覃重军(多拉菌素)
多拉菌素驱除绵羊寄生虫药效试验
多拉菌素驱除绵羊寄生虫药效试验作者：张永忠来源：《畜牧兽医科学》 2019年第10期张永忠（青海省海西州乌兰县畜牧兽医工作站，海西 817199）摘要：应用多拉菌素注射剂，选择自然感染消化道线虫和部分外寄生虫的1岁绵羊，试验发现多拉菌素注射剂0.2 mg/kg和0.3 mg/kg剂量对消化道线虫的虫卵转阴率分别为95.0%和100.0%；对原圆科线虫幼虫转阴率分别为85.0%和95.0%；总驱虫率分别为99.3%和99.9%。
多拉菌素注射剂0.2 mg/kg剂量驱除绵羊寄生虫高效安全。
关键词：多拉菌素；绵羊；寄生虫；试验中图分类号：S858.26文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.10.0090 引言在北方牧区寄生虫病是放牧绵羊的常见多发病，严重影响绵羊生产性能和幼年羊成活率。
目前，应用药物定期驱虫、杀虫仍是防治家畜寄生虫病最为有效的手段，因而选择新型高效、广谱、低毒的抗寄生虫药物显得尤为重要。
多拉菌素是阿维菌素的第3代衍生物，属于新大环内酯类抗生素[1]。
多拉菌素在畜牧临床上驱虫效果显著，已有试验研究发现其在治疗猪、牛、羊等养殖家畜的多种寄生虫中取得了良好效果[2-4]。
为深度分析多拉菌素对藏系绵羊寄生虫的驱虫作用，为临床使用提供科学依据，于2012年3—4月参加了青海畜牧兽医科学院承担的国家科技支撑计划课题（2006bad31b08）的抗寄生虫药物临床试验研究工作，整理报告如下。
1 材料与方法1.1 试验药品（1）试验药物：多拉菌素注射剂（104-54010H，美国辉瑞有限公司）。
（2）对照药物：1%伊维菌素注射剂（20091206，北京中农大生物技术股份有限公司）。
1.2 试验动物来源于海西州乌兰县柯柯镇北柯柯村，通过粪检，选择自然感染体内消化道线虫、肺线虫（原圆科线虫）的1岁绵羊100只供试。
1.3 试验分组将100只绵羊随机分为5组，每组20只，其中1～3组为多拉菌素注射剂低、中、高剂量试验组，分别按0.1、0.2和0.3 mg/kg的剂量肌肉注射给药；4组为药物对照组，伊维菌素注射剂按0.2 mg/kg剂量皮下注射给药；5组为阳性对照组，不给药。
多拉菌素的研究进展及应用
多拉菌素的研究进展及应用
高玉红;郭照成;刘方悦;高玉阁;宋铭忻
【期刊名称】《东北农业大学学报》
【年(卷),期】2009(040)004
【摘要】多拉菌素是新一代大环内酯类抗寄生虫药,具有安全、广播、高效、长效和奶中残留低等特点,文章从多拉菌素的药物制剂、药代动力学、药物残留检测、毒理学及其对机体免疫力的影响以及在临床兽医中的应用等几个方面进行了阐述,为临床合理用药提供可靠的指导.
【总页数】4页(P141-144)
【作者】高玉红;郭照成;刘方悦;高玉阁;宋铭忻
【作者单位】东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,150030;黑龙江畜牧兽医职业学院,黑龙江,双城,150111;哈药集团生物疫苗有限公司,哈尔滨,150069;哈药集团生物疫苗有限公司,哈尔滨,150069;天津市圣世莱科技有限公司,天津,301609;黑龙江畜牧兽医职业学院,黑龙江,双城,150111
【正文语种】中文
【中图分类】S859.7
【相关文献】
1.多拉菌素的研究进展及应用 [J], 张颖;李坤林
2.抗寄生虫药多拉菌素的研究进展 [J], 冯小花;肖兵南;唐利洲
3.多拉菌素的研究进展 [J], 徐美佳;胡志松
4.抗寄生虫药多拉菌素的研究进展 [J], 杨东来;高玉红;梁立
5.多拉菌素研究进展 [J], 李学钊;刘根新;王治仓;李海前
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抗寄生虫药多拉菌素的研究进展
２ ． １ 合理规 范使用抗生素 （ １ ）在动物疾病 防治工作 中要 贯彻 执行“ 预防为主” 的方针 。
在“ 防重于治 ” 的基础 上强调 “ 养 重于 防” 、 “ 养 防并举 ” ， 增加
持研究 开发 高效 、 无毒 、 无 残留 、 安全 的动物专用抗 菌药 物新
基础兽 医学及 生物制 药方面教学研究工作
、
应， 给人体 健康 带来 危害。 人们耐药性也会不知不觉增强 ， 人
体将来一旦患病 ， 很 可能就无药可 治。
２ 对 策
全程安全监控体系 ， 对动物产 品实行 市场 准入 制和产地追溯 制， 对滥用抗生素 的养殖者 和销售药 物残 留超标 动物产品的 违法行为 ， 依法严惩。
品种 ， 克服 目前抗菌药物存在 的缺点 ， 提高产 品的质量 。 探索 运用中草药解决抗菌药物 的污染问题。 在改善动物养殖 环境 的 同时 ， 深入发掘利用 天然 中草 药的优势 ， 改变 目前过度依 赖 化学物质 与抗生素作 为饲料 添加剂和兽药局面 ， 创造我 国 特 色的生态养殖新模式 ， 可以从源头上解决食品安全 问题 。
的信息 ， 帮 助消费者理性选择 。同时健全食 品生产到餐桌的
●
（ ４ ）强化兽药分类管理制度 ， 将兽医用药划分为处方药和非
处方药 。对人和动物容易产生药物残 留和耐 药性 的抗 生素 ，
依法确 定使用人 的权利和责Βιβλιοθήκη ，以保 障兽 医用抗生 素的管
理。
（ ５ ）完善 网络化兽医用药 监控体 系 ， 推动科 学化管理进程 。
专 论 与 综 述
抗寄生 药多拉菌素的研究进展
多拉菌素驱除猪体内线虫试验
多拉菌素驱除猪体内线虫试验周绪正;张继瑜;李金善;李剑勇;徐忠赞【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2005(26)1【摘要】选取80头仔猪进行驱除体内线虫试验,试验分5组进行(多拉菌素高、中、低剂量组、伊维菌素对照组及空白对照组).通过试验前后寄生虫感染情况的比较,表明多拉菌素驱除猪寄生线虫效果确实、可靠,其中高剂量组和中剂量组药物残效期达28d.推荐使用中剂量即300μg/kg体重.【总页数】3页(P110-112)【作者】周绪正;张继瑜;李金善;李剑勇;徐忠赞【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业部新兽药工程重点实验室,甘肃兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】S859.795;S858.28【相关文献】1.多拉菌素等三种药物驱除绵羊胃肠道线虫效果观察 [J], 刘建国;陈亮;王宗元;李仁阁2.丙硫咪唑缓释药弹驱除绵羊消化道线虫及肺线虫效果试验 [J], 祁文珍;胡义;杨什布加3.多拉菌素驱杀猪体内线虫和体外血虱试验 [J], 周绪正;张继瑜;李金善;李剑勇;徐忠赞4.多拉菌素驱除绵羊消化道线虫试验 [J], 周绪正;张继瑜;李金善;徐忠赞;李剑勇;孙国栋;李金书5.多拉菌素驱除绵羊寄生虫药效试验 [J], 张永忠[1]因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗寄生虫药多拉菌素的研究进展_冯小花
的不足之处提出了新的研究方向及展望。
关键词：多拉菌素；展望；综述
中图分类号：S859.79+5
文献标识码：A
文章编号：1006-4907（2008）06-0001-03
多拉菌素(Doramectin DRM)是一种新的高效 抗体内外寄生虫药物， 于上世纪 90 年代由美国辉 瑞公司研制开发，是新大环内酯类抗生素阿维菌素 (Avermectin. AVM)的第 3 代衍生物(伊维菌素是 2 代 Ivermetin. IVM)，由阿维链霉菌基因工程变异株 加入环已烷基羧酸后生物合成获得一种十六元大 环内酯类半合成抗生素，其结构与伊维菌素的差别 在 C25 位上具有环已烷基，该种药物为白色或淡黄 色结晶粉末，是一种脂溶性药物，可溶于许多有机 溶剂如丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、二甲基亚砜等， 但在水中的溶解度极低。 多拉菌素的抗虫机制主要 是引起虫体谷氨酸控制氯离子通道开放，氯离子也 引起神经之休止电位的超级化，使虫体神经传导受 阻发生麻痹致毙。 该类药物不易透过血脑屏障，因 而进入机体后极少分布在哺乳动物的脑组织，并且 与畜禽脑组织特异性的结合力较无脊椎动物低 100 多倍。 所以可选择性的作用于宿主的体内外寄 生虫，而对宿主本身不表现作用。 1 多拉菌素的抗虫谱
(脱氢阿维菌素)的驱虫效果更佳。
近几年来，我国抗寄生虫制剂研究也开始关注
缓控释制剂和脂质体制剂等技术， 但这些新剂型和
新技术大多还处于研究阶段， 在处方设计或制剂工
艺方面都还存在一些问题， 今后应加强这些新剂型
的工艺和技术研究，以真正发挥这些新剂型的优点。
国内报道的多拉菌素的剂型只有注射剂， 商品名为
国内对多拉菌素在动物组织中残留的研究较 少，而且仅限于方法的研究，对多拉菌素在靶动物 体内的残留研究也就更少了。 王海等用 HPLC(荧光 检测器)对猪组织中 DRM 的残留进行了测定，在其 肌肉、 肝脏、 肾脏和皮下组织中添加 DRM 浓度为 1ng/g、2ng/g、5ng/g 时，回收率为 55％～75％，检测限为 1ng ／ g。 5.2 最高残留限量
多拉菌素在治疗猪寄生虫上的应用
（ ） 苗 。 当稚 贝培育 至商 品苗 时 ， ４移 应及 时移 苗 性腺 解剖检测 。⑤海 区浮游幼虫 的采集及检查 。
３ ７ 波 纹 巴非蛤 养 殖 区性 腺 发 育 和 自然 繁 殖 习惯 因子之 间互动关系 。① 了解 波纹 巴非 蛤性腺成熟周 期 ．
及促使 自然排放的因素 。②及 时掌握波纹 巴非蛤性腺
０日龄 （ 猪 转 群 之 前 ） 驱 虫 １次 。对所 有 新 进 仔 各 然感 染 病例 在用 药后 ７ １ｄ时 ， ～２ 虫体 可被 １ 。 在对 猪 疥 螨 病 治疗 中 ， 哺乳 仔 猪 到母 猪均 有 从
的猪 只全体 用 药 １ ， Ｏｄ后 再 和其 它猪并 群 。 次 ｌ 注意事 项 ： ①在 治疗 １ 内 ， 周 应避 免 未治疗猪 和
（ 责任 编辑 ： 魏利 平 ）
（ ） 取措 施 。①抽 调 有 经验 的科 技 人员 １ 成熟 ， 为相关 的育苗研究提供亲贝及基础参数 。 １采 ～２ 并 名长期 蹲 点跟踪 研 究观 测 。② 在云 霄波 纹 巴非 蛤养
繁殖 。
地 进行 波 纹 巴非蛤性 腺 发育 跟踪 检测 和 自然繁 殖检
（） ２ 观测 内容 。① 天气及风力 观察 。②理化 因子 检测 （ 气温 、 水温 、 比重 、 Ｈ、 氧 ） ｐ 溶 。③ 波纹 巴非 蛤养
（ ） 贝培育 期 间 ， 料 需 求 量 逐 Ｈ增 加 ， 根 测 。③ 观测 周期 为 １ 。 ２稚 饵 要 年
与饲料 ２１ ０ ０年 第 ８
动 物 疾 病 防 治 ．１ ７．
多 拉 菌 素 在 治 疗 猪 寄 生 虫 上 的 应 用
袁 凤 菊
（ 东省 滨 州 市畜牧 兽 医局 ， 山 山东滨 州 ２ ６ Ｏ ） ５ ６ Ｏ
用于提高刺糖孢菌中多杀菌素产量的基因及其应用[发明专利]
![用于提高刺糖孢菌中多杀菌素产量的基因及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/157c4ed60912a21615792905.png)
专利名称：用于提高刺糖孢菌中多杀菌素产量的基因及其应用专利类型：发明专利
发明人：夏海洋,马小舒,覃重军
申请号：CN201910386424.9
申请日：20190509
公开号：CN111909950A
公开日：
20201110
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了用于提高刺糖孢菌中多杀菌素产量的基因及其应用。
具体地，本发明提供了一种多杀菌素生产菌株的构建方法，在出发菌株中，增强多杀菌素合成相关蛋白的活性或导入外源性的多杀菌素合成相关蛋白。
通过实验证实，多杀菌素合成相关蛋白的活性增强或包含外源性的多杀菌素合成相关蛋白的遗传改造工程菌株，多杀菌素的生产能力显著提高。
申请人：中国科学院分子植物科学卓越创新中心
地址：200032 上海市徐汇区枫林路300号4号楼
国籍：CN
代理机构：上海一平知识产权代理有限公司
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多拉菌素
多拉菌素DuolajunsuDoramectin本品为25-环己基-5-O-去甲基-25-去（1-甲基丙基）阿维菌素A1a。
按无水物计算，含多拉菌素（C50H74O14）不得少于95.0%。
【性状】本品为白色或类白色结晶性粉末，无臭，有引湿性。
本品在氯仿、甲醇中溶解，在水中极微溶解。
比旋度取本品，精密称定，加氯仿溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（附录36页），比旋度为+58°至+63°。
【鉴别】 (1)取本品，加甲醇制成每1ml中含10?g的溶液，照分光光度法（附录17页）测定，在245nm的波长处有最大吸收。
(2)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与多拉菌素对照品主峰的保留时间一致。
【检查】溶液的澄清度与颜色取本品1.0g，加甲醇50ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录61页）比较，不得更浓；如显色，与黄绿色5号标准比色液（附录60页，第一法）比较，不得更深。
有关物质取本品，加甲醇分别制成每1ml中含0.25mg的供试品溶液和每1ml中含12.5?g的对照溶液。
照含量测定项下的色谱条件试验，取对照溶液20?l，注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为记录仪满量程的20%～50%，再精密量取上述两种溶液各20?l，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。
供试品溶液的色谱图中阿维菌素峰面积不得大于对照溶液峰面积的3/5（3%），总杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5%）。
水分取本品，照水分测定法（附录58页，第一法A）测定，含水分不得过5.0%。
炽灼残渣取本品1.0g，依法检查（附录59页），遗留残渣不得过0.5%。
重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查（附录54页，第二法），含重金属不得过百万分之二十。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录24页）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－乙腈－水（67:15:18）为流动相，检测波长为245nm。
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覃重军
中国科学院上海生命科学研究院 植物生理生态研究所
合成生物学重点实验室
主要的生物兽药－－阿维菌素类抗生素
（2002年世界兽药产值113亿美元，我国180亿人民币）
第一代：阿维菌素 第二代：由阿维菌素衍生的依维菌素 第三代：多拉菌素（doramectin）是辉瑞公司在1995年利用 基因工程的方法阻断起始单元的合成，在突变株中补加 环己烷甲酸，在阿维菌素C25位上连接环己烷基,即25-环 己烷基阿维菌素B1a。多拉菌素被认为是新型阿维菌素 族中最好的驱虫药。
多拉菌素项目的主要创新点
在除虫链霉菌基因组了大片段DNA的体内克隆技术 •建立了以质粒为标记的基因组改组技术
在除虫链霉菌基因工程技术方面： •克隆了６个链霉菌抗生素生物合成的正调控基因 •利用合成生物学技术全合成了含有11个位点突变的aveC基因
6429-6438 6826-6827
6273-6288
Size of deletions
80 33
22
20 26 8
14 10
70
Status: with marker Yes Yes
Yes
kanr Yes Yes
Yes Yes
Yes
Status: removing marker Yes Yes
Yes
存在的问题
由于市场前景良好，国内企业仍无法购买多拉菌素菌株。 由于是基因工程构建的菌株，国内企业一般无法模仿。
2004年开始与浙江
海正药业集团公司 利用基因组工程技术改
（年产值30亿）合作
良除虫链霉菌
与海正药业集团公司的密切合作
沈美娟（高级实验师） 夏海洋（博士生） 党福军（研究助理） 徐晴雨（研究助理） 路志群（博士生） 陈威华（博士生） 张亮（硕士生） 胡敏杰（硕士生）
GLA 4-26
37ºC 30ºC 37ºC 30ºC
30 h
40 h
60 h
2×104 2×105 2×103 2×102
2×104 2×105 2×103 2×102
5×103 5×104 5×102 5×101
5×103 5×104 5×102 5×101
提高尼莫克丁工业菌株的效价
图二，T8 菌株发酵产物的 HPLC 图谱
基因工程菌株发酵效价达1730 mg/L， 与出发菌株900 mg/L相比， 产素水平提高近1倍。
基因组工程技术的推广
寡霉素高产和单组份的菌株
3
oligomycin
avermectin B1a
2.5
2
1.5
1
0.5
0
NRRL8165
建立若干新型的载体－宿主系统， 包括嗜盐拟诺卡氏菌、红球菌、 小单孢菌、糖多孢菌、南极适冷菌等。
发展新的基因组操作技术。
连续敲除染色体上的PKS/NRPS基因簇
已经连续敲除全部9个PKS/NRPS基因簇，并完成去除标记
Table 1. Sequential deletions of antibiotic biosynthetic gene clusters in M145 genome
多拉菌素项目的产业化
２、在操作工业生产菌种和发酵生产方面： •利用质粒为标记的基因组改组技术提高了基因工程菌 GDF3-26 的产素能力 •已经完成5吨、30吨大罐发酵，2009年7月 •的发酵单位约1200mg/L，达到了大规模 •工业生产的水平
多拉菌素的规模化生产
1、中科院与海正药业与2009年联合申请了国家发改委的 “年产20吨多拉菌素高技术产业化”的项目，已获批准。 2、浙江海正药业集团公司将于2010年开始生产多拉菌素， 预计年销售收入6亿元，利税总额1.8亿元。
多拉菌素项目的意义
本项目的成功实施，是我国利用基因组 工程构建和改良抗生素工业生产工程菌株的 第一例，对于利用基因操作技术提升我国抗 生素大型企业的竞争力具有重要意义。
图一，高产菌种选育流程图
利用基因组改造技术大幅度 尼莫克汀高产菌株的选育基本达到预期目标；T8 菌株现已移交海正发酵车ห้องสมุดไป่ตู้进行发酵 配方和发酵工艺优化。大罐发酵如能达到摇瓶发酵水平，这将是一个很好的实验结果。
Name of antibiotics
CDA RED
ACT
Coelichelin Coelibactin Grey spore pigment Unknown Unknown
Unknown
SCO numbers
3210-3249 5877-5898
5071-5092
489-499 7681-7691 5314-5320
pks1
pks2
pks3
pks4
pks5
pks8
pks9 pks11
rpp
olm
与海正药业集团公司新一轮的合作：
对多拉菌素、多杀菌素、泰乐菌素、尼莫克丁、 卑霉素、奥丽斯它、埃博霉素等重要的药物工业 生产菌株进行遗传改良
新技术
1.粘细菌、高温链霉菌等的遗传操作系统 2.体内“加减法”克隆大片段DNA技术 3.天蓝色链霉菌的基因组工程
No Yes Yes
Yes Yes
Yes
快速生长、耐高温的链霉菌
Thermophilic Streptomyces sp. 4F
50ºC 45ºC 37ºC 30ºC 20 h
S. coelicolor M145
37ºC 30ºC
S. venezuelae S. glaucescens
ISP5230
Strain names
FX1 FX2
FX3
FX4 ZM1 ZM2
ZM3 ZM4
ZM5
Order of Deletions
1 2
3
4 5 6
7 8
9
Type of antibiotics
NRPS Type I PKS Type II PKS NRPS NRPS Type II PKS NRPS Type I PKS Type I PKS
海正药业参与本项目的主要人员
王海彬（生物技术中心副主任） 黄隽（微生物菌种室副主任）
多拉菌素项目获得的资助
1、中国科学院知识创新工程方向性项目（先进工业生物技术 创新基地）：利用基因组工程改良多拉菌素工业生产菌株， 2006.10-2009.10，180万元。
2、科技部863重点项目子课题：瑞拉菌素和多拉菌素等产品 的规模化生产关键技术，2007.12-2010.12，130万元。