冷冻保存小鼠脂肪组织来源的干细胞 祖细胞(翻译)
小鼠乳腺脂肪组织体外培养
中图分 类号 ： 文献 标识 码 ： Ａ
Ｉ ｎ Ｖｉ ｔ ｒ ｏ Ｃｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｏ ｆ Ｍａ ｍｍａ ｒ ｙ Ａｄｉ ｐ ｏ ｓ ｅ Ｔｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｉ ｎ Ｍｏ ｕ ｓ ｅ
ＬＩＪｉ — ｘｉ ａ，ＷＡＮＧ Ｙ ｉ — ｍｉ ｎ，ＤＩ ＮＧ Ｘｉ ａ ｎ ｇ — ｂ ｉ ｎ，ＧＥ Ｘｉ ｕ — ｇｕ ｏ
ｍａ ｍｍ ａ ｒ ｙ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ａ ｌ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ， ａ ｎ ｄ ｈ ａ ｓ ｉ ｍｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ ｉ ｍｐ ａ ｃ ｔ ｆ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｍｍ ａ ｒ ｙ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ，
组 织培 养法培 养 小 鼠乳腺 周 围脂肪 组 织 ， 不但 获得 了成 熟脂 肪 细胞 ， 还 获得 了脂 肪 干 细胞 样 细 胞 。
该培 养 体 系的 建立 简单 易行 ， 为研 究脂肪 组 织对 乳腺 癌 的发 生 、 生长 和 侵 袭 的影 响 提供 了材 料 ， 也 为体外 获得 成 熟脂肪 细胞 和 脂肪 干 细胞提 供 了参 考 。
ｉ ｎ ｃ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ ， ｇ ｒ ｏ ｗｔ ｈ ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｖ ａ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｂ ｒ ｅ ａ ｓ ｔ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ， ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｓ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｎ ｄ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｓ ｅ
ｍａ ｍｍａ ｒ ｙ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｃ ｕ ｒ ｒ ｅ ｎ ｔ ｌ ｙ，ａ ｌ ｔ ｈ ｏ ｕ ｇ ｈ ｔ ｈ ｅ ｍａ ｍｍ ａ ｒ ｙ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｓ ｅ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｓ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ｆ ｏ ｒ
小鼠原位种植瘤模型 英文
小鼠原位种植瘤模型英文English:The xenograft tumor models are widely used in cancer research to study the growth, progression, and treatment of tumors. The term "xenograft" refers to the transplantation of tumor cells or tissues from one species into another, commonly from human tumors into immunodeficient mice. The procedure involves the implantation of tumor cells or tissues underneath the skin or into specific organs of mice, such as the subcutaneous tissue, the orthotopic site, or the metastatic site. This allows researchers to closely mimic the tumor microenvironment and study how tumors behave in vivo.To establish a xenograft tumor model, different steps are followed. First, tumor cells or tissues are obtained from a patient or a tumor cell line, and they are prepared for injection into the mice. The cells can be genetically modified or manipulated to express specific genes or proteins that are of interest. Next, immunodeficient mice, such as nude mice or severe combined immunodeficiency (SCID) mice, are chosen as hosts for the xenografts. These mice lack a functionalimmune system, which allows the engraftment and growth of human tumor cells. In some cases, immune-deficient mice may be humanized by introducing human immune cells to better model the tumor microenvironment.Injection of tumor cells or tissues can be done via different routes depending on the research question. The subcutaneous route is commonly used for studying tumor growth, while the orthotopic route involves implanting the tumor cells into the corresponding organ to better mimic the natural tumor site. Metastatic models involve injecting tumor cells into circulation or directly into organs where metastasis usually occurs, such as the lung or liver. Once the tumor cells or tissues are injected, researchers monitor tumor growth by measuring the size of the tumors using calipers, imaging techniques like bioluminescence or MRI, or by sacrificing the mice at different time points and examining the tumors.The xenograft tumor models provide valuable insights into tumor biology, tumor-host interactions, and preclinical drug testing. They allow researchers to evaluate the efficacy of potential therapeutic agents and to study tumor responses, including tumor growthinhibition, metastasis, and drug resistance. Moreover, the xenograft models can be used to investigate tumor heterogeneity by comparing the response of different tumor subtypes or exploring the tumor microenvironment. Overall, xenograft tumor models are an essential tool for cancer research and drug development.中文翻译:小鼠原位种植瘤模型广泛应用于肿瘤研究，用于研究肿瘤的生长、进展和治疗。
scientistsusestemcellsfrom课文
scientistsusestemcellsfrom课文随着科学技术的不断发展，干细胞研究已成为近年来生物医学领域最受关注的热点之一。
干细胞具有自我更新和分化为多种细胞类型的能力，这使得它们在医学研究和治疗中具有巨大的潜力。
科学家们利用干细胞治疗疾病、修复损伤以及再生组织，为许多疾病患者带来了希望。
干细胞分为胚胎干细胞（ESC）和成体干细胞（ASC）两大类。
胚胎干细胞来源于早期胚胎，具有发育的全能性，可分化为任何类型的细胞。
而成体干细胞则存在于成年人体内，具有特定分化潜能，如造血干细胞、神经干细胞等。
这两类干细胞在生物医学领域有着广泛的应用前景。
然而，干细胞研究的发展并非一帆风顺。
干细胞疗法的安全性和伦理问题引发了社会的广泛关注。
如何确保干细胞来源的合法性、避免胚胎干细胞研究引发的道德伦理问题以及确保干细胞疗法的安全性和有效性，都是干细胞研究面临的重要挑战。
在国际上，各国对于干细胞研究的政策和法规各不相同，我国对干细胞研究采取了严格的监管措施，以确保干细胞研究的安全和可持续发展。
在我国，干细胞研究取得了一系列重要成果。
科学家们在干细胞制备、移植和治疗等方面取得了突破性进展，为许多患者带来了实实在在的好处。
此外，我国政府对干细胞研究给予了高度重视，制定了一系列政策支持干细胞研究的发展。
例如，国家重点研发计划、国家科技计划等项目的资助，为干细胞研究提供了充足的资金支持。
展望未来，干细胞研究将对医学领域产生深远影响。
随着技术的不断进步，干细胞疗法有望成为治疗许多疾病的新型手段。
此外，干细胞研究还将带动生物制品、药物研发等相关产业的发展。
然而，干细胞研究仍面临许多未知领域和挑战，如干细胞的分化调控、移植免疫反应等。
这需要广大科研工作者继续努力，不断探索，为人类的健康事业作出更大的贡献。
总之，干细胞研究作为一种具有广泛应用前景的生物技术，在医学领域具有巨大的潜力。
我国在干细胞研究方面取得了世界领先的成果，但仍需不断努力，攻克技术难题，推动干细胞研究的发展。
脂肪细胞因子_脂联素_adiponectin_的研究进展
调节脂联素在脂肪细胞表达的因素有生脂转录 因子过氧 化物 酶 增殖 激活 受 体－ γ（ ＰＰＡＲ－ γ） ， 激 动 剂 （ＴＺＤ）、β肾上腺能受体（β－ ＡＲ）、第 ２ 信使 ｃＡＭＰ、ＩＬ－ ６、 ＩＧＦ－ Ⅰ及皮质激素等。如 ＴＺＤ 可刺激脂联素基因表 达， 增强其启动子活性， 升高循环脂联素水平； ＩＧＦ－ Ⅰ 则在转录水平增加脂联素表达； 而 ＩＬ－ ６、Ｃ 反应蛋白、 皮质激素和 ＴＮＦ－ α抑制脂联素基因表达。此外， 影响
素和因子统称为脂肪细胞因子。其中脂联素是新发现 的方法。
的一种脂肪细胞表达的细胞因子， 它以内分泌方式循 环 于 血液 中， 参与 调节 葡 萄糖 、脂 肪 酸 代 谢 及 抵 抗 炎 症反应等生命活动。 １ 脂联素的来源、结构
人类脂联素由 ２４４ 个氨基酸组成（鼠的脂联素由 ２４７ 个氨基酸组成）， 包括 Ｎ－ 端分泌信号肽、氨基端非 螺 旋 功 能 区 、 胶 原 样 结 构 域 以 及 Ｃ－ 端 球 形 结 构 域 （ｇＡｃｒｐ）， 翻译后修饰为 ８ 种不同的同源蛋白（ 见图 １） 。
２２
臧海军等： 脂肪细胞因子— ——脂联素（ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ） 的研究进展
营养研究
脂联素基因表达的因素还有生长激素、睾酮、内皮素－ １ 相关的脂肪细胞特异性蛋白。脂联素是脂肪细胞表达
及儿茶酚胺等（ Ｓｐｒａｎｇｅｒ 等， ２００４） 。
最丰富的激素， 在血浆中有相当高的浓度。脂联素进
脂联素蛋白合成和分泌只发生在成熟的脂肪细 入血液循环作用于相应的靶组织而发挥作用， 通过激
１１２
ＮＨ２
Ｓｉｇｎａｌ Ｃｏｌｌａｇｅｎ－ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ ｐｅｐｔｉｄｅ
Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ １ １７ ４５
研究生系列教材《干细胞生物学》pdf(两篇)
引言概述：正文内容：一、干细胞概述1.1干细胞的定义及特征1.2干细胞的分类及来源1.3干细胞在人体中的分布及功能1.4干细胞的研究方法与技术1.5干细胞研究的挑战与前景二、干细胞的生理功能2.1干细胞在组织发育中的作用2.2干细胞在组织修复与再生中的作用2.3干细胞与免疫调节2.4干细胞与老化及癌症的关系2.5干细胞与生殖生物学的关联三、干细胞的应用3.1干细胞在临床医学中的应用3.2干细胞在组织工程中的应用3.3干细胞在药物筛选与毒性测试中的应用3.4干细胞在基础研究中的应用3.5干细胞在农业与生物工程中的应用四、干细胞研究的伦理与安全性4.1干细胞研究的伦理问题4.2干细胞研究的法律与规范管理4.3干细胞研究中的安全性控制4.4干细胞转化为临床应用的障碍与解决方案4.5干细胞研究中国际合作的重要性及挑战五、干细胞生物学的最新进展5.1干细胞在疾病治疗中的最新应用5.2干细胞追踪及转基因技术的发展5.3干细胞的再编程与转化5.4干细胞与基因编辑技术的结合5.5干细胞治疗的未来前景与挑战总结：本文对研究生系列教材《干细胞生物学》pdf（二）进行了详细的内容分析与评述。
通过对该教材的五大主题进行阐述，从干细胞的概述、生理功能、应用、伦理与安全性以及最新进展等方面，给读者提供了全面、详细的干细胞生物学知识。
同时，也展示了干细胞生物学这一领域的重要性和研究前景。
干细胞研究仍然面临着伦理、法律、安全性等方面的挑战，需要国际合作与科学监管的支持，以确保其应用于临床医学和生物工程的安全性与可行性。
未来，随着干细胞研究的不断深入，相信其在医学、生物工程及其他领域的应用将会取得更加重要的突破。
引言：《干细胞生物学》是一本为研究生量身打造的教材，旨在系统介绍干细胞的基本概念、生物学特性以及在医学领域的应用。
干细胞作为一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，其研究不仅可以深化对生命本质的理解，还有望为多种疾病的治疗提供新思路和方法。
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。
ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。
大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。
同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。
目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。
为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。
1 脂肪组织采集1.1 脂肪组织采集机构要求脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。
采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。
采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。
“生物药”--Wharton’s jelly源间充质干细胞
“生物药”--Wharton’s jelly源间充质干细胞高连如【摘要】干细胞治疗代表生物冶疗进入到了一个崭新的时代。
间充质干细胞是存在于胚胎或成体组织中来源于中胚层具有多向分化潜能的干细胞。
由于成体间充质干细胞的质量与数量自身缺陷,使之应用受到了很大限制。
Wharton’s jelly组织,是起始于胚胎发育第13天的胚外中胚层组织。
使用基因微阵列分析及功能分析,首次发现Wharton’s jelly源间充质干细胞( Wharton’s jelly derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)高表达胚胎早期干性基因及心肌细胞分化早期特异转录因子,可分化心肌细胞等多种细胞。
进而,应用临床级WJMSCs经冠状动脉移植治疗ST抬高型急性心肌梗死患者的随机双盲临床试验,首次证明WJMSCs可明显改善心肌活力及心脏功能。
因此,WJMSCs具有极其重要益处；无伦理涉及,有强的分化潜能,无致瘤性；加之,WJMSCs可作为产品,在任何时候病情需要时立即应用。
为此,WJMSCs作为真正意义上的干细胞族,将最有希望成为具有应用前景的干细胞生物药。
%Cell-based treatment represents a new generation in the evolution of biological therapeutics. Mesenchymal stem cells ( MSCs) are mesoderm-derived multipotent stromal cells that reside in embryonic and adult tissues. The use of adult MSCs is limited by the quality and quantity of host stem cells. Wharton’s jelly of the umbilical cord originates from the extraembryonic and/or the embryonic mesoderm at day 13 of embryonic development. Using Affymetrix GeneChip microarray and functional network analyses, we found for the first time that Wharton’s jelly-derived MSCs ( WJMSCs) , except for their expression of stemness molecular markers in common with human ESCs ( hESCs) ,exhibited a high expression of early cardiac transcription factor genes and could be in-duced to differentiate into cardiomyocyte-like cells. Further, we demonstrated for the first time that intracoronary delivery of prepared clinical-grade WJMSCs was safe in treating patients with an ST-AMI attack by double-blind, randomized controlled trial and could significantly improve myocardial viability and heart function. It is therefore important to consider the benefits of WJMSCs, which are not ethically sensitive, have differentiation potential, and do not have the worrying issue of teratoma formation. Moreover, as the off the shelf product, WJMSCs can be applied immediately, and on de-mand. Thus, WJMSCs constitute a true stem cell population and are promising cells as a biological drug for stem cell-based therapies.【期刊名称】《转化医学杂志》【年(卷),期】2016(005)004【总页数】5页(P193-197)【关键词】间充质干细胞;Wharton’s jelly源间充质干细胞;生物药物【作者】高连如【作者单位】100048 北京，海军总医院心脏中心【正文语种】中文【中图分类】R329.2+4［Abstract］Cell-based treatment represents a new generation in the evolution of biological therapeutics.Mesenchymal stem cells（MSCs）are mesoderm-derived multipotent stromal cells that reside in embryonic and adult tissues.The use of adult MSCs is limited by the quality and quantity of host stem cells.Wharton’s jelly of the umbilical cord originates from the extraembryonic and/or the embryonic mesoderm at day 13 of embryonic ing Affymetrix GeneChip microarray and functional network analyses，we found for the first time that Wharton’s jelly-derived MSCs （WJMSCs），except for their expression of stemness molecular markers in common with human ESCs （hESCs），exhibited a high expression of early cardiac transcription factor genes and could be induced to differentiate into cardiomyocyte-like cells.Further，we demonstrated for the first time that intracoronary delivery of prepared clinical-grade WJMSCs was safe in treating patients with an STAMI attack by double-blind，randomized controlled trial and could significantly improve myocardial viability and heart function.It is therefore important to consider the benefits of WJMSCs，which are not ethically sensitive，have differentiation potential，and do not have the worrying issue of teratoma formation.Moreover，as the off the shelf product，WJMSCs can be applied immediately，and on demand.Thus，WJMSCs constitute a true stem cell population and are promising cells as a biological drug for stem cell-based therapies.［Key words］Mesenchymal stem cells（MSCs）；Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells（WJMSCs）；Biological drug21世纪，人类疾病治疗模式在继现代医学——药物、手术、机械辅助等手段后，一个崭新的充满希望的新理念——细胞生物治疗理论诞生了，这将给人类带来什么样的变化与影响，如此快速之进展，正如Science、Nature中所表述的“即使站在世界最前沿的科学家也难以预料”［1-2］。
细胞生物学中英文名词解释
nuclear envelope
真核细胞内细胞质与细胞核之间由双层膜构成，分别称外核膜与内核膜。双层核膜上镶嵌有核孔复合体，能选择性地运输核内外物质。
核基质
nuclear matrix
细胞核内抗抽提的不溶性纤维网状结构。
核孔复合体
nuclear pore complex，NPC
镶嵌在内外核膜上的篮状复合体结构，主要由胞质环、核质环、核篮等结构域组成，是物质进出细胞核的通道。
由多个甚至几十个核糖体串联在一条mRNA分子上进行肽链合成的核糖体与mRNA的聚合体。
多线染色体
polytene chromosome
染色体DNA经多次复制而不分开、呈规则并排的巨大染色体，昆虫中的巨大染色体形态特征最为典型。
反面高尔基体管网状结构
trans Golgi network，TGN
处于高尔基体反面的管网状结构，主要功能是负责对蛋白质进行分选，并定向将蛋白质转运到细胞内或细胞外的最终位置。
蛋白质分选
protein sorting
依靠蛋白质自身信号序列，从蛋白质起始合成部位转运到其功能发挥部位的过程。蛋白质分选不仅保证了蛋白质的正确定位，也保证了蛋白质的生物学活性。
灯刷染色体
lampbrush chromosome
较普遍存在于鱼类、两栖类等动物的卵母细胞减数分裂双线期，由具有转录活性的染色质环形成类似灯刷的特殊巨大染色体。
电子传递链
electron transport chain
膜上一系列由电子载体组成的电子传递途径。这些电子载体接受高能电子，并在传递过程中逐步降低电子的能量，最终将释放的能量用于合成ATP或以其他能量形式储存。
凋亡复合体
apoptosome
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Cropreservation of Mouse Adipose Tissue-Derived Stem/Progenitor Cells 冷冻保存小鼠脂肪组织来源的干细胞/祖细胞（翻译）摘要有报道，脂肪组织来源的干细胞/祖细胞（ASCs）不仅可分化为中胚层细胞，如成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞，也可分化为内胚层细胞，例如肝细胞、胰岛素分泌细胞。
这类干细胞/祖细胞有望用于各种再生治疗。
本研究证明用七种冻存液，包括10%DMSO、DMSO细胞冷冻液、甘油细胞冷冻液、CellBanker1、CellBanker1+、CellBanker2和CP-1，冻存得ASC有细胞活性及成脂/成骨分化潜能。
ASCs取自小鼠皮下脂肪组织。
用CellBanker2冻存的ASCs的细胞活性超过90%，CellBanker1、CellBanker1+或CP-1保存的约有90%活性，10%DMSO、DMSO细胞冷冻液、甘油细胞冷冻液保存ASC活性低于80%。
用与没用CellBanker2保存的细胞在成脂/成骨分化潜能上没有区别。
数据显示，CellBanker2是ASCs冷冻保存的最有效的解决方法，冻存ASCs及非冻存ASCs都可用于再生医疗。
介绍干细胞存在于多种器官，包括骨髓、肝脏、胰脏、脂肪。
骨髓间充质干细胞（MSCs）是多潜能细胞，可在体内和体外诱导分化成多种功能的中胚层组织，包括骨、软骨、腱、脂肪以及骨髓基质。
数项研究显示MSCs可分化成其他类型的组织特异性细胞，例如骨骼肌、肝脏和中枢神经系统的细胞。
中枢神经系统含有可分化成造血干细胞或骨骼肌细胞的干细胞。
这些结论提示多潜能MSCs在再生医学组织工学方向上使用广泛。
近来，脂肪组织被视作另一个MSCs的来源。
因为脂肪组织的MSCs比骨髓来源的MSCs更容易获得，脂肪组织来源的干细胞/祖细胞（ASCs）有望与其他干细胞用于临床研究。
ASCs有自我更新的能力，可经诱导分化多种间充质组织，包括软骨细胞，脂肪细胞，肌细胞和内皮细胞。
随着冻存细胞技术的进步，冷冻保存对细胞研究者更有意义，其应用包括干细胞运输，收集细胞以达到治疗剂量，安全完成任务节省时间和质控检测。
然而，有研究报道冻存对干细胞、祖细胞的不利影响。
冻融细胞的最终存活率体现了多种损伤细胞的机制对细胞的综合影响。
如果用快速冷却法保存，那么溶液无法维持平衡，因为细胞外溶液的化学势降低的速率远大于水分从细胞中扩散的速率。
这种不平衡的最终结果则是可观察到细胞内形成冰晶，这对细胞是致命的。
冷却速度是决定冻存干细胞活性的关键因素。
在复苏时也存在相似的不利影响。
含DMSO或甘油的冷冻保存液可用于解决这种影响。
在骨髓移植应用中，多数研究机构冻存骨髓用的是含10%DMSO的冻存液，然后在程序降温仪中以1℃/min的速率冷冻。
然而，一些研究指出细胞接触到DMSO会损失一定的祖细胞活性。
因此，有必要使用专用的对干细胞、祖细胞无害的冻存液。
虽然几项研究报道了冻存干细胞/祖细胞的效果是基于保存时间和冻融速度，但少有研究报道不同冻存液的影响作用。
本研究中，7种冻存液经过了一系列测试确定处哪一种冻存小鼠ASCs效果最佳。
材料和方法【分离和培养小鼠脂肪组织来源的干细胞、祖细胞】1.皮下脂肪组织取自8周龄成年小鼠；2.脂肪组织重0.5g，用Hank’s平衡盐溶液洗三次，切细，用1ml I型胶原酶（1mg/ml）消化，37℃水浴孵育1小时，并来回震荡；3.250μm筛网过滤消化的组织，细胞悬于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基；4.室温下细胞1200rpm离心5分钟，收集的细胞在培养前清洗三次；5.T-25培养瓶添加含20%FBS的DMEM/F12培养基，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素，接种1*105个细胞，37℃、5%CO2培养；6.细胞传代3-4代。
【小鼠脂肪组织来源干细胞/祖细胞的冻存和细胞活性鉴定】1.接近长满的时候，细胞密度大约2.5-6.5*104 cell/cm2，胰酶EDTA消化小鼠ASCs，离心后以2*105 cell/ml的密度悬浮于七种冻存液中；2.冻存液有10%DMSO，DMSO细胞冻存液，甘油细胞冻存液，CellBanker1，CellBanker1+，CellBanker2，CP-1；3.冻存液中的细胞迅速冷却，保存在-80℃7天；4.融化细胞后，迅速用培养基稀释细胞；5.细胞1200rpm离心3分钟，重悬在5ml 培养基中；6.细胞活性用台盼蓝染色法测定。
【成脂细胞分化鉴定】1.诱导方法：含100μM 吲哚美辛（消炎痛）、1μM 地塞米松、1μM 氢化可的松、10μg/ml胰岛素、10%FBS的DMEM高糖培养基，培养细胞3天。
此后用含10%FBS的DMEM高糖培养基培养一周；2.分化鉴定：油红O染料（Oil Red O）染细胞内脂滴可鉴定细胞分化情况。
ASCs在成脂培养基中培养1周，然后固定于含10%甲醛的PBS十分钟，用60%异丙醇清洗，油红O染色10分钟，多次清洗，100%异丙醇脱色1分钟；3.积聚性甘油三酸鉴定：甘油三酸E-Test TM试剂盒，在前述的细胞样品中测试。
细胞培养瓶用50mM Tris缓冲液（pH 7.4）清洗，细胞脱落后4℃离心1200rpm 5分钟，然后悬浮在含50mM Tris缓冲液、5mM EDTA、β-巯基乙醇的提取缓冲液，超声波处理，最后取20μl样品溶液用作鉴定。
【成骨细胞分化鉴定】1.诱导方法：含100μM地塞米松、50μM 抗坏血酸-2-磷酸、10μM β-甘油磷酸、10%FBS的DMEM培养基，培养细胞2-3周；2.分化鉴定：von Kossa法检测细胞外基质钙化。
用萘酚AS MX-PO4，N-N-二甲基甲酰胺，红紫LB盐，Tris-HCL(pH 8.3)染色45分钟，再用2.5%硝酸银溶液染色30分钟（Von Kossa法）。
【增殖速率的测量】非冻存的或冻存的ASCs以3.3*104 cell/每孔的密度接种到6孔板中，胰酶EDTA消化，细胞传代，3、5、7天后细胞计数。
活细胞用台盼蓝染色计数。
结果【脂肪组织来源的干细胞/祖细胞】本实验测试的是小鼠ASCs（见图1A）。
为了测试收获细胞的成脂分化能力，细胞用成脂培养基培养1周，诱导分化，然后进行油红O染色。
该染色显示细胞为阳性，意味着细胞具有成脂分化能力（图1B）。
为测试收获细胞的成骨分化能力，细胞用成骨培养基培养了1周，然后进行von Kossa染色。
该染色显示细胞为阳性，意味着该细胞具有成骨分化能力（图1C）。
这些结果都表明分离得到的细胞内包含了脂肪组织来源的干细胞。
【冻存ASCs的细胞活性】小鼠ASCs冻存了一周。
冻存液有10%DMSO, DMSO细胞冻存液，甘油细胞冻存液，CellBanker1，CellBanker 1+，CellBanker2和CP-1。
融化细胞后，迅速用台盼蓝评估细胞活性。
图2表明CellBanker2冻存的ASCs活性超过90%，CellBanker1、CellBanker1+、CP-1的活性约为90%。
而10%DMSO、DMSO冻存液、甘油冻存液的活性则低一个档次。
CellBanker2冻存的细胞具有7种冻存液中最高的活性。
【对比冻存的和非冻存的ASCs增殖速率】测定冻存的和非冻存细胞的增殖速率，细胞在培养第3、5、7天计数（图3）。
非冻存的小鼠ASCs显示比冻存细胞更高的增殖速率。
CellBanker2冻存的细胞增殖速率最快。
【冻存ASCs的成脂/成骨分化能力】为测试冻存细胞（图4A）是否有成脂分化能力，细胞成脂诱导培养了一周，然后进行油红O染色。
冻存在CellBanker2（图4B）或其他冻存液的细胞经油红O染色确定为阳性，说明冻存细胞具有成脂分化能力。
为测试冻存细胞是否有成骨分化能力，细胞成骨诱导培养了一周，然后进行von Kossa染色。
冻存在CellBanker2（图4C）的细胞经von Kossa染色确定为阳性，说明冻存细胞具有成骨分化能力。
这些数据说明冻存细胞具有成脂/成骨分化能力。
【对比冻存的和非冻存的ASCs的成脂分化能力】为测定冻存的和非冻存的ASCs的成脂分化能力，采用甘油三酸E-test TM法鉴定分化细胞内积累的甘油三酸。
冻存细胞和非冻存细胞在成脂诱导分化一周后进行的积累性甘油三酸测定中未显示明显差异（图5）。
讨论MSCs是多潜能细胞，有能力分化成中胚层组织的多种功能细胞类型。
数项研究显示多潜能MSCs在再生医学组织工程方向上很有用。
骨髓细胞一直被作为MSCs的来源。
而ASCs有也骨髓样特性。
据报道，ASCs 在体外分化成间充质系的细胞，正如本研究所示的脂肪细胞、骨细胞，以及软骨细胞、肌细胞，还可以生成肝细胞、胰岛素分泌细胞和神经细胞。
冻存技术已经常规用于保存动物和人体的所有细胞/组织。
在再生治疗领域，冻存的骨髓据研究所示可以用于骨髓转移。
早期采集骨髓可能更为有效，因为有研究认为年轻人的骨髓比年长者含有更多间充质干细胞。
因此，年轻患者身上采集的间充质细胞可以当作高增殖、高分化特性的细胞库而冻存下来，以在未来用于他自身的治疗。
本研究显示，冻存的小鼠ASCs保留有成脂/成骨分化能力。
在冷冻前，细胞必须置于冻存液中（DMSO或甘油）。
研究表明，DMSO加入培养基后，不仅有细胞毒性，还能诱导神经元样细胞或心脏肌细胞的分化。
有些研究小组使用非毒性冻存液例如海藻糖来代替DMSO冻存干细胞。
本研究检测了7种冻存液。
成脂诱导一周后细胞内含积累性甘油三酸量在冻存细胞和非冻存细胞之间没有明显差别。
然而，非冻存的小鼠ASC显示出最高的增殖速率。
对于7种冻存液，cellbanker2冻存的细胞在所有冻存的小鼠ASCs中有最高的增殖速率。
对冻存ASCs活性的研究显示CellBanker2是ASCs 最有效的冻存液。
通过对比细胞的成脂/成骨潜能，可发现冻存的和非冻存的细胞在成脂/成骨潜能上没有差异。
这些结果都表明冻存细胞，特别是通过CellBanker2冻存的，与未冻存的ASCs可成功用于再生治疗。
参考文献（略）。