样本前期的处理和染色优秀课件
1、二甲苯作用较快，透明力强，但组织块在其中停留过久， 容易收缩变脆变硬
2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同，唯沸点较低， 透明较慢，但不会使组织变脆
3、苯的用法同于二甲苯，对组织的收缩作用小，但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。
4、氯仿适于大块组织的透明
注意事项
1、透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在5min 至15min，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过 1h为宜
2、材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱 水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状 说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好
3、使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态
浸蜡包埋
1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h，然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石
2min，二甲苯ⅠⅡ各15min） 9、封片镜检
几种常见的染色问题
脱蜡：
原因：①烤( 烘) 片温度
太低，脱蜡前没有充分烤 ( 烘) 干。 ②二甲苯脱蜡时 间不足， 或二甲苯使用过 久，造成脱蜡不尽。
对策：切片需退回到脱
蜡步骤，延长脱蜡时间， 或跟换二甲苯，重新染色。
切片中白色的区域脱蜡不彻底，染色液由 于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。
有较强的亲合力。
固定剂种类
单纯固定剂 ：10%甲醛、 4%多聚甲醛 、饱和的苦味酸溶 液 、冰醋酸 、锇酸
混合固定剂 ：Bouin氏固定液 、Zenker液（PH2.3）、 Carnoy液 、改良Bouin氏固定液
固定的目的
1、防止组织溶解及腐败，以保持组织和细胞与正常生活 时的形态相似
2、使细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变为不 溶性物质，以保持它原有的结构与生活时的相仿
4、切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一 般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2
固定
固定液的性质和条件 1、能迅速渗入组织，使组织细胞形态在短期内不至于有
较大变化 2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等
，可使组织内外完全固定 3、使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变 4、尽可能避免固定剂使组织膨胀或收缩 5、使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对染料具
补救办法： 1、无法弥补 2、增加浸蜡时间，重新包埋 3、无法补救 4、用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进行脱水和透明 5、在蜡块表面涂一薄层火棉胶溶液
展片和捞片
1、直接展片法：在载玻片上滴加几滴蒸馏水，然后把切片 铺在小滴上面，用酒精灯在载玻片下面加热，待完全展 平，倾斜载玻片，倒弃多余水分，同时摆正切片。
染色： 苏木素着色
原因：染色时间短；苏木 素过度氧化，失去染色能 力；分化时间过长。
苏木素染色太浅，细胞核 与细胞质颜色对比度差。
对策：切片重新染色。
原因：与图2相反核膜、核仁等不清晰， 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的 细胞核染色液苏木精， 导致细胞核与细胞 质比例失调。
2、固定时间视组织块的种类、性质、大小，固定液的种类 性质、渗透力的强弱，固定时的温度的高低，实验目的 等来决定
3、防止被固定的组织因固定剂的作用而发生变形 4、固定所用的固定液，以新配的为好，放置过久会失效 5、在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入，
对长期固定的标本，可经常更换固定液 6、固定时间太短，就会影响组织固定的效果时间太长，福
样本前期的处理和 染色
取材
注意事项
1、植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分 动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯 仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织
2、取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重 要，应该尽可能割取生活着的组织块，并投入固定液
3、切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤
蜡熔点3度
切片可能产生的问题及解决方法
切片厚薄不匀
原 因： 1、切片机有毛病 2、夹刀不当，刀的倾角太大 3、未旋紧标本台螺旋 4、石蜡块过硬
解决办 法 1．矫正切片机装置 2．对症治疗 3．旋紧螺旋 4．将石蜡块在水中浸泡
材料发生裂隙破碎或脱落
原 因： 1、脱水不干净 2、有透明剂残留 3、石蜡透入时，温度过高或时间过长 4、由于脱水剂和透明剂的影响，使组织变硬发脆 5、材料太硬或太粗
染色步骤
1、64℃烤片30min 2、脱蜡至水（二甲苯ⅠⅡ各15min，无水乙醇ⅠⅡ各5min
，90％、80％、70％乙醇各1min） 3、蒸馏水浸洗3min 4、苏木素染3min 5、盐酸酒精分化 6、自来水返蓝15min 7、伊红染色30min 8、脱水（70％、80％、90％乙醇各30s，无水乙醇ⅠⅡ各
3、组织细胞内的不同物质经固定后可以产生不同的折光 率，对染料也产生不同的亲和力，造成光学上的差异 ，使得在生活情况下原来看不清楚的结构变得清晰起 来，并使得细胞各部分容易着色，有利于区别不同的 组织成分
4、固定剂的硬化作用，增加组织硬度，便于制片
固定时应注意的事项
1、固定液及被固定的组织必须新鲜；固定液的用量一般为 组织体积的10~20倍
尔马林会产生一种酸，影响核的染色
脱水透明
标本经二甲苯透明后，折射率改变，透明度提高，使得染 上色的部位更清晰地显示出来。
步骤 流水冲洗4h→ 70％乙醇2h → 80 ％乙醇过夜→ 90 ％乙醇 2h→无水乙醇Ⅰ1h →无水乙醇Ⅱ1h →二甲苯Ⅰ15min →二 甲苯Ⅱ15min
较常用的透明剂是二甲苯、甲苯、苯、氯仿等
2、温水漂浮法：用恒温水浴箱，先使水温保持在42℃，使 切好的石蜡切片漂浮在温水中受热后及在表面张力的作 用会自然平整地展开，必要时可用眼科镊轻轻拔开，然 后捞片，并及时编号。
展好的切片放在64℃恒温烤箱中4h，烤干备用。
包埋模具
染色缸
切片盒 切片机
HE
苏木精 — 伊红染色法简称HE染色法 ，石蜡切片技术里 常用的染色法之一 。S苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内 的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ， 主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是 组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛 的技术方法。
2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同，唯沸点较低， 透明较慢，但不会使组织变脆
3、苯的用法同于二甲苯，对组织的收缩作用小，但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。
4、氯仿适于大块组织的透明
注意事项
1、透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在5min 至15min，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过 1h为宜
2、材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱 水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状 说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好
3、使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态
浸蜡包埋
1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h，然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石
2min，二甲苯ⅠⅡ各15min） 9、封片镜检
几种常见的染色问题
脱蜡：
原因：①烤( 烘) 片温度
太低，脱蜡前没有充分烤 ( 烘) 干。 ②二甲苯脱蜡时 间不足， 或二甲苯使用过 久，造成脱蜡不尽。
对策：切片需退回到脱
蜡步骤，延长脱蜡时间， 或跟换二甲苯，重新染色。
切片中白色的区域脱蜡不彻底，染色液由 于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。
有较强的亲合力。
固定剂种类
单纯固定剂 ：10%甲醛、 4%多聚甲醛 、饱和的苦味酸溶 液 、冰醋酸 、锇酸
混合固定剂 ：Bouin氏固定液 、Zenker液（PH2.3）、 Carnoy液 、改良Bouin氏固定液
固定的目的
1、防止组织溶解及腐败，以保持组织和细胞与正常生活 时的形态相似
2、使细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变为不 溶性物质，以保持它原有的结构与生活时的相仿
4、切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一 般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2
固定
固定液的性质和条件 1、能迅速渗入组织，使组织细胞形态在短期内不至于有
较大变化 2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等
，可使组织内外完全固定 3、使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变 4、尽可能避免固定剂使组织膨胀或收缩 5、使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对染料具
补救办法： 1、无法弥补 2、增加浸蜡时间，重新包埋 3、无法补救 4、用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进行脱水和透明 5、在蜡块表面涂一薄层火棉胶溶液
展片和捞片
1、直接展片法：在载玻片上滴加几滴蒸馏水，然后把切片 铺在小滴上面，用酒精灯在载玻片下面加热，待完全展 平，倾斜载玻片，倒弃多余水分，同时摆正切片。
染色： 苏木素着色
原因：染色时间短；苏木 素过度氧化，失去染色能 力；分化时间过长。
苏木素染色太浅，细胞核 与细胞质颜色对比度差。
对策：切片重新染色。
原因：与图2相反核膜、核仁等不清晰， 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的 细胞核染色液苏木精， 导致细胞核与细胞 质比例失调。
2、固定时间视组织块的种类、性质、大小，固定液的种类 性质、渗透力的强弱，固定时的温度的高低，实验目的 等来决定
3、防止被固定的组织因固定剂的作用而发生变形 4、固定所用的固定液，以新配的为好，放置过久会失效 5、在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入，
对长期固定的标本，可经常更换固定液 6、固定时间太短，就会影响组织固定的效果时间太长，福
样本前期的处理和 染色
取材
注意事项
1、植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分 动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯 仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织
2、取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重 要，应该尽可能割取生活着的组织块，并投入固定液
3、切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤
蜡熔点3度
切片可能产生的问题及解决方法
切片厚薄不匀
原 因： 1、切片机有毛病 2、夹刀不当，刀的倾角太大 3、未旋紧标本台螺旋 4、石蜡块过硬
解决办 法 1．矫正切片机装置 2．对症治疗 3．旋紧螺旋 4．将石蜡块在水中浸泡
材料发生裂隙破碎或脱落
原 因： 1、脱水不干净 2、有透明剂残留 3、石蜡透入时，温度过高或时间过长 4、由于脱水剂和透明剂的影响，使组织变硬发脆 5、材料太硬或太粗
染色步骤
1、64℃烤片30min 2、脱蜡至水（二甲苯ⅠⅡ各15min，无水乙醇ⅠⅡ各5min
，90％、80％、70％乙醇各1min） 3、蒸馏水浸洗3min 4、苏木素染3min 5、盐酸酒精分化 6、自来水返蓝15min 7、伊红染色30min 8、脱水（70％、80％、90％乙醇各30s，无水乙醇ⅠⅡ各
3、组织细胞内的不同物质经固定后可以产生不同的折光 率，对染料也产生不同的亲和力，造成光学上的差异 ，使得在生活情况下原来看不清楚的结构变得清晰起 来，并使得细胞各部分容易着色，有利于区别不同的 组织成分
4、固定剂的硬化作用，增加组织硬度，便于制片
固定时应注意的事项
1、固定液及被固定的组织必须新鲜；固定液的用量一般为 组织体积的10~20倍
尔马林会产生一种酸，影响核的染色
脱水透明
标本经二甲苯透明后，折射率改变，透明度提高，使得染 上色的部位更清晰地显示出来。
步骤 流水冲洗4h→ 70％乙醇2h → 80 ％乙醇过夜→ 90 ％乙醇 2h→无水乙醇Ⅰ1h →无水乙醇Ⅱ1h →二甲苯Ⅰ15min →二 甲苯Ⅱ15min
较常用的透明剂是二甲苯、甲苯、苯、氯仿等
2、温水漂浮法：用恒温水浴箱，先使水温保持在42℃，使 切好的石蜡切片漂浮在温水中受热后及在表面张力的作 用会自然平整地展开，必要时可用眼科镊轻轻拔开，然 后捞片，并及时编号。
展好的切片放在64℃恒温烤箱中4h，烤干备用。
包埋模具
染色缸
切片盒 切片机
HE
苏木精 — 伊红染色法简称HE染色法 ，石蜡切片技术里 常用的染色法之一 。S苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内 的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ， 主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是 组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛 的技术方法。
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样品前处理技术讲座.ppt
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二、样品的制备和分解要求 固体样品转化为液体样品过程中虽带来 了问题，但溶液进样仍具有许多突出的 优点，所以目前仍然为极大多数实验室 所采用。 固体样品经化学方法处理成液体样品应 注意以下几点： 1）称取的固体样品应该是按规定的要 求加工的（如粉碎、分样等），是均匀 有代表性的；
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2）样品中需要测定的被测元素应该完 全溶入溶液中（样品是否“全溶”可根 据需要来定）。设定一个合理、环节少、 易于掌握、适用于处理大量样品的化学 处理方法。 3）在应用化学方法处理时，根据需要 可将被测元素进行伏击分离，分离的目 的是将干扰被测元素测定的基体和其他 元素予以分离以提高测定准确度。必须 考虑的前提是“被测元素必须富集完全， 不能有损失，而分离的组分。不必分离
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于是就发展了很多的科学技术来检测我 们的食品、环境和自身的健康、而原子 吸收光谱法、原子荧光分析、等离子体 发射光谱法则是人们在检验和监测中最 常用的方法之一。随着科学技术的发展， 现代分析手段也越来越向着高效率、高 精密度、高准确性、高自动化的方向发 展，样品的分析时间基本在20—30min， 痕量样品的检测可达10-9—10-12μg，但 是在实验前的样品前处理却存在不少问 题。
20பைடு நூலகம்
2）样品加工 样品加工应将从现场取得的原始样品进 行破碎（研磨）、过筛、缩分和混匀， 进行逐级破碎，逐级缩分混匀至需要的 粒度，得到少量均匀的有代表性的分析 用样品。破碎、过筛过程中的污染问题， 常用破碎机等设备及筛网等都是由金属 制成。这对需要测定样品中微量元素时 引入污染问题。采用玛瑙、刚玉、陶瓷 等的破碎设备及尼龙网筛来解决粉碎进 程中污染问题。
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样品前处理常规技术PPT课件
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第20页/共30页
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第21页/共30页
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第22页/共30页
微滴萃取
• 1996年Jeannot等提出的液相微萃取(LPME)是一种 建立在悬挂于微进样器针端有机溶剂微滴基础之上的 新型试样前处理技术，它是微型化的LLE，结合了LLE 和SPME的优点并可以根据不同的分析仪器选择合适 的萃取体积，极大的满足了色谱仪器的检测要求，填 补了SPME在应用领域上的很多空白。
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第6页/共30页
1.压杆 2．筒体 3．压杆卡持螺钉 4.Z形槽 5.简体视窗 6．调节针头长度的定位器 7.拉伸弹簧 8.密封隔膜 9．注射针管 10.纤维联结管 11．熔融石英纤维
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萃取模式的选择 直接SPME模式 顶空SPME模式
通过装在注射器内石英纤维萃取 头表面的高分子涂层，对样品中的有 机物进行选择性萃取和预富集，然后 将富集了分析物的涂层立即插入气相 色谱进样口热解吸进样。
• 超临界流体是介于气液之间的一种既非气态又非液态的物态．它只 能在物质的温度和压力超过临界点时才能存在。
• 超临界流体的密度较大，与液体相仿．所以它与溶质分子的作用力 很强，像大多数液体一样，很容易溶解其他物质。另一方面，它的 粘度较小，接近于气体，所以传质速率很高；加上表面张力小，容 易渗透固体颗粒，并保持较大的流速，可使萃取过程在高效、快速 又经济的条件下完成。
• 二氧化碳与氨。
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四. 液膜萃取和微滴萃取分离法
• 由浸透了与水互不相溶的有机溶剂的多孔聚四氟乙烯薄膜把水 溶液分隔成两相—萃取相与被萃取相；其中与流动的试样水溶 液系统相连的相为被萃取相，静止不动的相为萃取相。试样水 溶液的离子流入被萃取相与其中加入的某些试剂形成中性分子 (处于活化态)。这种中性分子通过扩散溶人吸附在多孔聚四氟 乙烯上的有机液膜中，再进一步扩散进入萃取相，一旦进入萃 取相，中性分子受萃取相中化学条件的影响又分解为离子(处 于非活化态)而无法再返回液膜中去。其结果使被萃取相中的 物质——离子通过液膜进入萃取相中。
气相色谱法样品前处理 PPT
采样的一般方法
❖ (1)随机抽样:均衡地、不加选择地从全部产品的各个部 分取样。但随机≠随意,而是要保证所有物料各个部分被 抽到的估计性均等。
❖ (2)代表性抽样:可按不同生产日期、也可在流水线上按 一定的时间间隔抽样、按分析的目的取样等。
❖ 总之要依照测定的目的而定采样方法。
样品保存
❖ 保存的注意事项: ❖ (1)防止外来污染,幸免容器壁对被测组分的吸附和易挥发组分的挥
2、1 样品采集前的准备
确定样品采集前要考虑以下6方面的问题和影响因素:
❖ 采样区域和采样点的确定 ❖ 样品种类 ❖ 样品的大致浓度范围 ❖ 基体的种类及其均匀程度 ❖ 所用分析方法的特别要求 ❖ 采样时应依照不同样品选择采样器皿
采样区域和采样点的确定
环境样品必须能够反映污染物对环境污染和生态影响 的真实情况,即采集的样品要具有代表性。采样之前 要依照样品测试的总体要求选定采样区域,综合考虑 采样区域的历史演变、地理情况、气候特点、环境生 态特征、工农业发展状况、污染历史、特定污染物排 放情况等因素。
样品采集
2、采样次数(Sampling times) :由于底质比较稳 定,受水文、气象条件影响 较小,一般每年枯水期(Low water period)采样1次,必要 时可在丰水期(High flow period)增采1次。
样品采集
3、采样量:视监测项目、 目的而定,一般为1— 2kg 。
样品采集
映水质状况。 2、在实验室分析之前水样中待测成分保
持 不变。
水样的采集
盛装水样容器的选择原则 可用硼硅玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶或桶,必须能用塞或 盖紧紧密封。具体要求:
1、容器不能是新的污染源。从塑料可溶出增塑剂、未 聚合的单体等,而玻璃器皿可溶出硼、硅、钙、镁等。 因此测金属的水样多选用聚乙烯塑料瓶。测有机物 的水样一般只能用玻璃瓶。
样品前处理技术及应用课件
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3 国际上前处理技术发展
80年代中后期，国际上针对传统萃取技术的 不足，发展了固相萃取（SPE）技术和超临界流 体萃取技术(SFE) ；
90年代以来，又出现了固相微萃取技术（ SPME）、液相微萃取（LPME）、基质固相分 散萃取技术（MSPDE）、免疫亲和色谱技术（ IAC)等新的萃取技术。
样品前处理技术及应用课件
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二、样品提取技术理论
提取是一个复杂的过程，是被测组分、样品 基质和提取溶剂（或固体吸附剂）三者之间的相 互作用与达到平衡的过程。常用的有液-液萃取 ，液-固萃取，柱色谱萃取等。
样品前处理技术及应用课件
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1 液-液萃取(LLE)
1.1 定义：液-液萃取 ---- 利用被测物质在两种互
不相溶液体中分配系数不同，从一种溶液中转 移到另一种溶液中。
分析或进一步处理。 洗脱溶剂应满足： A:必须有足够的强度，以最小用量将分析物洗 脱下来； B:必须有足够的选择性，尽可能只将分析物洗 脱，而将吸附力强的杂质留在柱上。
样品前处理技术及应用课件
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1.5 固相萃取分离模式
固相萃取分离模式与液相色谱相同 （1）正相（ 吸附剂极性大于洗脱液极性） （2）反相（吸附剂极性小于洗脱液极性） （3）离子交换
样品前处理技术及应用课件
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（1） 正相萃取
用极性吸附剂萃取极性物质。在正相萃取时目标 化合物是否能够保留在吸附剂上，取决于目标化 合物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之 间相互作用。包括氢键、π—π键、偶极－偶极、 偶极－诱导偶极相互作用以及其他的极性－极性 作用。
正相固相萃取可以从非极性溶剂样品中萃取极性 化合物。
（2）连续萃取--是将样品和溶剂在连续萃取仪 器中自动混合，由于连续操作，可减少乳化现
《样本前分析前处理》PPT课件
1.
2.
3.
尿液标本（一般在2小时内送检）
晨尿：该标本较为浓缩，主要用于肾脏浓缩能力评价，尿沉渣检查取晨尿， （职称考点） 随机尿：不受时间限制，主要是门诊病人。（） 计时尿：3小时尿（6：00-9：00）时段内的尿液--尿有形成分检查；餐后尿： （午餐后至14：00的尿标本）---病理性糖尿，蛋白尿以及尿胆原；24小时尿： 上午8：00排尿将膀胱排空，弃去，此后收集各次排出的尿，，直至次日上午8： 00最后一次排尿的全部尿。（因为尿中某些成分各个时间段内排泄浓度不同， 如肌酐、蛋白以及电解质等）。 如需加防腐剂：应在收集第一次尿液时加入适当的防腐剂。
• 种种这些因素都要控制好， • 另外，采集时间
• 血液标本最具代表性的采集时间：一般晨起空腹，可以减少饮食和昼夜节律 对检测指标的影响。且现在的生物参考区间多基于健康的空腹条件下建立的；
特殊的采集时间
即指定采集时间的标本，根据不同的检测要求有不同的指定时间，尿液早孕试 验应在怀孕35天后送检标本；细菌培养应可能在高热、寒战、抗生素使用前采 集标本；药物监测应根据药物峰值效应，在药物分布期结束后采集标本，如在 药物输液结束后2-4小时进行，而DIG、洋地黄毒佄在输液6-8小时进行。
2.综合报道称:分析前阶段所用的时间占全部时间的57.3％， 发生在分析前的误差占总误差的70％，所以说即使你检验做的精密度非常好， 准确度非常好，也是意义不大。
分析前阶段
按照时间顺序自医生申请至分析检验启动的过程，包括检验申请、患者准备和 识别、原始样品采集、运送和实验室内传递等都属于实验室内传递。
• 黑色盖:枸橼酸钠与血液比例是1：4，适用于血沉检查。 • 蓝色盖:枸橼酸钠与血液比例是1：9，适用于凝血检查。 • 灰色头盖：草酸钾及氟化钠，氟化钠是一种弱抗凝剂，抑制糖酵解。适合血
样本前期处理及HE染色-赵恒教材
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固定
固定液的性质和条件 1、能迅速渗入组织，使组织细胞形态在短期内不至于有 较大变化 2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等 ，可使组织内外完全固定
3、使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变
4、尽可能避免固定剂使组织膨胀或收缩
5、使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对染料具 有较强的亲合力。
2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同，唯沸点较低， 透明较慢，但不会使组织变脆 3、苯的用法同于二甲苯，对组织的收缩作用小，但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。 4、氯仿适于大块组织的透明
注意事项
1、透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在5min 至15min，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过 1h为宜
2、材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱 水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状 说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好 3、使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态
浸蜡包埋
1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h，然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石 蜡熔点3度
固定剂种类
单纯固定剂 ：10%甲醛、 4%多聚甲醛 、饱和的苦味酸溶
液 、冰醋酸 、锇酸 混合固定剂 ：Bouin氏固定液 、Zenker液（PH2.3）、 Carnoy液 、改良Bouin氏固定液
固定的目的 1、防止组织溶解及腐败，以保持组织和细胞与正常生活 时的形态相似
2、使细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变为不 溶性物质，以保持它原有的结构与生活时的相仿
封片：
原因：切片经梯度乙醇处理后没
有完全脱水， 导致二甲苯透明中 性树胶封固后残留大量水分。也可 能是封片的时候出现的气泡。
固定
固定液的性质和条件 1、能迅速渗入组织，使组织细胞形态在短期内不至于有 较大变化 2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等 ，可使组织内外完全固定
3、使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变
4、尽可能避免固定剂使组织膨胀或收缩
5、使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对染料具 有较强的亲合力。
2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同，唯沸点较低， 透明较慢，但不会使组织变脆 3、苯的用法同于二甲苯，对组织的收缩作用小，但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。 4、氯仿适于大块组织的透明
注意事项
1、透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在5min 至15min，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过 1h为宜
2、材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱 水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状 说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好 3、使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态
浸蜡包埋
1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h，然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石 蜡熔点3度
固定剂种类
单纯固定剂 ：10%甲醛、 4%多聚甲醛 、饱和的苦味酸溶
液 、冰醋酸 、锇酸 混合固定剂 ：Bouin氏固定液 、Zenker液（PH2.3）、 Carnoy液 、改良Bouin氏固定液
固定的目的 1、防止组织溶解及腐败，以保持组织和细胞与正常生活 时的形态相似
2、使细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变为不 溶性物质，以保持它原有的结构与生活时的相仿
封片：
原因：切片经梯度乙醇处理后没
有完全脱水， 导致二甲苯透明中 性树胶封固后残留大量水分。也可 能是封片的时候出现的气泡。
(完整)样本前期处理及HE染色赵恒精品PPT资料精品PPT资料
对策：适当稀释伊红染色液，减少伊红染色时间，或者使切片在乙醇脱水等步骤时，停留时间相对均匀。
3、蒸馏水浸洗3min 细胞核过染， 核膜、核仁等不清晰， 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的细胞核染色液苏木精， 导致细胞核与细胞质比例失调
。 苏木素染色太浅，细胞核与细胞质颜色对比度差。
4、苏木素染3min 4、固定所用的固定液，以新配的为好，放置过久会失效 5、盐酸酒精分化 组织体积的10~20倍
2、材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱 水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状 说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好
3、使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态
浸蜡包埋
1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h，然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石
1、二甲苯作用较快，透明力强，但组织块在其中停留过久， 容易收缩变脆变硬
2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同，唯沸点较低， 透明较慢，但不会使组织变脆
3、苯的用法同于二甲苯，对组织的收缩作用小，但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。
4、氯仿适于大块组织的透明
注意事项
1、透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在5min 至15min，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过 1h为宜
HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
6、自来水返蓝 4．将石蜡块在水中浸泡 15min 脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长， 因为含水多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。 1C、arn植o物y液材、料改选良择78B时、、ou须in尽伊脱氏可固能红水定不液损染（伤植色7物0体％3或0所m、需i要n8的0％部分、90％乙醇各30s，无水乙醇ⅠⅡ各
3、蒸馏水浸洗3min 细胞核过染， 核膜、核仁等不清晰， 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的细胞核染色液苏木精， 导致细胞核与细胞质比例失调
。 苏木素染色太浅，细胞核与细胞质颜色对比度差。
4、苏木素染3min 4、固定所用的固定液，以新配的为好，放置过久会失效 5、盐酸酒精分化 组织体积的10~20倍
2、材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱 水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状 说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好
3、使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态
浸蜡包埋
1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h，然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石
1、二甲苯作用较快，透明力强，但组织块在其中停留过久， 容易收缩变脆变硬
2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同，唯沸点较低， 透明较慢，但不会使组织变脆
3、苯的用法同于二甲苯，对组织的收缩作用小，但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。
4、氯仿适于大块组织的透明
注意事项
1、透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在5min 至15min，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过 1h为宜
HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
6、自来水返蓝 4．将石蜡块在水中浸泡 15min 脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长， 因为含水多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。 1C、arn植o物y液材、料改选良择78B时、、ou须in尽伊脱氏可固能红水定不液损染（伤植色7物0体％3或0所m、需i要n8的0％部分、90％乙醇各30s，无水乙醇ⅠⅡ各