02 高中生物选修一 制备牛肉膏蛋白胨培养基、接种微生物 Jesse
人教版高中生物选修一提分教程 专题2 微生物的培养与应用 课题1 第2课时 含答案
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。
(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
牛肉膏蛋白胨实验实训报告
一、实验目的1. 了解牛肉膏蛋白胨培养基的成分和制备方法。
2. 掌握牛肉膏蛋白胨培养基的灭菌和接种技术。
3. 学会观察和记录实验结果。
二、实验原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌基础培养基，主要由牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂等成分组成。
牛肉膏提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨提供氮源和维生素，氯化钠提供无机盐，琼脂作为凝固剂。
在无菌条件下，将牛肉膏蛋白胨培养基倒入平板，接种细菌，培养一段时间后，观察细菌的生长情况。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、细菌菌种、无菌平板、无菌移液器、酒精灯、火焰灯、高压蒸汽灭菌锅、三角瓶、烧杯、玻璃棒、电子天平、量筒、试管等。
2. 仪器：生物显微镜、细菌培养箱、电子天平、酒精灯、火焰灯、高压蒸汽灭菌锅、三角瓶、烧杯、玻璃棒、无菌平板、无菌移液器等。
四、实验步骤1. 培养基的制备（1）称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，按照比例溶解于蒸馏水中。
（2）加入琼脂，搅拌均匀。
（3）将混合液煮沸，不断搅拌，防止琼脂凝固。
（4）待溶液冷却至50-60℃，倒入无菌平板中。
（5）待培养基凝固后，进行高压蒸汽灭菌。
2. 灭菌（1）将无菌平板放入高压蒸汽灭菌锅内。
（2）调节压力至100KPa，温度121℃，灭菌20分钟。
（3）关闭电源，待压力降至0KPa后，取出无菌平板。
3. 接种（1）将细菌菌种接种到无菌平板上。
（2）用无菌移液器吸取适量菌液，滴加到平板中央。
（3）用无菌玻璃棒轻轻涂布，使菌液均匀分布在平板上。
4. 培养（1）将接种后的平板放入细菌培养箱中。
（2）设置培养温度，一般细菌培养温度为37℃。
（3）培养时间为24-48小时。
5. 观察与记录（1）观察平板上细菌的生长情况，包括菌落大小、形状、颜色等。
（2）记录实验结果，包括菌落数量、生长速度等。
五、实验结果与分析1. 实验结果通过观察，发现接种的细菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，形成了菌落。
生物选修一 专题二 微生物知识点填空(含答案)
微生物模块一、微生物的实验室：1.培养基(1)概念：人们按照微生物对的不同需求,配制出供其的营养基质。
(2)营养组成：一般都含有和。
此外，还需要满足微生物生长对、氧气以及的要求。
（3）分类培养基(含凝固剂); 培养基(不含凝固剂)（凝固剂是 : 中提取到物质，在下凝固，下熔化）2.无菌技术获得纯净培养物的关键：3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤：计算→称量→→→→问题：①.培养基灭菌后，需要冷却到左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？②.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？③.为什么将平板倒置？(2)纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到的肉眼可见的，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤：，接种时要在旁，原因是。
③常用的微生物接种方法有两种a. 法：是通过在琼脂固体培养基表面的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
b. 法：是将菌液进行一系列的，然后将的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
问题：①在这两种接种方法中，计数时只能选哪种接种方法？②两种接种方法的目的是：问题①.划线时为什么要从上一次划线的末端开始？②.划线时不能划破培养基，如果划破了会怎样？③.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？④.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？(3)菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以采用的方法，接种在试管的培养基上，将试管放入保藏②对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。
4.实验室中筛选微生物的原理是。
二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.实验原理：(1)能合成的细菌才能分解尿素(2)配制以为唯一的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌，还要涂布一个牛肉膏蛋白胨培养基，以此说明。
⑶可以用加了的培养基进行鉴别，培养基变2.实验流程：土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→→涂布平板与培养→菌落计数3.统计菌落数目的方法方法一：（活菌计数法）；至少要涂布个平板，最后求取值，还要设置一个平板作为对照，以说明一般选择菌落数在的平板进行计数。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
，必须原创
牛肉膏蛋白胨（Bacto-Proteose-Peptone，由蛋白质和多种水解物组成）培养基是分
离和纯化微生物的优质培养基，它可为微生物提供养分、气味和增强细胞代谢的稳定性，
有利于微生物的成长和繁殖，因此被广泛应用于细菌的鉴别、分离、纯化研究。
本实验介
绍牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
1、配制牛肉膏：将牛肉的去油干片以40倍的水为底料，煮沸约30min，冷却至室温
后用离心设备至0.75—1％的浊度；
2、添加蛋白质：分别将卵白袋、硝酸蛋白、胱蛋白分别以大约6:2:2的比例添加到
牛肉膏液中，再将二次离心液收集并稀释成1:200；
3、添加添加剂：用 0.1N 的 NaOH 调盐，加入 0.2 ％的 Na2CO3、1.0 ％的 K2HPO4 和 0.007 ％的 MnCl2，使液体 pH 值为7.2 ± 0.2。
二、微生物的分离与纯化：
1、微生物的分离：将牛肉膏蛋白胨作为培养介质，以碗杯离心法将培养基放在26-28℃的恒温器中培养24-48h；
2、筛选：用滤筛得到培养液粒子，将其留在高性能液相色谱仪（HPLC）上；
3、纯化：用不同浓度的氯化钾，盐酸混合溶液或二乙醇胺溶液去除悬浮粒子，再用
离子交换树脂法去除其他污染物，萃取物可用电泳分离成单体；
4、鉴定：根据抗原或抗体鉴定微生物，将其分类编号。
三、结论：
经过牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验，成功地实现了牛肉膏蛋
白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
通过该实验，我们可以进一步学习、提高分离
微生物的能力，为临床抗感染药物的研究提供有力的支持。
实验法二 牛肉膏蛋白胨培养基的制备
实验法二牛肉膏蛋白胨培养基的制备
实验目的：
本实验的目的是制备牛肉膏蛋白胨培养基，以备后续在培养菌种时使用。
实验原理：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含氮源和碳源的培养基，可以用来培养多种微生物，包括细菌、真菌和酵母菌等。
其主要成分为牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂。
牛肉膏是从牛肉中提取的肉汁，是一种富含植物蛋白、维生素和微量元素的营养液，蛋白胨是酶解的蛋白质，是一种常用的氮源。
氧化还原指示剂可以用来检测微生物的代谢活动，当微生物代谢产生酸性代谢产物时，其颜色将变为黄色。
实验步骤：
1.准备牛肉膏蛋白胨培养基的成分：牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂；
2. 将牛肉膏和蛋白胨分别加入到约800ml的去离子水中，加热至融化，然后煮沸5分钟，搅拌至完全溶解；
3. 将氧化还原指示剂加入到煮沸后的液体中，并用酒精灯进行灭菌处理，使溶液冷却至室温；
4. 将培养基装入无菌烧杯中，经过高温高压灭菌处理，即可得到无菌牛肉膏蛋白胨培养基。
注意事项：
1.在加热牛肉膏和蛋白胨的过程中，需不断搅拌，以防止附着在底部的物质烧焦。
2. 培养基的所有成分和制备过程均需无菌操作，以保证培养基的纯度和无菌性。
3. 每次使用前应检查培养基是否有明显异味或异色，如有异常情况则应弃用。
4. 操作过程中要注意安全，避免受到高温、高压、灭菌等因素的伤害。
实验结果：
制备牛肉膏蛋白胨培养基后，应详细记录制备过程中的操作步骤、配方和注意事项，以备后续使用时参考。
制备好的培养基应无明显异味或异色，并保持无菌状态，以保证培养菌种的纯度和生长。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌讲义
实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、目的要求1．明确培养基的配制原理。
2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
4．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15—20g 水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的制备一、目的要求（1）明确培养基的配制原理。
（2）通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用广泛和最普通的细菌基础培养基，又称普通培养基。
它含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供微生物生长繁殖之用。
基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCI提提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量的琼脂作为凝固剂。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0gNaCI 5.og蛋白胨10.0g水1000mlpH 7.4～7.6三、操作器材（1）溶液与试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCI。
（2）仪器及其他用具试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒培养基分装器，，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCI放入烧杯中。
2、融化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀。
然后加热使其溶解。
各试剂完全溶解后，补充水到所需的总体积。
配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。
3、调pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。
反之，用1mol/LHCI进行调节。
4、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。
5、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
6、灭菌将上述培养基以1210C,20min,0.103MPa高压蒸汽灭菌。
高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养第2课时实验操作及实验结果教案高二生物教案
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
02火焰。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻03皿盖。
盖上□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1] 下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( )A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
答案 A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
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（1）计算
根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100 mL的培养基 时，各种成分的用量。
（2）称量
准确地称取各种成分。
（3）溶化
将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，
加热。
当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。
往烧杯中加入称量好的蛋白胨和一包，包好后
放入干热灭菌箱内，在160 ~ 170 ℃下灭菌2 h。
（5）倒平板（或搁置斜面） 倒平板操作 待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来 倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶 的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
搁置斜面操作（P课本10）
待试管冷却至50 ℃左右
斜面长度不超过试管总长的1/2
（四）接种微生物（P9） 接种：在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
接种工具：玻璃涂布器、接种针、接种环。
接种方法
穿刺接种 （固体、半固体培养基） 斜面接种（可用于菌种转移、扩大培养、短期保存）
平板划线接种 （纯化） 涂布平板接种 （纯化、计数）
溶解。
加入琼脂，加热使其熔化。在此过程中，不断用玻棒搅拌，
防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
当琼脂完全熔化后，补加蒸馏水至100 mL。
（4）灭菌 将配制好的培养基转移至锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，
并用皮筋勒紧，在放入高压灭菌锅，在压力为100 kPa、温度为
121 ℃条件下，灭菌15 ~ 30分钟。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：既可以使培养基表面的水更好地挥发，又可以防止 皿盖上水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖 与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？ 为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上 滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。