金黄色葡萄球菌(牛肉膏蛋白胨培养基)

合集下载

抑菌实验实训报告

抑菌实验实训报告

一、实验目的1. 了解抑菌实验的基本原理和方法。

2. 掌握常用抑菌剂的抑菌效果。

3. 培养实验操作技能,提高对微生物学实验的实践能力。

二、实验原理抑菌实验是通过测定抑菌剂对微生物的生长抑制情况,来评价其抑菌效果的方法。

实验中,抑菌剂与微生物接触,通过干扰微生物的代谢过程或破坏其细胞结构,从而抑制其生长。

三、实验材料1. 菌株:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。

2. 抑菌剂:苯酚、酒精、氯霉素等。

3. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基。

4. 实验仪器:无菌培养皿、无菌移液器、无菌接种环、酒精灯等。

四、实验方法1. 将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃培养24小时,制成菌悬液。

2. 取无菌培养皿若干,分别加入适量的牛肉膏蛋白胨培养基。

3. 在每个培养皿中央加入适量的抑菌剂,用无菌移液器均匀涂抹。

4. 将菌悬液用无菌接种环取适量,均匀涂布于每个培养皿的抑菌剂周围。

5. 将培养皿倒置,37℃培养24小时。

6. 观察并记录抑菌圈的大小。

五、实验结果1. 苯酚:金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为1.5cm,大肠杆菌抑菌圈直径约为2.0cm。

2. 酒精:金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为1.0cm,大肠杆菌抑菌圈直径约为1.5cm。

3. 氯霉素:金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为2.5cm,大肠杆菌抑菌圈直径约为3.0cm。

六、实验分析1. 苯酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑制作用,但效果不如氯霉素。

2. 酒精对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱,而对大肠杆菌的抑制作用较好。

3. 氯霉素对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较强的抑制作用。

七、实验讨论1. 抑菌实验是微生物学实验中的重要内容,通过实验可以了解不同抑菌剂的抑菌效果,为临床用药和食品加工等提供参考。

2. 实验过程中,无菌操作至关重要,否则会导致实验结果不准确。

3. 本实验结果表明,氯霉素是一种高效的抑菌剂,在临床用药和食品加工等领域具有广泛的应用前景。

八、实验总结本次抑菌实验实训,使我对抑菌实验的基本原理和方法有了更深入的了解,提高了我的实验操作技能。

细菌斜面接种实验报告(3篇)

细菌斜面接种实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握细菌斜面接种的基本操作方法。

2. 熟悉斜面培养基的制作和保存方法。

3. 学习通过斜面接种法分离纯化细菌。

4. 了解细菌在不同培养基上的生长特性。

二、实验原理斜面接种法是一种常用的微生物接种方法,通过将细菌接种到含有营养成分的斜面培养基上,使细菌在适宜的环境中繁殖生长。

斜面培养基通常由琼脂、蛋白胨、牛肉膏等成分组成,提供细菌生长所需的碳源、氮源、生长因子等。

三、实验材料1. 细菌样品:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。

2. 斜面培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂斜面。

3. 实验器材:接种环、酒精灯、无菌试管、无菌培养皿、无菌水、记号笔等。

四、实验步骤1. 斜面培养基制备- 称取25g牛肉膏蛋白胨琼脂,加入100ml蒸馏水,加热溶解。

- 将溶液煮沸10分钟,以去除杂菌。

- 待溶液冷却至50-60℃时,加入无菌水调整pH至7.0-7.2。

- 将溶液分装至无菌试管中,每管10ml。

- 将试管置于高压蒸汽灭菌锅中,121℃灭菌15分钟。

- 灭菌后,待培养基冷却至45-50℃时,将试管倾斜45°,使培养基沿试管壁流下,形成斜面。

- 待培养基凝固后,将试管倒置,置于无菌环境中保存。

2. 斜面接种- 将待接种的细菌样品接种环在酒精灯上灼烧灭菌。

- 待接种环冷却后,挑取适量细菌样品,沿斜面培养基壁涂抹。

- 重复上述步骤,接种第二管斜面培养基。

3. 培养- 将接种后的斜面培养基放入恒温培养箱中,37℃培养24小时。

4. 观察与记录- 观察斜面培养基上的细菌生长情况,记录菌落形态、颜色等特征。

五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上生长良好,形成金黄色、表面光滑、边缘整齐的菌落。

2. 大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上生长良好,形成白色、表面光滑、边缘整齐的菌落。

六、实验讨论1. 斜面接种法是一种常用的微生物接种方法,适用于分离纯化细菌。

2. 在斜面接种过程中,无菌操作至关重要,避免杂菌污染。

抑菌圈实验实验报告

抑菌圈实验实验报告

一、实验目的本实验旨在通过抑菌圈实验,观察不同抗生素对特定细菌的抑菌效果,了解抗生素的抗菌活性,并学习如何通过抑菌圈的大小判断细菌对抗生素的敏感性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的方法之一,用于检测抗生素对细菌的抑制作用。

实验原理基于抗生素对细菌生长的抑制作用,当抗生素与细菌接触时,细菌的生长会受到抑制,从而在含有抗生素的培养基上形成一个无细菌生长的区域,即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抗菌活性,通常抑菌圈越大,说明抗生素的抗菌活性越强。

三、实验材料与仪器1. 材料:- 细菌菌株:金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)- 抗生素:青霉素、红霉素、庆大霉素、链霉素- 琼脂培养基- 牛肉膏蛋白胨培养基- 水浴箱- 滴管- 铅笔- 玻璃板2. 仪器:- 培养箱- 电子天平- 灭菌器四、实验步骤1. 制备培养基:- 称取牛肉膏蛋白胨培养基,加入适量的蒸馏水,溶解后用电子天平称量,使培养基浓度为10g/L。

- 将溶解后的培养基分装至锥形瓶中,每瓶100mL,121℃高压灭菌15分钟。

- 待培养基冷却至50℃左右,加入琼脂粉,充分搅拌均匀。

- 将琼脂培养基倒入培养皿中,待其凝固。

2. 接种细菌:- 将金黄色葡萄球菌接种至牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃培养24小时。

3. 制备抗生素纸片:- 将抗生素粉末用生理盐水溶解,配制成一定浓度的溶液。

- 用滴管将溶液滴加到无菌滤纸上,使滤纸充分浸润。

- 将滤纸晾干,制成抗生素纸片。

4. 抑菌圈实验:- 将制备好的琼脂培养基上的细菌菌落刮去,并用无菌镊子将抗生素纸片贴在培养基表面。

- 将培养皿倒置放入培养箱中,37℃培养24小时。

5. 观察与记录:- 观察培养皿中抗生素纸片周围是否形成抑菌圈,并记录抑菌圈的大小。

五、实验结果与分析1. 实验结果:- 青霉素:抑菌圈直径为15mm- 红霉素:抑菌圈直径为10mm- 庆大霉素:抑菌圈直径为20mm- 链霉素:抑菌圈直径为8mm2. 结果分析:- 根据抑菌圈的大小,可以判断金黄色葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。

细菌氮源利用实验报告(3篇)

细菌氮源利用实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握细菌氮源利用实验的基本原理和方法。

2. 熟悉不同氮源对细菌生长的影响。

3. 通过实验,了解细菌对氮源的适应性和代谢特点。

二、实验原理氮是细菌生长繁殖的重要营养元素,不同细菌对氮源的需求和利用能力存在差异。

本实验通过比较不同氮源对细菌生长的影响,研究细菌对氮源的利用情况。

三、实验材料与试剂1. 实验材料:大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌菌株。

2. 实验试剂:牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、硝酸盐培养基、尿素培养基、硫酸铵培养基等。

四、实验方法1. 菌株活化:将菌株从菌种保藏管中取出,接种于牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃恒温培养18-24小时。

2. 培养基制备:分别配制牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、硝酸盐培养基、尿素培养基、硫酸铵培养基等。

3. 接种与培养:将活化后的菌株接种于不同氮源培养基中,每个培养基接种3个平行样,37℃恒温培养18-24小时。

4. 观察与记录:观察并记录不同氮源培养基中细菌的生长情况,包括菌落形态、颜色、大小等。

五、实验结果与分析1. 牛肉膏蛋白胨培养基:细菌在该培养基上生长良好,菌落呈白色,圆形,边缘整齐。

2. 葡萄糖蛋白胨培养基:细菌在该培养基上生长较好,菌落呈白色,圆形,边缘整齐。

3. 硝酸盐培养基:细菌在该培养基上生长较差,菌落呈白色,圆形,边缘不整齐。

4. 尿素培养基:细菌在该培养基上生长良好,菌落呈白色,圆形,边缘整齐。

5. 硫酸铵培养基:细菌在该培养基上生长较好,菌落呈白色,圆形,边缘整齐。

通过实验结果可以看出,不同细菌对氮源的利用存在差异。

大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基和葡萄糖蛋白胨培养基上生长良好,说明这两种菌株对碳源和氮源的需求较高。

金黄色葡萄球菌在硝酸盐培养基和尿素培养基上生长较好,说明该菌株具有较强的硝酸盐还原和脲酶活性,能够利用硝酸盐和尿素作为氮源。

硫酸铵培养基对细菌生长的影响介于上述培养基之间。

金黄色葡萄球菌的耐药性研究

金黄色葡萄球菌的耐药性研究

金黄色葡萄球菌的耐药性研究一、金黄色葡萄球菌的分离及培养称取10g土样,在无菌条件下,放入无菌的三角瓶中,加入90ml的蒸馏水,再加入0.2mg复方磺胺甲恶唑振荡10min,使土样充分混合,利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性,杀死其他细菌。

从三角瓶中取1ml上清液放入一支无菌试管(15*150mm)中按10倍梯度稀释成10-5的土壤稀释液后,分别取200μL涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上,置于37℃培养箱中恒温培养24h。

利用高盐培养基抑制其它细菌的生长,从而分离得到金黄色葡萄球菌。

二、金黄色葡萄球菌的鉴定1.菌落形态:菌落较小,圆形,直径1-2mm,较湿,较透明,边缘整齐,隆起,略带淡绿色。

2.染色观察:从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阴性菌,显微镜下呈单个或葡萄状排列,无芽孢、荚膜,单个菌体直径为0.5-1μm。

革兰氏染色:1.涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10μL待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂步成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。

2.干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烧枯而变形。

3.固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒钟,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉得烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。

4.初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约为1min。

5.水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。

6.媒染:用100-1000μL移液枪吸取300μL碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min。

7.水洗:重复步骤5。

8.脱色:斜置载玻片,滴加95%的乙醇脱色,至流出的乙醇不显紫色为止,大约需时20-30s,随即水洗。

观察细菌实验报告结果

观察细菌实验报告结果

一、实验目的1. 学习细菌培养的基本方法。

2. 观察细菌在不同培养基上的生长情况。

3. 分析细菌的生长特征。

二、实验材料1. 细菌样品:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等。

2. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基、麦芽糖培养基等。

3. 培养箱:恒温培养箱。

4. 实验器材:接种环、培养皿、显微镜、酒精灯、无菌操作台等。

三、实验方法1. 细菌接种:将细菌样品用无菌操作台上的接种环取适量,分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基、麦芽糖培养基等。

2. 培养与观察:将接种好的培养基放入恒温培养箱中,分别于37℃、25℃、30℃等不同温度下培养,每隔一定时间观察细菌的生长情况。

3. 显微镜观察:将培养好的细菌用无菌操作台上的接种环取适量,滴在载玻片上,用显微镜观察细菌的形态、大小、颜色等特征。

四、实验结果1. 大肠杆菌培养结果:(1)牛肉膏蛋白胨培养基:在37℃培养24小时后,培养基表面出现白色菌落,菌落周围有透明圈。

(2)LB培养基:在37℃培养24小时后,培养基表面出现白色菌落,菌落周围有透明圈。

(3)麦芽糖培养基:在37℃培养24小时后,培养基表面出现白色菌落,菌落周围有透明圈。

2. 金黄色葡萄球菌培养结果:(1)牛肉膏蛋白胨培养基:在37℃培养24小时后,培养基表面出现黄色菌落,菌落周围有透明圈。

(2)LB培养基:在37℃培养24小时后,培养基表面出现黄色菌落,菌落周围有透明圈。

(3)麦芽糖培养基:在37℃培养24小时后,培养基表面出现黄色菌落,菌落周围有透明圈。

3. 枯草芽孢杆菌培养结果:(1)牛肉膏蛋白胨培养基:在25℃培养48小时后,培养基表面出现绿色菌落,菌落周围有透明圈。

(2)LB培养基:在25℃培养48小时后,培养基表面出现绿色菌落,菌落周围有透明圈。

(3)麦芽糖培养基:在25℃培养48小时后,培养基表面出现绿色菌落,菌落周围有透明圈。

五、实验分析1. 大肠杆菌在不同培养基上的生长情况基本一致,说明其生长条件较为宽松。

细菌接种_实验报告

细菌接种_实验报告

一、实验目的1. 掌握细菌接种的基本操作方法。

2. 熟悉无菌操作技术。

3. 观察细菌在不同培养基上的生长现象。

二、实验原理细菌接种是将纯培养的细菌转移到新的培养基上,使其在适宜的环境中进行繁殖。

无菌操作技术是保证实验结果准确性的关键。

通过观察细菌在不同培养基上的生长现象,可以了解细菌的生长特征和代谢产物。

三、实验材料1. 菌种:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌等。

2. 培养基:牛肉膏蛋白胨固体培养基、营养肉汤培养基、糖发酵培养基等。

3. 实验器材:接种环、接种针、酒精灯、无菌棉签、培养皿、试管、显微镜等。

四、实验步骤1. 准备工作(1)将菌种从保藏瓶中取出,置于37℃恒温箱中复苏。

(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、营养肉汤培养基、糖发酵培养基等。

2. 无菌操作(1)点燃酒精灯,用无菌棉签蘸取少量酒精,在火焰上方烧灼,待棉签干燥后,用于点燃接种环。

(2)用接种环从复苏的菌种中取出一环细菌,置于培养基表面。

(3)用接种环轻轻划线,使细菌均匀分布在培养基表面。

3. 观察生长现象(1)将接种后的培养基置于37℃恒温箱中培养24小时。

(2)观察细菌在不同培养基上的生长现象,包括菌落形态、颜色、大小等。

(3)用显微镜观察细菌的菌体形态和排列。

4. 结果分析(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基上的菌落为白色、圆形、光滑、湿润。

(2)营养肉汤培养基中的细菌生长旺盛,菌液浑浊。

(3)糖发酵培养基上的细菌在糖类周围形成透明圈,表明细菌能够发酵糖类。

五、实验结果1. 大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上形成白色、圆形、光滑、湿润的菌落。

2. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上形成金黄色、圆形、凸起、不透明的菌落。

3. 枯草芽胞杆菌在牛肉膏蛋白胨固体培养基上形成白色、圆形、凸起、不透明的菌落。

4. 营养肉汤培养基中的细菌生长旺盛,菌液浑浊。

5. 糖发酵培养基上的细菌在糖类周围形成透明圈。

六、实验结论1. 通过细菌接种实验,掌握了无菌操作技术,确保了实验结果的准确性。

牛肉膏蛋白胨培养基 接种等

牛肉膏蛋白胨培养基 接种等

实验一培养基的制备一、目的与要求(一)学习制备培养基的基本技术。

(二)制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。

二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基,这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质,可供作繁殖之用,制作固体培养基时须加2%琼脂,培养细菌时,应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。

牛肉膏蛋白培养基的配方:牛肉膏0.5%,蛋白胨1%,NaCl0.5%,pH7.4~7.6。

三、材料与仪器(一)试剂牛肉膏,蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。

(二)其他试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,漏斗,乳胶管,弹簧夹,纱布,棉花,牛皮纸,线绳,pH试纸,电炉,台称。

四、操作步骤(一)称量根据用量按比例依次称取成分,牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯,蛋白胨易吸湿,称量时要迅速。

(二)溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,加热,ZHU一加入各成分,使其溶解,琼脂在溶液煮沸后加入,融化过程需不断搅拌。

加热时应注意火力,勿使培养基烧焦或溢出。

溶好后,补足所需水分。

(三)调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。

(四)过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利于某些实验结果的观察,如无特殊要求时可省去此步骤。

(五)分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内,分装装置如实验图8所示;分装时注意,勿使培养基沾染在容器口上,以免沾染棉塞引起污染。

1.液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜,分装三角瓶的量则根据需要而定,一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。

2.固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,斜面长度不超过管长的1/2。

分装三解瓶,以不超过容积的1/2为宜。

3.半固体分装装置以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

(六)加棉塞分装完毕后,在试管口或三解瓶口塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等,以阻止外界微生物进入培养基而造成污染,并保证有良好的通气性能。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

金黄色葡萄球菌(牛肉膏蛋白胨培养基)一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8 ^m左右,显微镜下排列成葡萄串状。

金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。

金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37。

C,最适生长pH7.4。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15% NaCI肉汤中生长。

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。

甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸,水解尿素, 还原硝酸盐,液化明胶。

金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感。

二•流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。

因而,食品受其污染的机会很多。

近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。

金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占4 5% ,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点:季节分布,多见于春夏季;中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。

此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。

上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83% ,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。

一般说,金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品:食品加工人员、炊事员或销售人员带菌,造成食品污染;食品在加工前本身带菌,或在加工过程中受到了污染,产生了肠毒素,引起食物中毒;熟食制品包装不严,运输过程受到污染;奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时,对肉体其他部位的污染。

肠毒素形成条件:存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越短;存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素;食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成。

三•致病性金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。

金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶: a.溶血毒素:外毒素,分a B、Y 3四种,能损伤血小板,破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死; b.杀白细胞素:可破坏人的白细胞和巨噬细胞;c.血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。

葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关; d.脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;e.肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E及F五种血清型。

肠毒素可耐受100° C煮沸30分钟而不被破坏。

它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。

此外,金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

四.检验和控制1•金黄色葡萄球菌的检验样品处理:无菌取25g或25mL食品样品,放入225mL灭菌生理盐水中均质,制成 1 0-1稀释液。

增菌培养:将10-1稀释液接入7.5%NaCI肉汤或胰蛋白胨肉汤中,37° C培养24小时。

分离培养:将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板,置37° C培养24-48小时。

金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈。

在Baird-Parker平板上菌落为圆形,直径2-3mm,颜色灰或黑色,周围有一浑浊带。

染色观察:从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜,直径0.5-1 ^m o血浆凝固酶试验:吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。

同时做阴阳性对照。

耐热核酸酶试验:将24小时肉汤培养物沸水浴处理 15min ,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA 平板,36±1°C 培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。

本试验金黄色 葡萄球菌为阳性。

2 •金黄色葡萄球菌肠毒素检测金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法,在此就不一一赘述。

3 •金黄色葡萄球菌的控制主要包括:1 )防止金黄色葡萄球菌污染食品防止带菌人群对各种食物的污染: 定期对生产加工人员进行健康检查, 患局部化脓性感冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时,并且食用前要彻底加热。

牛肉膏蛋白胨培养基配方: 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。

它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI 。

其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCI 提供 无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。

琼脂在常用浓度下96 'C 时溶化,一般实际应 用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。

琼脂在40 C 时凝固,通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其 繁殖。

染(如疥疮、手指化脓等)、上呼吸道感染(如要暂时停止其工作或调换岗位。

防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染:患化脓性乳腺炎的牛奶;奶挤出后,要迅速冷至制品要以消毒牛奶为原料,注意低温保存。

对肉制品加工厂,患局部化脓感染的禽、式处理后进行加工生产。

2)防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成应在低温和通风良好的条件下贮藏食物,鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等)的人员 如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房,不能挤用 -10 C 以下,以防毒素生成、 细菌繁殖。

奶畜尸体应除去病变部位,经高温或其他适当方以防肠毒素形成;在气温高的春夏季, 食物置pH 调至中性或微碱性,以利于细菌的生长牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl 5g琼脂15 —20g水1000mlpH 7 .4—7.6三、器材牛肉膏,蛋白胨,NaCl ,琼脂;1mol/L NaOH ,1mol/L HCl ;试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH 试纸(pH 5.5—9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。

四、操作步骤1.称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl 放入烧杯中。

牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。

也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。

蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。

另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。

2.溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。

待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。

如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。

最后补足所失的水分。

3.调pH在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH ,边加边搅拌,并随时用pH 试纸测其pH 值,直至pH 达7.6。

反之,则用1mol/L HCl 进行调节。

注意pH 值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH 值较精确的微生物,其pH 的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有关说明书)4.过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。

一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去(本实验无需过滤)。

5.分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。

分装装置见图V -1。

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。

(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4 左右为宜。

(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图V -2。

分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3 为宜,灭菌后垂直待凝。

6.加塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。

7.包扎加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

8.灭菌将上述培养基以1. 05kg/cm2 (15磅/英寸2),121 . 3°C,20分钟高压蒸汽灭菌。

如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。

9.搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50 C左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

10 .无菌检查将灭菌的培养基放入37 C的温室中培养24 —48小时,以检查灭菌是否彻底枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌常用培养基配方:1L 蒸馏水+20g 葡萄糖+15g 蛋白胨+5g 氯化钠+0.5g 牛肉膏+20g 琼脂PH 为7 即可,温度30 度到37 度皆可——条件不是很苛刻,比较容易培养。

或者选用Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2[Note] :When cultivation of Bacillus ,5mg of to MnSO4.H2O may be added .It is favorable to promote spore formation . 适用范围:产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌大肠埃希杆菌俗称大肠杆菌牛肉膏琼脂培养基:牛肉膏0.3 克,蛋白胨1.0 克,氯化钠0.5 克,琼脂1.5 克,水100 毫升在烧杯内加水100 毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。

相关文档
最新文档