微生物接种方法-教学设计.
实验六产淀粉酶细菌的分离二微生物的分离培养和接种方法教案
三、实 验 器 材
1、材 料：土壤、粮食或者食品。 2、培养基：PDA培养基、营养琼脂培养基。 3、器 皿：三角瓶、移液管、试管、培养皿、 玻璃刮铲、酒精灯、接种环等。 4、仪器：电炉、恒温培养箱。
四、实验方法和步骤
1、微生物的纯种分离平板稀释分离法
10-3 1ml
10-4
试管中原始装 9ml无菌水
四、实验方法和步骤
1、微生物的纯种分离
（1）稀释涂布分离法：制平板—制菌悬液— 涂布—培养—获得纯种微生物。
（2）平板划线法：制平板—制菌悬液—划 线—培养—获得纯种微生物。
微生物纯种分离
（一）涂布分离法
微生物纯种分离
（二）划线分离法
微生物纯种分离
（三）定量稀释分离法
四、实验方法和步骤
2、微生物的接种
（1） 斜面接种 五步曲：a. 接种环灭菌 b. 拔棉塞及试管口
灭菌 c. 接种 d. 塞棉塞 e. 接种环灭菌 （2） 培养皿接种（霉菌形态观察及鉴定用） 倒平板 — 接种（单/三点接）— 接种环灭菌。
五、 作 业 题
1、为什么用稀释法和平板划线法能获得微生 物纯种？ 2、霉菌平板接种为什么要使平板倒置？
一、实验目的及要求
1、掌握稀释分离和平板划线获得微生 物纯种的方法。 2、学会微生物接种技术。
二、实 验 原理
从混杂微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的 过程称为微生物的分离纯化。平板分离法普遍适用于微生物 的分离与纯化，其基本原理是选择适合于待分离微生物的生 长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某 种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长 的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物接种方法
微生物接种1、平板倾注法1）、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。
2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。
3）、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1.0ml 吸管。
4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照。
6）、待稀释液入平皿后，翻转平板，置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。
2、平板表面涂布法将营养琼脂制成平板，经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后，于其上滴加检样稀释液0．2ml，用L捧涂布于整个平板的表面，放置片刻(约lO分钟)，将平板翻转，移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时)，取出，按前述方式进行菌落计数，然后乘以5(由O．2m1换算为1m1)，再乘以样品稀释的倍数，即得每g或m1 检样所含菌落数。
此法较上述倾注法为优，因菌落生长在表面，便于识别和检查其形态，虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆，同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长，从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。
实验二微生物的分离、纯化和接种
实验二微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化1、目的要求1.1了解微生物分离和纯化的原理1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法2、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。
而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。
3、实验材料3.1培养基肉汤培养基（固体）。
3.2溶液或试剂盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。
3.3仪器或其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。
4流程倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。
5、步骤5.1平板划线分离法5.1.1倒平板倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。
并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。
5.1.2划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法微生物的接种是微生物学实验中的一个重要步骤，它是将微生物从一个培养基转移到另一个培养基的过程。
接种方法的选择对于微生物的培养和研究具有重要意义。
下面将介绍一些微生物常用的接种方法。
一、平板接种法。
平板接种法是将微生物接种在培养基的表面上，通过接种棒或铅笔头的方式在培养基表面画线或涂抹，形成菌落。
这种接种方法适用于培养革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，通常用于分离和计数微生物。
在进行平板接种时，需要注意接种的均匀性和细菌数量的控制，以避免产生过多或过少的菌落。
二、液体接种法。
液体接种法是将微生物接种在含有营养物质的液体培养基中，通过摇床或振荡器进行培养。
这种接种方法适用于培养需要大量微生物的情况，如大规模生产微生物菌种或进行微生物代谢产物的生产。
在进行液体接种时，需要注意培养液的搅拌速度和通气情况，以保证微生物的充分生长和代谢。
三、斜面接种法。
斜面接种法是将微生物接种在倾斜的培养基表面上，通过接种棒或铅笔头的方式在斜面上画线或涂抹，形成菌落。
这种接种方法适用于培养对氧需求较高的微生物，如厌氧菌和微需氧菌。
在进行斜面接种时，需要注意斜面的倾斜角度和接种的均匀性，以保证微生物的充分生长和代谢。
四、深层接种法。
深层接种法是将微生物接种在含有固体琼脂的试管或培养瓶中，通过接种棒或铅笔头的方式在琼脂表面插入或涂抹，形成菌落。
这种接种方法适用于培养对氧需求较低的微生物，如厌氧菌和微需氧菌。
在进行深层接种时，需要注意琼脂的固化温度和接种的深度，以保证微生物的充分生长和代谢。
五、滴播接种法。
滴播接种法是将微生物接种在含有营养物质的琼脂平板上，通过滴管或移液器滴播微生物悬液，形成菌落。
这种接种方法适用于培养对氧需求较高的微生物，如厌氧菌和微需氧菌。
在进行滴播接种时，需要注意滴播的均匀性和微生物悬液的浓度，以保证微生物的充分生长和代谢。
总结，微生物的接种方法多种多样，选择合适的接种方法对于微生物的培养和研究具有重要意义。
微生物接种方法
微生物接种方法微生物接种是生物实验中的一项基本技术，也是各种微生物检测和研究中不可缺少的步骤。
本文将介绍一些常见的微生物接种方法，包括平板划线法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法等。
平板划线法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种纯化，得到单一的菌落。
该方法通过在固体培养基上划线，使菌种在培养基上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将固体培养基灭菌后倒入培养皿中，待凝固后加入适量菌液。
(2)用接种环取适量菌液，在培养皿表面划线。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到斜面培养基上，以便于观察和保存。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的斜面培养基中，使菌种在斜面上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将斜面培养基灭菌后放置在实验台上，用无菌操作法加入适量菌液。
(2)将接种环放入菌液中沾取少量菌种，然后在斜面培养基上划线接种。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
液体培养基接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到液体培养基中，以便于微生物的生长和繁殖。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的液体培养基中，使菌种在液体培养基中繁殖并形成微生物。
具体步骤如下：(1)将液体培养基灭菌后倒入试管中，加入适量菌液。
(2)用摇床或其他设备将试管中的培养基混合均匀。
(3)将试管放入适宜的温度下培养，观察微生物的生长情况。
微生物接种技术是生物工程中一项重要的技术，广泛应用于生物制品制造、环境生物治理、医学诊断等领域。
本文将介绍微生物接种技术的基本原理、应用场景以及发展前景。
微生物接种技术是指将目的微生物通过一定的方式引入到培养基或发酵系统中，使其在特定的环境下生长繁殖，以达到特定的生物制品或环境治理的目的。
该技术的主要环节包括菌种选择、接种量确定、接种方法选择和培养条件控制等。
实验3-微生物接种技术
实验三微生物接种技术一、实验目的1、掌握无菌操作在微生物接种过程中的重要性。
2、掌握几种常用的微生物接种方法。
3、掌握微生物微生物扩大繁殖的基本方法。
4、认识微生物接种工具二、实验原理微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。
由于实验目的、培养基种类及容器等不同，所用接种方法不同，如斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等，以获得生长良好的纯种微生物。
为此，接种必须在一个无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作；同时，因接种方法的不同，常采用不同的接种工具，如接种针、接种环、移液管和玻璃刮铲等。
三、实验器材主要仪器及设备无菌室、超净工作台、培养箱、振荡器、接种针、接种环、接种钩、接种铲，试管固体斜面培养基、培养基平板、三角瓶液体培养基，PDA平板及斜面，牛肉膏-蛋白胨-琼脂平板、斜面培养基、牛肉膏-蛋白胨液体培养基、试管半固体培养基。
菌种大肠杆菌（Escherichia coli)、青霉(Penicillium sp．)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)放线菌等。
四、操作步骤(一)斜面接种技术具体操作如下：1、贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。
贴在距试管口径2-3厘米的位置。
2、点燃酒精灯。
3、接种用接种环将菌种移接到贴好标签的试管斜面上。
无菌操作程序简述如下：⑴手持试管将菌种和用于接种的斜面两支试管用大拇指和其他四指握在左手中、使中指位于两试管之间。
斜面向上，并使它们位于水平位置(图a)。
⑵旋松棉塞先用右手将棉塞旋松，以便接种时易于拔出。
⑶取接种环右手拿接种环在火焰将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。
⑷拔棉塞用右手的无名指、小指和手掌边先后拔出试管的棉塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)，如图b、c所示。
⑸环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。
实验微生物接种技术讲解
实验微生物接种技术讲解实验微生物接种技术讲解微生物接种篇一：实验微生物接种技术一、目的：学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。
二、原理：所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。
本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。
根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。
三、实验材料：斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。
四、操作步骤（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。
用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。
可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。
操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。
（二）接种方法（1）斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。
此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。
用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。
图1.斜面接种示意图（2）液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。
如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
（3）穿刺接种：用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。
微生物实验中的接种分离和培养操作步骤
微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。
2、掌握无菌操作基本环节。
二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。
在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。
微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、实验材料1、恒温培养箱。
2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。
3、培养基（上次实验配制的）。
4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。
四、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。
（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。
（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。
（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。
（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。
（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。
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教学设计
项目
食品微生物检验技术基础 学时
20 学时
任务
微生物接种方法
学时
8 学时
知识点（技能 接种定义、接种工具及方
点）
法；无菌操作
学时
8 学时
微生物接种定义、接种工具，无菌操作技术，划线法接种，点植法接种，涂布 教学内容 法接种，倾注法接种
技能目标
会正确进行划线法、点植法、涂布法和倾注法等 常规接种技术，并注意无菌操作
实训中心
思考、讨论、总结
微生物接种方法及无菌
归纳
引导
多媒体课件
思考、总结
操作技术
微生物几种常用接种方
总结
法的异同及无菌操作技 讲授 多媒体课件、图片 听讲、思考
术要点
作业
无菌操作技术要点及划线法、点植法、涂布法和倾注法接种的注意事项
考核与评价 课堂表现、接种操作及培养结果、作业
教学设计
教学设计
⑦食品微生物学实验原理与技术 李平兰、贺稚非 中国农业出版社 ⑧食品微生物学及实验技术 陈红霞、李翠华 化学工业出版社
教学内容设计
步骤
教学内容
教学方法
教学手段
学生活动
告知 （教学 介绍微生物接种定义、 讲授
内容、目的） 接种工具及接种方法
多媒体课件、图片
听讲、思考
引入（任务） 微生物无菌操作技术
案例引入、 多媒体课件、视频
讨论交流
听讲、思考、讨论
划线法接种，点植法接 引 导 、 启
图片、视频、实训中 动手操作、思考、讨
实施
种，涂布法接种，倾注 发、现场演
心
论、总结
法接种
示、讨论
深化（加深对 对接种后的培养基进行 基 本 能 力 的 培养，结合培养结果现 认识与体会） 场点评
引导、现场 指导、总 结、讨论交 流
掌握微生物接种定义、接种常用工具及接种方法
掌握无菌操作概念及技术
教学目标知识目标源自掌握划线法、点植法、涂布法和倾注法等常规接 种技术
了解液体接种和穿刺接种等技术
积极进取，勤于思考，形成严谨、公正、客观的
态度素质目标
工作态度
具有团队精神，善于与人交流自己的想法
教学重点
教学条件要 求
接种方法及注意事项 无菌操作概念及技术
无菌操作技术 教学难点
教材、多媒体课件、视频、国家标准、网络资源、实训中心、检验用品与试剂、
仪器
教 学 方 法 与 案例讨论法、项目教学法、小组讨论法、现场教学法、四步教学法等教学方法
手段
借助图片、视频等多媒体手段
参考资料
①食品微生物学(食品科学与工程类专业用) 江汉湖 中国农业出版社 ②食品微生物学 董明盛、贾英民 中国轻工业出版社 ③现代食品微生物学实验技术 刘慧 中国轻工业出版社 ④食品微生物学检验 李松涛 中国计量出版社 ⑤食品微生物学 吕嘉枥 化学工业出版社 ⑥食品检验技术(微生物部分适合食品检验与质量控制技术专业) 刘 用成 中国轻工业出版社