论金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌1 简述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。
本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。
本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。
金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。
本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。
2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。
3 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。
3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。
3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。
3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。
3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。
待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。
临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。
3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。
4 培养基4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。
4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。
4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。
4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。
4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。
5 对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。
微生物金黄色葡萄球菌病例讨论
实验检测结果
1.菌落特点:菌落厚、有光泽、 圆形凸起，直径0.5~1.0mm。 血平板菌落周围形成透明的溶 血环。
2.血浆凝固酶试验和血溶现象： 血液凝固阳性，产生溶血环, 甘露醇发酵产酸。
3.实验确诊：病原体为金黄色
葡萄球菌。
菌落在培养基生长情况
致病物质与相关疾病
• 1)凝固酶（Coagulase）是能使含有抗凝剂的人 或兔血浆发生凝固的酶类物质。分为游离和结 合两种，与菌体逃避免疫，血栓形成有关。
• 2)溶血素（Staphyolysin）致病性葡萄球菌产 生溶血。重要致病物质，减毒后可做疫苗接种。
• 3)杀白细胞素（Leukocidin）含F和S两种蛋白 质，能杀死人和兔的多形核粒细胞和巨噬细胞。 此毒素有抗原性，不耐热，产生的抗体能阻止 葡萄球菌感染的复发。
致病物质与相关疾病
• 4）肠毒素（Enterotoxin）是引起食物中毒的
引起的全身感染
败血症
脓毒血症
中毒性休克综合征
引起的全身感染
食物中毒
烫伤样皮肤综合征
治疗与预防
谢谢 Question
致病物质，是一种蛋白质，耐热，对蛋白酶耐受， 可使人呕吐和腹泻，还是一种超抗原。
• 5）毒性休克综合毒素Ⅰ： 系噬菌体Ⅰ群金黄色 葡萄球菌产生。可引起发热，增加对内毒素的敏 感性。增强毛细血管通透性，引起必血管紊乱而 导致休克。
• 6）耐热核酸酶，对DAN或RNA有较强的降解能力， 有抗原性。
感染类型
微生物实验
病例讨论
Байду номын сангаас
病例简介
初步诊断
初步诊断
二.临床特征表现
初步诊断：细菌起的化脓性感染。
实验检测
金色葡萄球菌菌落形态特征
金色葡萄球菌菌落形态特征金色葡萄球菌是一种常见的细菌，属于球菌科。
它是一种革兰氏阳性细菌，通常在皮肤和黏膜上生长，并可以引起各种感染。
在临床实践中，对金色葡萄球菌的分离和鉴定非常重要。
本文将从菌落形态特征方面详细介绍金色葡萄球菌。
一、形态学特征1. 形态金色葡萄球菌为球形或卵圆形细胞，直径约为0.5-1.5微米。
其表面光滑，无胶囊。
在显微镜下观察时，可以看到其具有明显的革兰氏阳性特征。
2. 色素金色葡萄球菌可产生一种金黄色的色素，称为“黄素”。
这种色素使得该细菌在培养基上呈现出明显的黄色或金黄色。
3. 生长条件金色葡萄球菌是一种嗜温性细菌，在适宜温度下（通常为35-37℃）能够迅速生长并繁殖。
它可以在不同的培养基上生长，如营养琼脂、血琼脂、大肠杆菌琼脂等。
二、菌落形态特征1. 形态金色葡萄球菌的菌落呈圆形或不规则形状，直径通常在1-2毫米左右。
其表面光滑，边缘整齐，无突起或凹陷。
2. 颜色金色葡萄球菌的菌落颜色通常为黄色或金黄色，有时也会呈现出淡黄色或白色。
这种颜色是由于其产生的黄素所致。
3. 透明度金色葡萄球菌的菌落透明度较高，可以透过培养基看到底部。
4. 质地金色葡萄球菌的菌落质地较软，不易切割。
在压平后，表面会留下明显的凹痕。
5. 气味金色葡萄球菌的菌落通常没有明显气味。
三、结论综上所述，金色葡萄球菌是一种革兰氏阳性细菌，在皮肤和黏膜上生长，并可以引起各种感染。
在临床实践中，对其分离和鉴定非常重要。
在菌落形态特征方面，金色葡萄球菌的菌落呈圆形或不规则形状，表面光滑，颜色通常为黄色或金黄色，透明度较高，质地较软。
这些特征可以帮助临床医生更好地诊断和治疗金色葡萄球菌感染。
金黄色葡萄球菌
Part 2
致病性
致病性
1
金黄色葡萄球菌是一种常见的病原体， 可以引起多种人类和动物疾病
其中，食物中毒是最常见的疾病之一， 通常是由于摄入被金黄色葡萄球菌污
染的食物引起的
2
3
此外，金黄色葡萄球菌还可以引起皮 肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、
败血症等疾病
Part 3
传播途径
传播途径
金黄色葡萄球菌可以 通过多种途径传播， 包括空气传播、直接 接触传播、食物传播
x
然而，由于金黄色葡萄球菌 具有抗药性，一些抗生素可 能无法有效治疗该细菌
同时，对于严重感染的患者， 可能需要采用综合治疗措施， 包括手术治疗、支持治疗等
Part 6
预防措施
预防措施
为了预防金黄色葡萄球菌感 染，可以采取以下措施
加强个人卫生 勤洗手、洗脸、刷牙 等个人卫生习惯可以
减少细菌的传播
施
Part 1
生物学特性
生物学特性
它可以在各种环境条件下生长， 包括高温、低温、高盐度、低 pH值等
金黄色葡萄球菌是一种需氧型 细菌，具有高度的适应性和生 存能力 金黄色葡萄球菌具有多种毒力 因子，如溶血素、肠毒素、细 胞毒素等，这些毒力因子可以 破坏细胞、诱导炎症反应和免 疫应答，从而引起各种疾病
思到最后定稿的各个环节给予细心指引与教导,使我得以最终完成毕业论文设计！ 最后，我要向百忙之中抽时间对本文进行审阅，评议和参与本人论文答辩的各位
老师表示感谢！
恳请各位老师批评指正！
避免接触污染源 避免接触被金黄色 葡萄球菌污染的水
源、食物等
生 加强对食品的卫生管理，
避免食品被污染
增强免疫力 加强锻炼、保持健康的 生活方式可以提高免疫 力，减少感染的风险
食品“金黄色葡萄球菌”致病解读
对检出金黄色葡萄球菌肠毒素的中毒食品，或经流行病学调查证实的中毒食品，立即进行无害化处理或销毁。对已售出或在市场流通的中毒食品，要立即召回，并进行无害化处理或销毁。
同时，提醒消费者一旦发生疑似金黄色葡萄球菌肠毒素中毒，除立即将患者送往医院进行救治外，还要立即停止食用并封存可疑食品。
3. 冷却加工的食品要快速降温到5℃以下;
4. 对已感染或携带某种病原体，并已造成食物污染或可能经食品引起疾病传播的食品加工人员，应依据有关法律法规，限制其从事食品加工活动。
5. 生产加工乳制品、肉类等高危食品的企业，应认真、严格的执行食品安全国家标准的相关规定。在加工过程中或在市场流通中发现产品检验的某些指标不符合食品安全国家标准，应以消费者利益为重，自觉把控出厂产品的质量、主动召回不合格产品，防范引起中毒事件的潜在风险。
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何为金黄色葡萄球菌?
Байду номын сангаас
金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病微生物，其繁殖过程中产生的肠毒素是引发食物中毒的致病因子。该菌最适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口;空气、污水等环境中也无处不在。
金黄色葡萄球菌致病因子
金黄色葡萄球菌本身不会对人体健康产生危害，但其繁殖过程中产生的肠毒素是主要的致病因子。金黄色葡萄球菌产生的肠毒素具有极强的耐热性，在100℃加热条件下仍能存活30分钟不失去其活性，可存在于已经煮熟的食物中，导致食物中毒。食用金黄色葡萄球菌污染的食物是否会对人体产生危害，主要取决于污染食物中肠毒素的残留量。肠毒素对人体的中毒剂量存在明显的人群差异，一般认为是20～25μg。一般情况下，人体摄入带有达到致病量肠毒素的食物2~6小时后，出现恶心、呕吐和腹泻、腹痛、绞痛等急性胃肠炎症状，无发热，没有传染性，中毒症状通常会持续1~2天，轻度患者可以自愈，较严重者经治疗后可以较快恢复，愈后一般良好。但儿童对肠毒素比成人敏感，发病率高、病情重，需特别关注。
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。
金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。
2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。
金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。
- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。
- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。
3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。
金黄色葡萄球菌..
怎么发生危害
食物中毒的传染源，是被金葡菌感 染的人和动物。如食品加工人员、炊 事员或销售人员带菌，造成食品污染 ；食品在加工前本身带菌，或在加工 过程中受到了污染，产生了肠毒素,引 起食物中毒；熟食制品包装不严，运 输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺 炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部 位的污染。
怎 么 进 行
医 治
治疗方法
现在有金黄色葡萄球菌感 染者者，可选用：红霉素、新 型青霉素、庆大霉素、万古霉 素或先锋霉素Ⅵ治疗。
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.
检测方法 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10～15 %NaCl 肉汤中生长，因此利用它的这个特性进行污染标本分离。
空气中存在，但不繁殖；
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.
Thank You!
别培养基 1、皮肤、口腔、鼻咽腔中寄居的葡萄球菌，常是感染的来源。
ห้องสมุดไป่ตู้
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37 ℃，最适生长pH7.
耐热核酸酶试验 3M 金黄色葡萄球菌 尽量不吃隔夜菜，保存食物尽量选择低温、通风的条件，可阻止致病菌的生长繁殖。
1、皮肤、口腔、鼻咽腔中寄居的葡萄球菌，常是感染的来源。
形态与染色
生
物
学 特
培养特性
性
抵抗力
形态与染色
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄 色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。革 兰染色阳性，衰老或死亡后可转为阴性。
培养特性
金黄色葡萄球菌营养要求不高， 在普通培养基上生长良好，需氧或兼 性厌氧，最适生长温度37 ℃，最适生 长pH7. 4。
6.金黄色葡萄球菌GB 4789.10-2016解析
定性检测——平板划线分离
菌落形态：白色或者金黄色菌落 ，周围有透明溶血环（β-溶血）。 主要成分：蛋白胨，牛肉粉，脱 纤维羊血
注意点： 一，使用前观看平皿是否有干裂或染菌；
二，开封后未使用完的培养基要及时放于冰箱保存。
定性检测——血浆凝固酶鉴定试验
• 步骤：可疑菌落+5mLBHI→ 36 ℃±1 ℃培养18-24h； 0.5mL兔血浆+0.2-0.3mL BHI培养物→ 36 ℃±1 ℃ 培养6h； 每半小时观察； 同时设置阳性（如：ATCC 6538)、阴性（如：表葡 ATCC 12228) • 阳性现象：试管倾斜或倒置时，呈现凝块，即凝固 注意点： 现象， 1，必须每半小时观察； 或凝固 体积大于原体积的一半。 2，陈旧培养物（培养超过18-24h）或生长不良
平板计数法——计算
平板计数Байду номын сангаас——计算
• d)某一稀释度平板的菌落大于200且有典型 菌落，且下一稀释度平板上有典型菌落，其 平板上的菌落数不在20~200之间，按以下公 式，计数该稀释度平板上的典型菌落。 T=AB/Cd
其中 T-----样品中金黄色葡萄球菌菌落数 A-----某一稀释度典型菌落总数 B-----某一稀释度凝固酶阳性菌落数 C-----某一稀释度用于凝固酶试验的菌落数
B1----第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数 B2----第二稀释度（高稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数 C1----第一稀释度（低稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落总数
C2----第二稀释度（高稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落总数
1.1------计算系数
d--------稀释因子（第一稀释度）
• 超级细菌：耐甲氧西林金葡（万古霉 素）
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论金黄色葡萄球菌思念水饺一出，大家的心又提到了嗓子眼儿，因为想大家对金黄色葡萄球菌有跟多的理解，还有对生物产品在葡萄球菌的检测一块能够更好的理解，所以出于这目的，还有也是一项老师的作业，只有好好的完成了。
细菌按形态可分为：球菌,杆菌,和螺旋菌.金黄色葡萄球菌就是球菌的一种.它是革兰氏阳性菌的代表。
革兰氏阳性菌就是可以被结晶紫初染，碘液媒染,乙醇脱色，沙黄(红色)复染后呈现紫红色的细菌.而革兰氏阴性菌则呈现红色。
这些差别源于金黄色葡萄球菌具有阴性菌所没有的细胞壁结构.金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。
其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密,染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色,相反,阴性菌没有细胞壁结构所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色.金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。
当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素.而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。
这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的.生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
显微图像金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4,干燥环境下可存活数周。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。
选择不同的培养基就可以分离鉴别了，而且可供选择的培养基种类非常之多。
在不含氮的培养基中可生长的是圆褐固氮菌。
在含盐量非常高或含氯霉素的培养基中可生长并且表面绒毛状的是青霉菌，可用的培养基：高盐察氏培养基、孟加拉红培养基等等。
在伊红美蓝平板上为紫黑带金属光泽、在SS平板上为粉红色菌落、在XLD平板上为黄色菌落的是大肠杆菌。
在MRS培养基上可生长、在改良MC培养基上为粉红色菌落、在改良TJA培养基上为底部黄色表面微白色菌落的是乳酸菌。
在血平板上有典型溶血环的较小菌落、BP平板上为黑色带晕圈的菌落为金黄色葡萄球菌。
原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；D—甘露醇为可发酵的糖类；较高含量的氯化钠提供较高的渗透压，抑制大多数非葡萄球菌的微生物；酚红为pH指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
典型致病性葡萄球菌（凝固酶阳性）发酵D—甘露醇产酸而产生黄色带有黄晕的菌落，典型非致病性葡萄球菌不发酵D—甘露醇而形成红色菌落。
1 主题内容与适用范围本标准规定了出口食品中金黄色葡萄球菌的检验方法。
本标准适用于出口食品的检验。
2 设备和材料2.1 供常规平板计数用的基本设备与材料。
2.2 L形玻璃棒。
3 培养基和试剂3.1 普通肉汤培养基。
3.2 胰蛋白胨大豆肉汤。
3.3 Baird-Parker培养基。
3.4 甲苯胺蓝-DNA琼脂。
3.5 生理盐水。
3.6 凝固酶试验兔血浆。
4 样品制备4.1 固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。
4.2 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。
4.3 供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。
5 检验步骤5.1 最近似值(MPN)测定法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色葡萄球菌。
5.1.1 选三个连续稀释度,从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液,接种3管含10％氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤。
样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。
5.1.2 用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的Baird-Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。
5.1.3 从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落 [见附录B(参考件)],移种到肉汤培养基中,置36±1℃培养20～24 h。
5.1.4 取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm³100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察 6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。
试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。
对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验[见附录C (补充件)]等} 加以证实。
5.1.5 报告结果根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表 [见附录D (补充件)],报告金黄色葡萄球菌的MPN/g (mL)。
5.2 平板表面计数法适用于检查金黄色葡萄球菌数不小于10/g(mL)的食品。
5.2.1 选三个连续稀释度,从每个稀释度分别取1 mL稀释样液,接种至3 个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上(如：0.4mL—0.3mL—0.3mL)。
5.2.2 以L形玻璃棒将接种物涂布于琼脂表面,避免涂到平板边缘,将平板正置直至接种物被培养基吸收,将平板翻转,36±1℃培养45～48 h。
5.2.3 挑选有20～200个菌落的平板进行计数。
如果有数种菌落皆类似金黄色葡萄球菌,则分别计算和记录每一类型的菌落数。
当最低稀释度的平板的菌落数小于20时,仍可选用。
如平板上的菌落数大于200,其中有些菌落具有典型金黄色葡萄球菌的外观,同时在其高倍稀释度未出现典型菌落者,亦可用这些平板进行金黄色葡萄球菌计数,但不能把非典型菌落计算在内。
5.2.4 从可计数的各类型菌落中至少各选取1个菌落,参照5.1.3～5.1.4条进行凝固酶试验。
5.2.5 报告结果将呈凝固酶阳性的菌落所代表的 3 个平板上的菌落数相加,并乘以样品稀释倍数,即以此数报告为所检查食品中的金黄色葡萄球菌数/g(mL)。
5.3 非选择性增菌法适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。
5.3.1 取1 : 10稀释的样品液10 mL,接种于10 mL双料胰蛋白胨大豆肉汤中,36±1℃培养2h。
5.3.2 再加入20mL含20％氯化钠的单料胰蛋白胨大豆肉汤,36±1℃培养24±2h。
5.3.3 取上述培养物0.2 mL,分别涂布于2个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上,36±1℃培养46±2h。
5.3.4 从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,参照 5.1.3～5.1.4条进行凝固酶试验。
5.3.5 报告结果如发现有凝固酶试验阳性的菌落,即报告1g(mL)食品中有金黄色葡萄球菌存在,否则为阴性。
附录 A培养基和试剂(补充件)A1 普通肉汤培养基成分：牛肉膏 5.0g氯化钠 5.0g蛋白胨 20.0g蒸馏水 1000.0mL制法：将以上成分混合加热溶化,调至pH7.4～7.6,分装试管,121℃高压灭菌30min。
A2 胰蛋白胨大豆肉汤成分：胰蛋白胨 17.0g植物蛋白胨 3.0g氯化钠 5.0g磷酸氢二钾(K2HPO4) 2.5g葡萄糖 2.5g蒸馏水 1000.0mL制法：将各成分溶于蒸馏水中,必要时加热使完全溶解,分装于试管或玻瓶中,121℃高压灭菌15min,最终pH7.3±0.2。
注：制备双料胰蛋白胨大豆肉汤时,除蒸馏水外,其他成分加倍,配制10％或20％氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤时,可将氯化钠量增加至所需浓度。
A3 Baird-Parker培养基成分：胰蛋白胨 10.0g牛肉膏 5.0g酵母膏 1.0g丙酮酸钠 10.0g甘氨酸 12.0g氯化锂(LiCl²6H2O) 5.0g琼脂 20.0g蒸馏水 950.0mL制法：将各成分加于蒸馏水中,加热煮沸使完全溶解,冷至25℃,调至pH7.0±0.2,分装每瓶95 mL,121℃高压灭菌15 min,临用时加热溶化琼脂,冷至50℃左右,于每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL,摇匀后倾注平皿培养基,应是致密不透明的,使用前在冰箱贮存不得超过48 h。
卵黄亚碲酸盐增菌剂配制：将新鲜鸡蛋浸泡在适当的HgCl2溶液(1:1000)中约1 min,以无菌操作打开鸡蛋,使蛋黄与蛋白分开,将蛋黄加于生理盐水中(3＋7,V/V)充分摇匀,于50mL蛋黄乳液中加入10mL过滤除菌的1％亚碲酸钾水溶液,混匀,4±1℃贮存。
A4 甲苯胺蓝-DNA琼脂成分：脱氧核糖核酸(DNA) 0.3g琼脂 10.0g氯化钙(CaCl2无水) 1.1g氯化钠 10.0g甲苯胺蓝(O) 0.083g三羟甲基氨基甲烷 6.1g蒸馏水 1000.0mL制法：将三羟甲基氨基甲烷溶解于蒸馏水中,调至pH9.0,除甲苯胺蓝(O)外将其余各项成分加热使溶解。
再将甲苯胺蓝(O)溶于培养基中。
分装于塞有橡皮塞的烧瓶中。
如立即使用可不需灭菌。
已灭菌的培养基在室温可存放4 个月无变化,并经数次熔化后仍可使用。
A5 生理盐水成分：氯化钠 8.5g蒸馏水 1000.0mL制法：将氯化钠溶于蒸馏水中,分装于适当容器中,121℃高压灭菌15 min。
A6 凝固酶试验兔血浆临用时取3.8％(取柠檬酸钠3.8 g加蒸馏水100 mL,待溶解后过滤,121℃高压灭菌15min)柠檬酸钠1份,加入新鲜兔血4份,混匀后放冰箱中使用球沉降(或以3000r/min离心30min)后取上清液进行试验。
附录 B典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落(参考件)金黄色葡萄球菌的单个菌落在Baird-Parker琼脂平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿润,直径2～3mm。
灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。
当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。
有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外观可能较粗糙,质地较干燥。
附录 C耐热核酸酶试验(补充件)C1 取3mL甲苯胺蓝-DNA琼脂平铺于载玻片上制成标本片。
C2 待琼脂凝固后,在琼脂上打成直径2 mm的小洞(每个载玻片10～12个),抽出小洞中的琼脂块。