科研基金申请报告

编号

苏州大学大学生课外学术

科研基金项目申请书

项目名称利用siRNA抑制一种新型的糖基

转移酶：β3GalT7的表达在胃癌

发生和转移中的作用

申请人沈力

所在院部医学部基础医学与生物科学学院

苏州大学学生科技协会

二○○八年九月制

一、简表

二、项目设计论证（1、背景本项目当前的研究现状。2、内容本项目研究的主要内容、目标。3、价值本项目的创新程度、理论意义、应用价值。4、可行性论证。5、项目的研究计划方案。请逐项填写）

1. 3 O-糖基化与肿瘤的关系：

随着对基因组学和蛋白质组学研究的深入，人们已经逐渐认识到糖类是重要的生物信息分子，并且是基因信息的延续。糖生物学已经继基因组学和蛋白质组学之后发展成为一专门的学科——糖组学（Glycomics），涉及糖类结构与功能方面的研究。“DNA→RNA→蛋白质”是传统的基因信息传递的中心法则，但是生物体内的信息流并不止于蛋白质，作为蛋白质的酶还可以催化合成许多各种类型的、具有生物活性的分子，糖类就是其中最重要的一类。越来越多的证据表明细胞表面的糖链在发育，分化和肿瘤形成，细胞黏附和转移中能介导多种细胞的相互作用[36]，这些已经愈加引起人们的关注。而肿瘤恶性转化的一个特征就是细胞表面糖基化的改变，其通过影响黏附分子的功能而导致细胞与细胞，细胞与基质间相互作用的改变。聚糖糖链大多在细胞表面和细胞分泌的蛋白上，它们不仅可通过糖基化影响蛋白质功能，还与细胞通讯、信号传递密切相关。而糖链的生物合成必须有糖基转移酶的参与，它催化转移活化的糖基供体上的糖基到糖类或非糖类受体上，形成特殊的糖苷键，因此有关糖基转移酶的研究倍受人们的重视。国内外对糖基转移酶的研究正日益兴盛，随着越来越多的糖基转移酶成员被克隆和鉴定，对它们的功能研究也在进行中。

糖蛋白在生命活动中担负重要的生物学功能，人类细胞中的蛋白质至少70％是糖蛋白，如人类的主要ABO血型就是以糖链为基础的抗原系统。随着近几年科学的迅速发展，每发现一个新基因，都要首先看看这个基因表达的蛋白质是否含有潜在的糖基化位点，并进一步确认是否有糖链存在。蛋白质的糖链分为N-糖链和O-糖链两种，分别由两组酶催化。糖基转移酶可以通过相似的结构序列划分为多个功能亚家族，这些亚家族反映了他们的酶活特性，供体体特性，受体特性和供体和受体之间的特定连接。

β1,3糖基转移酶（β1,3-Glycosyltransferases ，CAZy family 31，EC 2.4.1 ）家族是一个由很

RNAi技术路线：

研究总体目标：

（1）发现和筛选胃癌发生以及转移过程中相对重要的糖基转移酶基因，鉴定有无编码基因的突变，筛选胃癌早期基因分型诊断可能的生物标志物。

（2）揭示糖基转移酶对蛋白质糖修饰调控变化对胃癌细胞的生长发育以及胃癌的浸润转移的作用机制和细胞信号转导调控的机制。

（3）开发肿瘤相关O-糖基转移酶的靶蛋白以及O-糖基化修饰靶位点的鉴定技术；建立胃癌血清糖基化差异糖蛋白表达谱变化技术，探索胃癌的血清早期诊断、预后判断以及肿瘤分型的新方法；

（4）研究糖基转移酶、糖链结构、被修饰靶蛋白在肿瘤发生发展中的功能关系；阐明蛋白O-糖基化与恶性肿瘤细胞分化、增殖、浸润和转移的相关性及其分子机制

三、本项目创新程度、理论意义、应用价值

3.1 研究意义：

胃癌是全世界（包括我国在内）最常见的恶性肿瘤，在发达国家中，胃癌的新发病数为第4位，而发展中国家为第2位，日本、智利、冰岛、奥地利、芬兰、匈牙利等国家为高发地区[41-45]。

转移中的功能及可能机制，相关结果已有多篇论文发表，并通过省级鉴定（O-糖基化与肿瘤浸润转移的相关性研究，苏科鉴字[2005]第903号）。

4.2 研究工作所需技术平台，如酵母双杂交及RNAi技术等，课题组均已成功构建。

4.3 相关工作技术已有一定基础，指导老师吴士良、徐岚均为归国留学人员，其中徐岚老师在哈佛骨病研究所主要研究MMPs方面工作；熟悉基因转染、RNAi、酵母双杂交等技术。

4.4 本课题组部分基因载体已构建成功，正发表多篇相关文章。

工作条件:

4.5 申请人所在生化及分子生物学教研室为国防科工委“十一·五”生命科学类重点规划学科，该室及医学院中心实验室拥有实时定量PCR仪、CO2培养箱、HPLC仪、UVP图象分析仪、电泳仪、紫外及可见分光光度计等分子生物学实验所需基本仪器设备。所在单位及相关基地具有芯片扫描仪、质谱仪、共聚焦显微镜等相关设备。

4.6实验所需载体、细胞株、基因等本室多已具有，其他试剂等均可从国内外试剂公司购得。

五、项目的研究计划方案

工作进度主要工作内容

2008年11月-2008年12月细胞培养及预实验

2009年1月-2009年5月基因转染与RNAi技术应用

2009年6月-2009年7月研究分析β3-GalT7与胃癌发生与转移关系

三、经费预算

四、推荐老师意见

五、专家推荐意见（重大项目须填写）

五、院（部）意见

六、校评审组意见

说明：本表一律打印或使用蓝色或黑色钢（水）笔填写。一式两份。