2018-大肠杆菌菌种活化步骤-推荐word版 (6页)
大肠杆菌表达操作规程
大肠杆菌表达操作规程大肠杆菌表达操作规程一、实验材料和仪器准备1. 大肠杆菌菌株：选择适合表达目标蛋白的大肠杆菌菌株，如BL21(DE3)、Rosetta(DE3)等。
2. 表达载体：选择适合目标蛋白表达的载体，如pET 系列、pBAD系列等。
3. 目标蛋白基因：基因可以通过PCR扩增获得，或者从其他载体中克隆。
4. 培养基：溶液制备LB培养基，配制好含有适当抗生素的LB琼脂板，另外还需要制备适用于大肠杆菌表达的诱导培养基，如TB、SB等。
5. 抗生素：根据载体的需要，选用适当浓度的抗生素。
二、诱导表达实验操作流程1. 预先培养：取一株原始菌落接种到含有适当抗生素的LB液体培养基中，为了避免突变株的污染，建议每次都从冷冻保存的单一菌落开始。
培养条件为37℃，180rpm，过夜培养。
2. 选取合适菌液接种量：从过夜的预培养液中取2ml，用于接种适当量的诱导培养基。
3. 诱导表达：根据所用的表达载体，将接种量转移到含有适当抗生素的诱导培养基中，继续培养。
4. 培养条件：培养条件根据所选表达载体的要求进行设置，一般为37℃，180rpm。
5. 收集细胞：在适当的时间点，如在菌液浓度达到指定值或培养时间达到一定程度后，通过离心收集细胞。
6. 细胞破碎：采用适当的方法破碎细胞膜，如超声波破碎、冻融法等。
7. 蛋白质提取：以适当的缓冲液提取目标蛋白质。
8. 蛋白质纯化：采用各种纯化方法（如亲和层析法、凝胶过滤法等）对蛋白质进行纯化。
9. 检测和分析：对蛋白质进行SDS-PAGE、Western blot等分析方法进行检测。
三、注意事项1. 培养条件的控制：控制好培养温度、转速和时间等条件，以保证表达的效果。
2. 抗生素浓度的选择：根据所用载体对抗生素的要求，选择适当的浓度以抑制非目标菌株的生长。
3. 提取和纯化条件的选择：选择适当的缓冲液、酶和抑制剂，以保持目标蛋白的活性和稳定性。
4. 实验材料的无菌处理：所有实验材料（包括培养基、平板、显微镜片等）都要经过严格的无菌处理，以防止外源性污染。
菌种活化_操作方法
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化A. 低温保存管之临时存放及解冻1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。
2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。
3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。
4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。
B. 菌株活化: 在无菌操作下1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。
2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
C. 划线法1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。
2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。
3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。
4. 灼烧接种环，将接种环归位。
D. 图示（1）金属接种环（2）平板划线法冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。
2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
4、( a ) 适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
活化菌种的方法
活化菌种的方法菌种的活化是指将冷冻、干燥或其他方式保存的菌种重新复苏，使其具有生物活性和生长能力的过程。
活化菌种的方法有很多种，根据菌种的特点和保存方式的不同，选择不同的方法进行活化。
本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。
一、液体培养法液体培养法是一种简单、易操作的活化菌种方法。
首先将保存的菌种接种到含有适当营养成分的液体培养基中，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
液体培养法的优点是适用范围广，可以用于多种菌种的活化，且容易控制生长条件，可以获得较高的活化率。
但液体培养法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
二、固体培养法固体培养法是将保存的菌种接种到含有适当营养成分的固体培养基上，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。
固体培养法的优点是可以获得单个菌落，可以对菌株进行纯化和鉴定。
但固体培养法的缺点是需要较长时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
三、滴定法滴定法是将保存的菌种加入到含有适当营养成分的液体培养基中，然后逐渐加入新的培养基，使菌株逐渐适应新的环境。
滴定法的优点是可以逐渐适应新的环境，可以获得较高的活化率。
但滴定法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。
四、化学处理法化学处理法是利用化学物质对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的化学处理方法包括酸碱处理、渗透压处理、氧化还原处理等。
化学处理法的优点是操作简单，可以获得较高的活化率。
但化学处理法对菌株的适应性要求较高，有可能对菌株造成伤害，影响其生物活性和生长能力。
五、生物处理法生物处理法是利用其他微生物对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。
常用的生物处理方法包括共培养法、共生法、共生菌法等。
生物处理法的优点是可以利用其他微生物对菌株进行适应性调节，可以获得较高的活化率。
但生物处理法对微生物的适应性要求较高，且需要较长时间才能获得足够的活化菌种。
大肠杆菌培养步骤方法
大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。
下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。
2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。
3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。
4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。
5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。
6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。
7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。
8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。
9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。
10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。
11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。
12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。
13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。
14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。
15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。
16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。
17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。
18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。
19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。
20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。
大肠杆菌活化操作规程
大肠杆菌活化操作规程1. 引言大肠杆菌(Escherichia coli)是一种常见的细菌，在分子生物学研究中广泛应用。
本文档旨在介绍大肠杆菌的活化操作规程，以确保实验的准确性和安全性。
2. 实验材料和设备•大肠杆菌冻存菌•LB培养基•离心管•无菌吸管•烧杯•恒温培养箱•培养皿3. 操作步骤3.1 准备工作•清洗实验台面，并用消毒液擦拭干净。
•穿戴实验手套和实验服。
•准备所需的实验材料和设备。
3.2 活化大肠杆菌1.取出冻存菌样，以无菌吸管悬浮于10 ml LB培养基中。
确保冻存菌样完全融化。
2.将悬浮的大肠杆菌培养液转移到无菌离心管中。
3.进行高速离心，以1500 g离心10分钟，以沉淀菌细胞。
4.弃去上清液，保留菌细胞沉淀。
5.加入适量的预热(37℃)的LB培养基，用吸管轻轻悬浮菌细胞。
6.取一小部分悬浮液，在无菌培养皿表面均匀涂布。
7.将培养皿放入恒温培养箱中，以37℃孵育24小时。
4. 结果记录与分析观察培养皿表面是否有细菌生长，检查菌落的形态和颜色。
5. 实验注意事项•操作过程中要保持无菌环境，避免细菌污染。
•注意个人安全，保护眼睛和皮肤，避免直接接触培养物。
•严格执行实验室安全规章制度，如正确处理废弃物。
•实验结束后，进行器械的清洗和消毒。
6. 结论通过以上活化操作规程，我们能够成功地从冻存菌样中活化大肠杆菌，为后续实验提供研究材料。
在实验中，严格遵循操作规程和注意事项是确保实验准确性和安全性的关键。
本文档提供了大肠杆菌活化的详细步骤说明，供实验人员参考。
需要注意的是，操作规程可能会因实验目的和实验设备的不同而有所变化，因此在具体操作前请查阅相关实验文献，并根据实际情况进行调整。
2018-2019-活化步骤-范文模板 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==活化步骤篇一：菌种活化步骤总结一下菌种活化需要以下几个步骤：第一配置菌种适宜生长的培养基第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮第四步挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落经过这四个步骤就到达将菌种从保藏状态活化的目的篇二：ACF活化步骤ACF活化步骤说明：F4：反洗出水阀F6：活化进水阀F7：活化出水阀F8：空气排空阀步骤：1. 反洗将要活化的ACF 15-20分钟，小流量排水3分钟2. 将其他未活化的ACFF7打开排水1分钟3. 打开将要活化的ACF的F6，F7，F8阀门4. 确认板式换热器循环侧各阀门均为开启状态5. 打开热水消毒水泵6. 将板换蒸汽侧的排冷凝水阀打开排冷凝水，之后关闭7. 缓慢打开板换蒸汽进口阀门，开始ACF升温8. 待ACF温度升至95℃以上时，打开其他未活化的ACF的F4和F6，冲洗10秒后关闭9. 进入保温阶段，时间不少于2小时10. 保温将要结束时，打开此ACF的两个取样阀，冲洗10分钟后关闭，保温结束，关闭F811. 关闭板换蒸汽进口阀，打开进UF水阀，进入循环降温阶段12. 当ACF温度降至40℃以下冷却降温结束，关闭热水消毒水泵，关闭所有阀门13. 进行ACF反洗，正冲，结束后立即投入使用篇三：斯列普活化炉使用流程官网地址：斯列普活化炉使用流程物料流程：物料进入加料槽后，借重力作用沿着产品道缓慢下行，依次经过预热带、补充炭化带、活化带、冷却带，完成全部活化过程，最后由下部卸料器卸出。
炭化预热段利用炉内热量预热除去水分。
在补充炭化段，炭化料被高温活化气体间接加热使炭的温度不断提高进行补充炭化。
关于菌种活化知识点总结
一、菌种活化的原理和方法1.原理菌种活化的原理是通过特定的方法对微生物菌株进行处理，改善其生长环境和代谢活动，提高其生理功能和应用性能。
菌种活化的关键是创造一个有利于微生物生长和活性的环境，促进微生物的代谢活动和生长繁殖。
2.方法菌种活化的方法主要包括以下几种：(1) 培养基优化：改良培养基的配方，提供适宜的营养物质、微量元素和pH值，创造一个有利于菌株生长和代谢的环境；(2) 激活培养：通过操作改变培养条件，如温度、氧气含量、光照等，刺激微生物的生理活性和代谢活动；(3) 生物激素处理：利用一定的生物激素或生长因子来刺激微生物的生长和代谢活动；(4) 培养基添加：在培养基中添加一些特定的辅助物质，如细胞因子、氨基酸等，促进微生物的生长和代谢活动；(5) 抗生素处理：在一定的浓度范围内添加抗生素，抑制一些有害细菌的生长，保护有益微生物的生长环境；(6) 培养温度控制：控制培养温度，促进微生物的生长和代谢活动。
二、菌种活化的应用菌种活化技术具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 环境保护和修复：菌种活化技术可用于土壤修复、水体净化、废水处理等环境保护和修复工作，促进有益微生物的生长和活性，加速污染物的降解和清除；2. 生物农药和生物肥料：菌种活化技术可用于生产高效、低毒的生物农药和生物肥料，提高其杀菌、杀虫活性和利用率，减少对环境和人体的危害；3. 食品加工和酿造：菌种活化技术可用于食品发酵和酿造工艺中，提高微生物的代谢产物质量和产量，改善产品口感和品质；4. 医药和保健品：菌种活化技术可用于生产保健品和药物中，提高药物的活性和利用率，加快药效，降低副作用。
随着现代科学技术的不断发展，菌种活化技术也将会有更广阔的发展空间和应用前景，主要体现在以下几个方面：1. 专业化和精细化：菌种活化技术将更加专业化和精细化，针对不同的微生物菌株和应用领域，开发出更加精准和有效的活化方法和配方；2. 生物工程技术：菌种活化将会与生物工程技术相结合，通过改造菌株的基因、调控代谢途径、提高酶活性等方法，实现微生物的高效利用和生产；3. 微生物资源开发：菌种活化技术将会成为开发和利用微生物资源的重要手段，通过菌株的活化和增殖，实现对微生物资源的高效开发和利用；4. 产业化应用：菌种活化技术将会逐步应用到相关产业领域，如环境保护、农业生产、食品加工和医药制造中，推动相关产业的快速发展和升级。
菌株活化操作
菌株活化操作
1．准备培养基和接种工具。
选择合适的非选择性培养基，确保营养富集。
准备无菌微量吸管、无菌接种环、无菌棉签、酒精棉球、火焰、培养皿等工具和耗材。
1234
2．活化前准备。
对于冻干菌株，使用75%酒精棉球擦拭冻干管表面进行消毒，然后在火焰上加热外管顶端，滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再用硬棒敲破尖端，取出隔热纤维纸和内管，用灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
3．溶解菌株。
对于液体培养基中的菌株，使用无菌吸管吸取指定量的液体培养基，滴入内管内，轻微震荡直到均匀悬浮。
对于固体培养基中的菌株，使用无菌吸管吸取指定量的无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，用无菌吸管吸取并滴入无菌水，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。
23
4．接种培养基。
在无菌环境下，用无菌微量吸管从内管中吸取菌液，滴入固态指定培养基的边缘附近，使用划线法接种于培养基。
将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。
5．废弃菌种管。
按照适宜的生物危害品处置方法丢弃菌种管，如121℃高压30分钟。
菌种活化传代
菌种活化与传代一、菌种活化下列步骤请在无菌环境下操作：1、把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。
2、先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。
点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。
（有些商品化的产品打开更方便）3、取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许（无菌水也可），加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。
( a ) 适用细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基或无菌水，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。
( b ) 适用霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。
4、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养才能正常生长。
经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。
二、菌种传代1、培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。
标签上写上菌名及接种日期。
至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。
2、点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。
左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。
【2018-2019】大肠杆菌菌种活化步骤word版本 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==大肠杆菌菌种活化步骤篇一：抑菌实验步骤抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸取进行划线！涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂布法1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）培养基MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5gMH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。
菌悬液的配制将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。
具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！
== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==
大肠杆菌菌种活化步骤
篇一：抑菌实验步骤
抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌
菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布，
划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸
取进行划线！
涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂
布法
1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)
2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养）
3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h）
培养基
MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋
白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5g
MH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸
溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。
菌悬液的配制
将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养
箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。
具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于
5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10-
10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品
溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度，
使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。
抑菌作用初步筛选
将灭菌固体培养基加热至熔化，待冷却至50℃时，每20ml培养基倒入无菌培
养皿中。
待平板自然晾干后，分别移取0.1ml待测药品，0.1 mL供试菌悬液，
均匀涂布于加药平板上，每个处理3次重复。
(涂布30min后再倒置)另设置对
照组，涂菌，以等量无菌水（溶解药品物质）代替药液。
上述操作在超净工作
台内进行。
将做好的细菌平板在37℃恒温培养24 h，统计菌落个数，按照下式计算抑菌率。
抑菌率=对照菌落数-处理菌落数?100% 对照菌落数
实验结果表示为：平均数±标准误差（Mean±SDE）。
菌种活化：37℃培养；约24H
挑取两环于50ml 液体培养基上活化：先恒温150r/min震荡12h,再静置培养
8-12h。
达到稳定期后，4度保藏，备用。
生理盐水：8.5gNaCl加入到1000ml 蒸馏水中，121度高压蒸汽灭菌15-20min
即可。
篇二：大肠杆菌电击转化流程
大肠杆菌感受态制备及电转化流程
1. 细菌电转化感受态细胞的制备
准备：50mL离心管3个 10%甘油≥200mL
灭菌蒸馏水≥100mL 冰盒（50mL离心管预冷）2个
1）由-80℃冰箱保存的菌种划单菌落，过夜培养16-20h。
晚上将新鲜的菌落接
种于装有20mLLB培养基的250mL三角瓶中，37℃振荡培养过夜（约12h），转
速控制在200rpm；
2）第二天，取过夜培养物以1%接种量（可适当加大）转接入2个含50mLLB培
养基的 250mL三角瓶中，37℃剧烈振荡（200rpm）培养至OD600约为0.5~0.6；
3）将2瓶细菌培养物分别倒入两个预冷的50mL离心管，然后至于冰水混合物
中骤冷，一定要骤冷，冰水混合物中冷却至少15min（需要的话这种方式可以
存放培养液数小时）
3）将离心管于4℃，4000rpm，离心10min，收集菌体，弃上清；
4）用50ml灭菌蒸馏水(预冷至4℃)轻轻重悬菌体，先加入少量水重悬菌体，
然后把水加满，4℃，4000rpm离心10min，弃上清，再重复一次；
5）再用10%甘油重复步骤4）两次，4000rpm离心10min，最后一次倒尽上清后，再用残存管底的甘油悬浮细胞，分装ep管，100μL/支（一般，25mL起始培养
物最终用200-250μL l0%甘油悬浮）；
6）放入-80℃冰箱中速冻。
或者立即用于电转化。
注意：
1）菌种最好是-80℃冻存的，活化后生长状态较好。
2） 20ml培养过夜，振荡速度不要过高（一般应该是37℃，300rpm，6h，当天转接，这样一天内工作量太大，这里我们选择过夜培养，时间长，转速控制在200rpm，可以适当缩短时间，前一天晚接种，第二天早转接）
3）培养完毕后一定要骤冷，是培养物在短时间内迅速冷却。
冰水混合物中摇
动瓶子，大约15min。
4）使用的器皿一点要非常干净，没有化学物质残存，可以先用餐洗净洗，
再加入NaOH固体和蒸馏水产热，最后用蒸馏水反复冲洗干净。
注意pH值检测
5）培养完毕后的离心操作一定要低温，所用的水和甘油，离心管都要冰上预冷。
6）整个过程尽量不要用枪吹打。
7）器皿和试剂最好最后用重蒸水涮洗和配置。
8）控制好菌体的OD600值，收菌以半对数期合适，一般OD为0.5~0.6最佳，过则不佳。
9）最后一次务必倒尽上清后，用残存管底的甘油悬浮细胞，一般每管仅剩
200μL左右。
切勿用过多甘油也悬浮细胞，我曾用350-500μL10%的甘油/25mL 出发菌液，导致细
胞浓度下降，电转效率低2-3个数量级。
2 电转化
准备：冰盒、1.5mL离心管、电击杯、37℃的LB培养基。