @ #（伪狂犬单抗）的标记过程 中，腹水纯化液的 </A 滴度达标记的 / 0 &（/ 0 & 值反映 荧光抗体的光学敏感性，其值过高，则非特异性染色将 显著增强；其值过低，则标记效率很低）比为 ! 8 % 时仍 然无活性，说明这种单抗的标记，严重损坏抗体的活 性。此外，单抗在 -. 1、4、5 条件下活性稳定，单抗愈 纯，愈易受酸碱的影响。
来，这就是筛选过程。由于每一个免疫淋巴细胞只能对 单一的抗原决定基产生特异性抗体，因此将筛选出的 融合细胞通过克隆化，使其集落生长成为单克隆细胞 系，就能产生大量单一的高纯度抗体，这种抗体就称为 “单克隆抗体”。 !5 # 荧光是染料吸收一种波长的光线，发出更大波长 的光线的物理学过程。处于基态的荧光色素受到紫外 线或兰紫外线光的照射而吸收足够的能量，而使色素 外层电子处于激发态。这种激发态电子给无辐射跃迁 到第一能级后则随着进一步的辐射跃迁而回落到基 态。在这辐射跃迁的同时释放能量，以可见光的辐射形 式释放，这就是荧光。其特征能量（较激发光而言）小而 波长长。这是由于部分能量以无辐射形式消耗的缘故， 而波长则与能量成反比。
免疫荧光技术又称为荧光抗体染色方法，它是将 血清学方法和显微镜示踪方法结合起来的一种技术。 这种技术是 3’’0- 等于 !14# 年首先建立的，在医学和 生物学研究工作中的应用将近 %$ 多年。荧光抗体法是 将特异性抗原多次注入动物体，使之产生抗体，将免疫 球蛋白从血清中分离出，用荧光色素标记，制成荧光标 记抗体溶液，以该溶液作为特异性试剂，浸染含有特异 性抗原（或抗体）的标本，借异抗原抗体的特异性，于抗 原或生物学染色方法有较高的特异性和敏感性。由于 免疫化学技术的进展和普及，荧光抗体染色法的应用 范围也不断扩大。对病原微生物的鉴定、血清抗体的检 测、特别是自身免疫病的研究、肿瘤免疫与诊断以及免 疫球蛋白的代谢研究均有其优越性。
抗体（免疫球蛋白）可以与荧光色素相结合，而不 失其抗体的免疫活性，与荧光色素相结合的抗体称为 荧光抗体。
利用荧光检测抗体的结合有两种不同的方法。直 接免疫荧光采用已直接以荧光染料标记的抗体；而间 接免疫荧光测定则是先将未标记的抗体与细胞反应， 然后再用荧光染料标记的抗抗体检测这种结合的抗 体。抗抗体通常称为第二抗体，是以用于生产单克隆抗 体动物的免疫球蛋白免疫异种动物制备的。当用小鼠 单克隆抗体进行间接免疫荧光测定时，第二抗体可以 是兔抗小鼠免疫球蛋白或山羊抗小鼠免疫球蛋白。
-. 12 3 !52 3 52 1
-. 62 3 52 1
$&’( @ %$ @ # 单抗亚级类属 *#+。-B 值约为 % 8 "2 3。在 碱性条件下最易失活，而且，大部分的—?.# 呈未质子化状 态，所以在中性偏酸的环境下照样进行加成反应。
% 非特异性染色 非特异性染色主要由于过度标记 所引起的，/<=> 过多的结合，造成抗体结构的改变，增 加了空间位阻，而且，/<=> 带负电荷，而病毒的核酸蛋 白多为碱性，在染色过程的 -. 均为中性而带正电荷， 进而造成静电引力的增加而出现非特异性的吸附。对
另外，必须采用饱和浓度的抗体，以便使荧光量受 抗原密度限制，而不受单克隆抗体或第二抗体浓度的 限制。通过预滴定几个稀释度的每一单克隆抗体或第 二抗体（以肉眼或流动式细胞计数器读数）确定抗体的 最适稀释度。当一个稀释度呈现出比前一个稀释度弱 的荧光时，抗体便不再处于饱和状态。为了防止该法固 有的波动，常规使用的浓度至少应保证在 # 倍稀释度 时荧光强度亦不致减弱。高浓度的抗体（如腹水）有时 呈现出前带，这一术语用于高浓度的抗体产生阴性反 应，而稀释的抗体呈现阳性反应时。在进行免疫荧光测 定中，由于有足够的未结合的单克隆抗体与溶液中的 标记物反应，从而阻断了标记物于结合与细胞的抗体 反应，可能会产生前带。在这种情况下必需洗涤 # 8 % 次。前带可因更复杂的原因而产生，但在免疫荧光测定 中不常见。 #2 # 温育时间和温度 正像大多数结合—解离平衡 一样，低温有助于结合，而高温有利于解离。然而在较 高温度下更迅速地达到平衡。因此，获得最大结合的良 好方法是先在 %47 温育，然后将温度降至 "7 。然而，另 一个对温度选择有影响的因素是抗体诱导的膜表面上 的抗原移位，这种移位的形式多种多样，如抗原斑片、 抗原盖帽、抗原的细胞摄粒作用及抗原脱落，最终可能 是抗原丢失（抗原调整），显然，这是应当避免的。在整
对于大多数用途来说，间接免疫荧光与直接免疫 荧光相比具有许多优点，尤其是仅用一种标记的第二 抗体即可检测一系列小鼠单克隆抗体。间接法更为敏 感，因为增加了被结合分子的数量。但在某些特殊场合 下，例如在双标志分析或第二抗体可能与靶细胞上的 抗原交叉反应时，则宁可采用直接免疫荧光法。 # 主要影响因素 免疫荧光染色方法主要是检查、鉴
异硫氰酸荧光素（=><3）是目前最为广泛应用的荧 光素。在碱性条件下，=><3 分子上的异硫氰基—? @ 3 @ A 能与抗体蛋白分子中的游离氨基（主要是赖氨酸 的—?:# 和少量的末端氨基）经碳酰胺化而形成硫碳氨 基键，结合为荧光标记抗体蛋白。! 个分子的 >B9 有 CD 个赖氨酸，但一般最多只能标记 !% E #$ 个。因为只有未 质子化的自由氨基才能与 =><3 起加成反应。在抗体侧 链游离氨基有赖氨酸的—?:#，谷氨酸的胍基，杂环氨 基酸———组氨酸，脯氨酸和色氨酸。其中杂环氨基酸不 易 与 =><3 反 应 ， 而 谷 氨 酸 的 胍 基 解 离 常 数 （F& 为 !#5 4C）较赖氨酸的—?:# 为小（F& 为 !$5 %"），所以质 子化的程度较赖氨酸为高，进而不易与 =><3 反应。 在偏碱性环境条件下赖氨酸之氨基部分未质子化，呈 G ?:# 状态而易于进行反应。
为了使单克隆抗体所要认识的目标变成可见的诊 断目标，那就必须通过把放射性物质、荧光素或酶分子 引入抗体等化学修饰手段来达到目的。下面就对单克 隆抗体和免疫荧光染色技术的原理、影响因素等方面 进行探讨。 ! 基本原理 !5 ! 免疫动物脾脏的淋巴细胞即 6 淋巴细胞能够产生特异性抗体，含有为抗免疫原抗体 编码的基因，但在体外培养条件下生存时间极短。而单 个骨髓瘤细胞系虽可在体外长期培养生长，含有提供 无限繁殖和分泌免疫球蛋白能力的基因，但其产生的 抗体却不具有分泌特异性免疫球蛋白的能力。将这两 类细胞融合而产生的杂交瘤细胞，一方面具有骨髓瘤 细胞无限生长的能力，另一方面又继承了免疫淋巴细 胞的功能，携带特异信息，从而大量合成特异性抗体。 由于细胞融合时，在融合剂聚乙二醇（789）的作用下， 只有少数细胞融合而形成杂交瘤细胞，因此必须通过 选择性培养基（:;<）将大量繁殖的未融合细胞分离出
于单抗而言，过度标记物宁可弃之不用。因为实验表明
离子交换层析的流出物之 / 0 & 比变化不大，这也说明 单抗的理化一致性。
综上所述，我们可以看到单克隆抗体荧光标记技
术将成为病毒诊断方面最为快速和准确的方法之一。
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