微生物接种方法涂布法接种及注意事项.pptx
微生物接种方法详解
微生物接种方法详解一、平板划线分离法平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
为方便划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。
划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种分区划线法是将平板分四区，故又称四分区划线法。
划线时每次将平板转动60~70°划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线；另一种连续划线法是从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。
1）连续划线法将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水，接种环于酒精灯外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。
轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。
或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
于靠近酒精灯处打开平皿盖约30°，右手将环伸进平皿，将菌种点种在平板边缘一处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘，抽出接种环，盖上平皿盖，然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧，打开平皿盖约30°伸入接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖。
灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。
微生物接种方法
微生物接种1、平板倾注法1）、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。
2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。
3）、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1.0ml 吸管。
4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照。
6）、待稀释液入平皿后，翻转平板，置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。
2、平板表面涂布法将营养琼脂制成平板，经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后，于其上滴加检样稀释液0．2ml，用L捧涂布于整个平板的表面，放置片刻(约lO分钟)，将平板翻转，移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时)，取出，按前述方式进行菌落计数，然后乘以5(由O．2m1换算为1m1)，再乘以样品稀释的倍数，即得每g或m1 检样所含菌落数。
此法较上述倾注法为优，因菌落生长在表面，便于识别和检查其形态，虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆，同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长，从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。
几种常见的微生物接种方法介绍及其优缺点比较
细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等，其方法和应用各有不同，下面就这几种方法进行下解释以帮助实验人员选择操作。
由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。
缺点：不能用于菌落计数。
先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml 菌液接种在已凝固的琼脂平板上。
再用无菌L 型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。
至长出菌落后即可计数。
优点：可以计数，较方便。
缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征，不适用于严格好氧菌和热敏感菌。
用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来移种的菌落。
伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。
接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。
用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。
可以在无任何全部或中间稀释的情况下快速细菌接种。
对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。
培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。
菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。
优点：螺旋接种法菌液无需稀释（其他接种方法均需经过梯度稀释才能计菌落数），自动化接种，效率高，可节省3/4 的耗材和时间。
微生物接种技术-PPT
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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（1）斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细 胞，轻轻点在平板的表面即可。
（2）平板接斜面：一般是将经 平板分散培养得到的单菌落接 种到斜面，以便作鉴定或扩大 培养、保存之用。
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（3）平板涂布法
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1.斜面接种：
从已长好微生物移接到另一斜面管的 方法。此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上， 并尽量放平。用右手先将塞拧转松动， 再拿接种环，用右手的小指、无名指和 手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰 上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管 内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部， 沿斜面划曲线或直线。
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试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞 4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环 6
2.液体接种：
将菌接种到液体培养基（试管、三角瓶等）中的 方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种 环送入液体培养基中时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分 散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀， 即可培养。 如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或接种环接 种。
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，另取一支吸管吸取相应的菌液0.2mL放
至平板上。 •用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂 抹均匀。倒置于37℃条件下培养1～2d， 观察菌落形态及计数菌落。
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凝 固 后
37℃ 培养
涂布法流程图
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思考题 （1）用接种环接种时有哪些注意事项 （2）涂布棒消毒方法有哪些？各应注意什 么？
微生物的无菌操作及接种技术ppt课件
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※ 斜面接种
（6）接种:
在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从 斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培 养基。
有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作 斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
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※ 斜面接种
(7) 塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞 旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁 空气。
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
分区划线法
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2、常用的接种方法
※划线接种
连续划线法
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2、常用的接种方法
※穿刺接种
用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的 深层培养基中的接种方法。 • 用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。 • 只适宜于细菌和酵母的接种培养
工作台等
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进入无菌室前的准备
（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min； （3）检查无菌器材是否完备； （4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒
精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、
鞋。
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无菌操作要求
动态。
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无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
微生物接种方法-涂布法接种及注意事项优质课件
意 涂食布品平 营板养法与培检养测后专培业养教基学上资会源出库现一些层薄部膜位状，的其原菌因落有以不下几能方分面：开。 事 食品营养与检测专业教学资源库
项
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涂布接种法操作
食品营养与检测专业教学资源库
1.倒平板 2.稀释菌液 3.将菌液加入平板中 4.涂布均匀
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项
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谢谢
事
项
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涂
• 二、涂布法优缺点
布
法 接
优点：
种
可以计数，可以观察菌落特征，操作相对简单，是较常使用的常规方法；
及 缺点： 合上培养皿，放到操作台上转几圈，以便铺平培养基，冷却至凝固。 注 将食一品定 营浓养度与，检一测定专量业的教待学分资离源菌库悬液吸加到收已量凝固较的培少养，基平平板上板，干再用燥涂布效棒果快速不地将好其，均匀容涂布易，蔓使长延出单，菌有落或时菌苔会而因达到涂分离布或不计数均的目匀的使。 某
涂布法接种及注意事项
主讲：王娟
食品营养与检测专业教学资源库
涂
• 一、涂布法接种定义布源自法 接定义：种
将一定浓度，一定量的待分离菌悬液加到已凝固的培养基平板上，再用
及
涂布棒快速地将其均匀涂布，使长出单菌落或菌苔而达到分离或计数的
注 再用此吸 管从10-1管中吸取1mL稀释液注入10-2管中，依次制成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6稀释液。 意 目的。 将涂抹好的平板放于操作台上20~30min，待菌液渗入培养基内后倒扣平板保温培养。
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• 三、涂布接种法操作
布
法 接
1.倒平板
接种环和涂布器的灭菌方法
接种环和涂布器的灭菌方法接种环和涂布器是微生物学实验中常用的工具，它们需要经过严格的灭菌处理才能保证实验结果的准确性和可靠性。
本文将从灭菌方法的选择、操作流程和注意事项等方面详细介绍接种环和涂布器的灭菌方法。
一、灭菌方法的选择目前常用的灭菌方法有高温干热灭菌法、低温干热灭菌法、湿热灭菌法、化学消毒法和紫外线辐射法等。
对于接种环和涂布器，我们通常采用高温干热灭菌法或湿热灭菌法进行处理。
具体选择哪种方法，需要根据实验要求以及设备条件来决定。
高温干热灭菌法：将接种环和涂布器放入高温干烤箱中，在160℃下加热2小时以上，可以达到完全杀死细胞的效果。
这种方法适用于耐高温耐蒸汽压力的设备。
湿热灭菌法：将接种环和涂布器放入自动化培养箱或压力蒸汽锅中，在121℃下加热20-30分钟，可以达到完全杀死细胞的效果。
这种方法适用于大多数设备。
二、操作流程1. 准备工作将需要灭菌的接种环和涂布器清洗干净，放入无菌器皿中备用。
同时准备好所需的灭菌设备和消毒剂等。
2. 灭菌操作（1）高温干热灭菌法：将接种环和涂布器放入高温干烤箱中，在160℃下加热2小时以上，待完全冷却后取出即可。
（2）湿热灭菌法：将接种环和涂布器放入自动化培养箱或压力蒸汽锅中，在121℃下加热20-30分钟，待完全冷却后取出即可。
3. 消毒处理将已经灭菌的接种环和涂布器放入无菌器皿中，并在上面喷洒适量的消毒剂，如70%乙醇等，进行消毒处理。
待消毒剂挥发干净后即可使用。
三、注意事项1. 灭菌前一定要确保接种环和涂布器表面没有残留物或污垢，否则会影响灭菌效果。
2. 灭菌操作过程中要注意设备的温度和时间，以确保完全杀死细胞。
3. 灭菌后要进行消毒处理，以避免再次受到污染。
4. 使用过程中要注意无菌操作，避免再次污染接种环和涂布器。
总之，接种环和涂布器的灭菌处理是微生物学实验中不可或缺的一步，只有做好灭菌工作才能保证实验结果的准确性和可靠性。
希望本文能够对大家有所帮助。
涂布接种法的操作过程
涂布接种法的操作过程1.引言1.1 概述概述部分可以简要介绍涂布接种法的背景和基本概念。
可以按照以下方式进行编写：概述涂布接种法是一种常用的疫苗接种方法，通过将疫苗涂布在皮肤表面，以达到预防疾病的目的。
与传统注射接种方法相比，涂布接种法具有操作简单、无痛苦、不易感染等优势。
近年来，涂布接种法逐渐受到世界各地研究者和医学界的关注，并被广泛应用于儿童疫苗接种和传染病防控领域。
本文将详细介绍涂布接种法的定义、原理以及操作步骤，以帮助读者更加全面地了解这一接种方法。
另外，还将探讨涂布接种法的优势和应用前景，以期为疫苗接种领域的研究和实践提供有益的参考。
通过本文的阅读，读者将对涂布接种法有一个全面的了解，为接种决策提供科学依据。
文章结构部分的内容可以包括以下几个方面：1.2 文章结构本篇文章主要分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，我们将概述涂布接种法的概念和原理，介绍文章的结构以及文章的目的。
引言部分将为读者提供对涂布接种法有一个整体的认识，使其能够更好地理解后续内容。
在正文部分，我们将详细介绍涂布接种法的定义和原理，以及该方法的具体操作步骤。
在涂布接种法的定义和原理部分，我们将解释涂布接种法是什么，它是如何起作用的。
接着，我们将详细描述涂布接种法的操作步骤，包括准备工作、材料准备和实施过程等。
通过这一部分的讲解，读者将能够了解和掌握涂布接种法的操作过程。
最后，在结论部分，我们将总结涂布接种法的优势并展望其应用前景。
我们将分析涂布接种法相对于其他接种方法的优点和不足，并讨论其在未来的应用前景。
结论部分将为读者提供对涂布接种法的价值和意义的深入思考。
通过以上的结构安排，我们将全面介绍涂布接种法的操作过程，使读者能够全面了解该方法的定义、原理、操作步骤以及其在未来的应用前景。
1.3 目的本文的目的是介绍涂布接种法的操作过程。
通过对该接种法的定义、原理以及详细的操作步骤进行解析，旨在帮助读者了解并掌握这一重要的医疗技术。