L-天冬酰胺酶 在医药中的应用
L-天门冬酰胺酶
5：酶分子修饰
20世纪 70年代治癌成功以来，随着酶学的发展， 对酶分子进行化学修饰，提高生物活性。降低抗原 性，有了较大的进展。据国外报道，L-天冬酰胺酶 游离氨基经脱氨、酰化、碳化三亚胺反应，可增强 酶在血浆中的半衰期。若多聚体与酶偶联。如用丙 氨酸 - 羧基酸酐处理。与 L- 天冬酰胺酶形成聚丙氨 酸 - 天冬酰胺酶的复合物，可延长酶的半衰期。对 天然酶的抗体反应减少了1/500-1/300.
60℃.，30min
→
无热原酶液
→
冻干 → L-天冬酰胺酶
• 1菌种培养 采用大肠杆菌Escherichia coli A.S.1.357,培养基加牛 肉汁100mL,蛋白胨1g,氯化钠0.5g,琼脂2-2.5g 37℃,在试 管中培养24h，茄形瓶培养8h，锥形瓶培养16h。 • 2 种子培养 培养基用玉米浆30kg，加水至300kg，接种量1%-1。5%， 37℃，通气搅拌培养4-8h.
L- 天冬酰胺酶的分子结构
1922 年 Clement 发现豚鼠血清中存在
天冬酰胺酶； 1953年Kidd发现豚鼠血 清中有抑癌作用的物质，其活性成分 是蛋白质； 1961 年Broome 确定了其有 效 成 分 是 天 冬 酰 胺 酶 ， 后 来 ， Mash burn等报告指出从大肠杆菌中分离出 天冬酰胺酶，具有同样抗癌活性。
对治疗白血病有显著疗效的L-天冬酰胺酶是第一种治疗癌症 的酶。 当L-天冬酰胺酶注射进入人体后，人体正常细胞内由于有天 冬酰胺合成酶，可以合成L-天冬酰胺而使蛋白质合成不受影 响。而对于缺乏天冬酰胺合成酶的癌细胞来说，本身不能合 成L-天冬酰胺，外来天冬酰胺又被L-天冬酰胺酶分解，因此 蛋白质合成受阻，从而导致癌细胞死亡。 使用L-天冬酰胺酶时，可能出现过敏反应，偶尔还可以发生 过敏性休克，但停药后，这些副作用会消失。因此，在应用 这种酶之前，应做皮试。在一般情况下，注射该酶出现的过 敏性反应包括发热、恶心、呕吐、体重下降等。对比起可怕 的白血病来，这些副作用是轻微的痛苦，在没有找到更好的 治疗方法之前是可以接受的。 另外芦笋内富含较多的L-天冬酰胺酶
浅谈L—天冬酰胺酶与其重组表达载体的研究
浅谈L—天冬酰胺酶与其重组表达载体的研究1. 引言1.1 研究背景L-天冬酰胺酶（L-asparaginase）是一种能够降解天冬酰胺和L-谷氨酸的酶，通常被广泛应用于治疗白血病和其他恶性肿瘤。
传统来源的L-天冬酰胺酶存在一些问题，如来源不稳定、纯度低、免疫原性强等。
研究者们开始探索通过基因工程技术构建高效表达的重组L-天冬酰胺酶，以应对传统L-天冬酰胺酶存在的问题。
L-天冬酰胺酶的重组表达载体设计和构建是实现高效表达的关键步骤。
通过选择合适的载体和宿主菌株，搭配适当的启动子和调控元件，可以实现L-天冬酰胺酶基因的高效表达。
还需要考虑到蛋白质的折叠、稳定性和可溶性等因素，以确保重组L-天冬酰胺酶的功能完整性和活性。
本研究旨在探讨L-天冬酰胺酶的重组表达载体设计与构建，以及其在纯化、表达及酶活性检测方面的应用。
通过对L-天冬酰胺酶与其重组表达载体的研究，可以为进一步提高L-天冬酰胺酶的表达水平和活性，以及扩大其应用范围提供重要参考和理论基础。
1.2 研究目的研究目的：通过对L-天冬酰胺酶与其重组表达载体的研究，旨在深入了解该酶在生物体内的功能和作用机制，探讨其在生物医学和工业领域的潜在应用价值。
具体目的包括：1. 研究L-天冬酰胺酶在代谢过程中的作用，揭示其在生物体内的生物学功能及代谢途径；2. 探讨L-天冬酰胺酶的结构特点，从分子水平揭示其催化机制和底物选择性；3. 设计和构建适用于L-天冬酰胺酶的重组表达载体，实现对该酶的高效表达和纯化；4. 实验验证重组L-天冬酰胺酶的表达效果，研究其酶活性及功能；5. 探讨L-天冬酰胺酶与其重组表达载体研究的意义，为未来相关研究提供理论基础和实验指导。
通过本研究，期望能够全面了解L-天冬酰胺酶及其重组表达载体的特性和应用前景，为进一步的研究和开发提供重要参考。
2. 正文2.1 L-天冬酰胺酶的重要性L-天冬酰胺酶是一种重要的酶类，广泛存在于生物体内，在氮代谢中发挥着关键作用。
l-天冬酰胺结构式 -回复
l-天冬酰胺结构式-回复什么是天冬酰胺？天冬酰胺，又称为L-天冬氨酸酰胺，是一种非必需氨基酸，其化学结构式为L-glutamine。
它是蛋白质的组成部分之一，也被广泛应用于医药和食品工业中。
天冬酰胺在体内起着许多重要的生理功能，具有促进肠道健康、增强免疫系统功能、调节蛋白质合成等作用。
天冬酰胺的结构及合成过程天冬酰胺的分子结构由一个氨基基团、一个羧基基团和一个天冬酰胺基团组成。
氨基基团与羧基基团之间通过一个碳原子相连，这也是天冬酰胺的骨架结构。
天冬酰胺的合成可以通过多种方法进行。
浓缩氨和谷氨酸可以在酸性条件下反应，生成L-谷氨酰肼，再进一步反应生成天冬酰胺。
此外，还可以通过谷氨酸和钠氰化物的反应合成天冬酰胺。
应用领域天冬酰胺在医药领域有广泛的应用。
由于其具有调节免疫系统功能的特性，天冬酰胺常被用作器官移植术后的免疫抑制剂。
它可以减少器官移植术后的排斥反应，并提高移植成功的机会。
此外，天冬酰胺还被应用于肠道疾病的治疗，如炎症性肠病和溃疡性结肠炎。
它可以修复受损的肠黏膜、促进肠道健康，并改善肠道功能。
在食品工业中，天冬酰胺常被添加到保健品和营养补充剂中。
它可以增强肌肉组织的合成，促进蛋白质的吸收，帮助身体更好地利用蛋白质。
此外，天冬酰胺还可以改善运动后的恢复能力，缓解疲劳感。
天冬酰胺的副作用及风险天冬酰胺在一般情况下被认为是安全的，但在某些特殊情况下可能有副作用。
长时间高剂量服用天冬酰胺有可能引起胃肠道不适，如腹胀、腹泻和恶心等。
对于存在某些过敏反应的人士，可能会出现过敏症状，如皮疹和呼吸问题。
因此，在使用天冬酰胺之前，最好咨询医生或专业人士的建议。
结语天冬酰胺作为非必需氨基酸，对人体健康有着重要的作用。
它具有调节免疫系统、促进肠道健康和提高蛋白质利用率等功效，在医药和食品工业中应用广泛。
然而，使用天冬酰胺时需要谨慎，根据个人情况和专业意见进行使用，以降低潜在的风险。
PEG_L_天冬酰胺酶的临床研究近况
L-天冬酰胺是细胞合成蛋白质的必需氨基酸。 肿 瘤 细 胞 中 的 天 冬 酰 胺 合 成 酶 ( asparag ine synthetase, AS)含量非常低, 故自身不能合成 L-天冬 酰胺, 需依赖外源 L-天 冬酰胺才能生存。而 L-天冬 酰胺酶 ( L-asparag inase, L-ASP ) 可通 过降解 L-天冬 酰胺从而抑制肿瘤细胞中蛋白质的正常合成, 导致 肿瘤细胞的死亡 [ 1-3] 。人体内正常细胞则因能自身
在 L-ASP的临床使用过程中存在着半衰期短和
因其抗原性而导致的严重过敏反应等问题。为了克 服这些缺陷, 人们采取了很多方法, 如利用免疫特性 的不同, 给对 E1coli L-ASP 过敏的患者改用来源于 E rw inia 的 L-A SP[ 3, 5] ; 或用可溶性聚合物如 PEG 对酶 进行物理包埋和修饰[ 6] , 以屏蔽其抗原表位, 并延长 其血浆 保留时间, 减少蛋 白质酶解和 肾脏排泄 [ 7 ]。 PEG-L-A SP的临床试验始于 1984 年[ 8] , 至今已有不 少试验结果表明, 其与其他化疗药物 ( 如长春新碱、甲 氨蝶呤、阿糖胞苷、柔红霉素和阿霉素等 )联用时, 对 ALL有良好的疗效 [ 9] 。 1994年 2月, 美国 FDA 批准 PEG-L-ASP可通过肌内注射途径用于对天然 L-ASP 过敏的 ALL 患者, 2005年 11月, 其获准用于静脉注 射, 2006年 7月再被列入治疗 ALL的一线联合化疗
L天冬酰胺酶在医药中的应用
胆碱酯酶
溶纤酶 弹性蛋白酶 核糖核酸酶ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ尿酸酶
细菌
蚯蚓 胰脏 胰脏 牛肾
治疗皮肤病，支气管炎，气喘
溶血栓 治疗动脉硬化，降血脂 抗感染，祛痰，治肝癌 治疗痛风
概述：L-天冬酰胺酶在医药的应用
对治疗白血病有显著疗效的L-天冬酰胺酶是第一种用于治 疗癌症的酶。 当L-天冬酰胺酶注射进入人体后，人体正常细胞内由于有 天冬酰胺合成酶，可以合成L-天冬酰胺而使蛋白质合成不受影 响。而对于缺乏天冬酰胺合成酶的癌细胞来说，由于本身不能 合成L-天冬酰胺，外来的天冬酰胺又被L-天冬酰胺酶分解掉， 因此蛋白质合成受阻，从而导致癌细胞死亡。 注射天冬酰胺酶时，可能出现过敏反应，偶尔还可能出现 过敏性休克，但停药后，这些副作用会消失。故此，在注射L天冬酰胺酶之前，应做皮试。在一般情况下，注射该酶可能出 现的过敏性反应包括发热、恶心、呕吐、体重下降等。对比起 可怕的白血病来，这些副作用是轻微的痛苦，在未找到其他更 好的治疗方法之前是可以接受的。
4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰
L-天冬酰胺酶的修饰
L-ASP的聚乙二醇化不但降级了胰蛋白酶对它的降解作 用，而且修饰酶的抗原性与天然酶相比也大为下降。 此外，聚乙二醇化L-ASP与传统的脂质体化L-ASP相比 与有明显的优势。
4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰
微囊化修饰
将L-天冬酰胺酶用半透膜性质的聚合物制成微囊型固定 化酶。其大小一般为1～ 500Lm。
中文名称： L-天冬酰胺 英文名称： L-Asparagine
分子式： C4H8N2O3
线性分子式： H2NCOCH2CH(NH2)CO2H 分子量： 132.12
L-天冬酰胺酶
1．性质 L-天冬酰胺酶（L-asparaginase , L-ASP ），广泛存在 于微生物、植物和部分啮齿类动物的血清中，为白色结晶粉 末，微有湿性，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、 乙醛、苯等有机溶剂。 对热稳定性好，在温度50℃下，15min后，活性降低 30%，60℃下，1小时内失活。冻干品在2~5℃可稳定数月， 但其溶液只能保存数日，20℃储存7天，5℃储存14天均不 减少酶的活力。最适宜在pH值为8.5，温度在37℃下储存。 纯酶的分子量从130000到140000不等。
L—天门冬酰胺酶是酰胺基水解酶（word）可编辑
L—天门冬酰胺酶是酰胺基水解酶，是从大肠杆菌菌体中提取分离的酶类药物，其商品名Elspar ，用于治疗白血病。
性状呈白色粉末状，微有吸湿性，溶于水，不溶于丙酮、氯仿、乙醚及甲醇。
20 ％水溶液贮存7 天， 5 ℃贮存14 天均不减少酶的活力。
干燥品50 ℃、15min 酶活力降低30 ％，60 ℃、1h 内失活。
最适pH8.5 ，最适温度37 ℃。
L —天门冬酰胺酶的产生菌是霉菌和细菌，故可作制造酶的原料。
( 二) 生产工艺1 ．工艺路线：L —天门冬酰胺酶生产的工艺流程见图 5 —1 。
图 5 — 1 门冬酰胺酶生产工艺流程图2 ．工艺过程：①菌种培养采取大肠杆菌AS1-375 ，普通牛肉培养基，接种后于37 ℃培养24h 。
②种子培养16 ％玉米浆，接种量1 ％～ 1.5 ％，37 ℃通气搅拌培养4 ～8h 。
③发酵罐培养玉米浆培养基，接种量8 ％，37 ℃通气搅拌培养6 ～8h ，离心分离发酵液，得菌体，加 2 倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉。
④提取、沉淀、热处理每千克菌体干粉加入0.Olmol ／L pH8.0 的硼酸缓冲液lOL 37 ℃保温搅拌 1.5h ，降温到30 ℃以后，用5mol／L 醋酸调节pH4.2 ～ 4.4 进行压滤，滤液中加入0.2 倍体积的丙酮，放置 3 ～4h ，过滤，收集沉淀，自然风干，即得干粗酶。
取粗制酶，加入0.3 ％甘氨酸溶液，调节pH8.8 ，搅拌 1.5h ，离心，收集上清液，加热到60 ℃30min 进行热处理。
离心弃去沉淀，上清液加 2 倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，用0.01mol ／L ，pH8.0 磷酸缓冲液溶解，再离心弃去不溶物，得上清酶溶液。
⑤精制、冻干上述酶溶液调节pH8.8 ，离心弃去沉淀，清液再调pH7.7 加入50 ％聚乙二醇，使浓度达到16 ％。
在 2 ～ 5 ℃放置 4 ～ 5 天，离心得沉淀。
浅谈L—天冬酰胺酶与其重组表达载体的研究
浅谈L—天冬酰胺酶与其重组表达载体的研究L—天冬酰胺酶（L-asparaginase，简称L-ASNase）是一种重要的酶类蛋白，能够催化天冬氨酸和水解为天冬酰胺和亮氨酸。
由于其能够降低机体内天冬氨酸的含量，从而抑制白血病细胞的生长，L-ASNase被广泛应用于白血病和淋巴瘤的治疗中。
近年来，随着生物技术的发展，对L-ASNase的研究也取得了重大突破，其中重组表达载体的研究尤为重要。
L-ASNase的传统生产方式主要依赖于放线菌属细菌的发酵产生，这种生产方式存在着生产周期长、纯度低、结构不稳定等诸多问题。
为了解决这些问题，研究人员转而将目光投向了重组表达技术，通过对L-ASNase基因进行重组，把其导入到适当的宿主细胞中，利用宿主细胞的生物合成能力来生产L-ASNase，从而得到高纯度、高稳定性的L-ASNase制剂。
在研究L-ASNase的重组表达过程中，选择合适的表达载体成为了关键。
表达载体是指将外源基因导入宿主细胞并在其内进行表达的工具，一般采用质粒作为表达载体。
质粒在重组表达过程中发挥着非常重要的作用，它能够提供适当的转录启动子、选择性标记基因和表达缓冲区等，从而确保外源基因在宿主细胞中得到高效表达。
目前，研究人员已经成功构建了多种不同的重组表达载体用于L-ASNase的表达。
采用大肠杆菌作为宿主细胞表达L-ASNase成为了研究的热点之一。
大肠杆菌因其生长速度快、易于培养以及基因工程改良方便等优点而成为了理想的宿主细胞。
目前已有多种大肠杆菌表达载体被用于L-ASNase的重组表达，通过对不同载体的比较研究，可以筛选出最适合L-ASNase表达的载体，提高L-ASNase的表达效率。
在研究L-ASNase的重组表达载体时，优化表达条件也是至关重要的。
通过对培养基组分、诱导条件、培养温度等进行优化，可以提高重组蛋白的表达量和纯度，从而为L-ASNase的工业化生产提供有力支持。
除了大肠杆菌表达载体外，还有一些其他宿主细胞被应用于L-ASNase的重组表达。
酶在疾病治疗方面的应用
目录
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前言
酶作为药物用于疾病的诊断与治疗已 有一段历史，其不但可以治疗多种疾病而
且还具有疗效显著和副作用小等特点。 早期酶类的临床应用以消化和消炎为
主，随之现代酶学和分子医学的发展，酶 在疾病医疗方面的应用范围越来越广，现 已经发展至降压、凝血、抗肿瘤、抗病毒
等多种用途。
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酶用于治疗疾病的发展史
2、在肠道中控制血糖
α-葡萄糖苷酶抑制剂是一类似延缓肠道碳水化合物吸收而 达到治疗糖尿病的口服降糖药物。α-葡萄糖苷酶抑制剂是比 较成熟的治疗糖尿病药物，已广泛应用于临床。
其作用机制为：竞争性 抑制位于小肠的各种α-葡 萄糖苷酶，使淀粉类分解 为葡萄糖的速度减慢，从 而减缓肠道内葡萄糖的吸 收，降低餐后高血糖。
• 临床用于外伤、手术后、关节炎、副鼻窦 炎等伴有水痘的炎症，能促进渗出液再吸 收，达到抗水肿的目的。
• 可以采用口服给药，也可局部外用于清洁 创面和化脓。
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蛋白酶：菠萝蛋白酶、木瓜蛋 白酶、胰凝乳蛋白酶等
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3.抗辐射，氧中毒
• 超氧化物歧化酶(SOD)催化超氧负离子 进行氧化还原反应，使机体免遭O2- 的 损害。因此SOD具有抗辐射作用，并 对红斑狼疮，皮炎，结肠炎以及氧中 毒疾病有显著疗效。
• 蛋白酶在医药领域的应用最初就是在消化 药上，用于治疗消化不良和食欲不振。
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·蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶 ·胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶是消化食物的重要
酶类，使用时往往与淀粉酶，脂肪酶等制 成复合剂以增加疗效。
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2.消炎、消肿
• 酶用作抗炎剂能对炎症病灶的血管通透性 升高、白细胞游走、肉芽组织的形成等均 有一定影响。
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概述：L-天冬酰胺酶在医药的应用
对治疗白血病有显著疗效的L-天冬酰胺酶是第一种用于治 疗癌症的酶。 当L-天冬酰胺酶注射进入人体后，人体正常细胞内由于有 天冬酰胺合成酶，可以合成L-天冬酰胺而使蛋白质合成不受影 响。而对于缺乏天冬酰胺合成酶的癌细胞来说，由于本身不能 合成L-天冬酰胺，外来的天冬酰胺又被L-天冬酰胺酶分解掉， 因此蛋白质合成受阻，从而导致癌细胞死亡。 注射天冬酰胺酶时，可能出现过敏反应，偶尔还可能出现 过敏性休克，但停药后，这些副作用会消失。故此，在注射L天冬酰胺酶之前，应做皮试。在一般情况下，注射该酶可能出 现的过敏性反应包括发热、恶心、呕吐、体重下降等。对比起 可怕的白血病来，这些副作用是轻微的痛苦，在未找到其他更 好的治疗方法之前是可以接受的。
2．用途 L-天冬酰胺酶是酰胺基水解酶，为抗肿瘤酶制剂。肿瘤细 胞不能合成生长必需的天冬酰胺而使其生长受到限制。正常 细胞能合成天冬酰胺，故受影响较少。 因此，天冬酰胺酶是一种对肿瘤细胞有选择性的抑制药 物。对急性淋巴细胞白血病的缓解率在50%以上，对急性粒 细胞性白血病和急性单核细胞白血病有一定疗效，缺点是单 独使用不仅缓解期短，切易产生耐药性。该药对肌体免疫也 有抑制作用，它还可用于治疗皮肌炎。在动物实验中，本品 对实体瘤和白血病均有效，且与常见巯嘌呤、甲蝶呤、长春 新碱、阿糖胞苷等无交叉耐药现象。
药效动力学相关模型显示，0.2 IU/ml的最小酶活性最适 天门冬酰胺酶消除。动态的POSTHOC分析显示酶活性可以 持续3个星期或更长。1例患者在给药后22天产生了抗天门冬 酰胺酶抗体。天门冬酰胺酶耐受性很好，很少出现3/4级不良 反应。未观察到过敏反应或胰腺炎。对于55岁左右成人，天 门冬酰胺酶可以产生很长的天门冬酰胺排除期，可以静脉注 射给药，安全性较好。
4 不需要外源性辅助因子；
5 在生理条件下酶促反应不可逆；
6 酶制剂纯度高，不含其它毒性杂志，来自非致病性酶源。
酶 淀粉酶
名Leabharlann 来源用 治疗消化不良，食欲不振
途
胰脏、麦芽、微生物
酶 在 疾 病 治 疗 方 面 的 应 用
蛋白酶
脂肪酶 纤维素酶 溶菌酶 尿激酶 链激酶 青霉素酶
胰脏、胃、植物、微生物
胰脏、微生物 霉菌 蛋清、细菌 人尿 链球菌 蜡状芽孢杆菌
3、L-天冬酰胺酶结构与功能
3、L-天冬酰胺酶结构与功能
3、L-天冬酰胺酶结构与功能
L-ASP结构中与催化活性相关位点的研究
L-ASP用于临床以来，人们对其分子结构与催化活性间 的关系进行深入的研究。L-ASP结果中已经被研究过的位 点包括T12、Y25、S58、T89、N248等，L-ASP的活性中 心由T12、Y25、S58、T89、D90。
2 静脉注射天冬酰胺酶对于55岁左右新诊断急性成淋巴细 胞白血病诱导缓解期治疗的药效动力学以及安全性
与儿童相比，天冬酰胺酶成人治疗的药代动力学、药效学 以及安全性信息非常有限。研究人员采用单次静脉注射天门 冬酰胺酶(2000 IU/m(2))作为25例成人患者诱导缓解的线药 物，并在几个时间点获得血清样本。结果可见，天门冬酰胺 酶活性血清峰浓度的总体均值为1 IU/ml，消除半衰期为7天， 分布容积为2.43 L/m(2)。单剂量给药后，患者2小时后完全 去氨基，并分别在14、21和28天完成100%、81%和44%。
5、 L-天冬酰胺酶在医药上的进展
1 Erwinase获准用于治疗对大肠杆菌源性天冬酰胺酶过敏 的急性淋巴细胞性白血病患者
注：Erwinase：欧文氏菌源性的天冬酰胺酶
2011年11月18日，EUSA制药和美国食品药品管理局(FDA) 宣布孤儿药Erwinase获准用于治疗对大肠杆菌源性的天冬酰 胺酶有超敏反应的急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者。 Erwinaze是一种可降低循环血液中天门冬酰胺水平的天冬 酰胺酶。天门冬酰胺是细胞生长的必需氨基酸，将其从血液 中清除可抑制ALL相关细胞的生长。天冬酰胺酶产品来源于 细菌，近15%~20%的患者可对大肠杆菌源性的现代制剂产生 超敏反应因而无法持续治疗。Erwinaze是由欧文氏菌产生的， 在免疫学性质上有别于原有的制剂，适用于对大肠杆菌源性 治疗有超敏反应的患者。 FDA批准Erwinase是基于相关的多项临床试验结果，共涉 及630例ALL患者。在一项纳入58名受试者的关键性疗效研 究中，100%的可评估患者达到了天冬酰胺酶活性主要终点。 Erwinaze的不良反应：过敏反应、胰腺炎、转氨酶和胆红 素水平升高、血栓形成、出血、高血糖症、恶心和呕吐。
XXX XXXXXXXX
酶在医药方面主要的应用
1 用酶进行疾病的诊断
2 用酶进行疾病的治疗
3 用酶制造各种药物
药用药用酶的一般要求酶的一般要 求
1 在机体内的生理条件下具有较高活力和稳定性； 2 对底物有较高亲和力,不受产物和体液中正常成分抑制；
3 在体内有较长的半衰期，可缓慢地被分解或排出体外；
4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰
L-天冬酰胺酶的修饰
L-ASP的聚乙二醇化不但降级了胰蛋白酶对它的降解作 用，而且修饰酶的抗原性与天然酶相比也大为下降。 此外，聚乙二醇化L-ASP与传统的脂质体化L-ASP相比 与有明显的优势。
4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰
微囊化修饰
将L-天冬酰胺酶用半透膜性质的聚合物制成微囊型固定 化酶。其大小一般为1～ 500Lm。
治疗消化不良，食欲不振，消炎，消肿，除去坏死组 织，促进创伤愈合，降低血压
治疗消化不良，食欲不振 治疗消化不良，食欲不振 治疗各种细菌性和病毒性疾病 治疗心肌梗塞，结膜下出血，黄斑部出血 治疗血栓性静脉炎，咳痰，血肿，下出血，骨折 治疗青霉素引起的变态反应
L-天冬酰胺酶
超氧化物歧化酶 凝血酶 胶原酶 右旋糖酐酶 胆碱酯酶 溶纤酶
中文名称： L-天冬酰胺 英文名称： L-Asparagine
分子式： C4H8N2O3
线性分子式： H2NCOCH2CH(NH2)CO2H 分子量： 132.12
L-天冬酰胺酶
1．性质 L-天冬酰胺酶（L-asparaginase , L-ASP ），广泛存在 于微生物、植物和部分啮齿类动物的血清中，为白色结晶粉 末，微有湿性，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、 乙醛、苯等有机溶剂。 对热稳定性好，在温度50℃下，15min后，活性降低 30%，60℃下，1小时内失活。冻干品在2~5℃可稳定数月， 但其溶液只能保存数日，20℃储存7天，5℃储存14天均不 减少酶的活力。最适宜在pH值为8.5，温度在37℃下储存。 纯酶的分子量从130000到140000不等。
4、L-天冬酰胺酶的纯化与修饰
L-天冬酰胺酶的分离纯化
将L-ASP与高效先导序列pelB融合使得L-ASP在细胞外 表达，并在L-ASP的N末端添加了6个组氨酸序列标签，然 后采用Ni-NTA亲和层析法分离纯化得到L-ASP，成本高， 并不适合大规模的工业化生产。
经蔗糖破壁、(NH4)2SO4分级沉淀、透析、DEAEDE52、 Q Sepharose Fast Flow等步骤纯化得到的L-ASP比活力高 达U/mg，SDS-PAGE检测时显示为一条带，RT-HPLC分析 纯达到99%，最终回收率为50.5%，适合大规模的工业化生 产的要求。
L-天冬酰胺酶的作用机制 L-ASP抗肿瘤的作用机制在于它能降低人体内L-天冬酰 胺和L-谷氨酰胺的浓度，这两种氨基酸是合成嘌呤环和嘧 啶环的重要组成部分。肿瘤细胞缺乏天冬氨酰合成酶，不 能合成L-天冬酰胺，需要摄取外源L-天冬酰胺才能存活。当 外源L-天冬酰胺被分解掉时，癌细胞合成核苷酸和戴白 骓· 蛋白质的能力就会显著降低，因此L-ASP能有效的抑制 肿瘤细胞的增值。 L-天门冬酰胺是某些肿瘤细胞生长必不可少的氨基酸， 对人体正常细胞而言 自身具有合成L-天门冬酰胺的能力， 而肿瘤细胞缺乏天门冬酰胺合成酶不能合成天门冬酰胺， 其细胞需要从外源的L-天门冬酰胺摄取才能存活。L-ASP 能催化水解L-天门冬酰胺生成L-天门冬氨酸和氨，因此能够 有效地抑制癌细胞的生长，最终使癌细胞消亡。
1、白血病介绍
1.1概述 白血病（Leukemia）是一类造血干细胞的恶性克隆性 疾病。克隆中的白血病细胞增殖失控，分化障碍，凋亡受 阻。 1.2特征 白细胞呈恶性、无限制地增生，浸润全身各组织和脏 器，周围血液血细胞有量和质的变化。抑制红细胞和血小 板止血的产生，非常容易受伤、出血、感染。
1.3分类 临床上分为急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性非淋巴细 胞白血病（ANLL）、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞 白血病。
酶对调节机体正常功能具有十分重要的作用。 酶具有高效﹑专一的催化功能，使其在预防疾病 中显示出明确的﹑针对性强和疗效高的特点。由 此可见酶在医学方面的应用有着广阔的前景。
1.4死亡率 慢淋白血病发病在50岁以后，才明显增多 急性白血病若不经特殊治疗，其平均生存期可能只有三个 月左右。
2、L-天冬酰胺酶的临床应用
L-天冬酰胺酶（L-asparaginase, L-ASP，EC.3.5.1.1），商 品名为左旋门冬酰胺酶，目前在临床上已经被用于急性淋巴 细胞白血病（childhood Actute lymphoblastic leukemia, ALL） 的治疗。L-ASP单独使用时，对ALL的有效率为60%，与长 春碱（vincristine）及皮质甾类药物（corticosteroids）联合使 用时，对ALL的有效率高达95%。 另外，L-ASP对单细胞白血病、淋巴肉瘤、白血病性网状 皮层组织增多症以及慢性髓细胞白血病也有一定的疗效，对 胰腺癌细胞的增多还有一定的抑制作用，是临床治疗白血病 的重要物质。
用固定化酶反应器进行体外循环净化血液中L -天冬酰胺 方法： 将固定化L -天冬酰胺酶装填于柱中或将其固定在酶板、酶 管或血液透析膜上, 使血液从固定酶上通过, 除去癌细胞生长 所需的L 2天冬酰胺, 从而达到治疗的目的。 改进的功能： 由于酶不与体内器官直接接触, 也就不会发生毒性和过敏 反应。 具有天然酶的高度专一性及温和条件下高效催化的特点, 还具有一定的机械强度; 酶经固定化后, 稳定性有较大的提高, 可以反复使用也可储存较长时间。