丹龙醒脑方促进脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞增殖与β-catenin、Wnt3a表达及其机制的研究
珍龙醒脑胶囊对小鼠脑缺氧及脑缺血再灌注损伤的保护作用
珍龙醒脑胶囊对小鼠脑缺氧及脑缺血再灌注损伤的保护作用高伟;张会鲜;孙建云;焦波【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2012(032)022【摘要】目的探讨珍龙醒脑胶囊对脑缺氧、脑缺血再灌注损伤小鼠的影响.方法采用常压密封法、断头法分别测定脑缺氧小鼠的喘息时间；结扎双侧颈总动脉复制脑缺血再灌注模型,观察珍龙醒脑胶囊对缺血再灌注小鼠脑含水量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性的影响.结果与模型组比较,珍龙醒脑高剂量(400 mg/kg)能明显延长缺氧小鼠的存活时间；高、中剂量(400、200 mg/kg)能明显延长断头小鼠喘息时间,降低缺血再灌注小鼠脑含水量、MDA含量,升高SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2-ATP酶的活力.结论珍龙醒脑胶囊对脑缺氧、脑缺血再灌注小鼠具有良好的保护作用,其机制与增加脑组织ATP酶活性、抑制脂质过氧化反应和减轻自由基损伤有关.【总页数】3页(P4958-4960)【作者】高伟;张会鲜;孙建云;焦波【作者单位】山东大学药学院药理教研室,山东济南250012;山东大学药学院药理教研室,山东济南250012;山东大学药学院药理教研室,山东济南250012;山东大学药学院药理教研室,山东济南250012【正文语种】中文【中图分类】R743【相关文献】1.珍龙醒脑胶囊对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究 [J], 闫滨;房娟娟;李丽2.醒脑通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用 [J], 张青萍;谭璐璐;秦若飞;黄小琪;刘泰3.珍龙醒脑胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl－2、Caspase－3蛋白表达的影响 [J], 项颖卿;涂长春;章国良4.芎龙胶囊对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制 [J], 刘秀梅;张丁华;杨庆宇5.川蛭通络胶囊对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 [J], 杨海燕;李彦;孔咏梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丹龙醒脑方对血管性痴呆大鼠Notch信号通路及其下游靶基因的干预作用研究
丹龙醒脑方对血管性痴呆大鼠Notch信号通路及其下游靶基因的干预作用研究曾逸笛;周小青;李金霞;郑彩杏;赖丽娜;李琳【期刊名称】《中医学》【年(卷),期】2022(11)4【摘要】目的:多层次地阐明丹龙醒脑方对血管性痴呆大鼠各指标的干预结果,从Notch信号通路及其下游靶基因角度探讨丹龙醒脑方治疗血管性痴呆(Vascular Dementia, VD)的作用机制。
方法:60只大鼠通过改良双侧颈总动脉永久阻断法(2-VO)加去势手术法制备VD大鼠模型。
将成模大鼠均分为四个大组,即模型组、阳性药物组、DAPT组、丹龙醒脑方组。
分别运用干预措施后,光镜下观察HE染色的大鼠海马组织形态学变化,检测给药干预后大鼠血清T水平,及NO和ET-1水平。
统计大鼠海马区、皮质区样本增殖活性细胞免疫荧光染色双阳性细胞数,使用免疫组织化学法、Western Blot法定性、定量检测VD大鼠海马组织Notch1、Hes1蛋白表达。
结果:干预后各大组大鼠海马组织出现一定变化,与模型组比较,阳性药物组、丹龙醒脑方组T、NO水平均有明显上升,ET-1水平有明显下降(P < 0.01, P < 0.05);与模型组比较,阳性药物组、丹龙醒脑方组大鼠海马区双阳性细胞数均有明显上升(P < 0.01, P < 0.05);假手术组与DAPT组海马区可见Notch1、Hes1蛋白少许表达,模型组表达增强,丹龙醒脑方组、阳性药物组蛋白表达明显增强。
结论:丹龙醒脑方能显著改善VD大鼠的学习能力、记忆能力、空间探索能力及脑组织病理损伤;丹龙醒脑方能通过积极调控VD大鼠Notch信号通路及其下游靶基因Hes1的表达,促进了神经干细胞的增殖、分化,从而发挥对VD大鼠的治疗作用。
【总页数】10页(P581-590)【作者】曾逸笛;周小青;李金霞;郑彩杏;赖丽娜;李琳【作者单位】湖南中医药大学长沙;湖南中医药大学中医诊断学科长沙;中医诊断学湖南省重点实验室长沙【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.丹龙醒脑方对老年肾虚血管性痴呆大鼠海马受体mRNA的影响与雌激素的比较2.丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠海马区Notch信号通路相关蛋白表达的影响3.醒脑解郁方对卒中后抑郁大鼠海马组织中Notch/Hes信号通路功能的影响4.温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织Nrf2-ARE信号通路的影响5.温肾醒脑方干预对血管性痴呆大鼠Nrf2-HO-1/NQO1信号通路的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丹星通络汤对脑缺血再灌注大鼠神经生长因子表达的影响
丹星通络汤对脑缺血再灌注大鼠神经生长因子表达的影响张巾;董幼溪;刘耘【期刊名称】《实用老年医学》【年(卷),期】2012(026)001【摘要】目的观察丹星通络汤( DXTLD)治疗脑缺血再灌注大鼠后脑组织神经生长因子(NGF)的变化,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护机制. 方法 SD大鼠40只随机分为5组(n=8):假手术组、缺血再灌注组(模型组)、尼莫地平组、DXTLD预处理小剂量组、DXTLD预处理大剂量组.线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.应用免疫组织化学染色、灰度分析等方法检测缺血2h再灌注24 h后脑组织海马区NGF的表达. 结果各治疗组缺血侧海马区的NGF表达显著增加,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 DXTLD通过上调脑缺血再灌注损伤后脑组织内NGF的表达,起到保护脑的作用.%Objective To observe the changes of nerve growth factor ( NGF) in rat brain after cerebral ischemial reperfusion, and to investigate the effects of Danxingtongluo decoction ( DXTLD) on cerebral ischemial reperfusion damage. Methods Forty Sprague Dawley rats weighing 220-250 g were randomly divided into five groups(n =8) ;sham operation group,ischemia-reperfusion( I/R) model group, nimodipine treatment group with lose, high dose of DXTLD treatment group. By to the suture method, a middle cerebral artery ischemic reperfusion model was established in rat brain. The expression of NGF was detected by immunohistochemistry and grayscale analysis, after 2 hours of cerebral ischemia followed by 24 hours of reperfusion. ResultsThe expression of NGF protein in hippocampus of ischemia side increased significantly in treatment group than that in model group ( P <0. 05 or P < 0. 01) . Conclusions DXTLD could up-regulate the expression of NGF in brain suffering from cerebral ischemial reperfusion damage. It may be one of the protective mechanisms of DXTLD.【总页数】3页(P68-70)【作者】张巾;董幼溪;刘耘【作者单位】116023 辽宁省大连市,大连医科大学附属第二医院中医科;116023 辽宁省大连市,大连医科大学附属第二医院中医科;116023 辽宁省大连市,大连医科大学附属第二医院中医科【正文语种】中文【中图分类】R743【相关文献】1.丹星通络汤对脑缺血再灌注损伤大鼠热休克蛋白70表达的影响 [J], 刘耘;史佳巍;袁翔宇2.大剂量丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 马春华;刘耘;穆春晓3.丹星通络汤治疗大鼠脑缺血再灌注Bax蛋白表达的影响 [J], 董幼溪;张巾;刘耘4.丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究 [J], 孙晓霞5.丹星通络汤对脑缺血再灌注大鼠Caspase-3表达的影响 [J], 史佳巍;刘耘;袁翔宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖与c—myc、c—jun表达的影响
丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖与c—myc、c—jun表达的影响目的探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注大鼠侧脑室室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）增殖与c-myc、c-jun表达的关系。
方法采用线栓法制备大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型。
150只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丹龙醒脑方小、中、大剂量组。
于再灌注24 h后，丹龙醒脑方各剂量组予相应剂量药液灌胃，模型组和假手术组予等体积蒸馏水灌胃。
1次/d，连续7 d。
再灌注1、3、7 d采用m-NSS法进行神经功能缺损评分，再灌注7 d取缺血侧SVZ脑组织，采用Brdu免疫组化检测NSCs增殖，RT-qPCR、Western blot 分别检测c-jun、c-myc mRNA和蛋白的表达。
结果与假手术组比较，其余各组神经功能缺损评分明显升高（P＜0.01）；再灌注3、7 d，与模型组比较，丹龙醒脑方各剂量组神经功能缺损评分明显降低（P＜0.01）。
与假手术组比较，其余各组Brdu阳性细胞率明显升高；与模型组比较，丹龙醒脑方各剂量组Brdu阳性细胞率亦明显升高（P＜0.01）。
丹龙醒脑方各剂量组较假手术组、模型组c-jun、c-myc 蛋白及mRNA表达均明显增强（P＜0.05，P＜0.01）。
结论丹龙醒脑方能改善脑缺血后神经功能，促进SVZ NSCs增殖，其机制可能与增强c-jun和c-myc表达及延长表达持续时间有关。
Abstract：Objective To study the relationship of proliferation of neural stem cells （NSCs）in SVZ and the expressions of c-jun and c-myc in rats with middle cerebral artery occlusion/reperfusion （MCAO/R）injury model administrated by Danlong Xingnao Formula. Methods The focal cerebral ischemia reperfusion injury models were prepared by longa method. Totally 150 male SD rats were randomly divided into sham-operation group，cerebral model group，Danlong Xingnao Formula low-，medium-，and high-dose groups. The treatment groups were given corresponding dose of Danlong Xingnao Formula，while the sham-operation group and model group were given the same amount of distilled water 24 h after modeling by gavage，once a day，7 days in a row. 1 d，3 d and 7 d after reperfusion，modified Neurological Severity Scores （m-NSS）was used to grade neurologic impairment. 7 d afterreperfusion taken to the SVZ brain tissue of ischemia side，Brdu immunohistochemical method was used to record the BrdU positive cells number. The hippocampal c-jun，c-myc mRNA and protein expressions were determined respectively by RT-qPCR method and Western blot method. Results Grades of neurologic impairment in others groups were improved obviously than sham-operation group （P＜0.01）；3 d，and 7 d after reperfusion，grades of neurologic impairment in Danlong Xingnao Formula groups were obviously lower compared with model group （P＜0.05，P＜0.01）. Brdu positive cell rates in others groups increased obviously compared with sham-operation group；Compared with model group，Brdu positive cell rates in Danlong Xingnao Formula groups increasedobviously （P＜0.01）. The expressions of c-jun and c-myc protein and mRNA in Danlong Xingnao Formula groups improved obviously than sham-operation group and model group （P＜0.01）. Conclusion Danlong Xingnao Formula can improve the neural function after cerebral ischemia and stimulate the proliferation of NSCs，and the mechanism may be related to activating the expression of c-jun and c-myc and extending the duration.Key words：Danlong Xingnao Formula；cerebral ischemia reperfusion；SVZ；proliferation of NSCs；c-jun expression；c-myc expression；rats脑血管疾病发生后的主要病理变化为神经元大量丢失导致脑功能缺失。
丹龙醒脑方对局灶性脑缺血大鼠CA1区Nestin和GFAP表达的影响
丹龙醒脑方对局灶性脑缺血大鼠CA1区Nestin和GFAP表达的影响韦琛静;周小青;刘旺华;李花;谢梦洲;张利美;李路迢【摘要】Objective Explore the influence of Danlongxingnao recipe on expression of Nestin protein and GFAP protein in rats CA1 area after focal cerebral ischem ia/reperfusion. Methods The 48 rats w ere randomly divided into sham-operation group, modelling group, Danlongxingnao recipe group and edaravone group.T he m odle of cerebral ischem ia reperfusion (I/R )was induced by middle cerebral artery occlusion (MCAO) and recanalization. Neurological sym ptom score were evaluated. HE staining of the cells was used to observe the morphology changes in hippocam pus CA1 area. Nestin protein and GFAP Protein were observed by im munohistochemical method in CA1 area. Results Compared with sham-operation, neurological symptom score of model group were increased and the result was significant (P<0.05) after 3d and 7d treatm ent. Compared with model group, neurological symptom score of Danlongxingnao recipe group and edar-avone group were decreased and the result was significant (P<0.05) after 3d and 7d treatm ent. The expression of average optital density of Nestin protein in Danlongxingnao recipe increased after 3d and 7d treatment (P<0.05) and the expressions of average gradation of GFAP protein in Danlongx-ingnao recipe decreased after 3d and 7d treatment (P<0.05). Conclusion The Danlongxingnao recipe had protective effects on the pathologicalm orphological changingin hippocam pus CA1 area. Danlongxingnao recipe can make effects after focal cerebral ischem ia/reperfusion and it may be as-sociated with promoting the proliferation and differentiation of neural stem cells.%目的：探讨丹龙醒脑方对大鼠脑缺血损伤后海马CA1区巢蛋白（Nestin）和胶质纤维酸性蛋白（glial fib-rillary acidic protein，GFAP）表达的影响。
丹星通络汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用的开题报告
丹星通络汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用的
开题报告
标题：丹星通络汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
背景和研究意义：
局灶性脑缺血再灌注（focal cerebral ischemia-reperfusion，FCI/R）是一种普遍存在的脑血管疾病，其特征为各种脑缺血后再灌注引起的一系列生理、生物化学和细胞学变化。
该血管性疾病可导致不同程度的神经元损失、神经元去向不明的凋亡、神经胶质细胞激活和炎症反应等一系列病理生理变化，从而加速脑损伤。
丹星通络汤（DXTLT）是一种具有中药特点的临床常用处方，其主要成分如丹参、黄芩等中药材可以提高脑血流量和氧化磷酸化水平，并发挥抗氧化、抗炎症作用。
由此，本研究旨在探究DXTLT对大鼠FCI/R模型中神经元保护的作用。
研究方法：
1. 建立大鼠FCI/R模型: 采用氯化氢气球法建立大鼠FCI/R模型；
2. 实验分组：将大鼠随机分为四组：假手术组、FCI/R组、DXTLT高剂量组和低剂量组；
3. 给药剂量：DXTLT高剂量组和低剂量组分别给予60mg/kg,30mg/kg的药物；
4. 给药时间：在缺血30min后即开始给药处理；
5. 结果分析：采用各种生理和分子学手段观察治疗后不同个体的损伤程度以及神经功能的恢复情况。
预期结果：
本研究将进一步阐明DXTLT给药对大鼠FCI/R造成的神经损伤的保护作用，为临床治疗脑血管疾病、预防脑损伤提供可能的理论和实践借鉴。
研究局限：
限于资源和时间限制，本研究可能存在一定的局限性，未能全面考虑到各种药物治疗剂量和治疗时间对治疗效果的影响，同时未能涉及到一些细胞和分子学机制的详细分析。
醒脑通脉胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织谷氨酸、天门冬氨酸的影响
（ Ｄ １， ｕ ｉ ｕ ｓ ｔ ｃ —ｒａ ｄ Ｍ Ｒ ） ｍ ｔ ｒｇｒ ｉａ ｅ ｅ ｔ ｌｄ ｅ ｓｎ ｌｅ
ｐｏ ｉ １ＭＲ １，ｔｇｅｉａｃ ｏ ｉ ｒｅ （ Ｐ ）ｌ ｓ ｔ ｅ ｒｔｎ ｔｎ ｍ ｒ ｓｎ ｐ ｅ （Ｒ ） ｎ ｒａｔｃｎｅ ｅ ｓ ｎｅ Ｌ Ｐ ，ａｄ ｂｅｓ ａｃｒ ｒ ｉａ ｃ ｓｔ
ｐｏ ｉ （Ｃ Ｐ ｇｎｓ ｎ ｌｉ ｌ ｕ ｒｅ Ｂ Ｒ ） ｅｅ ｄｃｎｃ ｔ ｔｎ ａ ｉ ａｏ－
ｃ ｍｅ ｉ ｈ ｌ ｈ ｏ ｃ ｔ ｙ ｈ ｂ ａ ｔ ｏ ｎ ｃ ｉ ｏ ｄ ａ ｕｅ ｌｍｐ ｏ ｌｓ ｃ ｄ ｉ
能与其对抗脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸（Ａ ） Ｅ Ａ 的升高有关。 关键词 醒脑通脉胶囊； 缺血再灌注； 谷氨酸； 天门冬氨酸 中图分 类号 ： ２５ ５ Ｒ ８ ． 文献 标识 码 ： Ａ
维普资讯
５９ ２ ） ４ １ —４ １ ． ７ （０ ： ４ ３ ４ ６
［６ ｉ ｅ ｏｄＪ ｆｔ Ｐ ｔｓ ， ｔ １ １】Ｄｓ ｍ ｎ ，Ｇ ｔ ，Ｍ￣ ｅ ａ． ｓ ｉｅ ｒＪ
Ａ ｓ ｃａ ｏ ｆＴ Ｐ１ｄ ｗ ｒｇ ｌｆ ｎ ｉ ｓｏ ｉｔ ｎ ｏ Ａ ｏ ｎ ｅ ｕ ｉ ｎ ｉ ａ ｏ ｈ ｍａ ｒ ｒ ｌｎ ｍａ ｌｓｏ ｓ ｗｉ ｕ ｎ ｐ ｉ ｙ ｍｅａ ｏ ｅｉ ｎ ｔ ｍａ ｈ
２５ ８．Βιβλιοθήκη 泰张青萍吴
林
广 西中医学院第一附属 医院 ５０２ 南宁市园湖路 ２ ３０３ 号 秦若飞 广西 中医学院 ２０ 级研究生 ５００ ０５ ３０ １ 广 西 中医学 院第一 附属 医院 ５０２ ３０３
丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤FADD、Bax蛋白表达的影响的开题报告
丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤FADD、Bax
蛋白表达的影响的开题报告
1. 研究背景及意义
脑缺血再灌注损伤是一种常见的神经系统疾病，其发病率和死亡率
较高。
当前，世界各地的医学工作者都在研究治疗脑缺血再灌注损伤的
新方法和新药物。
丹星通络汤是一种传统中药方剂，近年来应用于脑缺
血再灌注损伤的临床治疗中，效果显著。
然而，其具体机制仍不清楚，
需要进一步探讨。
2. 研究目的
本研究旨在探讨丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤FADD、Bax蛋白表达的影响，以期为临床治疗提供更加准确的理论依据。
3. 研究方法
将40只健康雄性大鼠随机等分为四组：正常对照组、模型组、丹星通络汤组和实验性药物组。
正常对照组和模型组不进行任何处理，丹星
通络汤组和实验性药物组先采用大鼠脑缺血再灌注损伤模型，然后丹星
通络汤组口服丹星通络汤，实验性药物组口服对照药物，每组10只大鼠，每只大鼠均在手术后1天、3天、5天、7天行TUNEL染色，Western blot检测脑组织中FADD、Bax蛋白表达量，比较各组之间的差异。
4. 预期结果
本研究预期结果是，丹星通络汤可显著降低大鼠脑缺血再灌注损伤
模型组中FADD、Bax蛋白表达量，表明丹星通络汤能够对大鼠脑缺血再灌注损伤起到保护作用，其可能的机制是通过调节FADD、Bax蛋白表达量的变化来实现。
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丹龙醒脑方促进脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞增殖与β-catenin 、Wnt-3a 表达及其机制的研究〔摘要〕目的探究丹龙醒脑方对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区内源性神经干细胞增殖与β-catenin 、Wnt-3a 表达的影响。
方法将60只雄性SD 大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组（西药组）、丹龙醒脑方小剂量组（丹小组）、丹龙醒脑方大剂量组（丹大组），线栓法制备局灶性脑缺血再灌注（I/R ）损伤模型，再灌注7d 后取大鼠缺血侧脑组织。
采用BrdU 掺入法记录海马齿状回颗粒下区BrdU 阳性细胞数目；采用RT-qPCR 法检测海马总β-catenin 、Wnt-3a mRNA 表达；采用Western Blot 法检测海马总β-catenin 、胞浆β-catenin 、Wnt-3a 蛋白表达。
结果与假手术组比较，其余各组BrdU 阳性细胞数、β-catenin 、Wnt-3a 蛋白及mRNA 的表达明显增强，差异有统计学意义（P ＜0.05或P ＜0.01）；与模型组比较，西药组、丹小组、丹大组BrdU 阳性细胞数、β-catenin 、Wnt-3a 蛋白及mRNA 表达明显增强，差异有统计学意义（P ＜0.05或P ＜0.01）。
结论丹龙醒脑方可能通过激活β-catenin 及Wnt-3a 表达促进神经干细胞增殖。
〔关键词〕丹龙醒脑方；脑缺血再灌注；Wnt-3a ；β-catenin ；神经干细胞；增殖〔中图分类号〕R285.5〔文献标识码〕A〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.01.002.007.04Study of Danlongxingnao Recipe on Proliferation of Neural Stem Cells and Expressions of β-catenin,Wnt-3a in Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury Model Rats and its MechanismZHANG Limei 1,ZHOU Xiaoqing 1*,LIU Wanghua 1,LI Hua 1,ZENG Yidi 1,LIANG Hao 1,FU Xiaojin 1,LI Lutiao 1(1.Institute of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China ；2.School ofTraditional Chinese Medicine,HUCM,Changsha,Hunan 410208,China)〔Abstract 〕Objective To study the effect of Danlongxingnao recipe on proliferation of endogenous neural stem cells andexpressions of β-catenin,Wnt-3a in hippocampus of cerebral ischemia-reperfusion injury model rats.Methods 60male SD rats were randomly divided into sham operation group,model group,the edaravone group(western medicine group),Danlongxingnao recipe small dose group (Dan Xiao group),Danlongxingnao recipe high-dose group (Dan Da group).The focal cerebral ischemia reperfusion (I/R)injury models were prepared by suture method,and 7d after reperfusion took the brain tissue ischemia side of rats with reperfusion were taken out after 7d.BrdU incorporation method is used to record BrdU positive cells in the hippocampus dentate gyrus;Hippocampal β-catenin and Wnt-3a mRNA expressions were detected by RT-qPCR method;The hippocampus β-catenin,cytoplasm β-catenin,Wnt-3a protein expression were determined by Western Blot method.Results Compared with sham operation group,the BrdU positive cells,β-catenin,Wnt -3a protein and mRNA expression enhanced obviously in other groups,the difference was statistically significant (P <0.05or P <0.01);Compared with model group,BrdU positive cells,β-catenin,Wnt -3a protein and mRNA expression improved obviously in western medicine group,Dan Xiao group,Dan Da group,the difference was statistically significant (P <0.05or P <0.01).Conclusion Danlongxingnao recipe may promote the proliferation of neural stem cells by activating the Wnt-3a and β-catenin expressions〔Keywords 〕Danlongxingnao recipe;ischemia reperfusion;Wnt-3a;β-catenin;neural stem cells;proliferation张利美1，周小青1*，刘旺华1，李花1，曾逸笛1，梁昊1，付小金1，李路迢1（1.湖南中医药大学中医诊断研究所，湖南长沙410007；2.湖南中医院大学中医学院，湖南长沙410208）〔收稿日期〕2014－10－13〔基金项目〕国家自然科学基金资助项目（81373702，81202632）；湖南省教育厅科研项目（12B097）。
〔作者简介〕张利美，女，在读硕士研究生，主要从事心脑血管病中医证治研究。
〔通讯作者〕*周小青，男，教授，博士研究生导师，E-mail ：zxq5381@ 。
2015年1月第35卷第1期Jan ．2015Vol．35No．1湖南中医药大学学报Journal of Hunan Univ．of CM·基础研究·7缺血性脑血管病是当前威胁人类健康的三大主要疾病之一，各种后遗症严重影响病人的生活质量，给家庭和社会带来巨大的负担。
脑缺血后，神经细胞大量丢失导致脑功能缺失，预防脑缺血、阻止脑缺血后神经细胞丢失、促进神经再生是防治脑血管病的主要途径。
随着对脑缺血研究的进展，人们已经证实缺血性脑损伤可促进哺乳动物侧脑室壁室管膜下区（SVZ）和海马齿状回颗粒下层（SGZ）神经细胞的增殖、分化。
在中枢神经系统中，Wnt/β-catenin信号通路是神经细胞增殖分化的重要调控环节，与脑损伤后的神经修复有关[1]。
我们前期研究表明丹龙醒脑方能抗脑缺血损伤，减少神经元丢失，保护神经功能，且其保护作用可能与促进海马区神经细胞的增殖及分化有关[2]，但是否通过激活经典Wnt/β-catenin途径而促进神经再生，值得进一步研究。
1材料与方法1.1材料及仪器依达拉奉注射液（批号：00221262，国瑞药业有限公司），规格20mL：30mg。
丹龙醒脑方由丹参15g，三七12g，地龙6g，远志15g，石菖蒲12g，淫羊藿10g，菟丝子12g等组成。
中药饮片及依达拉奉注射液均购自湖南中医药大学第一附属医院。
饮片浸泡30min，首煎加6倍水，煎40~60min；第二煎加3倍水，煎30~40min，两次药汁混合。
滤过，水浴浓缩为含生药1.6g/mL，灭菌分装，4℃冰箱冷藏。
β-catenin(1∶200)、Wnt-3a(1∶200)、β-actin(1∶4000)兔抗鼠抗体、BrdU及其试剂盒（批号：E2213）均购自Sigma公司，辣根过氧化物标记的羊抗兔抗体(1∶3000)购自Proteintech公司，逆转录试剂盒（批号：00221262，Fermentas），TRIZOL试剂盒(Invitrogen)，引物(上海化工)，SYBGREEN PCR Mix (ABI)，水合氯醛（科密欧）。
荧光定量PCR仪(Ther-mo)，光学显微镜及彩色图像分析系统(Optimas，美国)，Quantity One专业灰度分析软件。
1.2分组及造模健康SD大鼠60只，雄性，体质量250～300g，由湖南斯莱克景达动物实验公司提供，实验动物许可证号：SCXK(湘)2013-0004。
随机分为2组，即假手术组（12只），模型制备组（48只），模型制备组于造模后根据神经功能缺损的评分等级再分为模型组、依达拉奉组、丹龙醒脑方小剂量组（丹小组）、丹龙醒脑方大剂量组（丹大组）。
模型制备组大鼠用10%水合氯醛(0.35g/100g)腹腔注射麻醉，参照改良Longa等[3]制备左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，平均进线(18.0±0.5)mm，缺血2h，再灌注7d。
假手术组除不插线外，其余步骤同模型组。
待术后动物完全清醒，参照Zea-Longa[3]评分标准进行神经功能症状评分，评分为1~3分者为成功模型。
不成功者剔除，未存活到预定天数者删除，随时补充，保证每组12只。
大鼠的模型成功率约80％，大鼠死亡率约40％。
1.3给药及取材术后24h开始给药，以70kg成人为标准按体表面积换算，丹龙醒脑方小、大剂量组剂量分别为3.7、14.8g/kg，灌胃给药；依达拉奉组剂量为3.2mg/kg，腹腔注射；假手术组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃。