黄花乌头多糖对TGF-β诱导内皮间质转化的保护作用及机制研究

关键 词：黄 花 乌 头 多 糖；ＴＧＦβ；人 脐 静 脉 内 皮 细 胞；内 皮 间 质转化；保护作用；机制
内皮间质转化 （ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉ ｔｉｏｎ，ＥｎｄＭＴ）是内皮细胞在特殊生理或病理条件下 失去内皮细胞特征，表达间质细胞特征的过程，属于 上 皮 间 质 转 化 （ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，
ＥＭＴ）的一种。其主要特性是细胞骨架发生变化，内 皮细胞间黏附力逐渐降低直至失去，内皮细胞标志 蛋白减少，间质细胞标志蛋白及纤维细胞特异性蛋 白增多［１］。近 年 来，越 来 越 多 的 研 究 表 明，多 种 疾 病的发生、发展进程都涉及到 ＥｎｄＭＴ，如动脉粥样 硬化［２］、心肌 纤 维 化［３］、肺 动 脉 高 血 压［４］等 各 种 心 血管疾病。因此，寻找以 ＥｎｄＭＴ为靶点的天然药物 具有非常重要的意义。 黄花乌头［Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｃｏｒｅａｎｕｍ （Ｈ．Ｌéｖ．）Ｒａｉｐａ ｉｃｓ］是毛茛科乌头属植物，块根入药，中药名为关白 附、白附子、竹节白附，具有祛风痰、逐寒湿、止痛的 功效［５］。２０世纪 ６０年代至今，黄花乌头的有效成 分分离及药理研究主要集中在生物碱如盐酸关附甲 素方面 ［６－７］，关于 其 多 糖 成 分 的 研 究 很 少。 本 课 题 组首次从黄花乌头中分离并鉴定出 １种均一多糖 （Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｃｏｒｅａｎｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＡＣＰ），其 结 构 见 Ｆｉｇ１Ａ。并且已验证 ＡＣＰ在脂多糖诱导的巨噬 细胞 ＲＡＷ 炎症模型中，可通过 ＮＦκＢ信号途径剂 量依赖性地抑制炎症因子 ＴＮＦα、ＩＬ１β、ｉＮＯＳ和 ＩＬ ６的表达［８］。本 研 究 拟 通 过 建 立 转 化 生 长 因 子β （ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ，ＴＧＦβ）诱导人脐静脉 内皮细胞（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ，ＨＵ ＶＥＣ）ＥｎｄＭＴ模型，观察 ＡＣＰ抑制 ＥｎｄＭＴ的作用及 相关机制。 １ 材料 １．１ 细 胞 系 ＨＵＶＥＣ购 自 ＡＴＣＣ（ＡＴＣＣＣＲＬ １７３０ＴＭ）。 １．２ 药物与试剂 黄花乌头药材（批号：１５０９１０），购 于上海康桥中药饮片有限公司；ＡＣＰ为本课题组自 制。ＴＧＦβ购于 Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司；内皮细胞生长因子 （ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，ＥＣＧＳ）购于 Ｓｃｉｅｎ ｃｅｌｌ公司；肝素购于 Ｂｉｏｓｈａｒｐ公司；ＲＩＰＡ、ＰＭＳＦ，购于 上海威奥生物科技有限公司；ＣＤ３１抗体（ａｂ６４５４３）购 自 Ａｂｃａｍ 公 司；α平 滑 肌 肌 动 蛋 白 （ａｌｐｈａｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ，αＳＭＡ）抗体（２３０８１１ＡＰ）购自 Ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｅｃｈ公 司；Ｓｍａｄ２ 抗 体 （Ｄ４３Ｂ４）、ｐＳｍａｄ２ 抗 体 （Ｄ２７Ｆ４）、Ｓｍａｄ３抗 体、ｐＳｍａｄ３抗 体 （Ｃ２５Ａ９），均 购
收稿日期：２０１８－０３－１７，修回日期：２０１８－０４－２０ 基金项目：上海市卫生局课题（Ｎｏ２０１４４Ｙ０１５２）；上海市教委预算内
课题（Ｎｏ２０１５ＹＳＮ２５）；上 海 中 医 药 大 学 杏 林 青 年 人 才 培 养资助计划 作者简介：李亚青（１９９３－），女，硕士生，研究方向：中药活性成分筛 选，Ｅｍａｉｌ：２５４４３２９９２４＠ｑｑ．ｃｏｍ； 可 燕（１９６９－），女，博士，教授，硕士生导师，研究方向： 中药活性成 分 筛 选，通 讯 作 者，Ｔｅｌ：０２１５１３２２５３９，Ｅｍａｉｌ： ｋｅｙａｎｔｃｍ＠１６３．ｃｏｍ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
黄花乌头多糖对 ＴＧＦβ诱导内皮间质转化的 保护作用及机制研究
李亚青，可 燕，蒋嘉烨，李汉清，刘佳琪，栗 源，干仲元
（上海中医药大学教学实验中心，上海 ２０１２０３）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１８．０７．０１８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１８）０７－０９８３－０５ 中国图书分类号：Ｒ２８４１；Ｒ３２２１２３；Ｒ３２９２４；Ｒ５４；Ｒ９７７６ 摘要：目的 研 究 黄 花 乌 头 多 糖 （ＡＣＰ）对 转 化 生 长 因 子β （ＴＧＦβ）诱导内皮间质转 化 的 保 护 作 用 及 相 关 机 制。 方 法 采用 ＴＧＦβ（１０μｇ·Ｌ－１）孵育 ７２ｈ诱导人脐静脉内皮细 胞 （ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＨＵＶＥＣｓ）建 立 内 皮间 质 转 化 （ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥｎｄＭＴ）模 型。观察 浓 度 为 ５０、１００、２００ｍｇ· Ｌ－１ＡＣＰ对 ＴＧＦβ诱 导 ＨＵＶＥＣＥｎｄＭＴ的保护作用。ＣＣＫ８法检测不同浓度 ＡＣＰ 对 ＨＵＶＥＣ增殖毒性的影响；划痕实验检测 ＨＵＶＥＣ迁移能 力变 化；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ观 察 各 实 验 组 内 皮 特 异 性 标 志 物 ＣＤ３１、间 质 细 胞 特 异 性 标 志 物 αＳＭＡ，以 及 Ｓｍａｄ２／３、ｐ Ｓｍａｄ２／３的蛋白表达情况。结果 ＣＣＫ８实验结果显示，与 空白对照组相比，不同浓度 ＡＣＰ在干预 ＨＵＶＥＣ３６ｈ后，细 胞活性明显增 加 （Ｐ＜００５）；划 痕 实 验 显 示，ＴＧＦβ可 诱 导 ＨＵＶＥＣ迁移能力明显增强（Ｐ＜００５），而 ＡＣＰ可明显逆转 这种现象（Ｐ＜００５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示，ＨＵＶＥＣ经 ＡＣＰ与 ＴＧＦβ共同孵育后，αＳＭＡ蛋白及 Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３磷酸化水 平相比于模型组 明 显 下 降 （Ｐ＜００５），ＣＤ３１蛋 白 表 达 水 平 相比于模型组明 显 增 加 （Ｐ＜００５）。结 论 ＡＣＰ能 有 效 抑 制 ＴＧＦβ诱 导 的 内 皮 间 质 转 化，其 机 制 可 能 通 过 调 控 Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３的磷酸化激活实现。
中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０１８Ｊｕｌ；３４（７）：９８３～７
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