SDSPAGE测量蛋白质分子量解析
SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量解析
• 5．支持介质的筛孔：支持介质的筛孔大小 对生物大分子的电泳迁移速度有明显的影 响。在筛孔大的介质中泳动速度快，反之 则泳动速度慢。
电泳技术的分类
• 1. 根据电泳中是否使用支持介质分为自由电泳和区带电泳： ①自由电泳不使用支持介质，电泳在溶液中进行。②区带 电泳需使用支持介质，根据支持介质不同可分为醋酸纤维 薄膜电泳、薄层电泳和凝胶电泳等。根据支持介质的装置 形式不同又可分为水平板式电泳、垂直板式电泳、垂直盘 状电泳、毛细管电脉等。 • 2.根据电泳时电压的高低分为高压电泳和常压电泳：①高 压电泳使用的电压在500～1000V，这类电泳分离速度快， 但热效应较大，必须具备冷却装置，主要适用于小分子化 合物的快速分离。②常压电泳使用的电压在500 V以下， 电位梯度为2～10 V /cm。这类电泳的分离速度较慢，但 对电泳设备要求简单。
• 4．电渗：液体在电场中对于固体支持介质 的相对移动称为电渗。由于支持介质表面 存在一些带电基团，如滤纸表面含有羧基， 琼脂含有硫酸基等。这些基团电离后使支 持介质表面带电，吸附一些带相反电荷的 离子在电场作用下向电极方向移动，形成 介质表面溶液的流动。 • 当电渗方向与电泳方向相同时则加快电泳 速度；当电渗方向与电用的示踪剂有溴酚兰和二甲苯青FF。 示踪剂一般与蔗糖、甘油组成上样缓冲液， 蔗糖、甘油可增加溶液密度，使其比重增 加，以确保样品均匀沉入加样孔内。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
【基本原理】 • 本实验用醋酸纤维薄膜作电泳支持物分离血清 蛋白质。血清蛋白质的等电点都小于7.5，在 pH=8.6的巴比妥缓冲溶液中都带有负电荷，在电 场中将向正极移动。由于血清中各蛋白质的等电 点不一，所带净电荷有差异，所以它们的泳动速 率也不同。将微量血清点于薄膜上，通电电泳后， 将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色，可将血 清蛋白质分成5条区带，从正极端起分别为白蛋白、 α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分子量
(4)聚丙烯胺凝胶的生成：
四、实验步骤：
1、贮液的配制：
2、凝胶的制备： 2.1 胶板的制备： 2.2 分离胶的制备： 2.3 浓缩胶的制备：
3、蛋白样品的制备：
4、装槽、点样： 5、电泳： 6、剥胶、染色、脱色：
2.1 胶板的制备：
3、植物组织蛋白质提取：
称取大豆叶片1g放在研钵中用液氮研磨，加
第二、不连续系统中的三种物理效应：
①电荷效应：
②分子筛效应: ③浓缩效应:
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：黄瓜叶片(芽黄叶和正常叶)
2、仪器、器皿：
(1)垂直板电泳装置
（电泳槽，玻璃板，胶条，电泳梳子，制胶架等）； (2)稳流稳压电泳仪； （4）电子天平； （6）瓷盘、微量进样器； （3）高速冷冻离心机； （5）电冰箱；
②光聚合：
催化剂是核黄素（VB2 ），在痕量氧存在下，核黄素光
解形成无色基，无色基再被氧氧化成自由基，激活单体发 生聚合。光聚合形成的凝胶孔径较大，且不稳定，适于制 备大孔径的浓缩胶。
5)聚丙烯酰胺凝胶结构上的特点：
① 聚丙烯酰胺的基本结构为丙烯酰胺单体构成的长 链，链与链之间通过甲叉桥联结在一起；
⑧支持物筛孔大小：
孔径小，电泳速度慢，反之则快。
2、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE测定蛋白质分子量
02 实验材料
所需的试剂和溶液
丙烯酰胺（AA）：用于制备凝胶，是聚合反应 的单体。
甲叉双丙烯酰胺（MBA）：交联剂，增加凝胶 的交联度。
N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）：催化剂， 加速交联聚合反应。
所需的试剂和溶液
过硫酸铵（APS）
引发剂，产生自由基，引发聚合反应。
SDS
十二烷基硫酸钠，用于变性蛋白质并促使其 带负电荷。
发展新型分离技术
随着生物技术的不断发展，可以发展新型的蛋白质分离技术， 如二维电泳、毛细管电泳等，以提高蛋白质分离的分辨率和准
确性。
应用多维度分析
在后续实验中，可以将SDS-PAGE与其他蛋白质分析技术相结 合，如质谱技术、免疫学检测等，进行多维度分析，更全面地
了解蛋白质的性质和功能。
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白质带负电荷，从而在电场中向正极移动。
聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，能够根据蛋白质分子量的不同
03
对其进行分离。
蛋白质的分子量测定
通过比较标准蛋白的迁移率和已知分 子量的标准蛋白，可以大致测定出待 测蛋白质的分子量。
蛋白质的迁移率与其分子量的对数成 反比，因此可以通过计算待测蛋白与 标准蛋白的相对迁移率来推算其分子 量。
甘氨酸
作为分子量标准品。
Tris-HCl缓冲液
维持电泳过程中的pH值稳定。
所需的仪器和设备
电源
为电泳提供电力。
凝胶板
放置凝胶的框架。
垂直电泳槽
提供电泳所需的基 本结构。
移液器
精确添加试剂和溶 液。
紫外透射仪
检测蛋白质条带。
实验前的准备事项
清洗电泳槽和相关器具，确保无残留物。 准备好所需的试剂和溶液，并确保其在有效期内。
SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量
SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量SDS-PAGE电泳是现代生物学和生物化学研究中最常用的方法之一，可用于测定蛋白质的相对分子质量、纯度和数量等指标。
下面将就SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量进行介绍。
SDS-PAGE电泳的原理：SDS-PAGE电泳是一种基于PAG（聚丙烯酰胺凝胶板）的矩阵上运行的直流凝胶电泳。
相对分子质量（MW）是以电泳迁移距离为单位来表示的。
蛋白质在PAG上被限制在孔道中运动，因此，蛋白质分子迁移距离与分子大小成正比。
通过使用外部标准，可以精确地将样品的迁移距离转换为分子量。
这种分离方法受到电荷和大小作用的影响，电势梯度使带电的蛋白质分子在凝胶中迁移。
SDS-PAGE电泳的过程：SDS-PAGE电泳的过程主要包括：样品加载、电泳和染色步骤。
（1）样品加载：样品的制备：蛋白质样品通常经过还原和变性，以便将所有蛋白质中的二硫键断裂并且在孔道中呈现线性的多聚蛋白质结构。
这需要在治疗过程中对样品添加SDS缓冲液，然后在热水浴或高压下暴露于还原剂，例如2-硫代乙酸（DTT）或β-巯基乙酸（MEA）。
（2）电泳：将处理过的样品通过凝胶基质中的丝状孔道。
随着电场的施加，蛋白质会在SDS凝胶板上自由迁移，从而分离出蛋白系列。
（3）染色：电泳结束后，将凝胶板进行染色。
目前较常用的方法是银染、共染和Coomassie Brilliant Blue染色法。
SDS-PAGE电泳的应用：SDS-PAGE电泳广泛应用于研究蛋白质相对分子质量、活性定量、纯度评估、亚基分离等方面。
其中，蛋白质相对分子质量的测定是SDS-PAGE电泳的最主要应用之一。
通过将未知蛋白与已知分子质量蛋白一起电泳，可以通过线性回归计算未知标本的分子大小。
SDSPAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告
SDS_PAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告实验报告：SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量一、实验目的通过SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）测定蛋白质相对分子质量，了解其基本原理和实验操作流程。
二、实验原理SDS-PAGE是一种常用的测定蛋白质相对分子质量的方法。
它利用十二烷基硫酸钠（SDS）与蛋白质的结合性质，将蛋白质变性并带负电荷，使得蛋白质在电场中的迁移率仅取决于相对分子质量，而与蛋白质的等电点、电荷性质无关。
通过比较标准蛋白质的迁移率和已知相对分子质量的蛋白质，可确定待测蛋白质的相对分子质量。
三、实验步骤1.准备试剂和器材：SDS-PAGE所需试剂包括丙烯酰胺、N-丙基甲基丙烯酰胺、过硫酸铵、甘氨酸、十二烷基硫酸钠、tris缓冲液、G250染料、乙醇等；器材包括电泳槽、制胶板、移液器、电泳仪、电源等。
2.制备标准蛋白样品：选择已知相对分子质量的标准蛋白样品，将其与G250染料混合，煮沸变性，冷却后作为标准蛋白样品。
3.制备样品：将待测蛋白质样品与G250染料混合，加入适量SDS-PAGE缓冲液，煮沸变性，冷却后作为待测样品。
4.制胶：将丙烯酰胺、N-丙基甲基丙烯酰胺、过硫酸铵、甘氨酸、tris缓冲液等混合，倒入制胶板中，插入样品梳子，静置凝固。
5.电泳：将凝胶放入电泳槽中，加入适量电泳液，将标准蛋白样品和待测样品分别加入对应的孔中。
打开电源，调整电流和电压，开始电泳。
6.染色和脱色：电泳结束后，将凝胶取出，用G250染料进行染色，然后进行脱色处理，以呈现清晰蛋白质条带。
7.相对分子质量测定：通过比较标准蛋白样品的迁移率和已知相对分子质量的蛋白样品，可确定待测蛋白质的相对分子质量。
四、结果分析通过本实验，我们成功地得到了SDS-PAGE凝胶电泳图谱，并测定了待测蛋白质的相对分子质量。
通过与标准蛋白样品的迁移率进行比较，发现待测蛋白质的相对分子质量约为50kDa。
此外，我们还发现不同浓度的待测蛋白质样品在凝胶电泳图谱上的条带位置也存在差异，表明它们具有不同的相对分子质量。
SDS-PAGE蛋白质纯度分析
SDS-PAGE蛋白质纯度分析十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语：sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE）是较常用的一种蛋白纯化分析技术。
SDS-PAGE可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离。
如果蛋白质样品中含有多个蛋白质或者纯化蛋白样品中含有其他杂蛋白，经过SDS-PAGE分离后不同的蛋白质会被分离成多个蛋白条带。
如果纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，则只显现一条蛋白条带。
由此SDS-PAGE技术可以对蛋白质样品的纯度进行分析。
SDS-PAGE分析原理SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质-SDS复合物在电泳时的迁移速度仅由蛋白质分子量决定，不同的蛋白质由于分子量的差异经过SDS-PAGE电泳后分离，再经由蛋白质染色对蛋白质分离结果进行分析。
蛋白质SDS-PAGE分析流程1. 蛋白质浓度检测2. 样品处理: 在蛋白样品中加入等量含有B-巯基乙醇的2x loading buffer，煮沸10分钟3. 电泳准备: 配置合适浓度的SDS分离胶，安装电泳槽，注入1x 电泳液4. 蛋白质样品上样：根据蛋白质浓度，取适量处理过的蛋白样品依次加入电泳孔槽内，另外取适量蛋白标准marker加入其他空余孔槽内。
5. 开始电泳: 接通电源，将电压调至120v，保持恒定电压。
6. 电泳结束剥离胶: 当溴酚蓝迁移至凝胶底部，停止电泳；将蛋白胶取出，并切去浓缩胶和分离胶底部的溴酚蓝胶条。
7. 染色: 使用R250染色液对蛋白胶染色1小时8. 脱色: 使用脱色液对染色的蛋白胶脱色至背景干净，蛋白条带清晰可见9. 拍照分析中/英文项目报告在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：1. 实验步骤（中英文）。
5 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子量
实验SDS - PAGE测定蛋白质的相对分子量一、目的了解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，并学会用这种方法测定蛋白质的相对分子量。
二、原理聚丙烯酰胺凝胶电泳之所以能将不同的大分子化合物分开，是由于这些大分子化合物所带电荷的差异和分子大小不同之故，如果将电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，这些化合物在凝胶上的迁移率则完全取决于相对分子质量。
SDS是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）的简称，它是一种阴离子去污剂，它能按一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质原有的电荷，也就消除或降低了不同蛋白质之间原有的电荷差别，这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，就可根据标准蛋白质的相对分子量的对数对迁移率所作的标准曲线求得未知蛋白质的相对分子质量。
本实验用目前常用的垂直平板电泳，样品的起点一致，便于比较。
三、试剂和器材（一）试剂1. 凝胶贮备液：丙烯酰胺（Acr）29.2g和亚甲基双丙烯酰胺（Bis）0.8g重蒸水溶解后，定容至100ml，棕色试剂瓶4℃保存，30天内使用。
2. 分离胶缓冲液：1.5mol/L Tris-HCl，pH8.8。
18.15 Tris（三羟甲基氨基甲烷），少许重蒸水溶解，用1M HCl调pH8.8，重蒸水定容至100ml，4℃保存。
3. 浓缩胶缓冲液：0.5mol/LHCl，pH6.8。
6gTris,少许重蒸水溶解，用1M HCl调pH6.8，重蒸水定容至100ml，4℃保存。
4. 10%SDS，室温保存。
5. 两类样品缓冲液：2倍还原缓冲液（2×reducing buffer）0.5mol/L HCl，pH6.8 2.5 ml甘油 2.0 ml质量浓度10%SDS 4.0ml质量浓度0.1%溴酚蓝0.5mlβ-巯基乙醇 1.0 ml总体积10 ml6. 电极缓冲液，pH8.3。
Tris3g，甘氨酸14.4g，SDS1.0g加重蒸水溶解定容至1000ml，4℃保存。
生物化学实验-SDS-PAGE电泳法测定蛋白质分子量
2、当蛋白质的分子量在15000～200000之间时，电泳迁 移率与分子量的对数值呈直线关系，符合下列方程： ㏒10Mr = －b·mR + K
（式中：Mr为蛋白质分子量，mR为相对迁移率，b为斜率，K为截距。 在条件一定时，b 和K均为常数。）
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数 作图，可获得一条标准曲线。未知蛋白质在相同条件下进 行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子 量。
2）1mol/L，pH8.8Tris-HCl缓冲液 Tris 21g 溶于蒸馏水，用浓HCl调至pH8.8蒸馏水定容1000ml。
3）1mol/L，pH6.8 Tris-HCl 缓冲液 Tris21g 溶于蒸馏水，用浓 HCl调至 pH6.8 定容1000ml。
4Байду номын сангаас10%（W/V）SDS 5）10%（W/V）过硫酸铵（现用现配） 6）TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)
实验试剂
（1）标准蛋白质（低分子量Marker）
蛋白质名称
分子量
兔磷酸化酶B
97400
牛血清白蛋白
66200
兔肌动蛋白
43000
牛碳酸肝酶
31000
胰蛋白酶抑制剂
20190
鸡蛋清溶菌酶
14400
待测蛋白质：牛血清白蛋白、人血清蛋白
（2）凝胶试剂
1）30%（W/V）丙烯酰胺 30g 丙烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，溶于100ml蒸馏水中，储 于4℃暗处，一个月内可使用。
（3）10×电极缓冲液（pH8.3） Tris30.3g，甘氨酸144.2g，SDS10g，溶于蒸馏水并定 容至1000ml。使用时10倍稀释。
（4）2 样品稀释液 SDS 500mg，巯基乙醇1ml，甘油3ml，溴酚蓝4mg， 1mol/L，pH6.8Tris-HCl 2ml，用蒸馏水定容至10ml。 按每份0.5-1.0ml分装，-20℃贮存。以此液制备样品时， 样品若为固体，应稀释1倍使用；样品若为液体，则加入 于样品等体积的原液混合即可。
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20-30 15-20 10-15 5-10
2-5
10-20 5-10 2-2.5
5%
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45
29
迁 移
A
率
B
5 7 9 11 13 15 T%
凝胶浓度T对样品迁移率的影响
例：混合蛋白质A,B，A分子量较小，B分子带电荷较多，T＝5％ 时，电泳行为主要以电荷起作用，B 迁移速度快。当 T 增加，分 子筛效应增加，B的迁移速度减慢；T＝ 9 ％时，A，B的迁移率 相同，不能分开，T 再增加，凝胶孔径更小，A分子比B分子小， 表现较高的迁移率。并且说明电泳只获得单一的带时，并不能证 明是单一的均一成分。
DMAPN
β－二甲基胺基丙晴
影响聚合因素
1. 大气中氧能淬灭自由基，使聚合反应终止，所以在聚合过程 中要使反应液与空气隔绝。
2. 某些材料如有机玻璃，能抑制聚合反应。 3. 某些化学药物可以减慢反应速度，如赤血盐。 4. 温度高聚合快，温度低聚合慢。 5. 碱性条件下凝胶易聚合，其聚合速度与AP浓度的平方根成正
支持介质－聚丙烯酰胺凝胶
聚合原理：
单体丙烯酰胺Acr
交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺Bis
化学聚合
光聚合
引发剂 加速剂
（NH4)2S2O8 TEMED
（NH4)2S2O8 DMAPN
核黄素 TEMED
注： （NH4)2S2O8
TEMED
过硫酸胺在凝胶形成中提供始自由基，通过自由基的传递， 使丙烯酰胺 成为自由基，发动聚合反应 N，N，N，N-四甲基乙二胺
0.025mol/L Tris（三羟甲基氨基甲烷） 0.2mol/Gly (甘 氨酸) PH8.3 样品缓冲液 0.1mol/L Tris-HCl,PH 6.8, 40%甘油、0.05mg/ml溴酚蓝 样品缓冲液的要求： 选择合适的PH与离子强度，以保证样品的溶解性、稳定性、 生物活性。并加入便于观察电泳前沿的指示剂。
比。
6. 聚丙烯酰胺凝胶优点
7. 化学性质稳定；凝胶孔径可调； 8. 重复性好；分辨率高； 9. 灵敏度高，可以测定10-6浓度的样品。
T ab10(0％ m
C b 100％ 1 ab
凝胶浓度的计算
聚合后的聚丙烯酰胺凝胶的强度、弹性、透明度、粘度和孔 径大小均取决于两个重要参数T和C，T是丙烯酰胺和甲叉双 丙烯酰胺两个单体的总百分浓度。C是与T有关的交联百分 浓度。T与C的计算公式是：
不连续凝胶电泳洗脱
碱性不连续－分离酸性样品
酸性不连续－分离碱性样品
大多数蛋白质分子呈酸性或中性，适合用碱性系统进 行电泳分离。
①浓缩效应
1.凝胶的组成：浓缩胶为大孔径（稀） T ＜5％，分离胶一般为小孔径（浓） T﹥7.5％。样品在较稀的凝胶上自由迁 移，直至浓凝胶时，便形成一道栅栏， 所有的样品分子在浓缩胶的界面堆积成 一窄带，得到浓缩，然后，再依据分子 量的大小进行电泳分离。
C
a＋ bb10（0 ％）T
ab10(0％ ）
m
上式中a为丙烯酰胺的克数，b为甲叉双丙烯酰胺的克数，m 为水或缓冲液体积（ml）。式中a与b的比例很重要。富有 弹性，且完全透明的凝胶，a与b的重量比应在30左右。
分子量范围与凝胶浓度的关系
物质 蛋白质
核酸
分子量范围 适用的凝胶浓度（%）
<104 1-4×104 4×104-1×105 1-5×105 >5×105
Hale Waihona Puke 标准蛋白质样品标准蛋白质样品：是一组（5～7种） 已知的合适的分子量范围的、构形 相近的一套蛋白质，溶解在样品缓 冲液中备用。
样品的浓度 分析目的、检测方法和样品的组成
是关键； 未知样品浓度：0.1～20mg/ml 考玛斯亮篮染色：1～2mg/ml 银 染 色 :0.02～0.2mg/ml 高纯度样品： 0.5～2mg/ml
加样
电泳
光吸收
检测
考玛斯亮篮染色
染色
银 染色
SDS-PAGE测蛋白质分子量
SDS-PAGE是在PAG系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS能 断 裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能 使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的 SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质 复合 物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状 态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了 各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按 重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分 子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子 量 的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子 量，X 为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率 对 分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进
EXPERIMENT 7
SDS-PAGE测 量
蛋白质分子量
实验目的
学习聚丙烯酰胺凝胶聚合原理； 学习不连续聚丙烯酰胺凝胶分离原理； 掌握垂直板电泳的操作方法； 学习SDS-PAGE测蛋白分子量原理并测定。
聚丙烯酰胺凝胶电泳—
PAGE (Polyacryamide gel electrophoresis)
③电荷效应
操作
PH8.3 PH6.7 PH8.9 PH8.3
1. 垂直柱状，板状 的不连续凝胶电泳 系统的组成和配制
1. 垂直柱状，板状的不连 续凝胶电泳系统的组成 和配制；
2. 均一凝胶与梯度凝胶配 制；
3. 电极缓冲液系统；
4. 样品的准备；
5. 加样要求
6. 电泳
7. 检测
缓冲液系统
浓缩凝胶缓冲液 0.5mol/L Tris-HCl,PH6.8 分离凝胶缓冲液 1.5mol/L Tris-HCl,PH8.8 电极缓冲液系统
不连续凝胶电泳（disc）的分离原理
(一).原理
不连续凝胶电泳系统具有与一般电泳的① 电荷效应分离 外，还具有②浓缩效应与③分子筛效应，因而，能提高 电泳的分辨率；使电荷性质与密度相近的但分子量有差 别的分子得以分离；或分子量相近、性质一样、电荷性 质与密度有差别的分子可以分离；或电荷性质、分子量 大小相近，但构型不同时亦可分离。
2.缓冲液的组成:图示。PH系统的不连续， 各种分子的电荷之间的差异进行分离。
3.缓冲体系的不连续，其中各组成的离子、 快慢离子迁移快慢的差别是影响样品浓 缩效应的重要因素。
4.离子的迁移速率及浓度的不连续又造成 电场强度与电导率的变化。
②分子筛效应
移动界面到达浓缩胶和分离胶 界面时，凝胶的PH变化明显， 缓冲液中甘氨酸的解离迅速增 加，直至完全解离出 gly-,其 分子量小，迁移超过蛋白质分 子。而丧失夹击的作用；同时， 凝胶的孔径变小，降低了蛋白 质的迁移率。故蛋白质分子在 均一的电压梯度和PH 值中泳 动，依其分子量的大小而分开。