核酸提取质量保证与全自动核酸提取仪的性能评价 廖璞
核酸提取仪标准
核酸提取仪标准
核酸提取仪是一种用于提取DNA或RNA的仪器，常用于分子生物学、遗传学、医学等领域。
为了确保提取出的核酸质量和纯度达到实验要求，需要遵循以下标准：
1. 选择合适的样品：样品的选择对于提取出高质量的核酸非常重要。
样品应该新鲜、无污染、保存完好，并且量足够。
2. 仪器操作：在使用核酸提取仪时，需要严格遵守操作说明书上的操作步骤。
仪器需要经过预热、平衡和冷却等步骤，以确保提取出的核酸质量稳定。
3. 试剂选择：试剂的质量和纯度也会直接影响到提取出的核酸质量。
应该选择经过认证的高质量试剂，并按照说明书上的要求使用。
4. 操作环境：在操作核酸提取仪时，需要保持操作环境清洁卫生，避免外界污染。
同时，也要注意避免试剂和样品之间的交叉污染。
5. 核酸质量检测：在提取出核酸后，需要进行质量检测。
可以使用紫外线分光光度计或凝胶电泳等方法，检测核酸的纯度和浓度。
总之，遵循以上标准可以提高核酸提取的效率和准确性，确保实验结果的可靠性。
- 1 -。
全自动核酸提取仪器及试剂对比
磁珠提取技术 cobas® AmpliPrep分析仪能净化PCR所需 的RNA或DNA靶标。
仪器比较
厂家 圣湘 复星 天隆
仪器 The NatCH 64 system SuperPure System-32
NP968
通量 64 32 32
/show1equip.asp?equipid=347691 7
ROCHE 全自动核酸提取工作站
cobas AmpliPrep
/products/Pages/COBASAmpliPrep.aspx
/products/instrumentation-automation/realtime-pcr/m2000-sp-rt.html#
6
QIAGEN 全自动核酸提取工作站
QIAsymphony SP
QIAsymphony 技术将硅胶膜或NI-NTA纯 化的速度和效率与易于操作的磁珠相结合。 更高的操作安全性，样本体积多至1 ml ， 50 mg 组织或107 个细胞，以及多样的应 用（RNA、DNA和蛋白纯化），使 QIAsymphony SP工作站成为自动化样本 制备技术上一座新的里程碑。 工作站提供试管架和96孔板底座，可加载 多种类型的试管和96孔板，包括10-16.9 mm 的带条形码标签的试管或 96孔微孔 板或深孔板。上样模块共可放置4 个可加 载24个样本的试管架和一个用作内参的试 管架，或最多放置4个96孔微孔板或深孔 板。工作站在样品管/板进入仪器时自动 扫描条形码，确保纯化全过程的样本追踪。
时间 30min 30~50min 10~45min
样本体积 200ul ~1ml ~1ml
QIAGEN 罗氏 雅培
关于全自动核酸提取仪的优点都有哪些
关于全自动核酸提取仪的优点都有哪些随着科技的不断进步，现代医疗越来越依赖于分子生物学技术。
其中，核酸提取是基础而重要的步骤。
传统的核酸提取方法需要大量的人工操作，耗费时间和人力，而且操作过程中容易发生交叉感染的风险。
全自动核酸提取仪的出现，为核酸提取带来了翻天覆地的改变。
那么，全自动核酸提取仪有哪些优点呢？1. 高效快捷全自动核酸提取仪减少了繁琐的人工操作，节省了时间和人力成本。
整个核酸提取的过程在机器内部完成，无需操作人员亲自参与。
一旦样本加入到提取卡带中，全自动核酸提取仪就能够自动完成样本的提取、纯化和浓缩等工作，时间只需要几小时，甚至更短。
此外，全自动核酸提取仪还可以实现高通量的核酸提取，单次可以处理多个样本，大大提高了工作效率。
对于检测几千份样本的实验室来说，全自动核酸提取仪的效率是不可替代的。
2. 提取质量高全自动核酸提取仪在操作过程中，可以严格控制各个条件，使提取的核酸质量非常高。
仪器可以通过微调样品、缓冲液、磁珠等的浓度，以及加热、震荡等参数的设置，优化核酸提取的效果。
相比传统的手工提取方法，全自动核酸提取仪可以避免人为操作时产生的误差和不稳定性，从而提高提取的质量和纯度。
3. 降低操作风险全自动核酸提取仪的另外一个优点是大大降低操作风险。
传统的核酸提取过程中，操作人员需要进行许多繁琐的步骤，包括样品的移液、离心、吸液、加磁珠等，操作过程中很容易受到污染和误操作的影响。
在一次实验中，误操作有可能导致大量样品或关键试剂的浪费，而且还可能交叉感染。
相比之下，全自动核酸提取仪可以降低误操作的风险。
它把整个核酸提取流程封装在一个系统中，减少了对操作人员的依赖程度。
样品加入卡带后，整个提取过程在机器内部完成，操作人员接触样品的时间减少了很多。
这降低了污染和误操作的风险，提高实验的成功率。
4. 高度自动化全自动核酸提取仪可以高度自动化，减少了人工精度和疲劳对实验结果的影响。
几乎所有的步骤都由机器自动完成，例如样品输入、磁珠分离、洗涤等，只需要按照菜单的操作步骤即可。
全自动核酸提取仪标准
全自动核酸提取仪标准全自动核酸提取仪标准介绍•全自动核酸提取仪是一种用于从样品中提取核酸的高效设备；•核酸提取是分子生物学研究的重要步骤，也是疾病诊断和基因检测的关键步骤之一；•全自动核酸提取仪的标准是确保提取过程的准确性、一致性和可重复性。
核酸提取的重要性•核酸提取是从生物学样本中分离出核酸分子的过程；•核酸提取对后续的PCR扩增、测序等实验具有决定性影响；•核酸提取的质量和纯度直接影响后续实验的结果准确性。
全自动核酸提取仪标准的必要性•标准化的核酸提取过程可以确保提取结果的准确性和可靠性；•核酸提取仪的标准化可以提高实验室内不同操作者之间的一致性；•标准的验证和认证流程可以帮助生物实验室选择合适的核酸提取仪设备。
全自动核酸提取仪标准应包括的要点1.提取效率标准：–标准化的样品输入量和提取产量；–提取效率的变异系数限制；–提取过程中的样品损耗限制。
2.纯度要求：–核酸提取后的杂质含量要求；–蛋白质、RNA和DNA的污染限制；–标准化的纯化步骤和方法。
3.自动化程度：–提取过程中是否需要人工干预的限制；–是否具备自动化的样品处理功能；–自动化控制的准确性和稳定性要求。
4.流程验证和认证：–核酸提取仪的性能测试标准；–设备使用前的校准和验证要求；–核酸提取仪的质量管理体系要求。
结论全自动核酸提取仪标准的制定和遵守对于保证核酸提取的准确性和可靠性至关重要。
标准化的提取过程可以提高实验结果的一致性，并推动生物领域的科学研究和临床应用。
通过制定合理的标准和认证流程，我们能够选择到合适的核酸提取仪设备，为科学研究和医学诊断提供可靠的支持。
核酸提取仪国标
核酸提取仪国标
核酸提取仪国标是指中国国家标准化管理委员会发布的一项关于核酸提取仪器的国家标准。
该标准规定了核酸提取仪器的术语和定义、分类与命名、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存等要求。
随着生物技术的不断发展，核酸提取仪器的应用越来越广泛，涉及到医学、生物工程、农业等领域。
为了规范市场，提高核酸提取仪器的质量和技术水平，中国国家标准化管理委员会于2016年发布了《核酸提取仪器的通用技术要求》，并于2017年实施。
该标准对核酸提取仪器的性能和技术指标做出了详细的规定。
例如，仪器应具备自动化、快速、准确、稳定等性能特点，能够满足不同实验需求；仪器的外观应简洁、大方、易于操作；仪器的安全性能应符合国家相关标准等。
除了技术要求外，该标准还规定了核酸提取仪器的试验方法、检验规则等要求。
例如，仪器应进行哪些试验项目、如何进行试验、如何判定试验结果是否符合要求等。
此外，标准还规定了仪器的标志、包装、运输和贮存等要求，以确保仪器的质量和安全性能。
总之，核酸提取仪国标是保障核酸提取仪器质量和性能的重要标准之一。
该标准的发布实施对于提高核酸提取仪器技术水平、推动行业发展具有重要意义。
核酸提取仪标准
核酸提取仪标准
核酸提取仪是现代分子生物学研究中必不可少的设备之一。
它可
以从样本中提取DNA或RNA等核酸分子，为后续的PCR、测序、克隆等实验提供所需的基础物质。
在使用核酸提取仪时，需要注意以下几个
标准：
1. 样本的处理要严谨：样本的质量直接影响核酸提取效果的好坏。
在提取前，需要对样本进行处理，如细胞活性检测、去除污染物等。
同时，不同类型的样本在处理前也需要有所不同的处理方法，需
要根据实验需求进行相应的选择。
2. 操作条件要掌握：核酸提取仪需要在恰当的操作条件下才能
发挥出最佳效果。
包括样本的配比、温度、时长等，都需要按照设备
的要求进行精准的操作，遵守仪器的使用规范。
3. 环境的卫生要保证：核酸提取是十分精细的操作，很容易受
到环境中污染物的影响。
为了避免实验结果的偏差，操作前需要对实
验环境进行消毒处理，保证其干净卫生。
4. 仪器的维护需重视：一台核酸提取仪如果没有经过及时、规
范的维护，将会严重影响其使用寿命和检测准确性。
因此，在使用后
需要对仪器进行正确的清洗、消毒和维护，避免损坏和日常不良影响。
以上就是核酸提取仪标准的四个方面，能够较为全面地指导我们
进行实验，提高实验准确性和效率。
全自动核酸提取仪技术参数
全自动核酸提取仪技术参数嘿，大家好！今天咱们来聊聊全自动核酸提取仪，这可是个了不起的玩意儿哦！说到核酸提取，可能有的人就开始挠头了，核酸是什么？提取干嘛？别担心，今天我就带你们轻松了解这个神奇的小机器。
全自动核酸提取仪就像厨房里的搅拌机，能把原材料变成你想要的东西。
想象一下，咱们在实验室里，需要从样本中提取DNA或者RNA，传统的方法那可真是麻烦得很，手动操作还得小心翼翼，搞得像是在玩高难度的魔方。
可是，有了这个全自动的小家伙，整个过程简直就像开了挂！它能把繁琐的步骤统统自动化，让科研人员省时省力，心情也跟着好起来。
这仪器的技术参数，别说，还真是让人眼前一亮。
它的提取效率高得惊人，样本处理量大，像流水线一样，一下子就能搞定好多样本。
操作界面友好得很，像是在玩游戏一样，轻轻一点，仪器就乖乖开始工作。
它不仅速度快，而且提取的结果也特别纯净，基本上可以说是高质量的保证。
要知道，在科学研究中，质量可是一条命啊，差一点都不行。
这仪器的体积也挺小巧的，放在实验室里简直不占地方，关键是颜值也不低，简直就是实验室的“高颜值”代表。
它有各种模式可以选择，适应不同的实验需求。
简直是科研工作者的好帮手。
嘿，有时候我都想，它是不是有自己的小情绪，感觉它在帮我们加油，努力工作呢！说到安全性，大家可能会担心这些高科技的东西会不会出错。
放心吧，这个全自动核酸提取仪可是经过多重测试的，稳定性杠杠的。
就像你信任的老朋友一样，虽然长得比较复杂，但绝对不会给你添麻烦。
而且它的清洗和维护也很简单，简直不费吹灰之力。
真心觉得，这机器就像是个勤劳的小蜜蜂，工作再忙也不怕。
当然了，使用全自动核酸提取仪的好处可不仅仅是提取效率高、操作简单。
它还能减少人为操作带来的误差，这在科研领域可是个大大的加分项。
大家都知道，科研就是一个对数据精益求精的过程，哪怕是一点小差错，都可能影响整个实验的结果。
有了这台仪器，简直就像是为科研保驾护航，心里踏实多了。
国产全自动核酸提取仪的比较
国产全自动核酸提取仪的比较比较国产全自动核酸提取仪的特点：厂家仪器通道防污染措施提取时间___ 16、20、32、96 循环风路、hepa滤膜、紫外 30-40min西安天隆 24、32、48、96 紫外 30-50min杭州博日 32、96 30-60min___ 24、32、48、96 紫外 15-40min杭州艾康 32 紫外 12-40min___ 32 循环风路、hepa滤膜、紫外 30-70min___ 24、32、96 紫外 30-50min江苏硕世 24、32、96 30-50min百泰克 16、32 <60min厦门致善 32 30-60min___生物 24、32 30-40min天根 16、32 30-40min均一性 CV值___ <5%西安天隆 <5%___ <3%___ <5%杭州___ <1.5%___ <5%___ <3%江苏硕世 <5%百泰克 <5%厦门致善 <5%___生物 <5%天根 <5%是否有试剂盒磁珠回收率处理体积南京___ 有。
99% 30ul-2000ul西安天隆有。
99% 30ul-15ml杭州博日有。
98% 10ul-1000ul___ 无。
95% 50ul-10ml杭州艾康有。
98% 20ul-1000ul___ 有。
99% 100ul-2400ul___ 有。
98% 20ul-1100ul江苏硕世有。
99% Max1000ul百泰克有。
99% 20ul-7000ul厦门致善有。
99% 50ul-1000ul___生物有。
99% 50ul-1000ul天根有。
99% 20ul-2400ul对比这些国产全自动核酸提取仪，可以发现它们在通道、防污染措施、提取时间、均一性、是否有试剂盒、磁珠回收率和处理体积等方面存在差异。
其中，南京___、西安天隆、杭州博日、杭州奥盛、杭州艾康、___、___、江苏硕世、___、厦门致善、济凡生物和天根这些品牌的全自动核酸提取仪都有其各自的特点和优势。
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CT-DENBA、-DUNUA-DNA 部血分清泌、物全等血。、咽拭子等
耐 葡甲 萄氧 球核西 菌林 相酸金 关提黄 基色 因取方粪物法便、：血液及各类分泌 H检HC测PM-VD煮-DN沸NAA法；胃尿全粘液血膜、等组乳织汁活、检血标清本、
H乙关MIVP肝基--1病因D柱RN毒检N提AA耐测取药；相痰血、清血咽或清拭血或子浆血等等浆 磁珠法等。
产率 (yield)
不同核酸提取方法产率比较 （通过样本浓度倍比稀释后比较灵敏度）
Journal of Virological Methods 171 (2011) 195–199。
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
纯度 (Purity)
检测260nm、280nm、(320nm)OD值，计算比值
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
产率 (yield)
不同核酸提取方法产率比较 （不同提取方法提取后Ct比较）
菌液浓度106 CFU/ml
Journal of Microbiological Methods 76 (2009) 30–37
菌液浓度105CFU/ml 重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
有机提取法 盐析法 氯化铯密度梯度离心法 硅材质技术 离子交换法 滤纸分离法 …
CLSI- MM13A Collection, Transport, Preparation, and Storage of Specimens for Molecular Methods
酶消化法 有机溶剂提取法 强变性剂提取法 酒精及氯化锂沉淀法 氯化铯及蔗糖密度梯度 离心法 离子交换层析法 硅材质技术 Oligo(dT) 亲和层析法 分离mRNA …
组织样本结合杆菌检测 不同提取方法效率比较
（检测限比较）
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
提取方法的选择
依据 标本类型
考虑 后续实验 对提取质 量的要求
依据
相关标准、 指南
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
提取方法的选择
依据治疗、监测要求选择
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
产率 (yield)
核酸定量分析方法
若不含脂肪组织，大于10mg的组织应能产出大于 10 μg的 RNA 或 DNA 。
CLSI-MM10-P Genotyping for Infectious Diseases:Identification and Characterization . CLSI- MM13A Collection, Transport, Preparation, and Storage of Specimens for Molecular Methods.
葡萄球菌相关基因 检测
部分泌物等。 粪血便清、、血全液血及、各咽类拭分子泌等 物
HP-DNA
HCMV-DNA 乙肝病毒耐药相
关基因检测
MP-DNA
胃粘膜组织活检标本 尿液、乳汁、血清、 全血等 血清或血浆
痰、咽拭子等
HIV-1RNA 血清或血浆等
细菌其宏它…基…因组 Flu-RNA
菌液 …… 咽拭子、呼吸道分泌 物样本等
核酸提取质量保证
与自动核酸提取仪性能评价
廖璞 重庆市临床检验中心
2015 . 10 重庆
内容
引言 核酸提取质量评价与保证 自动核酸提取仪性能评价 结语
重庆市临床检验中心
引言
器官移植 配型HLA 分型检测
分子诊断
病原微生物 核酸检测
核酸提取 与纯化是
基础
分子诊断 临床应用
染色体病 和遗传性 疾病基因
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取基本步骤
样本 预处理
裂解 释放
分离 纯化
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取与检测结果
核酸提取、扩增过程中人基因组的污染，导致测序结果被污染
J Natl Cancer Inst. 2011 Jun 8;103(11):847-8庆市临床检验中心
核酸质量综合评价 产率 纯度
完整性 其他
其他：干扰物质、交叉污染等
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
产率 (yield)
1
核酸定量
评2
价
提取核酸后进行定量PCR，比较Ct值
方3 通过标本倍比稀释后提取进行灵敏度评价
法
4
通过内标(Internal Control/Calibrator)评价
RNA核酸提取评价
产率 (yield)
不同实验室RNA提取产率比较 （ 通过RT-qPCR对提取出的RNA进行基因转录子扩增比较提取效率）
Methods 59 (2013) 20–31
重庆市临床检验中心
RNA核酸提取评价
纯度 (Purity)
比值 R = (A260–A320)/(A280–A320)
重庆市临床检验中心
微量样本的核酸质量评价
如NanoDrop超微量分光光度计、quabit、 Quant-iT荧光定量分析–用 于下游检测为（NGS）等需要精密测定的实验
重庆市临床检验中心
主要分子诊断技术对核酸提取的要求
1 临床病原微生物核酸检测
2 染色体病和遗传性疾病基因检测
3
肿瘤基因检测
4 器官移植配型HLA基因分型检测
提取后贮存方式
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
评价方法
完整性(Integrity)
1
普通凝胶电泳
2 脉冲场凝胶电泳
3
毛细管电泳
其他：如扩增不同 4 大小的片段比较
……
Clinica Chimica Acta 424 (2013) 274–286
不同实验室核酸提取后完整度比较 （脉冲场凝胶电泳）
5
个体化用药核酸检测
重庆市临床检验中心
临床病原微生物核酸提取
病毒与细菌 耐药相关检 测 细菌 核酸病检毒测
核酸检测
结核HT分BBV枝--DD杆NN菌AA、耐
药基H因CV检-R测NA
痰、肺及支气管灌洗液、 咽拭子等 血血清清或、血血浆浆、乳汁等
性病类：NG-DNA、 生殖泌尿道分泌物、眼
耐CT甲-D氧NE西AB、林-DU金NU黄-AD色NA
1. 检测260nm、280nm、
（ 320nm ）OD值，计算纯度
2. 层析
层析
NATURE PROTOCOLS, 2007,2(12)
重庆市临床检验中心
RNA核酸提取评价
完整性(Integrity)
评价方法
RNA电泳图：
1 普通凝胶电泳
毛细管电泳/RIN 2 值等
理想的RNA完整性为：清晰的 28S/18S两条带，以及5S条带，无 基因组污染的DNA条带。28S/18S 应近似两倍。
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取质量管理
性能验证
试剂性能验证记录应能反映该批试剂的核酸提取效率 和核酸扩增效率。
可采用凝胶电泳试验比较核酸提取物与核酸标准物确 认核酸片段提取的完整性、260nm紫外波长测定确认核酸提 取的产率、260nm/280nm比值 确认核酸提取的纯度。
检验过程
应使用验证过的核酸抽提和纯化方法。
检测
用药个体化 核酸检测
肿瘤基因 检测
重庆市临床检验中心
引言
核酸
脱氧核糖核酸
(deoxyribonucleic acid, DNA)
核酸的紫外吸收
核糖核酸
(ribonucleic acid, RNA)
• 线性高分子化合物，粘度极大； • 多元酸，较强酸性； • 核酸分子具有强烈的紫外吸收。
DNA纯品A260/A280=1.8 RNA纯品A260/A280=2.0
二、将影响后续实验的物 质加入到标本中，看提取试 剂是否能够有效去除干扰。
交叉污染
将已知不同浓度的病原 体含量（包括阴性）的标本 用待评价试剂提取，比较所 得到的结果。可知纯化后是 否存在标本间交叉污染。
重庆市临床检验中心
核酸提取其它评价
成本、时间、特殊设备要求等
Journal of Microbiological Methods 76 (2009) 30–37.
重庆市临床检验中心
DNA核酸提取评价
完整性(Integrity)
不同的提取方法 对核酸提取完整性的影响（ ImageJ分析）
Clin Chim Acta. 2015 Feb 2;440:205-10.
样本提取间隔时间 对完整性的影响(脉冲场电泳)
重庆市临床检验中心
RNA核酸提取评价
产率 (yield)
重庆市临床检验中心
引言 多样化
临床核酸提取标本类型
血液：全血、血清、血浆、血斑… 粪便、尿液、脑脊液…
分泌物：痰、乳汁、拭子…
细胞：肿瘤细胞、羊水细胞… 病理组织、微生物菌落…
重庆市临床检验中心
引言
核酸提取方法
病毒核酸 提取方法
基因组核酸 提取方法
RNA 提取方法
有机提取法 靶向捕获技术 硅材质技术 …
重庆市临床检验中心
微量样本的核酸质量评价
如微生物群体中pg级的DNA提取量
• 使用荧光双链DNA染料
法在quabit荧光计上测
定浓度。
• Lonza FlashGel system检 测完整性、16S rRNA基 因进行qPCR检测
Nat Protoc. 2015 May;10(5):768-79.
我室核酸纯化过程中乙醇未完全去 除导致测序结果出现杂峰
乙醇未完全去除标本
乙醇完全去除标本