物体表面微生物监测标准操作规程
表面微生物监测标准操作规程
偏差纠正
▪ 一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以 下行动进行调查和评估：
▪ 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员 的资质是否确认；
▪ 回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果； ▪ 回顾最近一次的沉降菌的检测结果； ▪ 检查人员的更衣程序是否正确； ▪ 检查清洁设备和消毒剂的质量； ▪ 查看操作员工的培训记录。
表面微生物的监测标准操 作规程
目的
▪ 建立表面微生物测试标准操作规程，保证 测试人员操作规范化、标准化
依据
▪ 《药品生产质量管理规范》（2010年修订 本）
范围
▪ 本规程适用于本公司对洁净区的表面微生 物的检测
洁净区微生物测试点选择
▪ 表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方 面设置：
▪ 日常监控一月一次 ▪ 接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。 ▪ 洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法） ▪ 洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。 ▪ 仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培
养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac （Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。 ▪ 取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。取样时，打开碟盖， 无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取 样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。 ▪ 取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。 ▪ 培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～ 28℃培养5天，以所有采样点的平均值总和为最终结果。
版药典表面微生物检测操作规程
1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2表面微生物：4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的大小；2.设备、管路等的复杂程度；3.生产活动的重要性；4.易受污染的部位等。
表面微生物测定操作规程
文件制修订记录一、目的：建立表面微生物测定操作规程，使操作标准化，规范化。
二、范围：各生产车间、化验室。
三、责任人：质控部检验员。
四、管理内容：1 洁净区微生物监测的动态标准如下：2 检测方法2.1 培养皿接触法培养皿接触法(Rodac Plate法)最为简单，但仅适用于平的表面。
在层流下开启表面接触碟，碟内无菌琼脂培养基 (通常直径为50mm)直接与设备表面接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖；用蘸有75%酒精的棉球擦拭被取样表面，除去残留琼脂。
将取样后的接触碟置于预定时间内和规定温度下(例如30～35℃或20～25℃)进行培养，用肉眼对微生物计数并识别，有疑似控制菌应鉴别菌种。
此方法要求将培养基倒人培养皿中并使之隆起，应防止培养基溢出。
2.2 棉球擦抹法对洁净区消毒结束后，可对洁净室内的机械表面＼内部及缝隙间、墙壁、窗台、试验台等量取25cm2的面积，用事先经过灭菌的生理盐水、精制水或缓冲液(例如磷酸缓冲生理盐水)润湿的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内振摇(或作超声波洗涤)，再对浸出液进行增菌培养。
棉签取样能用于 Rodac 盘无法进行取样的场合，例如角落、缝隙等处。
棉签可以由棉花和涤纶制成。
如果棉签是由海藻酸钙做成的那就最好不过，因为这种材料可溶于稀释液，这样便于将微生物释放在溶液中。
擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。
对每个擦拭点应详细记录所在房间的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间。
2.3 浸渍法棉签先用灭菌稀释液(如注射用水)湿润，然后擦拭取样区域，最后放入一个装有灭菌稀释液的试管中。
样品应在2小时内进行测试，以免在稀释液中增加微生物数量。
试管经搅动从棉签上释放出微生物，稀释液则注入培养基盘内，经培养，然后计数并鉴别。
根据USP中表面微生物的检测，面积为25～30平方厘米，一个点使用一根棉签，擦拭完毕后将棉签剪断到5ml生理盐水中，分注到5个平皿中。
物体表面微生物监测标准操作规程
物体表面微生物监测标准操作规程1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程。
2.适用范围2.1医院感染高风险部门，每季度进行检测。
2.2 发生有暴发流行。
3.采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样，清洁区根据现场情况确定。
4.职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。
5.采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
6.采样方法用5 cm×5 cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1~4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10 ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。
若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。
见表（5.5）。
表5.5化学消毒剂的常用中和剂消毒剂相应中和剂浓度（%）含氯消毒剂硫代硫酸钠0.2～1.0复合含氯消毒剂硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.2～1.0+2.0+0.3过氧乙酸硫代硫酸钠0.1~0.5过氧化氢硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.5～1.0+2.0+0.3碘酊碘伏硫代硫酸钠+吐温80 0.5+2.0甲醛双甲酮+马林 1.0+0.6戊二醛甘氨酸+吐温80 2.0+2.0乙醇吐温80+卵磷脂 3.0+0.3氯已定吐温80+卵磷脂注：配制各种中和剂均使用磷酸盐缓冲液（PBS）为基础溶剂。
7. 检测方法将采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂每皿倾注15ml~20ml；36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。
8.结果计算：8.1规则物体表面物体表面菌落总数计算方法见式（A.2）：物体表面菌落总数(CFU/cm2)= 平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数.........（A.2）采样面积(cm2)8.2小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。
药典表面微生物检测操作规程
题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
表面微生物测试标准操作规程
1．目的建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。
4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行5．内容5.1洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：5.1.1空调系统验证的结果5.1.2房间的大小和布局5.1.3房间的用途5.1.4与产品的距离5.1.5人流物流方向同一种培养基（对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
）5.2洁净区微生物测试频率和限度5.2.1日常监控一月一次5.2.2接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。
5.3洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）5.3.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。
5.3.2仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac（Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。
5.3.3取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。
取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。
5.3.4取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。
5.3.5培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～28℃培养5天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。
5.4偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.4.1检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.4.2回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.4.3回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4.4检查人员的更衣程序是否正确；5.4.5检查清洁设备和消毒剂的质量；5.4.5查看操作员工的培训记录。
表面微生物检测标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。
表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。
如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。
不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。
4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。
5、测试状态及时间：动态测试。
6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。
将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。
翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。
7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
物体表面微生物污染检测标准操作规程
物体表面微生物污染检测标准操作规程一、采样方法
二、检测方法
充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0 ml接种平皿，将冷却至40~45 ℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20 ml，36±1 ℃恒温箱培养48小时，计数菌落数。
三、结果计算
物体表面菌落总数计算方法：
1、规则物体表面：
细菌菌落总数（CFU/ cm²）：平均每皿菌落数×稀释倍数/
采样面积（cm²）；
2、不规则物体表面的结果计算，用CFU/件表示。
四、判定标准
1、Ⅰ、Ⅱ类环境：洁净手术部、其他洁净场所、非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器
官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等，物体表
面细菌菌落总数≤5 CFU/cm²。
2、Ⅲ、Ⅳ类环境：儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人工流产室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心检
查包装灭菌区和无菌物品存放区、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室等，物体表面细菌菌落总数≤10 CFU/cm²。
五、采样中的注意事项
1、采样时机：日常常规检测时可在消毒后采样，怀疑医院感
染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被污染时，应随机采样。
2、常规对环境物体表面消毒效果检测时可不进行致病性微生物检测，疑似医院感染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被微生物污染时，应进行目标微生物的检测。
3、采样、接种中严格遵守无菌技术操作规程。
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参考文献
2002版消毒技术规范
门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。
三.结果计算方式：平板菌落数*稀释倍数/采样面积（cm2）
四.结果判断
Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
Ⅲ类区域：细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
Ⅶ类区域工作人员：细菌总数≤15cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
物体表测的科室
文件编号：RJ-IC-SOP-WTBMJC
编写者：糜琛蓉
审核者：倪语星
版次：01
编写日期：2007-5-30
审核日期：2007-5-30
执行日期：2007-6-15
注：本文件程序仅供本院医务人员使用，未经同意，不得翻印
目的：正确进行物体表面微生物监测
内容：
一.采集指征
1．医院感染监控重点科室，每月常规监测。
2．发生医院感染暴发流行时。
二.采集方法
采样时间:在消毒处理后进行采样。
采样方法:用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积≥100cm2，连续采样4个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。