梅毒螺旋体感染临床检测程序的建立、结果报告和解释

机体对梅毒螺 旋体感染的抗体应答
非 特 异 性 类 脂 质 反 应 素 抗 体 抗 密 螺 旋 体 的 特 异 性 抗 体
非 特异 性 类 脂 质 反应素 抗 体
即 抗 心 磷 脂 （ cardiolipin） 抗 体 ， 又 称 为 反 应 素 ， 多 为 IgA和 IgM混 合 型 抗 体
不 加 热 血 清 反 应 素 试 验 (Unheated serum reagin test, USR)
本 方 法 对 VDRL抗 原 进 行 了 改 良 ， 其 将 VDRL 抗 原 用 稀 释 液 稀 释 后 ，再 将 该 抗 原 悬 液 离 心 ， 然 后 在 沉 淀 物 中 加 入 含 有 EDTA-Na2、氯 化 胆 碱和防腐剂的一定量的缓冲液。
TRUST方 法 是 目 前 最 为 常 用 的 梅 毒 初 筛 方 法 之一。
使用类脂质抗原的血清学试验：优缺点
测 定 操 作 简 便 快 速 ， 对 一 期 梅 毒 的 阳 性 反 应 出 现 较 早 ，对 二 期 梅 毒 也 有 诊 断 价 值
特 异 性 较 差 ： 生 物 学 假 阳 性 可 见 于 多 种 疾 病 ， 如 麻 风 、结 核 、红 斑 狼 疮 、类 风 湿 性 关 节 炎 、猩 红 热 、慢 性 肝 病 、HIV感 染 等 。
EDTA可 使 抗 原 半 年 内 不 变 性 氯 化 胆 碱 对 补 体 有 化 学 灭 活 作 用 ， 从 而 使 用 时
无需 每天配 制抗 原 及 血 清加热 灭活 处理 仍 需 显 微 镜 下 观 察 结 果 。
快 速 血 浆 反 应 素 环 状 卡 片 试 验 (RPR)
RPR是 在 上 述 USR抗 原 的 基 础 上 加 入 一 定 量 特 制 的 活 性 炭 颗 粒 ，实 验 在 特 制 的 白 色 纸 片 卡 上 进 行 ，从 而 使 得 抗 原 抗 体 反 应 在 白 色 底 板 上 出 现 黑 色 的 凝集 颗 粒 而 可 用 肉 眼 观 察 ，结 果 容 易 判断
本 试 验 是 将 梅 毒 螺 旋 体 Nichols株 抗 原 直 接 涂 在 载 玻 片 上 ， 然 后 将 密 螺 旋 体 无 毒 株 （ Reiter株 ） 制 成 吸 收 剂 加 至 待 测 血 清 标 本 中 反 应 30分 钟 ， 以 去 除 同 属 抗 原 的 交 叉 反 应 。再 将 吸 收 后 的 血 清 加 到 玻 片 的 抗 原 膜 上 ， 37℃温 育 30分 钟 ， 用 PBS缓 冲 液 冲 洗 晾 干 ， 再 加 荧 光 素 标 记 的 抗 人 IgG， 37℃温 育 后 冲 洗 ， 晾 干 ， 最后在荧 光显微镜下观 察结果。
肉眼观察结果
VDRL
二 十 世 纪 50、60年 代 最 为 常 用 的 梅 毒 血 清 学 试 验 所用的抗原是从牛心中提取的心磷 脂和从鸡蛋 黄 中提取的卵磷 脂及胆 固醇 等 有效
成分 梅 毒 螺 旋 体 在 破 坏 机 体组 织 的 过 程 中 ，体 内 释 放 一 种 心 磷 脂 抗 原 ，这 种 抗 原 可 刺
测 定 假 阳 性 可 见 于 高 丙 种 球 蛋 白 血 症 、全 身 免 疫 性 疾 病 和 生 殖 器疱疹等 。
FTA-ABS是 公 认 的 “经 典 ”密 螺 旋 体 抗 原 的 血 清 学 试 验 。
由 于 感 染 梅 毒 螺 旋 体 后 ， 机 体 血 循 环 中 心 磷 脂 抗 体 的 出 现 要 晚 于 特 异 性 的 抗 梅 毒 螺 旋 体 抗 体 ，并 且 晚 期 梅 毒 这 类 抗 体 还 有 可 能 转 阴 ，因 此 ，上 述 过筛试验 不适于一期梅毒早期和三期梅毒的临床 诊断。
使用 密 螺 旋体抗 原 的血 清学 试 验
荧 光 密 螺 旋 体 抗 体 吸 收 试 验 （ Fluoresent treponemal antibody-absorption test, FTA-ABS）
梅 毒 螺 旋 体 血 球 凝 集 试 验 （ Treponema pallidum hemagglutination assay, TPHA）
此 类 类 脂 质 抗 体 在 体 外 可 增 强 巨 噬 细 胞 对 梅 毒 螺 旋体的吞噬作用
未 经 治 疗 的 梅 毒 患 者 血 清 中 反 应 素 可 长 期 存 在 ，经 适 当 治 疗 后 可 逐 渐 减 少 ，直 至 消 失 。
抗 密 螺 旋体的特异 性 抗 体
早 期 患 者 以 产 生 针 对 梅 毒 螺 旋 体 轴 丝 中 37KDa鞘 亚 单 位 成 分 的 IgM抗 体 为 主 ， 另 外 还 有 针 对 梅 毒 螺 旋 体 多 肽 （ 分 子 量 分 别 为 45、42、33、30、 16.5、15.5 KDa） 的 抗 体
17 KDa成 分 由 156个 氨 基 酸 组 成 ， 具 有 梅 毒 螺 旋 体 抗 原 特 异 性 ， 不 与 （ treponema phagedenis） 发 生 交 叉 ， 与 人 类 正 常血 成分亦无交 叉反应。
轴丝抗原
轴 丝 是 梅 毒 螺 旋 体 的 运 动 器 官
主 要 由 33KDa、35.5KDa核 心 单 位 和 37KDa 鞘 亚单位聚合而成
二 期 梅 毒 时 ， 则 血 循 环 中 可 出 现 抗 全 部 梅 毒 螺 旋 体 抗 原 的 IgM和 IgG抗 体 ， 对 多 肽 的 抗 体 除 了 以 上பைடு நூலகம்六 种 外 ， 又 增 加 了 另 外 16种 多 肽 抗 体 。
如 经 治 疗 ， IgM抗 体 浓 度 降 低 ， 血 清 中 只 能 检 出 IgG抗 体 。
梅 毒 螺 旋 体 即 苍 白 螺 旋 体 （ treponema pallidum, TP） 为 梅 毒 的 病 原 体 ， 亦 称 为 梅 毒 密 螺 旋 体 ， 是 1905年 由 Schandim和 Hoffman首 先 发 现 的 。
梅毒螺 旋体的抗 原 结 构
外 膜 脂 蛋 白 抗 原 轴 丝 抗 原 4D抗 原
不 需 用 显 微 镜
甲 苯 胺 红 不 加 热 血 清 试 验 （ TRUST）
该 方 法 则 是 在 上 述 抗 原 试 剂 中 加 入 特 制 的 染 料 甲苯胺红
由 于 甲 苯 胺 红 是 化 学 染 料 ， 颗 粒 均 匀 ， 生 产 的 批 间 差 异 小 ，结 果 易 于 观 察
当 疾 病 进 入 晚 期 时 ， 则 血 循 环 中 的 某 些 抗 梅 毒 螺 旋体抗 原 多 肽 的 抗 体会 逐 步 消 失。
经 典的梅毒血 清学 试 验
补 体 结 合 试 验 ： 1906年 由 Wasserman建 立 ， 是最 早使用 的梅毒螺 旋体感染诊 断 的血 清学 试 验
梅毒螺 旋体感染临 床检 测 程 序 的 建 立 、结 果 报 告 和 解 释
卫生部临床检验中心 李金明
Pandora和 她 的 魔 盒
古 希 腊 语 中 ， "潘 "（ Pan） 是 所 有 的 意 思 ， 而 "多 拉 "（ Dora） 则是礼 物
梅 毒 的 英 文 名 称 为 Syphilis（ 西 菲 利 斯 ） ， 源 于 拉 丁 语 。据 考 最 早 以 此 称 谓 梅 毒 是 在 16世 纪 的 上 半 叶 。
絮 状 沉 淀 试 验 ： 1920年 由 Kahn建 立
使用类脂质抗原的血清学试验
性 病 研 究 实 验 室 试 验 （ Venereal disease research laboratory test, VDRL）
不 加 热 血 清 反 应 素 试 验 (Unheated serum
外 膜 脂 蛋 白抗 原
有 47KDa、44.5KDa、43KDa、36KDa、34 KDa、17 KDa、15 KDa等 成 分 。
47KDa成 分 含 量 最 高 ， 由 367个 氨 基 酸 所 组 成 ， 具 有 强 免 疫 原 性 ， 是 梅 毒 螺 旋 体 的 主 要 免 疫 优 势 抗 原 。该 成 分 与 另 两 种 致 病 性 密 螺 旋 体 （ treponema pertenue和 treponema endemicum） 抗 原 成 分 有 交 叉 反 应 。
本 试 验 由 于 吸 收 试 剂 的 使 用 ， 提 高 了 测 定 的 特 异 性 ， 可 达 92%。 由 于 使 用 的 是 梅 毒 螺 旋 体 Nichols株 抗 原 ， 密 螺 旋 体 各 种 抗 原 分 子 均 存 在 ，提 高 了 试 验 的 敏 感 性 。
对 一 期 梅 毒 的 敏 感 性 为 80%， 二 期 为 99~100%， 三 期 为 95~100%。
梅 毒 螺 旋 体 明 胶 颗 粒 凝 集 试 验 （ Treponema pallidum particle agglutination assay, TPPA）
酶 联 免 疫 吸 附 试 验 （ ELISA） 蛋 白 印 迹 技 术 （ Western blotting, WB）
荧 光 密 螺 旋 体 抗 体 吸 收 试 验 （ FTA-ABS）
37KDa抗 原 成 分 含 量 最 高 ， 其 免 疫 原 性 亦 很 强 ，可 以 刺 激 机 体 产 生 细 胞 和 体 液 免 疫 应 答 。
4D抗 原
4D抗 原 为 梅 毒 螺 旋 体 特 异 性 表 面 抗 原 为 分 子 量 190KDa的 单 体 聚 合 物 均 匀 分 布 于 螺 旋 体 表 面 ， 为 有 序 环 状 结 构 耐 热 、耐 碱 ， 但 对 酸 较 敏 感 。
reagin test, USR)
显微镜 观 察 结 果
快 速 血 浆 反 应 素 环 状 卡 片 试 验 (Rapid plasma reagin circle card test， RPR)