不同体积浓度胎牛血清对大鼠髓核间充质干细胞生物学特性的影响
补肾活血舒筋方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移的影响及其机制
补肾活血舒筋方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、迁移的影响及其机制王彦超;邓蓉蓉;叶亚东;席志鹏;康然;谢林【摘要】目的探讨补肾活血舒筋方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、迁移的影响及其可能的作用机制.方法采用全骨髓贴壁法分离提取大鼠BMSCs并进行验证.制备补肾活血舒筋方低、中、高浓度含药血清(1.1、2.2、4.4 g/mL)及空白血清,将大鼠BMSCs随机分为含药血清低、中、高浓度组和空白对照组,分别加入上述血清.采用CCK-8法检测各组增殖能力(以细胞生存率表示),Transwell小室试验检测细胞迁移能力(以细胞迁移数量表示),Western blotting法检测趋化因子受体4(CXCR4)和NF-κB信号通路p65蛋白表达.结果各组间细胞生存率比较差异无统计学意义(P>0.05).含药血清高、中浓度组细胞迁移数量均高于含药血清低浓度组、空白对照组,且含药血清高浓度组高于含药血清中浓度组(P均<0.05).含药血清高、中、低浓度组与空白对照组p65、CXCR4蛋白表达依次降低,组间两两比较P均<0.05.结论 2.2、4.4 g/mL补肾活血舒筋方含药血清可促进BMSCs迁移,但对BMSCs增殖无影响;激活NF-κB信号通路可能是其作用机制.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)016【总页数】3页(P38-40)【关键词】骨髓间充质干细胞;补肾活血舒筋方;细胞迁移;核转录因子κB;趋化因子受体4;大鼠【作者】王彦超;邓蓉蓉;叶亚东;席志鹏;康然;谢林【作者单位】南京中医药大学,南京210023;南京中医药大学附属中西医结合医院;南京中医药大学附属中西医结合医院;泰州市中医院;南京中医药大学附属中西医结合医院;南京中医药大学附属中西医结合医院;南京中医药大学附属中西医结合医院【正文语种】中文【中图分类】R329间充质干细胞(MSC)来源于发育早期的中胚层和外胚层，具有多向分化潜能、自我复制、靶向归巢和损伤修复等特点。
大鼠骨髓间充质干细胞与脂肪间充质干细胞生物学特性的比较
大鼠骨髓间充质干细胞与脂肪间充质干细胞生物学特性的比较范龙坤;梁世桢;华泽权;金岩【期刊名称】《牙体牙髓牙周病学杂志》【年(卷),期】2012(22)4【摘要】目的:本研究旨在比较同一个体来源的脂肪间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)和骨髓问充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的生长特点和诱导分化能力.方法:取7～10dSD大鼠的脂肪和骨髓,体外分离、纯化脂肪和骨髓来源间充质干细胞,分别从细胞形态、生长动力学、表面标志、分化潜能等方面进行鉴定和比较.结果:脂肪间充质干细胞的增殖速度明显大于骨髓间充质干细胞(P＜0.05),两种细胞所表达的表面蛋白标志物基本相似,但脂肪间充质干细胞表面蛋白标志CD106呈阴性,而骨髓间充质干细胞CD106呈阳性.在成软骨分化中脂肪间充质干细胞弱表达Ⅱ型胶原,而骨髓间充质干细胞不表达.第5、10、15、20代ADSCs及BMSCs经成骨诱导后茜素红染色均呈阳性且有“矿化”结节形成,碱性磷酸酶活性以第5代最强,随着细胞代次的递增,碱性磷酸酶活性呈递减趋势.结论:ADSCs较BMSCs更易于分离培养及体外扩增,诱导条件下成骨、成脂、成软骨能力较强,适合作为再生医学的种子细胞.%AIM: To compare the ability of differentiation, proliferation and differentiation between bonernmarrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and adipose derived stem cells (ADSCs) in vitro. METHODS: ADSCs and BMSCs were acquired from the adipose and bone marrow of SD rat. The BMSCs and ADSCs were isolated and purified from the adipose and the bone marrow, and then were identified based on their morphology, cellmarker, growth kinetics and proliferation potential. RESULTS: The biological characteristics and pluripotentiality of ADSCs and BMSCs were similar. The proliferation rate of ADSCs was higher than that of BMSCs. The cell markers of BMSCs and ADSCs were similar, however, contrary to BMSCs, CD106 was not expressed on ADSCs. The collagen II was expressed weakly on ADSCs but was modest on BMSCs. Both BMSCs and ADSCs showed fibroblast-like morphological characteristics. BMSCs and ADSCs of the 5,10,15 and 20 passage showed positive ALP activity and were positive by Alizarin Red staining. ALP activity was strongest at passage 5, and gradually decreased thereafter. The number of mineralized nodules in BMSCs was similar in different passages. However, the number of mineralized nodules in ADSCs was smaller at passage 20. CONCLUSION: ADSCs can be more easily isolated and cultured in vitro and show similar proliferation, os-teoinduction and adipose induction ability to BMSCs. They are suitable as seed cells for bone tissue engineering.【总页数】7页(P194-199,244)【作者】范龙坤;梁世桢;华泽权;金岩【作者单位】辽宁医学院沈阳军区总医院研究生培养基地,辽宁沈阳110016;辽宁医学院沈阳军区总医院研究生培养基地,辽宁沈阳110016;沈阳军区总医院口腔颌面外科,辽宁沈阳110016;第四军医大学口腔医学院,陕西西安710032【正文语种】中文【中图分类】R780.2【相关文献】1.大鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性的实验研究 [J], 邓展生;沈民仁;鞠洪斌;孙太存;许宇霞;张旋2.氯化钴诱导化学性低氧对经HIF-1α 基因转染后的大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响 [J], 王君;韩丽春;孙绪德;李正民;张振;张茹;张玉明3.不同年龄段大鼠脂肪间充质干细胞生物学特性的研究 [J], 枟涛;秦书俭;王超;单伟4.两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的比较 [J], 高元慧;向杨;曹卉;王顺兰;郑琳麟;何浩伟;张应爱;张淑芳;黄邓高5.两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的比较 [J], 高元慧;向杨;曹卉;王顺兰;郑琳麟;何浩伟;张应爱;张淑芳;黄邓高因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同Pfirrmann分级椎间盘内髓核细胞生物学特性的比较
组 织 在细胞 水平 的退 变程 度 ， 且 比组 织 学分 级 简 并
组 织 一样 的消化 程序 消化 退变 的髓 核组织 则效 率很 低 ， 得细 胞 的数 量 少 。髓 核 的 消化 时 间本来 就 比 获
液 ， Ｌｎ １０ｐ Ｍ Ｏ 震荡 １ ｉ， 每￣ Ｊ人 ５ ． Ｄ Ｓ ， Ｊ Ｌ ０ｒｎ 充分溶解 ａ 结 晶物 。设置 ８个 复孔 ， 平 均 值 。Ａ值 为纵 坐 标 取
轴 ， 养 的时 间为 横 轴 作 曲线 图 。在 酶 联 免 疫 检测 培 仪 上选 择 ４０ｒ 波长 ， 定各孔 的吸光 度值 。绘制 ９ ｍ ｉ 测 髓 核 细胞 生长 曲线 。
液 ， ０ ２ ％胰酶消化后计数 ， １ ０／ Ｌ的细 用 ．５ 以 ×１ ｍ 胞密 度接 种 于 ９ ６孔板 ， 孔 体 积 ２０ ｔ ， 于 每 ０ ｘ 置 Ｌ ３ ℃ ，％Ｃ ： ７ ５ Ｏ 培养箱 中培养 ， 于培养 的前 ８ｄ内每
天在 每孔 加入 Ｍ Ｆ溶液 ２ Ｌ 孵 育 ４ｈ 弃 去 培 养 Ｔ ０ ， ，
的因素有年龄 、 遗传 、 生活方式 、 劳动习惯 、 损伤等。 在各 种 生理 性 和病 理 性 致 病 因 素 的持 续 影 响下 ， 退
变 不 断加重 。为 了便 于 基 础 研 究 和 临床 评 估 ， 者 学 们 对椎 间盘退 变 的程 度 进 行 细 化 分 级 ， 对 临 床 治 这 疗方 案 的选 择 具有 重要 意义 。 目前评 价椎 间 盘退 变 程度 的方 式 有 大 体 观 察 法 、 织 病 理 学 分 级 法 和 组 ＭＲ 分 级 法 ， 就 是 临 床 常 用 的 Ｐ ｒ ａｎ分 级 法 。 １ 也 ｉｍ ｆｒ ｎ 大 体观 察法 具 有简 单 、 直观 的优 点 ； 织病 理 学分级 组 是评 价 椎 问盘 退变 的 “ 标 准 ” 但是 两 者 都不 适 用 金 ， 于椎 间盘退 变 程度 的术 前 评估 。ＭＲ 影 像 技术 的发 Ｉ 展 ， 临床 医 生术 前 能 清 晰 的 获得 椎 间 盘 的影 像 资 使 料 。Ｐｉｍａｎ等¨ 根据 椎 问 盘 Ｍｉ ｆｒ ｎ ｒ ｌ ｌ的 Ｔ ２加权 像 特
大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
中国组织工程研究与临床康复 第15卷 第10期 2011–03–05出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research March 5, 2011 Vol.15, No.10ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH1721Department of TraumaticOrthopaedics and Hand Surgery, First Affiliated Hospital, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, ChinaLi Xiao-feng ★, Master, Attending physician, Department of TraumaticOrthopaedics and Hand Surgery, First Affiliated Hospital, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China xiaofengli74@ Correspondence to: Zhao Jin-m in, Doctor, Professor, Department of TraumaticOrthopaedics and Hand Surgery, First Affiliated Hospital, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Chinazhaojinmin@Supported by: the National Natural Science Foundation of China, No. 30860078*; Key Science andTechnology Program by HealthDepartment of Guangxi Zhuang Autonomous Region, No. 200636*Received: 2010-12-27 Accepted: 2011-01-26大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定**★李晓峰，赵劲民，苏 伟，崔向荣，罗世兴，马爱国Culture and identification of rat bone marrow mesenchymal stem cellsLi Xiao-feng, Zhao Jin-min, Su Wei, Cui Xiang-rong, Luo Shi-xing, Ma Ai-guo Abstract Li XF, Zhao JM, Su Wei, Cui XR, Luo SX, Ma AG. Culture and identification of rat bone marrow mesenchymal stem cells.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(10): 1721-1725. [ ]摘要 李晓峰，赵劲民，苏伟，崔向荣，罗世兴，马爱国. 大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(10):1721-1725. [ ]0 引言骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells ，BMSCs)具有多向分化潜能，能促进间充质组织的再生，如：骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质等组织[1]。
兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应
兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应【摘要】为了研究兔骨髓间充质干细胞(rBM-MSC)的生物学特征及其对不同生长因子的反应，使用贴壁培养法从兔骨髓单个核细胞中获得间充质干细胞，在光学显微镜和电子显微镜下观察其基本生长行为和生物学特征；使用流式细胞仪检测rBM-MSC的免疫学表型；RT-PCR法检测其胶原表达；诱导rBM-MSC多向分化并使用特异性染色和RT-PCR予以鉴定；最后使用MTT法检测IL-1、3、8和HGF对rBM-MSC生长增殖的影响。
结果显示：贴壁生长的rBM-MSC具有典型的成纤维样细胞形态，可传15代以上，第5代rBM-MSC高表达基质受体CD44，低表达造血细胞标记CD45；RT-PCR显示高表达I型胶原，弱表达II型胶原，不表达X型胶原；在不同的诱导条件下，rBM-MSC 可被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞。
rBM-MSC对IL-3最为敏感，10 ng/ml的低浓度IL-3可显着促进细胞增殖达32％以上，而高浓度IL-3能显着抑制其生长。
结论：分离培养了rBM-MSC，其生物学特征与人和猕猴等BM-MSC相似的生物学特性，低浓度IL-3可有效促进其增殖。
【关键词】骨髓；间充质干细胞；生长因子；兔Biological Characteristics of Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Their Response to Different Growth FactorsAbstractThis study was aimed to analyze the biological characteristics of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (rBM-MSCs) and their response to different growth factors. RabbitBM-MSCs were separated from bone marrow mononuclear cells by using adherent cultivation. Biologicalcharacteristics were investigated by optical and electron microscopy. Immunophenotype of rBM-MSCs was measured by flow cytometry. Theexpression of collagen was detected by RT-PCR. Differentiation potential was identified by specific staining andRT-PCR. The response of rBM-MSCs to IL-1, 3, 8 and HGF with different concentrations were tested by MTT. The results showed that the rBM-MSCs gave rise to a population of adherent cells characterized by the presence of a predominant cell type with a typical fibroblast-like morphology and could be cultured for over 15 passages. CD44 was highly expressed on F5 rBM-MSCs (32%) and CD45 was lowly expressed (%). Type I collagen was highly expressed, while type II collagen was lowly expressed and type X collagen was not detected on rBM-MSCs using RT-PCR method. In various conditions inducting differentiation, rBM-MSCs could differentiate into the osteoblast, chondrocyte, adipocyte and neuron-like cells. The rBM-MSCs weresensitive to IL-3, even low concentration (10 ng/ml) of IL-3 could promote the proliferation of rBM-MSCs effectively (32％, ), whereas high concentration IL-3 inhibited it significantly. It is concluded that rabbit BM-MSCs were successfully isolated and culture-expanded. The biological characteristics of rabbit BM-MSCs are similar to those of human and rhesus BM-MSCs. IL-3 with low concentration can promote the proliferation of rBM-MSCs effectively, but high concentration of IL-3 can inhibit their proliferation.Key wordsbone marrow; mesenchymal stem cell; growth factor; rabbit骨髓间充质干细胞具有高度自我更新和多向分化的潜能，在不同的诱导条件下，可分化为多种组织细胞类型，如骨髓基质细胞、成骨细胞、成软骨细胞和脂肪细胞［1］。
大鼠骨髓间充质干细胞的培养、鉴定及生物学性状分析
大鼠颈交感神经激惹模型制作及其评价的实验研究
沙轲农朋海 广西医科大学第一附属医院创伤骨科手外科
目的探讨大鼠颈交感神经激惹模型的制作及评价方法。 方法选用２５０９的ＳＤ大鼠２４只，结扎右侧颈交感神经的方法制作大鼠颈交感神经激惹模型，于术 后６周对实验动物进行体重、足印分析、Ｂｅｄｅｒｓｏｎ神经功能评分、前肢放置试验、平衡木行走试验、肌力测 试（前爪抓握试验）及病理学检查。 结果（１）术后６周实验组体重相对对照组轻，但统计学分析结果两组无明显差异（Ｐ＞ｏ．０５）；（２）足印 重复间距试验结果显示实验组术后６周时实验鼠右侧前后肢足印重复性差。表现为间距较大，且间距不 稳定，明显大于对照组（Ｐ＜ｏ．０１）；（３）术后６周平衡木行走试验结果显示实验组通过性与对照组相比差 （Ｐ＜０．０１）；（４）术后６周时Ｂｅｄｅｒｓｏｎ神经功能评分实验组评分高于对照组（Ｐ＜０．０１）；（５）术后６周前肢放置 试验实验组右侧得分均低于对照组（Ｐ＜０．０１）；（６）术后６周前爪抓握试验评分实验组有不同程度的肌力下 降，对照组则没有肌力下降，但统计学分析结果两组没有明显差异（Ｐ＞０．０５）。（７）术后实验组右侧的颈中 神经节ＨＥ染色病理切片显示交感神经细胞数量相对减少，并且出现大量的淋巴细胞浸润。 结论结扎右侧颈交感神经的方法制作大鼠颈交感神经激惹模型稳定、可靠，具有推广意义，并可用 于颈交感神经的相关实验研究。神经行为学在颈交感神经激惹动物模型的评价方面有很大应用空闰。 关键词交感神经；动物模型；神经行为学
第九届西部骨科论坛论文集
臂丛神经损伤合并腋神经在四边孔处损伤的临床研究 及肱三头肌肌支转位修复腋神经的解剖学研究
不同血清浓度对大鼠软骨细胞增殖、形态和基因表达的影响
不同血清浓度对大鼠软骨细胞增殖、形态和基因表达的影响刘丽芳;薛艳;郑昱新;曹月龙;丁道芳【摘要】目的观察不同血清浓度对大鼠软骨细胞体外培养的形态、增殖和基因表达的调控作用.方法取出生24h SD大鼠关节处软骨,0.1％浓度的Ⅱ型胶原酶多次消化后获得软骨细胞.软骨细胞培养于含5％胎牛血清(fetal bovineserum,FBS),10％ FBS和20％ FBS的DMEM低糖培养基中,分别为5FBS组,10FBS组和20FBS组.24h后镜下观察细胞形态变化,CCK8方法检测24、48和72h软骨细胞增殖.Western blot法检测软骨指标Ⅱ型胶原A1(COL2A1)和MMP13(matrix metalloproteinases13)表达,定量PCR检测软骨特异性基因Sox9、A-can、ADAMTS5、MMP9和MMP3的表达及代谢相关基因Nme2和PnP表达.结果 5FBS组的软骨细胞呈由鹅卵石样排列,10FBS组和20FBS组细胞呈现长梭形改变,且血清浓度越大,形态改变越明显.和5FBS组比较,10FBS组和20FBS组细胞增殖明显,呈血清浓度依赖性增加.10FBS组和20FBS组的MMP13表达显著上调,Ⅱ型胶原表达显著下调.PCR结果表明,和5FSB组比较,10FBS组和20FBS组的A-can和Sox9表达下降,MMP9、MMP3和ADAMTS5表达上调,且基因表达变化和血清浓度改变呈正相关.同时随着血清浓度增加,Nme2和PnP表达显著上调.结论血清浓度的增高促进软骨细胞代谢,引起软骨细胞退变.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)009【总页数】6页(P53-57,33)【关键词】血清浓度;软骨细胞;细胞增殖;形态改变;营养状态【作者】刘丽芳;薛艳;郑昱新;曹月龙;丁道芳【作者单位】200240 上海交通大学;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所【正文语种】中文【中图分类】R332关节炎在我国的总发生率约为13%，其中以骨关节炎(osteoarthritis，OA)为最常见，发生随年龄增加而上升。
不同换液体积和血清对黄牛孤雌胚体外发育的影响
不同换液体积和血清对黄牛孤雌胚体外发育的影响作者：吴曙限,李莉,孙世铎,乔宪凤,郑新民来源：《湖北农业科学》2011年第07期摘要：试验研究了牛胚胎体外培养过程中不同换液体积及血清灭活与否对黄牛孤雌胚胎体外发育潜力的影响，结果表明，以ＳＯＦａａ为基础培养液，在更换培养液体积１／２组与１／４组和３／４组之间的黄牛孤雌胚胎囊胚率有显著差异（Ｐ＜０．０５），分别为３８．８４％、２３．３９％和２１．７１％；不同处理的血清添加组的卵裂率、囊胚率和孵化囊胚率均无显著差异（Ｐ＞０．０５）。
关键词：牛；孤雌胚胎；体外培养中图分类号：Ｓ８２８．３＋６文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）07－1413-03ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＣｈａｎｇｉｎｇＭｅｄｉａＶｏｌｕｍｅａｎｄＦＢＳｏｎＴｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＢｏｖｉｎｅＰａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃＥｍｂｒｙｏｓ iｎＶｉｔｒｏＷＵＳｈｕ－ｘｉａｎ１，ＬＩＬｉ２，ＳＵＮＳｈｉ－ｄｕｏ１，ＱＩＡＯＸｉａｎ－ｆｅｎｇ２，ＺＨＥＮＧＸｉｎ－ｍｉｎ２（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Shaanxi，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙａｎｄＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＨｕｂｅｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅs／ＨｕｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｆＡｎｉｍａｌＥｍｂｒｙｏ＆ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇ，Ｗｕｈａｎ４３００６４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙａｉｍｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｈａｎｇｉｎｇｍｅｄｉａｖｏｌｕｍｅａｎｄｕｎ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｓｅｒｕｍｏｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｔｙｏｆｂｏｖｉｎｅｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃｅｍｂｒｙｏｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｒａｔｅｓｏｆ１／２ｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｏｆ１／４ａｎｄ３／４ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０５） when SOFaa was used as the basic medium， they were 38.84%， 23.39%， 21.71% respectivily．Ｔｈｅｃｌｅａｖａｇｅｒａｔｅｓａｎｄｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｒａｔｅｓｏｆｅｍｂｒｙｏｓｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄａｎｄｕｎ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｓｅｒｕｍｇｒｏｕｐｓ（Ｐ﹥０．０５）．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｏｖｉｎｅ；ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃｅｍｂｒｙｏ；ｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅ胚胎体外培养是一项相当复杂的工作，因为胚胎发育要经过早期卵裂、突破发育阻滞、桑椹胚、囊胚及孵化囊胚等阶段，影响因素较多［１］。
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ｗ ｅ ｒ ｅ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｓ ｕ ｂ ｃ ｕ ｈ ｕ ｒ ｅ ｄ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ． ①Ｆ ｌ ｏ ｗ ｃ ｙ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｙ ｒ ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ￣ｔ ｈ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ Ｃ Ｄ ２ ９ ， Ｃ Ｄ ３ ４， Ｃ Ｄ ２ ４ ， Ｃ Ｄ ９ ０ ， Ｃ Ｄ１ ０ ５
第 ３代传代 Ｎ Ｐ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ， ２周 以后 ， 用染 色剂对其染色 ， 观察其成脂 、 成骨、 成软骨能力 。④ 在 ３ ７ ｏ Ｃ、 ２ １ ％Ｏ ： 、 ５ ％Ｃ Ｏ ： 的细胞 培养
箱 中用不 同血清 体积 浓度 （ ０ ％、 ５ ％、 １ ０ ％、 ２ ０ ％、 ３ ０ ％） 的Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ— Ｆ １ ２血 清 培 养 液 培 养 第 ３代 传 代 Ｎ Ｐ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ， ７ ２ ｈ后 利 用 ｂ ｏ ｖ ｉ 来自 ｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｌ ｎ
ｎ ｇ Ｌ ｉ ａ ｎ ｇ， Ｚ ｈ ａ ｎ ｇⅣ
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中 国 现代 医 药 杂 志 ２ ０ １ ４年 ４月 第 １ ６卷 第 ４期 ＭＭ Ｊ Ｃ， Ａ ｐ ｒ ２ ０ １ ４， Ｖｏ ｌ １ ６ ，Ｎ ｏ ． ４
不 同体 积 浓 度 胎 牛血 清 对 大 鼠 髓核 间 充质 干 细 胞 生物 学特 性 的 影 响
宋 亮 张 宁 关 晓 明 陈 辉 马 迅
【 关键词 】 椎 间 盘退 变 髓 核 间充 质 干 细 胞 营 养 增殖 凋 亡
① 大鼠 Ｎ Ｐ ＭＳ Ｃ ｓ 具有间充质干细胞
Ｅｆ ｆｅ ｃ ｔ ｏｎ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈａ ｒ ａｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏｆ ｒ ａ ｔ ｎｕｃ ｌ ｅ ｕ ｓ ｐｕ ｌ ｐｏｓ ｕｓ ｍｅ ｓ ｅ ｎｃ ｈｙ ｍａ ｌ ｓ ｅｍ ｔ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕｎｄ ｅ ｒ ｄｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎｔ ｃ ｏ ｎｃ ｅ ｎｔ ｒ ａｔ ｉ ｏｎ ｆ ｅ ｔ ａｌ
Ｃ Ｃ Ｋ 一 ８ 法 检 测 细 胞 的增 殖 ， 并采用 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 细胞 蛋 白 多糖 、 Ⅱ型 胶原 、 Ｓ Ｏ Ｘ ９的 ｍ Ｒ Ｎ Ａ表 达 ， 借 助 流 式 细 胞 仪对 细胞 进
行细胞凋亡 的检测 。 结果
①大鼠Ｎ Ｐ ＭＳ Ｃ ｓ 的成骨 、 成软骨能力 强 ， 成脂能力较 差 ， 且其 细胞表面高度表达 Ｃ Ｄ ２ ９ 、 Ｃ Ｄ ９ ０ 、
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍ ｕ ｍ ｖ ｏ ｌ ｕ ｍ ｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｒ ｔ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｏ ｆ ｓ ｅ １ ３ １ ｍ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｔ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｕ ｓ ｍ ｅ ｓ —
Ｃ Ｄ１ ０ ５ ， 低 度表达 Ｃ Ｄ ２ ４ 、 Ｃ Ｄ ３ ４， 细胞 基 因 Ｓ ｏ ｘ ２ 、 Ｎ ａ ｎ ｏ ｇ高 度 表 达 。② 随 着 培 养 液 血 清 体 积 浓 度 增 加 ， Ｏ Ｄ值增 大 ， Ｎ Ｐ Ｍ．
Ｓ Ｃ ｓ 的凋亡率 降低 ， 细胞蛋 白多糖 、 Ⅱ型胶 原 、 Ｓ Ｏ Ｘ ９基 因的 ｍ Ｒ Ｎ Ａ表达增加 。结论 特性 ； ②细胞外营养影响大 鼠 Ｎ Ｐ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ 的增殖 、 分泌 、 凋亡 。
流式细胞仪对第 ３代传代 Ｎ Ｐ ＭＳ Ｃ ｓ 细胞表型 Ｃ Ｄ ２ ９ 、 Ｃ Ｄ ３ ４ 、 Ｃ Ｄ ２ ４ 、 Ｃ Ｄ ９ ０ 、 Ｃ Ｄ １ ０ ５进 行鉴定 ；②利 用普通 Ｐ Ｃ Ｒ鉴定体外 培养
的Ｎ Ｐ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ 细胞 基 因 Ｓ ｏ ｘ ２ 、 Ｎ ａ ｎ ｏ ｇ的表 达 ； ③在 ３ ７ ℃、 ２ １ ％Ｏ ： 、 ５ ％Ｃ Ｏ 的细胞培养箱中用成骨 、 成软骨 、 成 脂 培 养 液 诱 导 培养
ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｃ ｕ ｈ ｕ ｒ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ｌ ｕ ｍｂ ａ ｒ ａ ｎ ｄ ｃ ａ ｕ ｄ ａ ｌ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｓ Ｄ ｒ ａ ｔ ｓ ｂ ｙ Ｃ ｏ ｌ ｌ ａ ｇ ｅ ｎ ａ ｓ ｅ， ｔ ｒ ｙ ｐ ｓ ｉ ｎ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｔ ｉ ｌ ａ ｄ ｉ ｇ ｅ ｓ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ， ａ ｎ ｄ ｈｅ ｔ ｎ ｈｅ ｔ ｙ
【 摘要 】 目的
研 究 大 鼠髓 核 间充 质 干 细 胞 （ Ｎ Ｐ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ） 体 外 培 养 的最 佳 血 清 体 积 浓 度 并 探 讨 椎 间盘 退 变 的 机 制 。方
法
用胶原酶 、 胰酶序贯消化法从 ｓ Ｄ大鼠腰 部和尾部 的椎 问盘组织 中提取 Ｎ Ｐ Ｍ Ｓ Ｃ ｓ ， 并进行体外培养 ， 将其传代。① 利用