需氧革兰阳性杆菌及检验共109页
需氧革兰阳性杆菌检验
三、微生物学检验
• 要求快速检出、分离鉴定病原菌 以利早期确诊、查清疫源 及时治疗和采取预防对策
三、微生物学检验
（一）检验程序
三、微生物学检验
（二）标本的采集
• 皮肤炭疽：病灶深部标本 • 肺炭疽：痰和血液 • 肠炭疽：粪、呕吐物 • 脑膜炭疽：CSF、血液 • 死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后
三、临床意义
(二)索状因子 细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的
呼吸与磷酸化 (三)K抗原 -细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 -抗吞噬 -有利于细菌在黏膜表面的定植
三、临床意义
•所致疾病：白喉-急性呼吸道传染病
• 传染源：患者及带菌者 • 传播途径：飞沫或污染 • 临床表现
– 细菌--上呼吸道粘膜，生长繁殖，产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症： • 炎性渗出，坏死，纤维蛋白 →→假膜→→窒息
三、临床意义
• 锡克试验（Schick test）： （白喉外毒素皮内试验）
• 调查人群在感染或预防接种后对白喉是否产生免疫力 • 根据外毒素与抗毒素中和的原理，以少量白喉外毒素测定
机体有无相应抗毒素 • 缺点—观察时间长、操作繁琐，不易进行广泛测试
三、临床意义
•类白喉棒状杆菌致病性
•多为人或动物的正常菌群 •存在于鼻腔、咽喉部、外耳道、眼结膜、外阴和皮肤等处 •一般无致病性或仅能与其他细菌一起引起混合感染 •可引起医院内感染，如菌血症、心内膜炎、肺炎、咽炎等
三、微生物学检验
涂片染色
--G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告 --荚膜荧光抗体染色
核酸检测 核酸杂交 分离培养
--BAP、戊烷脒多黏菌素B平板 --2%兔血清肉汤增菌→分离培养
需氧革兰阳性杆菌
2、临床检验程序
• 标本采集:
血液、脑脊液、呕吐物、粪便、分泌物等
• 标本直接检查:
--在CSF标本中成对排列,形如球菌,易误 认为肺炎链球菌
--有时与类白喉杆菌也极易混淆
• 分离培养:
杂菌污染标本接种20%NaCl心脑浸液肉汤2支 1支—10%CO2,37℃24～48h→分离培养 (BAP、 萘啶酸选择性平板) 1支—4℃ “冷增菌” →分离培养(每24h1次,
• 血琼脂平板 —有β溶血环
• 卵黄平板:
生长迅速,培养3h后,虽看不到菌落,但 该菌可分解卵磷脂而形成白色得混浊 环,称乳光反应或卵黄反应
生化反应:
•能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨苷等 •能胨化牛乳,液化明胶,VP(+) •触酶(+)、卵磷脂酶(+) • 多次传代后生化特性常可改变
抵抗力:
AP631炭疽噬菌体
• 串珠试验:
--接种于含青霉素(0、05～0、5U/ml)得肉汤 中,35℃ 6h,大而均匀成串得圆球状菌体
--与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 --类炭疽杆菌无此现象
•青霉素抑制试验:
接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板, 35℃24h
生长 受抑制不生长
•串珠和青霉素抑制联合试验:
•人类主要因接触带菌动物或其产品经皮肤损 伤感染而引起类丹毒。也可引起败血症或心 内膜炎
(二)微生物学检验
1、红斑丹毒丝菌基本特性 • 形态结构:
G+细长杆菌,单个存在或形 成短链,粗糙型菌落涂片可 呈长丝状,且有分支及断裂, 与放线菌得形态相近 无芽胞、无鞭毛、无荚膜
•培养特性:
厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环 境,传代后有氧环境也能生长,最适温度 30~35℃
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验
第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验本章考点：1.概述：概念2.棒状杆菌属（白喉棒状杆菌）、炭疽芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、产单核李斯特菌●生物学性状●临床意义●微生物学检查常见的与临床有关的需氧革兰阳性杆菌有棒状杆菌属、芽胞杆菌属、李斯特菌属、丹毒丝菌属、加特纳菌属。
上述菌属的主要区别见表5-23-1。
表5-23-1 革兰阳性杆菌属的鉴别一、棒状杆菌属（一）简述：棒状杆菌属是①一群革兰阳性杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状.故名棒状杆菌。
②本菌着色不匀，有异染颗粒。
③无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
（无特殊结构）④需氧，⑤营养要求较高，能分解一些糖类，产酸不产气。
本属细菌种类较多，有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌等。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，棒状杆菌除白喉棒状杆菌外，其余统称为类白喉棒状杆菌，大多数为条件致病菌。
（二）白喉棒状杆菌1.生物学特征（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌，大小为（2～5）μm×（0.5～1.0）μm。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
染色特点：在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒，这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
美蓝染色菌体着色不均匀，呈现着色深浅相间的节段或着色较深的颗粒；Neisser（奈瑟）染色，菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色，菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，生长最适温度为35℃～37℃，pH为7.2～7.8。
营养要求高，常用下列培养基进行分离培养。
1）血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
2）吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，10～18h形成灰白色、湿润、S型菌落。
涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
3）亚碲酸钾血琼脂：本菌能在亚碲酸盐琼脂平板上能还原碲盐为元素碲，使菌落呈黑色。
第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验
微生物第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点棒状杆菌属（白喉棒状杆菌）、炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、产单核李斯特菌生物学性状、临床意义、微生物学检查。
棒状杆菌属芽胞杆菌属李斯特菌属丹毒丝菌属加特纳菌属形态棒状杆菌有芽胞短杆、链或丝状细杆或线状杆菌、多形性触酶＋＋＋－－动力－＋＋－－对氧需、兼需、兼兼性兼性兼性G＋C mol% 51～65 32～60 36～38 35～40 42～44（一）白喉棒状杆菌G+，杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状。
着色不匀，有异染颗粒（异染颗粒的主要成分是RNA核糖核酸和多偏磷酸盐，具有鉴定意义）。
无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
需氧，营养要求较高。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。
1.培养特性：在普通培养基上生长不良，形态不典型。
血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
☆吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，形成灰白色、湿润、S型菌落。
涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
(让其迅速生长并形成典型涂片染色形态的培养方法)亚碲酸钾血琼脂：本菌能吸收亚碲酸盐，并使其还原为元素碲，使菌落呈黑色。
（选择鉴别培养基）<霍乱弧菌使菌落呈褐色>2.致病性本菌一般不侵入血流，但其产生的大量外毒素可吸收入血，致病物质：白喉毒素（主要的致病因素、索状因子、K抗原），引起毒血症。
白喉棒状杆菌和毒素可使局部黏膜上皮发生炎性渗出并将炎性细胞和坏死组织和菌体凝结在一起，形成灰白色假膜，假膜脱落与气管内，可阻塞呼吸道成为白喉早期致死的主要原因。
而严重的毒血症引起的细胞变性、坏死、内脏出血和神经麻痹等严重损害，是白喉晚期死亡的主要原因。
3.免疫性：☆锡克试验或致敏红细胞凝集试验。
调查人群对白喉是否产生免疫力。
4.标本采集：无菌长棉拭子，从可疑的伪膜边缘采集分泌物，未见伪膜的疑似。
5.生化反应：主要用于鉴别白喉棒状杆菌与类白喉棒状杆菌。
尿素分解试验：白喉棒状杆菌（-），类白喉棒状杆菌（+）。
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点总结
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点总结一、棒状杆菌属G+，杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状。
着色不匀，有异染颗粒。
无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
需氧，营养要求较高。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。
（一）白喉棒状杆菌1.生物学性状（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。
细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
异染颗粒：Neisser（奈瑟）染色；Albert（阿培特）染色。
这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
异染颗粒（浓染颗粒）Neisser（奈瑟）染色：菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色：菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
（2）培养特性：在普通培养基上生长不良，形态不典型。
1）血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
2）吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，形成灰白色、湿润、S型菌落。
涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
3）亚碲酸钾血琼脂：本菌能吸收亚碲酸盐，并使其还原为元素碲，使菌落呈黑色。
4）液体培养基。
（3）生化反应：触酶试验阳性，氧化酶试验阴性。
分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖，产酸不产气。
不分解乳糖，极少分解蔗糖。
能还原硝酸盐，不液化明胶，不产生吲哚，不分解尿素。
据亚碲酸钾血琼脂培养基、肉汤培养基的生长特点及生化反应，可将本菌分为轻、中、重三型。
在我国以轻型多见。
分型与所致疾病的严重程度无关，可用于流行病学调查。
2.致病性致病物质：白喉棒状杆菌引起白喉，多在秋冬季节流行。
以咽白喉最常见，喉白喉及鼻白喉次之，偶亦引起眼结膜、外耳道、阴道及皮肤的局部病变。
本菌一般不侵入血流，但其产生的大量外毒素可吸收入血，引起毒血症。
毒素能与敏感的心肌、肝、肾、肾上腺等组织细胞及外周神经，尤其与支配咽肌和腭肌的神经结合，引起细胞变性、坏死、内脏出血和神经麻痹等严重损害，是白喉晚期死亡的主要原因。
微生物学检验需氧革兰阳性杆菌及检验
分枝杆菌属种类
结核分枝杆菌复合群
结核分枝杆菌 牛分枝杆菌、 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌
光产色分枝杆菌 暗产色分枝杆菌 不产色分枝杆菌 迅速生长分枝杆菌
分 枝 杆 菌 属
非典型分枝杆菌
麻风分枝杆菌
课件制作 陆曙梅
结核分枝杆菌－－形态染色
细长略弯，分枝生长易 着色 抗酸染色阳性
课件制作 陆曙梅
炭疽芽孢杆菌－－抗原结构与抵抗力
抗原结构： ※炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因 子组成，具有毒性作用。三种成分单独存在无 致病作用。 ※菌体抗原：耐热、耐腐败，能与相应抗体结合 发生沉淀反应，用于Ascoli试验 抵抗力：本菌芽孢抵抗力强，芽孢对碘和氧化 剂敏感 耐药性：本菌对青霉素、氨基糖甙类、四环素 类、环丙沙星敏感
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白喉棒状杆菌－－毒力试验
意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重 要依据 方法 艾立克平板毒力试验 对流电泳法 协同凝集试验 动物实验
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需氧芽孢杆菌属
是一大群下枯杨，能产生芽孢的革兰阳 性大杆菌。 种类： 炭疽芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 蜡样芽孢杆菌 多粘杆菌等
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结核分枝杆菌－－生化反应
生化反应不活泼，不发酵糖类 与非结核分枝杆菌鉴别：
耐热触酶试验－；（非结核分枝杆菌＋）
与牛分枝杆菌鉴别 烟酸试验＋；（牛分枝杆菌－）
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结核分枝杆菌－－抵抗力与变异性
抵抗力特点：“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000）
※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物
课件制作 陆曙梅
结核分枝杆菌－－所致疾病与免疫性
经多途径感染，引起结核病，以肺结核 多见 类型：原发感染和继发感染 免疫性 ※抗结核免疫以细胞免疫为主 ※抗结核免疫属带菌免疫 ※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验
第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验本章考点：1.概述：概念2.棒状杆菌属（白喉棒状杆菌）、炭疽芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、产单核李斯特菌●生物学性状●临床意义●微生物学检查常见的与临床有关的需氧革兰阳性杆菌有棒状杆菌属、芽胞杆菌属、李斯特菌属、丹毒丝菌属、加特纳菌属。
上述菌属的主要区别见表5-23-1。
表5-23-1 革兰阳性杆菌属的鉴别棒状杆菌属芽胞杆菌属李斯特菌属丹毒丝菌属加特纳菌属形态棒状杆菌有芽胞短杆、链或丝状细杆或线状杆菌、多形性触酶+ + + - -动力- V + - -对氧需氧、兼性厌氧需氧、兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧G+Cmol% 51～65 32～69 36～38 36～40 42～44一、棒状杆菌属（一）简述：棒状杆菌属是①一群革兰阳性杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状.故名棒状杆菌。
②本菌着色不匀，有异染颗粒。
③无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
（无特殊结构）④需氧，⑤营养要求较高，能分解一些糖类，产酸不产气。
本属细菌种类较多，有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌等。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，棒状杆菌除白喉棒状杆菌外，其余统称为类白喉棒状杆菌，大多数为条件致病菌。
（二）白喉棒状杆菌1.生物学特征（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌，大小为（2～5）μm×（0.5～1.0）μm。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
染色特点：在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒，这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
美蓝染色菌体着色不均匀，呈现着色深浅相间的节段或着色较深的颗粒；Neisser（奈瑟）染色，菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色，菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，生长最适温度为35℃～37℃，pH为7.2～7.8。
13章需氧革兰阳性杆菌(检验)
三、微生物学检验
㈠检验程序 见图13-2
㈡标本的采集与处理
皮肤炭疽：病灶深部标本/分泌物 肺炭疽：痰、血液 肠炭疽：粪便、呕吐物 脑血炭疽：脑脊液、血液
其它：内脏、耳、舌尖、淋巴结、污染物等
㈢标本直接检查 1、直接镜检 2、荚膜荧光抗体染色 荧光显微镜
3、核酸检测
PCR、核酸杂交
在血琼脂平板上呈β溶血
三、微生物学检验
㈠检验程序 见图13-5 ㈡标本采集 排泄物、呕吐物和可疑食物
㈢标本直接镜检
㈣分离培养与鉴定 1、活菌计数 涂布法 倾注平板法
细菌数大于105个/克或大于105个/毫升，即有
发生食物中毒的可能
2、分离培养
普通琼脂平板
血琼脂平板
3、鉴定
依据形态、染色、菌落特点、生化反应、血
排列呈竹节状
有毒株有荚膜 芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，小于
菌体，位于菌体中央
无鞭毛
㈡培养特性
需氧
营养要求不高
在普通培养基中生长旺盛
菌落直径2mm～4mm
灰白色、无光泽、不透明、扁
平、边缘不整齐的粗糙型
在低倍镜下观察菌落边缘呈
“卷发状” 在液体培养基中呈絮状沉淀生长
第13章 需氧革兰阳性杆菌
芽胞杆菌属——炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌 李斯特菌属——产单核李斯特菌 丹毒丝菌属——红斑丹毒丝菌
加特纳菌属——阴道加特纳菌
第一节 炭疽芽胞杆菌
引起动物和人类炭疽病
是人类历史上第一个被发现的病原菌，俗
称炭疽杆菌
一、临床意义
1.致病物质
荚膜
抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散
第二节 蜡样芽胞杆菌