抗氧化剂测定
抗氧化剂检测标准
抗氧化剂检测标准引言抗氧化剂是一类能够延缓或阻断食品、药物和化妆品等物质氧化反应的化学物质。
随着人们对健康意识的提高，抗氧化剂在食品和日用品中的应用逐渐增加。
为了确保抗氧化剂的质量和安全性，必须进行严格的检测。
本文将介绍抗氧化剂检测的标准和方法。
抗氧化剂检测标准抗氧化剂检测标准是指对抗氧化剂产品进行检测时所遵循的技术规范和方法。
通过制定统一的标准，可以确保抗氧化剂产品的质量和可靠性。
目前常用的抗氧化剂检测标准有以下几种：1. 国家标准国家标准是由国家质检总局颁布的，具有强制性的标准。
国家标准通常包括抗氧化剂的分类、命名、规格要求以及检测方法等内容。
针对不同类型的抗氧化剂，国家标准会有相应的规定，如BHT、BHA等常用抗氧化剂的检测标准。
2. 行业标准行业标准是由相关行业组织或协会制定的标准，用于指导该行业的产品质量控制。
比如食品行业的抗氧化剂检测标准由食品行业协会制定，化妆品行业的抗氧化剂检测标准由化妆品行业协会制定等。
行业标准更贴近实际应用，因此在实际检测中更常被采用。
3. 国际标准国际标准是由国际标准化组织制定和发布的标准。
国际标准通常被多个国家所接受和采用，对于跨国贸易和合作具有很大的指导作用。
抗氧化剂检测标准的国际标准一般是由国际食品标准委员会等相关国际组织制定和发布的。
抗氧化剂检测方法抗氧化剂检测的方法多种多样，根据不同的抗氧化剂和检测需求，采用不同的方法。
下面介绍几种常见的抗氧化剂检测方法：1. 高效液相色谱法（HPLC）HPLC法是一种常用的抗氧化剂检测方法，它利用高效液相色谱仪分离和定量分析样品中的抗氧化剂成分。
这种方法具有高分辨率、高灵敏度和高准确性等优点，适用于各种类型的抗氧化剂检测。
2. 气相色谱法（GC）气相色谱法是一种利用气相色谱仪对样品中的抗氧化剂进行分离和检测的方法。
该方法适用于易揮发的抗氧化剂成分的检测，具有样品制备简单、分析速度快的特点。
3. 电化学法电化学法是一种利用电化学分析仪器对样品中的抗氧化剂进行定量分析的方法。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。
随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。
以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。
1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。
实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。
2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。
实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。
3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。
实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。
4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。
实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。
5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。
实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。
6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。
实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性 (antioxidant activity)描述了化学物质在抑制或减少氧化反应中所起的作用。
抗氧化物是一类具有亲电子的分子，它们容易被氧化，从而中和自由基。
抗氧化物具有重要的生物学和医学意义，因为氧化损害是许多疾病和老化的主要原因。
因此，抗氧化物活性测定方法是目前研究的热点之一，现将抗氧化物活性测定方法进行总结:1. DPPH法：该方法是一种常用的体外抗氧化测定方法。
含有DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）的溶液表现为紫色，DPPH自由基上的氢原子被抗氧化物夺取后，DPPH自由基变成无色，从而可以通过紫外可见光谱测定其吸光度的降低来表示抗氧化物活性。
2. ABTS法：该法通过测定2,2’-联氮双(3-乙基苯并咪唑啉硫酸铵) (ABTS)自由基的消除能力来测定抗氧化活性。
该法也是一种体外抗氧化测定方法，溶液发生颜色变化，从而通过紫外可见光谱测定其吸光度的降低来表示抗氧化物活性。
3. ORAC法：ORAC（氧化还原能力值）法对不同化学物质的体内抗氧化活性进行定量测定，其原理是将抗氧化剂加入与有氧气气氛接触的荧光染料溶液中，由于受到氧自由基的攻击，染料随着时间流逝会逐渐减少。
为了确定不同化学物质的抗氧化活性，十分重要的是应该不断输入氧自由基。
4. FRAP法：铁还原能力 (FRAP) 方法测量样品对Fe3+的还原能力，其原理是将含有Fe3+的试液与抗氧化剂反应后，Fe3+被还原为Fe2+，测试Fe2+的含量即可评估抗氧化剂的抗氧化性能。
5. TBARS法：该方法是用于评估脂质过氧化物含量，从而推断抗氧化剂的能力。
该评估方法是通过测定细胞膜上的脂质过氧化产物（丙二醛）来分析抗氧化剂活性。
6. Total Phenolic Content (TPC)法：该方法最初是用来测定葡萄酒和咖啡中酚类化合物含量的。
后来发现大多数植物成分含有大量的酚类化合物，故也用于测定植物中的酚类含量。
绝缘油中T501抗氧化剂含量检测细则(红外光谱法)
绝缘油中T501抗氧化剂含量检测细则（红外光谱法）1检测条件1.1环境要求除非另有规定，检测均在当地大气条件下进行，且检测期间，大气环境条件应相对稳定。
a)取样应在良好的天气下进行。
b)环境温度不宜低于5℃。
c)环境相对湿度不大于80%。
1.2待试样品要求a)用洁净的500mL 磨口具塞试剂瓶，从设备下部取样口采样500mL。
b)油样在运输、保管过程中要注意样品的防尘、防震、避光和干燥等。
1.3人员要求试验人员需具备如下基本知识与能力：a)熟悉绝缘油抗氧化剂含量检测技术的基本原理和标准。
b)了解红外光谱仪的技术参数和性能。
c)掌握绝缘油抗氧化剂含量检测操作方法和影响因素。
d)了解被测样品取样基本要求。
e)熟悉电力生产和化学相关安全管理规定。
f)经过上岗培训并考试合格。
1.4安全要求a)执行国家电网公司《电力安全工作规程（变电部分）》相关要求。
b)现场取样至少由2人进行。
c)应在良好的天气下进行取样工作。
d)按照化学药品安全使用规定进行操作，注意防火防毒。
e)测试仪器确保良好接地。
1.5试验仪器及材料要求1.5.1主要仪器设备a)红外分光光度计：波长涵盖3800cm -1～3500cm -1，分辨率不低于4cm -1。
b)液体吸收池：在3800cm -1～3500cm -1范围内透明、具有无选择性吸收的任何材料的池窗(常用池窗有KBr，NaCl)、光程长0.3mm～1.0mm（也可根据不同的仪器状况，选择合适程长)的吸收池。
c)吸耳球。
d)玻璃注射器：1mL～2mL。
e)搅拌器。
f)分析天平，精度为0.0001g。
冷月无声1.5.2试剂与材料要求a)四氯化碳：分析纯。
b)浓硫酸：密度1.84g/cm 3，98%，分析纯。
c)2，6二叔丁基对甲酚：化学纯。
d)干燥白土：细度小于200目的白土约500g ，在120℃下烘干1h ，保存于干燥器内。
2检测准备2.1环境、人员、仪器准备检查环境、人员、仪器满足检测要求。
抗氧化剂抗氧化活性的测定方法_一_
利用脂质氧化测定抗氧化活性时 ,在常温下添加 完抗氧化剂后 ,脂质氧化变慢 ,抗氧化活性的测定往 往需要几个月甚至更长的时间 。因此常使用各种加 速氧化的方法 , 如烘箱法 、活性氧法 、Rancimat 法 、 OSI 法 。这些方法是通过升温或增加氧浓度加速氧 化的 。上述加速氧化所使用的温度与食品体系中氧 化变质的条件不同 ,而且高温加速试验造成氧化机理 的改变 ,有可能导致错误的结果 。
法和 DPPH 法 。 311 以抗氧化剂抑制脂质氧化为基础的方法
在食品中 ,以抑制脂质氧化降解为基础的方法是 测定抗氧化活性最方便也是最常用的方法 。脂质中 的不饱和脂肪酸自动氧化 ,生成不稳定的氢过氧化 物 ,氢过氧化物继续分解形成短碳链的醛 、酮 、酸等小 分子化合物 。抗氧化剂的加入可以延缓氢过氧化物 及其分解产物的形成 ,由此可测得抗氧化活性 。由于 氧化的底物 、引发或加速氧化的方法以及脂质氧化检 测方法的不同 ,该法又可分为以下几种情况 。 31111 氧化的底物或使用的体系
为了得到重复性的结果 ,选择底物时应优先考虑 单一的物质 ,如亚油酸或亚油酸甲酯 。不推荐使用植 物油或血浆等生物试样作为底物 ,因为它们是混合 物 ,提供完全相同的底物是不可能的 。此外 ,底物中 含有的抗氧化剂 (如植物油中常含有 VE) 也能参与测 试过程 ,干扰测定 。但是实际测定中常使用植物油等 脂质混合物 ,因为它们是与真实食品有关的脂质成 分 。实际操作中应根据具体的测试方法选择合适的 底物和测试体系 。 31112 引发或加速氧化的方法
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结引言：抗氧化物活性测定在食品、医药、化妆品以及生命科学等领域具有重要应用。
目前，常用的抗氧化物活性测定方法主要包括化学法、生物法和物理法。
本文将对这几种方法进行总结。
一、化学法1.1.DPPH自由基法该方法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、通过DPPH自由基与抗氧化物发生反应，使DPPH自由基得以还原为无色溶液，测定溶液的吸光度来评估抗氧化活性。
1.2.ABTS自由基法该方法通过生成具有特定吸光度的ABTS自由基，评估抗氧化物对自由基的清除能力。
与DPPH自由基法相比，ABTS自由基法具有更高的灵敏度和稳定性。
1.3.羟自由基清除法该方法利用特定的化学反应，测定样品对羟自由基的清除能力，评估其抗氧化活性。
该方法适用于抗氧化物活性测定和体外抗氧化活性评价。
1.4.过氧化物清除法该方法测定样品对过氧化物的清除能力，通过测定生成的不稳定的自由基产物的分解速率，评估抗氧化活性。
该方法适用于测定生物样品的抗氧化活性。
二、生物法2.1.脂质过氧化抑制能力测定法该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力，评估其抗氧化活性。
常用的指标包括丙二醛生成量、硫代巴比妥酸反应物（TBA）生成量等。
2.2.DNA损伤保护能力测定法该方法通过测定样品对DNA损伤的保护能力，评估其抗氧化活性。
常用的指标包括DNA链断裂率、碱基损伤率等。
2.3.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法该方法测定样品中SOD的活性，评估其清除超氧自由基的能力。
常用的指标包括抑制率、相对酶活等。
2.4.过氧化氢酶（CAT）活性测定法该方法测定样品中CAT的活性，评估其清除过氧化氢的能力。
常用的指标包括催化剂浓度、酶单位等。
三、物理法3.1.相对电子自旋共振法该方法通过测定样品中的自由基产物的电子自旋共振信号的强度，评估抗氧化物的活性。
常用的指标包括g值、线宽等。
3.2.高温氧化法该方法利用样品在高温条件下的氧化反应，评估其抗氧化活性。
抗氧化剂抗氧化活性的测定方法_二_王会
抗氧化剂抗氧化活性的测定方法(二)＊王 会1 郭 立2 谢文磊11(河南工业大学化学化工学院,郑州,450052) 2(河南省粮油机械工程有限公司,郑州,450003)摘 要 综述了抗氧化剂抑制脂质氧化、清除自由基、抑制自由基对底物的氧化降解以及还原能力4类测定抗氧化活性的方法,并讨论了评价或表征测定结果的方法和参数以及对测定方法的要求。
关键词 抗氧化剂,抗氧化活性,测定方法 第一作者:硕士研究生(谢文磊为通讯作者)。
＊此篇文章续本刊2006,32(3):92～96 收稿日期:2005-12-053.3 以抗氧化剂抑制自由基对底物的氧化降解为基础的方法此法与3.1.3.2方法不同之处在于测试体系中既有底物又有自由基,但底物自身不能生成自由基,它与外源自由基反应,形成有荧光或带颜色的特征物质,抗氧化剂的加入使生成的特征产物减少,由此可测得抗氧化活性。
3.3.1 ORAC 法ORAC (oxygen radical absorbance capacity ,氧自由基吸收能力)法是近年来由Cao 等人[31]在Glaz -er [32]研究的基础上发展起来的,原理如下:天然蛋白质β-藻红蛋白(β-phy coerythrin ,β-PE )在540nm 光波激发下可发射565nm 的荧光。
在有自由基或氧化剂时,β-PE 的荧光逐渐减弱;当有抗氧化剂存在时,β-PE 的荧光减弱被抑制。
自由基或氧化剂可用AAPH (产生过氧自由基)、H 2O 2-Cu 2+(主要产生HO ·)和Cu 2+。
使用AAPH 时,可测量所有公认的抗氧化剂,如抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素。
使用Cu 2+-H 2O 2时,可测量甘露醇、葡萄糖、尿酸以及过渡金属螯合剂这类物质,不用于测定抗坏血酸、α-生育酚[33]。
测定结果以Trolox (标准抗氧化剂)当量表示。
此法是一种新的、独特的评价各种物质抗氧化活性的方法。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法（倾向于考虑DPPH法和ORAC法）1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[1]FRAP(ferric ion reducing antioxidant power)方法，在低pH值的溶液中，Fe3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe2+-TPTZ。
反应的结果常以Fe2+当量或标准物质的抗氧化能力表示。
该法快速简便、易于操作、重复性好，但FRAP反应属于电子转移(SET)反应，因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。
而且该法实际测定的是待测生物活性物质将Fe3+还原为Fe2+的能力，因此没有抗氧化能力的生物学相关性。
2.TEAC法(trolox equivalent antioxidant capacity)ABTS(2,2'-amino-di(2-ethyl-benzothiazoline sulphonic acid-6)ammonium salt,2,2'氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐)与过氧化物酶和氢过氧化物在一起形成ABTS+阳离子自由基。
在抗氧化剂存在时，这种自由基混合物的光吸收值下降，下降程度取决于抗氧化剂的抗氧化能力，测得的结果以TEAC表示，即被测抗氧化剂清除ABTS·+的能力(吸光度大小的变化)与标准抗氧化剂trolox(VE的水溶性类似物)清除ABTS·+的能力的比值。
TEAC法十分简单，适用于大量样品的分析检测。
但是，ABTS·+并非生理自由基，缺乏生理相关性，而且与FRAP方法相似，ABTS·+与不同抗氧化剂问的氧化反应时间不同，因此，只能定性不能定量评价样品的抗氧化能力。
3.DPPH法[2，3](2，2-diphenyt-l-picrylhydrazyl radical scavenging capacity)DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是较常用的方法之一。
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抗氧化剂的测定摘要：综述了抗氧化剂抑制脂质氧化、清除自由基、抑制自由基对底物的氧化降解以及还原能力4类测定抗氧化活性的方法，并讨论了评价或表征测定结果的方法和参数以及对测定方法的要求。
关键词：抗氧化剂，抗氛化活性，测定方法。
测量脂质氧化的方法很多，以过氧化值、共扼二烯、TBARS法和气相色谱法最为常用。
各种方法都有优缺点，实际测定中将各种方法结合使用。
1.ABTS法ABTS法最初是Marklund根据含有蛋白质的血红素过氧化物酶能使无色的ABTS[2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid ) d iammoniumsalt,2,2-连氮-(3-乙基苯并唾哇琳-6-磺酸)二按盐]变成蓝绿色的ABTS·十，用于测定组织样品中血红蛋白的含量[1]。
后来这个方法被Miller等人加以改进，用于测定生物样品的抗氧化活性[2]，然后广泛应用于食品和天然水溶性酚类物质抗氧化活性的测定.ABTS法广泛用于评价抗氧化剂清除自由基的能力。
此法快速简单.可用于常规测定。
但对于同一物质，测得的TEAC值往往不同，例如，在不同的研究中，栋精的TEAC值分别为3.1和6.4。
这不仅与具体的测试方法有关，即使同一方法，TEAC值也有可能不同，例如，用同样的方法，栋精浓度为1.5和1.0μmol/L时的TEAC分别为5.6和6.4。
ABTS·十在与氢原子供体的反应中选择性差是此法又一个不足，它可与任何羟基化的芳香族化合物反应，这与它们实际抗氧化能力无关，TEAC值也包括对抗氧化不起作用的羟基。
2.DMPD +法Fogliano等人提出的清除自由基的方法与ABTS法类似:在酸性条件下，DMPD (N, N-dimethyl-pphenylenediamine)可被ABAP,Fe C13,CU C12,H202氧化，生成稳定的DMPD·+，它在505nm处有最大吸收峰。
根据加人抗氧化剂后吸光度的变化可测得样品清除自由基的能力。
Fogliano等人用FeC13与DMPD反应测定葡萄酒的抗氧化活性。
DMPD 只溶于水，不能用于疏水性抗氧化剂的测定。
3.DPPH 法DPPH法是1950年代提出的，最初用于发现食物中的供氢体，后来广泛用于定量测定生物试样、酚类物质和食品的抗氧化能力。
DPPH·( 2,2 ' -diphenyl-l-picrylhydrazyl, 2,2一二苯代苦味酞基苯脐)是一种稳定的自由基，其乙醇溶液显紫色，在515 nm处有最大吸收。
当有供氢能力的抗氧化剂存在时(如酚类),DPPH·溶液的颜色变浅，吸光度值变小。
根据吸光度的变化可测得抗氧化剂的活性。
DPPH法又可分为动力学法和静力学法2种。
动力学法测的是添加完含有供氢能力的样品后DPPH·减弱的速率，表征的是被测物的反应性，即反应的快慢，一般用DPPH·减弱的起始速率表示,静力学法测的是被测样品清除DPPH·的量，或DPPH·与某一供氢体反应的化学计量关系或复杂混合物中活性一OH的量，常以I几。
表示〔gal。
与ABTS法类似，被测物清除DPPH·的产物也能与DPPH·作用，影响测定结果。
Sanchez-Moreno等人把上述2种方法结合在一起，以抗氧化效率AE (antioxidant efficiency)表示，AE用参数1/E几0-t5。
计算(is。
是达到50%变化时需要的时间)。
ABTS·+和DPPH·是测定抗氧化活性使用最广的2种人工生成的自由基，但是它们对抗氧化剂的响应以及它们的操作也有几个重要的不同:(1)DPPH·不需制备可直接得到，而ABTS·+必须由酶或化学反应生成。
(2)ABTS十可溶于水，也可溶于有机溶剂，所以既可测量水溶性化合物也可测量脂溶性化合物。
而DPPH·只能溶于有机溶剂，特别是乙醇，不溶于水，在评价水溶性抗氧化剂的作用时，这是一个很大的局限。
(3) 在与供氢体的反应上，DPPH·比ABTS·+的选择性强。
例如，DPPH·不能与只含有一个-OH的芳香酸反应[3]，也不能与B-环上没有-OH的类黄酮反应[4]。
而ABTS·+可与任何经基化的芳香族化合物反应。
4. Fremy 自由基和galvinoxyl 还原法[5]该法是根据稳定的Fremy自由基(potassium nitrosodisulphonate，五硫化二钾) 溶于水，合成的过氧自由基galvinoxyl [2 , 6- di-tert -butyl-a-(3 ,5-di-tertbutyl-4-oxo-25-cyclohexadien-1-ylidene)-p-tolyloxy ] 溶于乙醇，它们能与供氢体反应，分别用于测定茶叶中的水溶性和脂溶性抗氧化剂的活性。
自由基浓度用电子自旋共振(ESR)仪测定，根据自由基浓度的变化可知抗氧化剂的活性。
Galvinoxyl和Fremy自由基选择性强，只能与供氢能力强的供氢体反应;灵敏度高，可在混浊的或颜色深的溶液中进行。
5. ORAC法ORAC (oxygen radical absorbance capacity,氧自由基吸收能力)法是近年来由Cao等人[6]在Glazer[7]。
研究的基础上发展起来的，原理如下:天然蛋白质β-藻红蛋白((3-phycoerythrin,β-PE)在540nm光波激发下可发射565nm的荧光。
在有自由基或氧化剂时，β-PE的荧光逐渐减弱;当有抗氧化剂存在时，β-PE的荧光减弱被抑制。
自由基或氧化剂可用AAPH(产生过氧自由基)、H202-CU2+ (主要产生HO·)和Cu2+。
使用AAPH时，可测量所有公认的抗氧化剂，如抗坏血酸。
α-生育酚、β-胡萝卜素。
使用Cu2+-H2O2时，可测量甘露醇、葡萄糖、尿酸以及过渡金属赘合剂这类物质，不用于测定抗坏血酸、α-生育酚[8]。
测定结果以Trolox标准抗氧化剂)当量表示。
此法是一种新的、独特的评价各种物质抗氧化活性的方法。
6.TRAP法Wayner等人的TRAP( total radical trapping antioxidant parameter，总自由基清除抗氧化能力)法[9]是过去10年中测量血浆或血清总抗氧化能力最广的方法。
该法中的过氧自由基由AAPH产生，在向血浆中添加完AAPH后，通过测量反应过程中消耗的氧检测底物的氧化状况。
在诱导期内，氧化被血浆中的抗氧化剂抑制。
结果以血浆的诱导期与标准抗氧化剂Trolox的诱导期的比值表示。
而Ghiselli等人报道的TRAP法基本上是Glazer法的复制。
Glazer于1990年发表的TRAP法用AAPH产生过氧自由基或用Cu2+-抗坏血酸产生HO·,氧化底物B-或R-PE 藻红蛋白)。
Glazer假定在过氧自由基或HO·存在时，PE荧光的减弱与时间呈线性关系。
由试样保护PE防止过氧自由基或HO·氧化的诱导期与Trolox诱导期的比值定量给出试样的抗氧化力。
然而，PE荧光淬灭的速度与过氧自由基或HO不是线性关系，而且诱导期一般很难测定[10]。
7.DCFH-DA法Valkonen和Kuusi报道的DCFH-DA(dichorofluorescin-diacetane，二氧荧光素二乙酸醋)法也是测定总的自由基清除能力[11]。
AAPH产生的过氧自由基氧化DCFH-DA，生成DCF( dichlorofluorescein，二氯荧光黄)。
DCF有很强的荧光(Ex480 nm, Fm526nm)，在504 nm也有吸收，因此可用荧光法或分光光度法检测。
在此法中，DCF的荧光的形成或吸光度的出现包括4个阶段:第一延滞期(the first lag phase)是由于样品中的抗氧化剂形成的，它们被过氧自由基消耗完后反应进行到第一传播阶(the first propagation phase);由于在第一传播阶段添加的内标抗氧化剂Trolox中断此传播阶段，致使第二延滞期开始，相应的反应随Trolox的消耗进人第二传播阶段。
由第一延滞期与第二延滞期的比值可得出样品的抗氧化能力。
8.KI法[12]这是一个自动分析法，也是一种测定清除过氧自由基活性的方法。
该法以PV法的原理为基础，用AAPH产生的过氧自由基取代脂质过氧化物，将KI氧化生成碘分子。
抗氧化剂抑制过氧自由基引起的氧化，使碘释放的速率降低。
氧化生成的碘的量可通过自动电位滴定仪用硫代硫酸钠滴定得出。
此法简单，可用于测定各种植物提取物和类黄酮的抗氧化活性。
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