(可直接使用)鸡新城疫的诊断.ppt
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鸡新城疫 课件
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发病机理
新 城 疫 病 毒 经过消化道、呼吸 道，眼结膜，受伤 的皮肤、泄殖腔粘 膜侵入机体。 病毒在24h 内很快在侵 入部位繁殖
进入血液扩散到全身，引起败血症
NDV强毒感染破坏全身 淋巴组织，胸腺、法氏囊和 脾脏受损严重，造成严重免疫抑制。
自然感染的潜伏期一般为3-5天，人工感染2-5天。
病毒的鉴定
NDV在细胞培养中的鉴定方法
1、中和试验 2、蚀斑减数试验 3、血吸附抑制试验
流行病学
鸡、野鸡、火鸡、珍珠鸡、鹌鹑易感。其中以
鸡最易感，野鸡次之。幼雏和中雏易感性最高， 两年以上的老鸡易感性较低。水禽如鸭、鹅等 也能感染本病，并已从鸭、鹅、天鹅、塘鹅和 鸬鹚中分离到病毒，但它们一般不能将病毒传 给家禽。鸽、斑鸠、乌鸦、麻雀、八哥、老鹰、 燕子以及其他自由飞翔的或笼养的鸟类，大部 分也能自然感染本病或伴有临诊症状或呈隐性 经过。
产蛋母鸡的卵泡和输卵管显著充血，卵泡膜极易破裂以致卵黄流入腹腔引起 卵黄腹膜炎，肝、脾无特殊病变，肾多表现充血及水肿，输尿管内积有大量 尿酸盐。脑膜充血或出血，而脑实质无眼观变化，仅于组织学检查时，见有 明显的非化脓性脑炎病变。
病理变化与鸡群免疫状态有关，有部分免疫力鸡的症状、
死亡率和病理变化与易感鸡感染新城疫病毒有显著不同。 用新城疫强毒株感染易感鸡时，可发生典型新城疫症状 和病变，腺胃乳头和粘膜出血明显，肌胃有出血和溃疡， 肠道粘膜和浆膜有明显出血，盲肠扁桃体出血和溃疡， 而且死亡率很高。而有部分免疫力的鸡感染后，出现轻 微临诊症状，主要表现为呼吸系统和神经症状，腺胃出 血不明显，病变检出率低，往往以非典型出现。据国内 报道，非典型新城疫的病例中，以直肠粘膜和盲肠扁桃 体出血的比例增多，肠道粘膜和浆膜出血也比典型新城 疫少。因此，在一个鸡场发生疫情时，怀疑为非典型新 城疫时，尽可能多解剖几例病死鸡，总会发现有腺胃乳 头和粘膜少量出血点，可作综合诊断的补充。 （ /news/P1P210124I8772402.html ）
发病机理
新 城 疫 病 毒 经过消化道、呼吸 道，眼结膜，受伤 的皮肤、泄殖腔粘 膜侵入机体。 病毒在24h 内很快在侵 入部位繁殖
进入血液扩散到全身，引起败血症
NDV强毒感染破坏全身 淋巴组织，胸腺、法氏囊和 脾脏受损严重，造成严重免疫抑制。
自然感染的潜伏期一般为3-5天，人工感染2-5天。
病毒的鉴定
NDV在细胞培养中的鉴定方法
1、中和试验 2、蚀斑减数试验 3、血吸附抑制试验
流行病学
鸡、野鸡、火鸡、珍珠鸡、鹌鹑易感。其中以
鸡最易感，野鸡次之。幼雏和中雏易感性最高， 两年以上的老鸡易感性较低。水禽如鸭、鹅等 也能感染本病，并已从鸭、鹅、天鹅、塘鹅和 鸬鹚中分离到病毒，但它们一般不能将病毒传 给家禽。鸽、斑鸠、乌鸦、麻雀、八哥、老鹰、 燕子以及其他自由飞翔的或笼养的鸟类，大部 分也能自然感染本病或伴有临诊症状或呈隐性 经过。
产蛋母鸡的卵泡和输卵管显著充血，卵泡膜极易破裂以致卵黄流入腹腔引起 卵黄腹膜炎，肝、脾无特殊病变，肾多表现充血及水肿，输尿管内积有大量 尿酸盐。脑膜充血或出血，而脑实质无眼观变化，仅于组织学检查时，见有 明显的非化脓性脑炎病变。
病理变化与鸡群免疫状态有关，有部分免疫力鸡的症状、
死亡率和病理变化与易感鸡感染新城疫病毒有显著不同。 用新城疫强毒株感染易感鸡时，可发生典型新城疫症状 和病变，腺胃乳头和粘膜出血明显，肌胃有出血和溃疡， 肠道粘膜和浆膜有明显出血，盲肠扁桃体出血和溃疡， 而且死亡率很高。而有部分免疫力的鸡感染后，出现轻 微临诊症状，主要表现为呼吸系统和神经症状，腺胃出 血不明显，病变检出率低，往往以非典型出现。据国内 报道，非典型新城疫的病例中，以直肠粘膜和盲肠扁桃 体出血的比例增多，肠道粘膜和浆膜出血也比典型新城 疫少。因此，在一个鸡场发生疫情时，怀疑为非典型新 城疫时，尽可能多解剖几例病死鸡，总会发现有腺胃乳 头和粘膜少量出血点，可作综合诊断的补充。 （ /news/P1P210124I8772402.html ）
鸡新城疫血凝和血凝抑制实验ppt
取鸡免疫血清。
-
鸡群卵黄抗体的制备
1.取鸡蛋卵黄20ml，加入等量生理盐水， 振荡，摇匀。
2.加入等量氯仿40ml，振荡30分钟。 3.取振荡的卵黄液3000～4000rpm30分钟。 4.取上清液作为抗体检测材料
-
二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【方法】 • 1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。 • 2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，先在第1孔加50L生
（第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分 5分钟）洗去血清及白细胞。 ⒋ 取纯红细胞0.6ml，加生理盐水稀释99.4ml，即 成1%的鸡红细胞悬液。
-
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
（二）加样
1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L 生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50L病毒液，混合均匀后，吸 50L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L； 第12孔为红细胞对照。
+
+
-
-
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该- 病毒血凝价，即为一个凝集单位
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【 结果判定 】
• 置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待对照孔 红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底， 平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉 于孔底呈点状。
-
• 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单 位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为 1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32， 即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
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鸡群卵黄抗体的制备
1.取鸡蛋卵黄20ml，加入等量生理盐水， 振荡，摇匀。
2.加入等量氯仿40ml，振荡30分钟。 3.取振荡的卵黄液3000～4000rpm30分钟。 4.取上清液作为抗体检测材料
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二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI)
• 【方法】 • 1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。 • 2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，先在第1孔加50L生
（第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分 5分钟）洗去血清及白细胞。 ⒋ 取纯红细胞0.6ml，加生理盐水稀释99.4ml，即 成1%的鸡红细胞悬液。
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一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
（二）加样
1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L 生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50L病毒液，混合均匀后，吸 50L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L； 第12孔为红细胞对照。
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以100% 凝集的病毒最大稀释度为该- 病毒血凝价，即为一个凝集单位
一、鸡新城疫的血凝试验(HA)
• 【 结果判定 】
• 置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待对照孔 红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底， 平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉 于孔底呈点状。
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• 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单 位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为 1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32， 即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
呼吸系统疾病--鸡新城疫 ppt课件
最急性型 急性型 慢性型 耐过鸡
速发嗜内脏型 速发嗜神经型 中发型 缓发型 无症状肠型
典型性新 城疫 非典型性 新城疫
按病程分类
最急性型： 多见于暴发初期，鸡群无明显异常而突
然出现急性死亡。
急性型
• 病鸡眼半闭或全闭，呈昏睡状，驱赶或惊吓 不愿走动废食.
• 病初期体温升高，饮水增加，冠髯发绀，嗉 囔内充满硬结未消化的饲料或充满酸臭的液 体。下痢，粪便呈黄绿色，混有多量黏液， 有时混有血液，泄殖腔充血、出血、糜烂。
• 1、采食量的变化 • 2、精神情况 • 3、饮水情况 • 4、呼吸道声音 • 5、鸡冠颜色和温感 • 6、粪便形状与颜色 • 7、肛门的变化
• 8、产蛋量 • 9、蛋壳颜色与质地 • 10、发病速度与死亡情况 • 11、诊断历史 • 12、治疗历史 • 13、用药历史 • 14、治疗效果如何
实验室诊断：病毒分离与鉴定 • 采集病、死鸡的气管、支气管、肺、肝、
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
郑州牧业工程高等专科学校《禽病防制技术》精品课程
病原
• 分类地位：新城疫病毒 RNA病毒中副粘 病毒科、腮腺炎病毒属的禽副粘病毒。
慢性型
• 慢性型鸡出现神经症状，盲目前冲，头颈 扭曲，转圈等。
• 耐过鸡长期带毒、排毒，并生长基本正常； 但受惊吓等刺激时，突然倒地，抽搐旋转， 几分钟后恢复正常。
头颈扭曲
非典型新城疫
• 非产蛋鸡
• 产蛋鸡
• 不同程度的呼吸道症状，
鸡新城疫的诊断与防治
鸡新城疫的诊断与防治鸡新城疫是一种由新城疫病毒引起的急性、高度接触传染性、急性传染病，主要发生在家禽，尤其是鸡类，同时对野生鸟类也具有致病性。
该病毒主要通过接触、飞沫、粪便、尘埃等途径传播，易于在养殖场内蔓延，对家禽养殖业造成了极大的经济损失。
有关鸡新城疫的诊断与防治是养殖户们所关注的重要问题，本文将对此进行详细介绍。
一、诊断1. 临床表现鸡新城疫的临床表现多种多样，主要包括呼吸道症状、消化系统症状以及神经系统症状。
表现为精神萎靡、食欲减退、呼吸急促、咳嗽、喘息等。
消化系统症状表现为腹泻、腹胀、肠道出血等。
神经系统症状表现为鸡跛行、头部后仰、颈部弯曲等。
以及病死率高和快速传播等。
2. 实验室检测通过病原学检测，可以采取病理组织学检查、病毒学检查、免疫学检查等方法进行确诊。
病毒学检查主要通过病毒分离和鉴定，病原学检测主要为血清等体液检测，免疫学检查包括补体结合试验、酶联免疫吸附试验等。
3. 临床诊断根据临床表现、实验室检测结果以及流行病学调查可以进行临床诊断。
鸡新城疫的诊断需要综合考虑动物的临床症状、实验室检测结果，并且需要排除其他可引起类似症状的疾病后方可得出结论。
二、防治1. 疫苗防控目前，针对鸡新城疫病毒已研制出相应的疫苗，可以根据病情的严重程度进行预防接种和应急接种，有效降低病死率。
在发生疫情的情况下，可以选择灭活疫苗、活疫苗等形式进行预防接种。
2. 生物安全措施对于鸡新城疫的防治，生物安全措施尤为重要，包括加强饲养管理、提高养殖环境卫生、加强消毒、杀灭病毒传播源头等。
避免交叉感染和病毒扩散，保持养殖场的清洁和卫生。
3. 防控流行病学调查在鸡新城疫发生疫情后，需要加强流行病学调查，追踪病情源头，控制疫情扩散。
及时采取隔离、封锁、屠宰等措施，阻断病毒的传播途径，保护其他家禽和野生鸟类的安全。
4. 疫情监测预警建立疫情监测预警系统，及时发现疫情，进行隔离治疗以及资源调度，有效控制疫情的传播。
通过疫情监测预警，可以加强养殖管理，提高疫情防控的有效性。
鸡新城疫(课堂PPT)
（2）呼吸系统症状 不同程度的 呼吸困难，即患鸡张口伸颈，呼吸 困难，有喘鸣声，咳嗽，口含粘液， 有摇头和吞咽动作。
（3）生殖系统症状 产蛋鸡产蛋 率下降，产软壳蛋、沙皮蛋，颜色 变淡。
病程10～20d。
19
病理变化
主要病理变化是全身粘膜和浆膜出 血，淋巴系统肿胀、出血和坏死， 尤其以消化道和呼吸道病变明显。
生防疫制度，地面、用具应定期消毒， 防止一切带毒动物（特别是鸟类）和污 染物品进入鸡群，进出的人员和车辆应 该消毒，饲料来源要安全，不从疫区引 进种蛋和鸡苗等。
41
2.做好预防接种，增强特异免疫力 （1）疫苗
1）灭活疫苗 常用油苗，不散病毒。 2）活疫苗 包括： 弱毒疫苗 包括Ⅱ（B1株）、Ⅲ（F 株）、Ⅳ（Lasota株）系苗，一般没有 致病力、偶尔有轻微呼吸道或其他反应， 可用于雏鸡，但Ⅳ系苗毒力较强，一般 不用于4周龄以下的鸡。 中等毒力苗 Ⅰ系苗，一般肌肉注射， 作加强免疫，但不用于8周龄以下鸡。
病程2~5d。
口腔流出酸臭黏液
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拉稀黄绿便
13
神经症状
14
扭颈，呈观星状
15
扭颈，转圈
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产软皮蛋，蛋壳变白
17
3.亚急性或慢性型（或非典型新城疫） 多发生在流行后期，主要表现在三个方面：
（1）神经系统症状 病初症状似急性， 后渐减轻，且出现神经症状，如翅膀下垂， 腿麻痹，破行或站立不稳，向后倒退，头颈 向后或向一侧扭转，常伏地旋转，反复发作。 不发作时貌似健康，受惊扰或抢食时又突然 发作，头颈屈仰，全身抽搐旋转，数分钟后 又恢复正常，最后瘫痪死亡。极少数耐过鸡 留下神经症状的后遗症。
诊断
1.现场诊断 根据流行病学、临床症 状、病理变化等综合诊断。
鸡病诊断图谱
病鸡眼睛虹膜增 生褪色,瞳孔收缩 边缘不整,似锯齿 状.右侧为正常对 照.
皮肤型:病鸡皮肤上 有大小不等的肿瘤.
皮肤型;病鸡肉髯部 有肿瘤结节.
病鸡胸部肌肉 有突起的肿瘤.
病鸡上部坐骨神 经肿胀变粗,肿胀 的神经为正常的 二到三倍.神经横 纹消失,呈灰白色.
病鸡腺胃肿大,外 观呈球状.
病鸡腺胃壁增厚,乳 头融合肿胀.有出血 和溃疡.
禽副伤寒病鸡盲 肠变粗,呈蚯蚓状.
禽副伤寒病鸡盲肠 内有灰白色的干酪 样栓子.
鸡大肠杆菌
病鸡精 神沉郁, 缩头闭 目,羽毛 逆立.
病鸡羽毛逆立, 缩头排黄绿色 粪便.
病鸡腹气囊浑浊 增厚,有纤维素 渗出物.
病鸡肝脏肿大,外 面有纤维素性白 色包膜.
病鸡肝脏肿大, 淤血外有黄白 色包膜,腹部有 黄白色纤维素 膜.
病鸡心脏表面有大 的白色肿瘤结节.肿 瘤质地坚硬稍突于 心脏表面,使心脏失 去正常的形态.
病鸡肺脏肉变.
病鸡肺脏上有弥 漫性大小不一的 白色肿瘤.
病鸡肝脏上有弥 漫肿瘤,
病鸡肝脏上面有 较大的肿瘤结节.
病鸡脾脏肿大,表 面有大小不一的肿 瘤结节.下面为正 常对照.
病鸡胰脏有白色 肿瘤结节.
病鸡脾脏肿大 为正常的数倍.
病鸡脾脏切面, 紫红色的切面上 可见灰白色肿瘤 结节.
病鸡肾脏肿大褪 色肉肉样变.
病鸡法氏囊肿大, 有肿瘤结节.
病鸡法氏囊内皱褶肿 大坚实,有凹凸不平 的白色肿块.
鸡网状内皮增生症
病鸡肝脏肿
大,有的肝脏 上有肿瘤结 节.
病鸡肝脏肿大有 扣状肿瘤结节.
病鸡肠道有结节状 肿瘤,呈串珠状.
皮肤型鸡痘,病鸡 腿部,趾部溃疡,有 痘斑.
鸡新城疫课件
③亚急性或慢性型：多由嗜神经速发 型新城疫病毒引起。病初症状与急性 相似，发病1—2周后，出现神经症状 较为明显，腿翅麻痹，跛行或卧地。 部分肌肉抽搐，动作失调，头颈扭转， 有的作转圈运动，出现半瘫痪或完全 瘫痪。病程可长达4周或以上。死亡 率较低。
④非典型新城疫：主要发生 于免疫鸡群，其特征是发病 缓慢，症状、病变不典型、 不明显，死亡率低，但发病 率可能很高。产蛋鸡产蛋下 降，无色壳蛋、畸型蛋。
诊断： 根据流行特点（鸡发病，鸭、 鹅不发病）、临床症状（嗉囊 炎；绿色粪便；呼吸困难，咯 咯声；神经症状）、剖检病变 （腺胃乳头出血；肠道岛屿状 坏死等），结合药物治疗效果 可作出初步诊断。确诊应进行 实验室诊断
防治措施：
本病无特效疗法。预防本病发生乃 是重点。 ①搞好卫生消毒，加强饲养管理， 防止病原侵入。 ②合理免疫接种是预防新城疫发生 的关键，常用疫苗有弱毒活苗和灭 活油乳剂苗，应根据母源抗体水平 和当地疫情合理安排免疫程序。
直肠黏膜条状出血或点状出血
慢性病例可见十二指肠黏膜岛屿状坏死
产蛋鸡卵泡出血、液化、变形
鸡新城疫
气管黏膜充血、出血
• 病理变化：主要在消化道和呼吸道 • 腺胃乳头突起出血多见。小肠出血 性卡他性炎，肠淋巴滤泡肿胀、出 血。盲肠扁桃体出血和坏死。慢性 病例肠粘膜上亦可见纤维素性坏死 点,表面有纤维素性假膜覆盖，有 的病例小肠壁变薄，出现空泡状肠 段，肠粘膜脱落，毛细血管充血或 出血。泄殖腔和直肠粘膜出血。
在鼻腔、喉头和气管内常积有 大量污秽粘液，其粘膜充血及 出血。气囊粘膜有充血或出血。 肺有时可见瘀血或水肿，或有 间质性肺炎。心尖、心冠脂肪、 心耳外膜常有针尖状出血点。 脑膜充血或出血。 产蛋鸡卵 巢出血变形。
学习内容： 鸡新城疫又名亚洲鸡瘟（俗称 鸡瘟），是由鸡新城疫病毒引 起鸡的高度接触性传染病，对 养鸡业危害极大。
新城疫课件(共56张PPT)《禽病防治》
了排出口内液体，病鸡常有甩头动作。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 下痢，排出黄白色或黄绿色恶臭稀粪，有时混有
少量血液。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 随着情发展，病鸡极度虚弱，体温降
至常温以下，虚脱而死。 ✼ 病程３－５天，雏鸡１－２天。雏鸡
的病程一般比成鸡短，而且症状不明 显，死亡率高。
典型性新城疫症状
防制措施
一、平时的卫生防疫措施 2、建立科学的适合于本场实际情况的免疫程序
✼ 母源抗体水平 ✼ 疫苗种类及毒力 ✼ 最佳剂量和接种途径 ✼ 鸡的品种和日龄
弱毒疫苗
许可 疫苗
油佐剂疫苗
缓发型 ：新城疫Ⅱ系、Ⅳ系 中发型 ：新城疫Ⅰ系
缓发型毒株特点
✼ 毒力较低 ✼ 可用于各种年龄鸡的预防接种 ✼ 免疫力较弱，免疫期也只有1-2个月 ✼ 可用于未经免疫的鸡群做首次基础免疫
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
这种血凝特性能被抗血清中的抗体特异性抑制 (HI), 可用HA和HI来诊断疾病和免疫监测。
非典型性新城疫症状
在一些接种过新城疫疫苗的鸡群内，由于多种原 因造成了一部分鸡免疫力不足，不能完全抵抗强病毒的 自然感染，发病后症状、病变较轻，死亡率也低，称之 为非典型新城疫。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 下痢，排出黄白色或黄绿色恶臭稀粪，有时混有
少量血液。
典型性新城疫症状
2.急性型 ✼ 随着情发展，病鸡极度虚弱，体温降
至常温以下，虚脱而死。 ✼ 病程３－５天，雏鸡１－２天。雏鸡
的病程一般比成鸡短，而且症状不明 显，死亡率高。
典型性新城疫症状
防制措施
一、平时的卫生防疫措施 2、建立科学的适合于本场实际情况的免疫程序
✼ 母源抗体水平 ✼ 疫苗种类及毒力 ✼ 最佳剂量和接种途径 ✼ 鸡的品种和日龄
弱毒疫苗
许可 疫苗
油佐剂疫苗
缓发型 ：新城疫Ⅱ系、Ⅳ系 中发型 ：新城疫Ⅰ系
缓发型毒株特点
✼ 毒力较低 ✼ 可用于各种年龄鸡的预防接种 ✼ 免疫力较弱，免疫期也只有1-2个月 ✼ 可用于未经免疫的鸡群做首次基础免疫
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
新城疫病毒（NDV）
✼ 具有血凝素
NDV
血凝素
红
表面受体
细
胞
红细胞凝集 (HA)
这种血凝特性能被抗血清中的抗体特异性抑制 (HI), 可用HA和HI来诊断疾病和免疫监测。
非典型性新城疫症状
在一些接种过新城疫疫苗的鸡群内，由于多种原 因造成了一部分鸡免疫力不足，不能完全抵抗强病毒的 自然感染，发病后症状、病变较轻，死亡率也低，称之 为非典型新城疫。
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50μl放入第二孔中，然后依次倍比稀释至第10孔，并将第10 孔的液 体混匀后取50μl弃去。第11孔为病毒对照，第12孔为盐水对照。 ③用微量移液器吸取稀释好的4个血凝单位的病毒抗原，向1～11孔中分 别加50μl。然后，振荡1min，将反应板置室温下作用20min， 或在 37℃恒温培养箱中作用5～10min。 ④取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1％红细胞悬液50μl，再 将反应板置于微型振荡器上振荡15～30s，混和均匀。 ⑤将反应板置37℃ 温箱中作用15～30min 后取出，观察并记录结果。
新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红 细胞的作用逐渐变弱。稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现 明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。
最新.课件
11
血凝试验（HA）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
病毒液
50 50 50 …… 50 50 50 弃
置冰箱中作用2～4h，然后离心沉淀，取其上清液作 为接种材料。
在这同时，应对接种材料作无菌检查如有细菌生长， 应将原始材料再作除菌处理，也可改用细菌滤器过滤 除菌。
最新.课件
7
（2）鸡胚接种
用9～11日龄的SPF鸡胚（如果没有SPF鸡胚，也可用非免疫鸡 胚），将上述处理过的材料，取0.1～0.2ml接种于尿囊腔内。
最新.课件
5
（二）ND的实验室诊断
1．病毒的分离培养 2．病毒的鉴定
最新.课件
6
1．病毒的分离培养
（1）病料采集与处理
分离病毒的材料应来自早期病例
病鸡扑杀后应用无菌操作采取脾、脑、肺、肝、肾等 器官组织混合
将病料制成1∶5～1∶10的乳剂，每毫升加入青霉素 10000单位、链霉素10mg，以抑制可能污染的细菌
1%的红细胞 50 50 50 …… 50 50 50 50
振荡1min，置于室温30~40min，或置37℃温箱15~30 min
结果观察 （血凝价）
凝 不滑
不凝 滑
不凝 滑
最新.课件
12
HA视频
最新.课件
13
（2）微量血凝抑制试验（HI）
用上述分离病毒制备4单位病毒，再用标准的阳性血清进行HI试验。 ①用微量移液器向1～12号孔中分别加入50μl生理盐水。 ②换一吸头取标准阳性血清50μl 置于第１孔中，挤压3～5次混匀，吸出
最新.课件
14
⑥结果判断和记录
“－”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病 毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于 反应孔底端中央，而不出现血凝现象。
“＋”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，它对病毒血凝作用 的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红 细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。
最新.课件
3ห้องสมุดไป่ตู้
方法步骤
（一）ND的临床诊断 （二）ND的实验室诊断
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（一）ND的临床诊断
1．按家禽尸体剖检程序，首先检查鸡的体表组织，然后 检查皮下组织，最后打开体腔，暴露整个胸腔和腹腔 器官，检查内部组织器官。鸡新城疫主要检查消化道 病变。
2．将剖检所见填写于病理剖检记录表内。 3．根据剖检记录，归纳分析进行初步诊断。
技能训练8 鸡新城疫的诊断
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实训目标
掌握鸡新城疫的临床诊断和实验室 诊断的方法
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2
仪器材料
疑似鸡新城疫病死鸡、剪刀、镊子、病理剖检记录表、 工作服、胶靴、围裙、橡胶手套和来苏儿等。
9～11日龄SPF鸡胚、恒温箱、照蛋器、蛋盘、接种箱、 注射器（1～5ml）、针头、中号镊子、剪刀、眼科剪 刀和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、 吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精灯、试管架、胶布、 蜡、锥子、煮沸消毒器、消毒剂（3%碘酊棉、75%酒 精棉、5%石炭酸）、离心机、离心管、生理盐水、96 孔V型微量血凝集反应板、微量吸液器、混合振荡器； 1%鸡红细胞悬液、鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫标准 阳性血清等。
“±”表示不完全抑制。红细胞下沉情况介于“－”与“＋”之间。
如果待检抗体被标准阳性血清所中和，则确诊为NDV。
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血凝抑制试验（HI）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒 致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出 血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。
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8
2．病毒的鉴定
（1）微量血凝试验（HA） （2）微量血凝抑制试验（HI）
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（1）微量血凝试验（HA）
一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗 原的HA滴度。 ①用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50μl，共加12孔。 ②换一吸头吸取50μl待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器 挤压3～5次使病毒混和均匀，然后取50μl移入第二孔，混匀后取50μl 移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出 50μl弃去。第12孔不加病毒抗原，作对照。 ③换一吸头吸取1％红细胞悬液依次加入1～12个孔中，每孔加50μl。 ④加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min。并放室温（18～ 20℃）下作用30～40min，或置37℃恒温培养箱中作用15～30min取出， 观察并判定结果。
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10
⑤结果判定及记录
“＋”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层， 呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“－”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层， 而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“±”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。
接种后以熔化的石蜡将卵壳上的接种孔封闭，继续置温箱内。
每日上下午各照蛋一次，连续观察5d，接种24h内死亡的鸡胚， 废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上 （气室向上）。
然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。 留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。
新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红 细胞的作用逐渐变弱。稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现 明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。
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血凝试验（HA）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
病毒液
50 50 50 …… 50 50 50 弃
置冰箱中作用2～4h，然后离心沉淀，取其上清液作 为接种材料。
在这同时，应对接种材料作无菌检查如有细菌生长， 应将原始材料再作除菌处理，也可改用细菌滤器过滤 除菌。
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7
（2）鸡胚接种
用9～11日龄的SPF鸡胚（如果没有SPF鸡胚，也可用非免疫鸡 胚），将上述处理过的材料，取0.1～0.2ml接种于尿囊腔内。
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5
（二）ND的实验室诊断
1．病毒的分离培养 2．病毒的鉴定
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6
1．病毒的分离培养
（1）病料采集与处理
分离病毒的材料应来自早期病例
病鸡扑杀后应用无菌操作采取脾、脑、肺、肝、肾等 器官组织混合
将病料制成1∶5～1∶10的乳剂，每毫升加入青霉素 10000单位、链霉素10mg，以抑制可能污染的细菌
1%的红细胞 50 50 50 …… 50 50 50 50
振荡1min，置于室温30~40min，或置37℃温箱15~30 min
结果观察 （血凝价）
凝 不滑
不凝 滑
不凝 滑
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HA视频
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（2）微量血凝抑制试验（HI）
用上述分离病毒制备4单位病毒，再用标准的阳性血清进行HI试验。 ①用微量移液器向1～12号孔中分别加入50μl生理盐水。 ②换一吸头取标准阳性血清50μl 置于第１孔中，挤压3～5次混匀，吸出
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⑥结果判断和记录
“－”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病 毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于 反应孔底端中央，而不出现血凝现象。
“＋”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，它对病毒血凝作用 的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红 细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。
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方法步骤
（一）ND的临床诊断 （二）ND的实验室诊断
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（一）ND的临床诊断
1．按家禽尸体剖检程序，首先检查鸡的体表组织，然后 检查皮下组织，最后打开体腔，暴露整个胸腔和腹腔 器官，检查内部组织器官。鸡新城疫主要检查消化道 病变。
2．将剖检所见填写于病理剖检记录表内。 3．根据剖检记录，归纳分析进行初步诊断。
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实训目标
掌握鸡新城疫的临床诊断和实验室 诊断的方法
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仪器材料
疑似鸡新城疫病死鸡、剪刀、镊子、病理剖检记录表、 工作服、胶靴、围裙、橡胶手套和来苏儿等。
9～11日龄SPF鸡胚、恒温箱、照蛋器、蛋盘、接种箱、 注射器（1～5ml）、针头、中号镊子、剪刀、眼科剪 刀和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、 吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精灯、试管架、胶布、 蜡、锥子、煮沸消毒器、消毒剂（3%碘酊棉、75%酒 精棉、5%石炭酸）、离心机、离心管、生理盐水、96 孔V型微量血凝集反应板、微量吸液器、混合振荡器； 1%鸡红细胞悬液、鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫标准 阳性血清等。
“±”表示不完全抑制。红细胞下沉情况介于“－”与“＋”之间。
如果待检抗体被标准阳性血清所中和，则确诊为NDV。
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血凝抑制试验（HI）
孔号
试剂
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3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒 致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出 血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。
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2．病毒的鉴定
（1）微量血凝试验（HA） （2）微量血凝抑制试验（HI）
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（1）微量血凝试验（HA）
一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗 原的HA滴度。 ①用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50μl，共加12孔。 ②换一吸头吸取50μl待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器 挤压3～5次使病毒混和均匀，然后取50μl移入第二孔，混匀后取50μl 移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出 50μl弃去。第12孔不加病毒抗原，作对照。 ③换一吸头吸取1％红细胞悬液依次加入1～12个孔中，每孔加50μl。 ④加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min。并放室温（18～ 20℃）下作用30～40min，或置37℃恒温培养箱中作用15～30min取出， 观察并判定结果。
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⑤结果判定及记录
“＋”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层， 呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“－”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层， 而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“±”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。
接种后以熔化的石蜡将卵壳上的接种孔封闭，继续置温箱内。
每日上下午各照蛋一次，连续观察5d，接种24h内死亡的鸡胚， 废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上 （气室向上）。
然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。 留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。