酵母菌生理生化试验
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。
（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。
2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
发酵食品中菌种的选择和筛选方法研究
发酵食品中菌种的选择和筛选方法研究发酵食品是指利用可食用的微生物（如细菌、酵母菌、真菌等）的代谢过程，对食品中的成分进行转化和改造的食品。
而菌种的选择和筛选方法则是研究发酵食品中的关键环节之一。
本文将介绍一些常见的菌种选择和筛选方法，以及它们在发酵食品生产中的应用。
首先，菌种的选择方法是在众多潜在的菌种中，选择合适的菌种进行发酵。
常见的菌种选择方法包括：1. 文献调研法：通过查阅相关的文献资料，了解各种菌种在特定食品发酵过程中的应用情况和效果，以此为依据进行选择。
2. 试验筛选法：通过实验的方式，将不同的菌种与发酵基质结合，观察其生长情况、代谢产物以及对食品品质的影响，选出最佳菌种进行后续发酵。
3. 现有菌种的再利用法：在发酵食品生产中，已经存在一些被广泛应用的菌种，如酵母菌、乳酸菌等，可以直接利用这些已有的菌种，无需选择新的菌种。
接下来，菌种的筛选方法是从大量的发酵菌中，找出具有优良特性的菌株。
常见的菌种筛选方法包括：1. 菌株的生理生化特性筛选：通过测定菌株的生长速率、代谢产物、耐受性等生理生化特性，来筛选具有优良特性的菌株。
2. 抗菌活性筛选：利用菌株的抗菌活性来对菌株进行筛选。
例如，使用抗生素对菌株进行抗性测试，或者利用菌株的抗菌代谢物对其他菌种进行抑制。
3. 基因工程筛选：通过基因工程技术对菌株进行改造，使其具有更好的发酵特性。
例如，通过引入外源基因来提高菌株的产物产量或改善发酵过程中的抗性。
在实际的发酵食品生产中，菌种选择和筛选方法的应用十分广泛。
以乳酸菌在乳制品发酵中的应用为例，菌种选择主要考虑到菌株在发酵过程中的代谢特性和产物品质。
例如，乳酸菌的菌株要具有低酸和低丁酸生成量的特性，以使乳制品口感更佳。
而菌株的筛选则可以通过酸奶的发酵试验，观察不同菌株的发酵速率、产酸量以及乳酸呈异构体的比例等指标，选择出最佳的菌株进行扩大生产。
总结来说，菌种的选择和筛选方法对于发酵食品生产至关重要。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母菌的培养与分离
微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室2007.3目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生;其生活最适pH为4.5－6;常见于含糖分较高的环境中;例如果园土、菜地土及果皮等植物表面..酵母菌生长迅速;易于分离培养;在液体培养基中;酵母菌比霉菌生长得快..利用酵母菌喜欢酸性环境的特点;常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长;然后在固体培养基上用划线法分离之.. 三、实验主要内容和要求一本次实验的方案由同学们自己制定;实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基; 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制..2.菌株的筛选;根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株..3.酵母菌的分离;要求接种一次; 28-30℃;培养24小时;转接一次;28-30℃;培养24小时;并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌..4.用划线分离法对酵母菌进行纯化;要求每组挑取单个菌落;连续划线分离4代;镜下为单一纯菌株;每组扩繁10支斜面菌种;备用..四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等..2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、蒸馏水1000ml..配制方法：1先将马铃薯去皮;切片;称200克并加蒸馏水1000ml;煮沸半小时;用纱布过滤;补足蒸馏水量至1000ml ;制成20%的马铃薯汁..2在20%的马铃薯汁中加入琼脂;煮沸溶化;补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种..3加入葡萄糖;制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基..3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上;但不加琼脂而加乳酸;按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入;并分装试管..五、实验设计l、接种：取一小块果皮;不需冲洗;直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中;置28-30℃;培养24小时;可见培养液变混浊..2、培养;用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml;注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中;置28一30℃再培养24小时或稍长过长则霉菌长出..3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中;混匀后加盖玻片制成水浸片;先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况..活酵母菌可使美蓝还原;从而使菌体不着色;用此方法可判断酵母菌的死活..4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板..用划线法分离酵母菌培养液;从而得到单个菌落..挑取单个菌落反复再次划线分离纯化;最终可获得纯培养..六、实验注意事项1.配制培养基时;应注意琼脂的加量;不同规格及批次的琼脂的加量应由实验确定;不能照搬书上的加量..2.对培养基加热时应注意琼脂的糊底与暴沸..3.灭菌锅操作时;首先应注意水一定要加足够;排气要彻底;其次灭菌期间不要离开人;灭菌结束后;关闭电源;拔掉插头;最后放气一定要缓慢;均匀;气放彻底才能开锅;取锅内物品;应小心;防止烫伤..4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌;接种时应注意手与接种工具的消毒..七、实验结果的观察及记录1.24小时;观察试管内培养液的情况并作记录;每组转接2支试管..2.48小时;观察试管内培养液的情况;镜检培养液内菌的数量;粗略判断是否为酵母菌并作记录;每人蘸取培养液进行划线分离;并作记录..3.72小时后;观察培养皿内菌的生长的情况;挑取单个菌落进一步划线分离;直到为纯菌落..4.每组转接10支斜面试管;备用..八、实验的延伸自然条件下酿造苹果酒;葡萄酒、猕猴桃酒..七实验报告要求1.实验完毕后;每位同学都应独立作出实验报告;实验报告应类似于小型论文格式..2.实验报告内容包括：1立题意义..2实验设计..3实验步骤详细记录..4对实验结果的分析讨论和总结..5实验延伸..6实验心得体会..附1：果酒的酿制方法—、目的要求了解果酒酿制原理;学习苹果酒酿制技术..二、基本原理果酒是一类营养丰富、含酒精度低的上乘饮料..它是用含一定糖分和水分的果实压汁;经微生物发酵而成..其生化作用;除酒精发酵的主产物外;还有甘油、醋酸、琥珀酸、杂醇油等的形成；同时;陈酿期中;各种酸类与醇类的酯化反应;赋予果酒特殊的香味；果酒中的单宁、色素、果屑微粒及蛋白质包括酵母尸体等的氧化和下沉;使酒液澄清、风味增浓..各种果酒以原料而称名..除坚果外;所有栽培果;野生果均可做酿果酒的原料..本实验以苹果酒为例;学习其酿制方法..三、实验材料1、菌种在7°Be’麦芽汁琼脂斜面培养基上的葡萄酒酵母s.cerevisae ellipsoieleus..2、器材苹果汁培养基;7°Be’麦芽汁培养基;10ml／管、100ml／三角瓶等装量;白糖;食用酒精;亚硫酸;果胶酶;发酵缸;破碎机;果汁分离器等..a.苹果汁培养基粗滤新鲜果汁蔗糖调至13°Be;酸度0.5%以下1000mlK2HPO4 0.1g MgSO4·7H2O 0.1g配好后;加热煮沸3～5分钟;静置10小时以上;过滤、分装;0.7Kg／cm2灭菌20分钟..四、实验步骤一酒母培养1、菌种活化一级种取装有10ml苹果汁或7°Be’麦芽汁培养基1支;按无菌操作法接种葡萄酒酵母菌一环;混匀后置28～30℃下培养2～5天用苹果汁活化菌种时需培养5天以上;镜检酵母繁殖良好;无杂菌即可..2、母发酵剂制备二级种在装有100ml苹果汁培养基的三角瓶中;接1～2ml经活化的葡萄酒酵母菌液;于28℃下培养2～3天;当培养液表面有气泡产生;嗅之有酒香味、取样镜检无杂菌时使用..3、生产发酵剂的制备三级种方法与母发酵剂相同;只是采取更大的容器..一般采用500～1000ml的三角瓶或卡氏罐;盛装占容积1／2～3／5的果汁培养液;灭菌冷却后;按10％接种量接人母发酵剂;在25～28℃下培养24～48小时;待发酵正常;镜检无杂菌方可使用..4、如果使用活性干酵母;添加量为20g/L发酵醪;复水用水量是干酵母重量的5～10倍..复水用水的温度应保持在40℃左右38～43℃;将酵母静置5～10min后搅拌;酵母在水中的时间不能超过30min..然后使酵母溶液缓慢冷却到与将被接种发酵醪的温差小于10℃;然后直接加入发酵醪..二果酒生产工艺流程如下：果胶酶↓苹果→分选除杂下清洗→破碎→压榨→粗果汁→果楂、苹果酸、丹宁↑活化酵母→母发酵剂→生产发酵剂↓蔗糖→发酵→皮渣分离→后发酵→原酒→→换捅除渣→贮存陈酿→配制→贮存→澄清过滤→装瓶→巴氏灭菌→封口→成品..2～3次操作要点：1、分选取成熟苹果;除去腐烂、干疤和伤果..2、清洗清水充分洗涤;除去果皮上的污物、杂质及药剂;以保证原料干净卫生..3、破碎为易于压榨;提高出汁率;需进行破碎..用破碎机破碎至果块粒度0．5cm3左右;并除去果籽..4、压榨分离破碎后立即进行压榨分离..分离出的果汁中不得夹带果肉;同时需添加适量苹果酸调整含量要求果汁总酸含量为5g／L;并加入0.1～0.15g／L的果胶酶;促进果胶分解;使果汁澄清并提高酒的风味..由于苹果汁易被自身含有的多酚氧化酶氧化;故需加SO2还原剂抑制酶活性;同时SO2也具有杀菌、防腐和澄清果汁作用..SO2来源;除工厂应用液态SO2外;实验室常加入亚硫酸钠Na2SO3和偏重亚硫酸钾K2S2O5;其用量为果汁量的0.02％即可..5、前发酵取澄清果汁放入经干热灭菌的发酵缸中;装量占缸容积的4／5;按3～5％的接种量接入酵母生产发酵剂进行发酵;保持品温在18～22℃之间;最高勿超过25℃;发酵应在7～12天内结束..一般苹果汁糖分约为11％;经发酵后;酒精含量约达6％以上;前发酵结束后;原酒酒度应大于8％V;残糖＜20g／L;总酸苹果酸＞5g／L..6、后发酵前发酵结束后;迅速将酒液与皮渣分离;酒汁转入经干热灭菌的发酵缸中;进行后发酵;使残糖继续分解..期间;控制品温在18～22℃之间;不要超过25℃;时间1个月;即得原酒..要求残糖含量小于2g／L以下;挥发酸以醋酸计小于0.6g／L;总酸以苹果酸计大于5g／L..7、换桶除渣为使已澄清的原酒与其酒脚沉淀物及时分离;以免酒脚产生异味而影响酒质;故需进行换桶缸..换桶次数新酒每年换三次..8、贮存陈酿应满桶贮存..陈酿即酒的老熟;经长期密闭贮存;可使酒质澄清、风味醇厚..贮存室温8～16℃;存期半年以上..9、配制原酒贮存半年后可开始配制..配制时;按工艺规定将不同原酒按一定配比相混;然后添加适量的糖、酒精、继续贮存半年以上..10、澄清过滤可采用冷冻法使其澄清;即于-4℃左右存放7天;然后冷过滤..澄清后的酒置-5～-7℃下冷冻3天不发生混浊沉淀;或暴露空气中氧化4天不变混浊即为合格..11、装瓶灭菌装瓶后需进行巴氏灭菌;即在63℃下处理15分钟;冷却后封口保存..五、实验报告1、简述苹果酒的酿制法..2、二氧化硫在果酒酿制中的作用是什么六、思考题1、酵母菌酿酒的原理是什么2、果酒酿制中为何要加入果胶酶实验二酵母菌的鉴定酒精生产中所用酵母菌在微生物学中的分类依据是什么微生物学的类别分门、纲、目、科、属、种;生产酒精用酵母菌属于微生物中的真菌门、子囊菌纲、原子囊菌亚纲、内孢霉目、内孢霉科、啤酒酵母属、卡尔斯伯酵母属等..酵母菌的分类依据是根据它的形态特征、生理生化反应特征来确定的..在分类前将菌体细胞进行分离纯化;得到由单细胞长成的菌落;然后再进行形态特征和生理生化鉴定..一形态特征的鉴定把酵母菌接种到麦芽汁固体培养基上;让它长成菌落;观察其菌落的形态、颜色、质地、边缘、表面等特征..把它再接种到液体麦芽汁培养基中;观察是否能产生醭、试管或培养仪器表面壁上能否形成菌环;培养液中是否产生沉淀、混浊程度等..另外;还要取样在显微镜下观察其单细胞的形态、大小、能否形成孢子、孢子的大小以及繁殖方式等.. 二生理生化特征的鉴定酵母菌的生理生化特征主要表现为发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的能力..同时;还需测定利用其它碳水化合物、同化酒精、耐酒精;利用硝酸盐还是硫酸盐;发酵产酸、产醋、耐温、耐酸、抗重金属离子、抗杂菌性等的能力..最后;根据以上得出的形态特征和生理生化特征;查阅有关资料;把具有相同特征的一类酵母菌;就可以归属于某一属..怎样鉴定酵母菌在液体培养基中的培养特征将酵母菌种接种于米曲汁或麦芽汁液体培养基中;放于恒温培养箱内以28—30℃保温培养18—24、24—48、48—72小时;取出观察各个时期液体培养基表面有无白色浮膜物-醭的存在;各个不同时期培养基中有无沉淀或沉淀的多少、有无混浊和混浊程度、试管或其它培养器壁上有无菌环形成;最后取出各个不同时期的样液;注入酵母细胞计数器--血球计中;放置显微镜下观察单个细胞的形态变化情况、液泡的大小、细胞数增加的多少以及培养基中pH值的变化情况等;并测定其酒精和二氧化碳的生产量..然后根据不同的反应情况;作好详细的原始记录;便于以后培养菌种时比较和参考..酵母菌生理生化试验一、酵母菌糖发酵试验一实验目的了解鉴别酵母菌的实验方法..二实验原理酵母菌在厌氧条件下能分解糖类;产生各种有机酸、气体和其它产物..酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异..因此;这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据..酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫pH6.8-5.2由紫变黄或溴麝香草酚蓝pH7.6-6.0由蓝变黄指标剂颜色的改变来确定..产气可由发酵管气泡的产生予以证实..三材料糖发酵基础液;1.6%溴甲酚紫或0.2%溴麝香草酚蓝溶液;葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖;啤酒酵母斜面菌种..四实验内容1、糖发酵基础液配制好后;按培养液容量的1%加入糖;分装于杜氏发酵管中培养液的高度约为4-5厘米;再在试管内加入倒置的小玻管约0.4×2.0－2.5厘米一支..每种糖设三个重复管;<121℃>高压灭菌15分钟..2、将酵母分别接入上述各发酵管中;置<30℃>下培养48-72小时;另以不接种者作对照3、如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气;则必先产酸;并在杜氏小管顶端出现气泡..4、结果记录..以“”表示产酸;“<0”>表示产气;“＋”表示产酸产气;“－”表示无变化;“碱”表示产碱..二、酵母菌碳源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种碳源的利用情况..二实验原理碳是酵母菌细胞的重要组成成分;约占酵母菌体重量的50%;为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质..酵母菌对各种碳源的利用;因种类不同而异..这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据..三材料无碳基础培养基;啤酒酵母斜面菌种;0.5%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖溶液.. 四实验内容1、液体试管法1每管加无碳基础培养基5毫升;加被测试的某种碳源;并以葡萄糖作为对照..2接入啤酒酵母;<28℃>下培养1-2周;观察结果..2、生长图谱法1无碳培养基内加入2%的水洗琼脂;融化后冷却至45<-50℃>;到至平板..2接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内;搅匀后倒入上述未凝平板内;摇匀待凝..3皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记..4用不锈钢匙;按标记加入相应的米粒大小的碳源;并以葡萄糖作对照..5<28℃>下培养24-48小时后观察结果..3、结果观察1液体试管中是否形成醭;环岛等..2生长图谱中测量菌落大小;说明对碳源的利用情况..三、酵母菌氮源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种氮源的利用情况..二实验原理酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外;故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用;酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致..三材料无氮基础培养基;啤酒酵母斜面菌;0.5%的蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵和尿素溶液..四实验内容1、液体试管法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮源作空白对照..2、生长图谱法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮化物作空白对照..3、结果观察1液体试管中溶液pH值的变化..2生长图谱中测量形成菌落的大小;说明对各种氮源的利用情况..四、酵母菌生长曲线的测定试验一实验目的掌握单细胞微生物群体生长曲线的几种测定方法..二实验原理酵母菌属于单细胞真核型微生物;把一定数量的酵母菌接种于的液体培养基中;在适宜的温度下培养时;它的生长过程具有一定的规律性..在其生长过程中;定时取样测定酵母菌细胞数量;然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标;生长时间作横坐标;绘制所得的曲. . .线叫生长曲线..此生长曲线大致可划分为四个阶段：调整期、对数生长期、稳定期和衰退期..三材料酵母菌增殖培养基;苹果酒酵母斜面菌种..四实验内容1、将培养24小时左右的酵母斜面菌种;用无菌水洗下菌苔;以3000转/分的速率离心;得菌体..将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后;制备酵母菌悬液细胞数量约106左右/毫升;测数备用..2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中;<25℃>下培养;以此为起始时间;记录起始溶液的细胞数..并在培养1;2;4;6;8;9;10;11;12;14;16;20;22;24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量..3、酵母菌细胞数量的检测方法①：活菌计数法..此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;取一定量体积在0.1-1毫升之间的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内;在<25℃>下培养24小时左右;计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量..方法②：血球计数板计数法..此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;使菌落数约为105-106个/毫升;取一滴稀释液滴于血球计数板内;在显微镜下直接计算细胞总数..4、绘制生长曲线以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标;以培养时间作为横坐标;画出酵母菌的生长曲线..并分析酵母菌群体的生长规律..五、实验结果的观察及记录见表1－2六、思考题1. 为什么碘液反映无色糖化即可结束2. 煮沸强度对麦芽汁质量有什么影响. . ...........附1麦芽汁培养基的制备：麦芽汁制备俗称糖化..所谓糖化是指将麦芽和辅料中高分子贮藏物质如蛋白质、淀粉、半纤维素等机器分解中间产物通过麦芽中各种水解酶类或外加酶制剂作用降解为低分子物质并溶于水的过程..溶解于水的各种干物质称为浸出物;糖化后未经过滤的料液称为糖化醪;过滤后的清夜称为麦芽汁;麦芽汁中浸出物含量和原料干物质之比质量分数称为无水浸出率..方法一1取50g麦芽;在EBC标准磨上粉碎；2将已经粉碎好的麦芽粉放入已称重的糖化杯中;加200mL46℃水;不断搅拌并在46℃水浴中保温30min；3使醪液以1℃/ min速率升温到70℃..此时杯内加入100mL70℃水;保持恒温..45min后用玻璃棒取麦芽汁1滴;置于白滴板上;再加碘液1滴;混合后观察碘液颜色变化..直到碘液呈纯黄色不再变色;停止保温;糖化结束..5在10~15min内急剧冷却到室温；6冲洗搅玻璃棒拌器;擦干糖化杯外壁;加水使其内容物准确称量为450g；7用玻璃棒搅拌糖化杯;并注于漏斗中进行过滤;即获得麦芽汁..方法二称取市售麦芽粉或大麦经浸泡、发芽、干燥、粉碎的麦芽粉;按每Kg麦芽粉加入60—65℃温热水3.5—4kg..于55—60℃保温糖化3-4小时;用碘液检查;然后4层纱布过滤;过滤液中加鸡蛋白加水20 mL;调匀之生出丰富的泡沫为止;然后倒在糖化液中搅拌煮沸后用4层纱布过滤;即得到澄清、透明的麦芽汁;灭菌后方可备用..附2 酵母菌鉴定常用培养基1.酵母菌生孢培养基1麦氏琼脂葡萄糖 1gKCL 1.8g酵母浸膏 2.5g醋酸钠 8.2g琼脂 12g蒸馏水 1000ml115℃灭菌20min2胡萝卜培养基将葫萝卜切成的6~7cm的长条;下后上薄;装入培养管中;加水1ml;杀菌;即成..3Gorodkowa氏培养基消化蛋白 1g葡萄糖 0.1g氯化钠 0.5g琼脂 1.2g水 100ml2.12.5％豆芽汁培养基黄豆芽125g加1L;煮沸半小时;过滤后补足水至1L..115℃灭菌30min3.0.6％酵母浸汁加60g干酵母粉于1L水中;必要时加入一些蛋清以澄清滤液;121℃灭菌15min;趁热用双层滤纸过滤；115℃灭菌15min..4.同化碳源基础培养基NH42SO40.5%;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..115℃灭菌15min同化碳源液体培养基NH42SO40.5%;KH2PO4;MgSO4-7H2O0.05%;CaCl2-2H2O0.01%.NaCl0.01%;酵母膏0.02％;糖或其它碳源0.5％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装小试管;每管3 ml; 115℃灭菌20min..5. 同化氮源基础培养基葡萄糖2％;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装大试管;每管20 ml; 115℃灭菌15min..附3酵母各属检索表一 1.生子囊孢子简称孢子;营养细胞芽殖二..2. 生子囊孢子;营养细胞裂殖或兼有芽殖三..3.不生子囊孢子;但生掷孢子营养细胞芽殖四4.不生子囊孢子及掷孢子五二营养细胞芽殖;生子囊孢子1.除芽生细胞外;有真菌丝……………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis..2.无真菌丝1营养细胞多边芽殖A2营养细胞两极芽殖BA1.孢子圆卵形;光面;无凸线Ⅰ2. 孢子半圆形;光面;无凸线Ⅱ3. 孢子痣面Ⅲ4. 孢子有凸线Ⅳ5. 孢子长条形Ⅴ6.生袋状子囊;孢子多到16个;圆形………………………2油脂酵母属LipomycesⅠ1. 孢子1～4个;圆;卵形;光面;无凸线；营养细胞多边芽殖;圆形;卵形;长形..……………………………………………………………3酵母菌属Saccharomycesa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………结合酵母亚属Zygosaccharomycesb孢子生成时;子囊生试探接合枝;但无二细胞结合现象…孢子圆酵母亚属Torulaspora c孢子生成时;子囊直接有营养细胞变成;无试探枝及结合现象……………酵母菌亚属Saccharomyces2.孢子1～4个;光面;无凸线；圆卵形;但营养细胞两极芽殖;为柠檬形………………………………………………4类酵母属SaccharomycodesⅡ孢子为半圆形或肾形1. 孢子为半圆形;多角形;或兼有圆形的…………………………5毕氏酵母属Pichiaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………接合毕氏酵母亚属Zygopichiab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………………毕氏酵母亚属Pichia2. 孢子为肾形………………………………………………………a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..……接合肾孢酵母亚属Zygofabosporab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………肾孢酵母亚属FabosporaⅢ孢子痣面1. 孢子痣面;无凸线；营养细胞多边芽殖……7德巴利酵母属Debaryomyces2. 孢子痣面;无凸线;子囊由接合子的芽子而成;营养细胞两极芽殖……8纳酵母属Nadsonia3.孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线；营养细胞多边芽殖;…………9施氏酵母属SchwanniomycesⅣ孢子有凸线1. .孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线…………………………………………施氏酵母属2. .孢子光面;圆或卵形;中腰有凸线;使整个形体如土星状………10魏氏酵母属Williopsisa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成………………接合魏氏酵母亚属Zygowilliopsisb孢子生成时;子囊直接由营养细胞变成…………………魏氏酵母亚属Williopsis3. 孢子光面;凸线生在一边;使孢子形如草帽;营养细胞多边芽殖……11汉氏酵母属Hansenulaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成……接合汉氏酵母亚属Zygohansenulab孢子生成时;子囊直接由营养细胞直接生成………汉氏酵母亚属Hansenula4. 孢子光面;凸线生于一边;使孢子形如草帽;营养细胞两极芽殖;…………………………………………………………………12孢子柠檬形酵母属HanseniasporaⅤ孢子长条;梭形或鞭形..1. 一个子囊中只有一个孢子…………………………13单孢酵母属Monosporellu2. 孢子2～8个;长条带鞭毛;如鞭子……………………14鞭子酵母属Nematospora3.孢子无鞭毛………………………………………………15蝇肠酵母属Coccidiasous B营养细胞;两极芽殖;柠檬形..1. 孢子生成时;营养细胞直接变成子囊…………………4类酵母属Saccharomycodes2. 孢子上有凸线;使之成草帽形………………12孢子柠檬形酵母属Hanseniaspora3. 孢子痣面;子囊由接合子的芽子而成…………………………8纳酵母属Nadsonia三营养细胞裂殖;或兼及芽殖;生子囊孢子..1.由真菌丝Ⅱ2.假菌丝发达Ⅱ无真菌丝ⅠⅠ只有裂生子;无真菌丝..1. 孢子圆形卵形…………………………………16裂殖酵母属Schizosaccharamyces2. 孢子肾形…………………………………………………………17北港酵母属Ⅱ有真菌丝1. 有真菌丝;只裂殖生裂生子……………………………………18内孢霉endomyces2.有真菌丝;芽殖兼及裂殖………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis.. 四生掷孢子1. 掷孢子肾形;不对称;菌落红色或红………………19掷孢酵母属Sporobolomyces2. 掷孢子圆形或卵圆形;菌落无色或浅黄色…………………20布尔酵母属Bullera.. 五不生子囊孢子或掷孢子1. 芽殖细胞及假菌丝外生真菌丝且分裂生裂生子……21芽裂酵母属Trichosporon2. 芽殖细胞;假菌丝及真菌丝可能有;但无裂生子Ⅰ..Ⅰ1. 普通假菌丝甚发达;真菌丝可能有………………………22假丝酵母属Candida2. 无真菌丝;假菌丝原始型或无Ⅱ..Ⅱ1. 生类胡萝卜素………………………………23红酵母属Rhodotorrula2. 无类胡萝卜素Ⅲ..Ⅲ1. 两极芽殖;普通细胞常为柠檬形…………………24无孢柠檬形酵母属Kloeckera2. 三角芽殖;营养细胞常为三角形………………………25三角酵母属Trigonopsis3.营养细胞瓶形;芽殖;子母细胞基部甚宽;生横膜……26瓶形酵母属Pityrosporum4. 营养细胞一端为尖穹窿状;含糖培养基中生大量的酸…………27瓶形酵母属Brettanomyces5. 营养细胞圆形或卵圆形Ⅳ..Ⅳ1. 生荚膜及淀粉样物质;不发酵………………………28隐球酵母属Cryptococcus..2. 无淀粉样………………………………………………29圆酵母属Torulopsis..酵母菌亚属各种检索表Ⅰ1. 只发酵葡萄糖包括果糖及甘露糖及半乳糖：a细胞圆形;子囊孢子一个;…………………………………单孢子酵母S.unisporus b细胞圆形;子囊孢子2或多个………………………………大连酵母 S.dairensc细胞卵形………………………………………………球形酵母S.globosus..Ⅱ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及蔗糖………………………………S.ribis2. 发酵糖类不同Ⅲ..Ⅲ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及棉子糖：。
天然酵素酵母菌分离及理化特性鉴定
天然酵素酵母菌分离及理化特性鉴定作者：彭禹铭刘巳齐李婧婧纪可欣李岑刘艳霞来源：《吉林蔬菜》2021年第01期摘要：从复合水果酵素中分离酵母菌，通过形态学特征，生理生化指标进行鉴定，并对其生长特性进行研究，结果表明：分离出的A1、A2、A3为水果酵素中的优势酵母，其具有耐高糖，耐低pH、耐高渗、耐一定酒精浓度特性，其可在初始糖量400g/L以下，pH为2以上，酒精浓度12%以下的环境中生长。
关键词：酵素;酵母;分离;生理生化特性;1 前言酵素食品是指新鲜果蔬、谷物、菌菇或其它食用植物等为原料，经微生物发酵形成的，富含维生素、酶、多酚类化合物等多种生物活性物质的产品[1]。
其在维持机体代谢，促消化、修复组织，抗氧化、减肥，净化血等方面具有不可代替的功效[2-4]。
酵素生产主要是自然发酵过程，在其发酵过程中会产生多种酶类、短链脂肪酸、醇、酯等代谢产物。
自然发酵过程中微生物主要来源于原料本身和加工环境，其中部分微生物会快速生长并成为优势菌，例如乳杆菌、等细菌和毕赤酵母、少见的伊萨酵母和酿酒酵母等。
2 试验材料与方法2.1 材料复合水果酵素原液：发酵3个月，还原糖含量620g/L，pH3.25，硫酸铵、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、氯化钠、酵母膏、酵母粉、蛋白胨、葡萄糖;PDA培养基、YEPD 培养基、碳源基础培养基、氮源基础培养基、无维生素培养基。
2.2 实验方法2.2.1 工藝流程果肉→破碎→调配混合→发酵→成品→酵母培养→酵母分离纯化。
2.2.2 酵母菌的分离纯化用梯度稀释法，将样品涂布于PDA培养基上进行分离纯化，纯化后转接于斜面保存待用。
2.2.3 形态特征鉴定菌落形态观察：将纯化好的单菌落接种于PDA固体培养基和PDA液体培养基，于28℃恒温培养72h，记录菌落大小、形状、颜色、质地是否有凹凸。
显微观察：挑取少许单菌落于载玻片上，用灭菌生理盐水稀释，加盖玻片，于显微镜下观察记录细胞形态、菌体大小、形状、繁殖方式。
微生物鉴定中常用的生理生化试验
一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
酵母菌的培养与分离
微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室2007.3目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。
三、实验主要内容和要求（一）本次实验的方案由同学们自己制定，实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基, 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制。
2.菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株。
3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃，培养24小时，转接一次，28-30℃，培养24小时，并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌。
4.用划线分离法对酵母菌进行纯化，要求每组挑取单个菌落，连续划线分离4代，镜下为单一纯菌株，每组扩繁10支斜面菌种，备用。
四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml）。
配制方法：（1）先将马铃薯去皮，切片，称200克并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml ，制成20%的马铃薯汁。
酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法
显微镜直接计数法的优缺点
优点
操作简单、快速，适用于初步估 计样品中微生物的数量。
缺点
主观性强，误差较大，无法准确 反映样品中微生物的种类和分布 情况。
03 酵母菌的应用
酿酒工业
酿造啤酒
酵母菌是酿造啤酒的关键微生物，通 过发酵作用将麦芽中的糖分转化为酒 精和二氧化碳。
选择高倍数显微镜，以 便清晰观察酵母菌形态。
用于放置观察样本，需 干净无痕。
酵母菌培养液
选择适当的培养基，以 便培养和观察不同种类
的酵母菌。
染色剂
如美蓝或苯酚品红，用 于染色酵母菌，使其更
易于观察。
实验操作步骤
1. 制备样本
将酵母菌培养液滴在载玻片上 ，然后盖上盖玻片。
2. 染色
用染色剂对样本进行染色，使 酵母菌更容易观察。
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3. 观察
在显微镜下观察酵母菌形态， 记录其特征。
4. 计数
采用直接计数法，统计显微镜 下观察到的酵母菌数量。
实验注意事项与安全须知
样本新鲜度
确保样本新鲜，避免酵母菌死亡 或污染。
显微镜操作
正确操作显微镜，避免损坏仪器或 造成人身伤害。
安全须知
避免染色剂与皮肤、眼睛接触，如 不慎接触，应立即用大量清水冲洗。
酵母菌的分类学依据
形态学特征
根据酵母菌的形态、大小、 出芽方式等特征进行分类。
生理生化特征
根据酵母菌的生理生化反 应和代谢产物进行分类。
分子生物学特征
通过分析酵母菌的基因组 序列和分子标记进行分类。
02 显微镜直接计数法
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一、酵母菌糖发酵试验
（一）实验目的
了解鉴别酵母菌的实验方法。
（二）实验原理
酵母菌在厌氧条件下能分解糖类，产生各种有机酸、气体和其它产物。
酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异。
因此，这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据。
酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫（pH6.8-5.2由紫变黄）或溴麝香草酚蓝
（pH7.6-6.0由蓝变黄）指标剂颜色的改变来确定。
产气可由发酵管气泡的产生予以证实。
（三）材料
糖发酵基础液（见附录I），1.6%溴甲酚紫或0.2%溴麝香草酚蓝溶液（见附III），葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖，啤酒酵母斜面菌种。
（四）实验内容
1、糖发酵基础液配制好后，按培养液容量的1%加入糖，分装于杜氏发酵管中（培养液的高度约为4-5厘米），再在试管内加入倒置的小玻管（约0.4×2.0－2.5
厘米）一支。
每种糖设三个重复管，121℃高压灭菌15分钟。
2、将啤酒酵母分别接入上述各发酵管中，置30℃下培养48-72小时，另以不接种者作对照。
3、如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气，则必先产酸，并在杜氏小管顶端出现气泡。
4、结果记录。
以“”表示产酸，“0”表示产气，“＋”表示产酸产气，“－”表示无变化，“碱”表示产碱。
二、酵母菌碳源同化试验
（一）实验目的
了解酵母菌对各种碳源的利用情况。
（二）实验原理
碳是酵母菌细胞的重要组成成分，约占酵母菌体重量的50%，为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质。
酵母菌对各种碳源的利用，因种类不同而异。
这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据。
（三）材料
无碳基础培养基（见附录I），啤酒酵母斜面菌种，0.5%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖溶液。
（四）实验内容
1、液体试管法
（1）每管加无碳基础培养基5毫升，加被测试的某种碳源，并以葡萄糖作为对照。
（2）接入啤酒酵母，28℃下培养1-2周，观察结果。
2、生长图谱法
（1）无碳培养基内加入2%的水洗琼脂，融化后冷却至45-50℃，到至平板。
（2）接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内，搅匀后倒入上述未凝平板内，摇匀待凝。
（3）皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记。
（4）用不锈钢匙，按标记加入相应的米粒大小的碳源，并以葡萄糖作对照。
（5）28℃下培养24-48小时后观察结果。
3、结果观察
（1）液体试管中是否形成醭，环岛等。
（2）生长图谱中测量菌落大小，说明对碳源的利用情况。
三、酵母菌氮源同化试验
（一）实验目的
了解酵母菌对各种氮源的利用情况。
（二）实验原理
酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外，故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用，酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致。
（三）材料
无氮基础培养基（见附录I），啤酒酵母斜面菌，0.5%的蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵和尿素溶液。
（四）实验内容
1、液体试管法
方法同二，以被测试的氮源代替碳源，不加任何氮源作空白对照。
2、生长图谱法
方法同二，以被测试的氮源代替碳源，不加任何氮化物作空白对照。
3、结果观察
（1）液体试管中溶液pH值的变化。
（2）生长图谱中测量形成菌落的大小，说明对各种氮源的利用情况。
四、酵母菌生长曲线的测定试验
（一）实验目的
掌握单细胞微生物群体生长曲线的几种测定方法。
（二）实验原理
酵母菌属于单细胞真核型微生物，把一定数量的酵母菌接种于的液体培养基中，在适宜的温度下培养时，它的生长过程具有一定的规律性。
在其生长过程中，定时取样测定酵母菌细胞数量，然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制所得的曲线叫生长曲线。
此生长曲线大致可划分为四个阶段：调整期、对数生长期、稳定期和衰退期。
（三）材料
酵母菌增殖培养基（见附录I），啤酒酵母斜面菌种。
（四）实验内容
1、将培养24小时左右的啤酒酵母斜面菌种，用无菌水洗下菌苔，以3000转/
分的速率离心，得菌体。
将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后，制备啤酒酵母菌悬液（细胞数量约106左右/毫升），测数备用。
2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中，25℃下培养，以此为起始时间，记录起始溶液的细胞数。
并在培养1，2，4，6，8，9，10，11，12，14，16，20，22，24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量。
3、酵母菌细胞数量的检测
方法①：活菌计数法。
此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后，取一定量体积（在0.1-1毫升之间）的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内，在25℃下培养24小时左右，计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量。
方法②：血球计数板计数法。
此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后，使菌落数约为105-106个/毫升，取一滴稀释液滴于血球计数板内，在显微镜下直接计算细胞总数。
4、绘制生长曲线
以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标，以培养时间作为横坐标，画出酵母菌的生长曲线。
并分析酵母菌群体的生长规律。