血液细胞分析仪原理及应用

三、Coulter ACT diff血细胞分析仪的结构
۩ 采用库尔特电阻抗原 理测量血细胞的体积 和数量，采用单色光 比色原理检测血红蛋 白，并根据血细胞体 积分布直方图得出白 细胞的三分类。
۩ 每小时可作35～50个 样本
۩ WBC,RBC,HGB,PLT, LY,MO,GI
Coulter ACT diff
二 、
۩ 脉冲高度叠加，经过换算可得到红
血 细
细胞的比容 HCT
胞 计
数
检
测
原
理
۩ 红细胞比容的测定方法：
۩ 红细胞比容指红细胞在全血中所占的容 积百分比是用来检测红细胞数量的一个 比值。
۩ 先以单个脉冲细胞的高度计算红细胞的
平均体积MCV，再乘以红细胞的数，
得出红细胞比容
二 、
۩ 正常成年人的红细胞比容,男性为40%-
血液细胞分析仪原理及应用
主要内容
一．血液细胞分析仪的发展简史 二．血细胞计检测原理 三．Coulter ACT diff血细胞分析仪的
结构
۩ 人类生理和病理变化，往往会引起 血液组分的变化，所以及时了解血 液组分的变化，可以为医生提供诊 断与治疗疾病的重要依据。
۩ 红细胞
۩ 双凹圆盘 无核
۩ 红细胞的直径在6～9µm之间，平均为 7.2µm。
MCB ۩ 平均血红蛋白量
MCH ۩ 平均血红蛋白浓度
MCHC
一、血液细胞分析仪的发展简史
۩ 1956年美国科学家W.H.Coulter将电 阻法计数粒子的专利技术应用于血 细胞计数获得成功
۩ 其原理是根据血细胞非传导的性质， 以电解质溶液中悬浮血细胞在通过 计数小孔时引起的电阻变化进行检 测为基础，进行血细胞计数和体积 测定，这种方法称为电阻法或库尔 特原理。
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
۩ 设在540nm处为λ1，690nm处为λ2， 则在λ1时的吸光度为：
A1 K 1 CL AS1
۩ 式中，Aλ1为在λ1时的吸光度；Kλ1为
在λ1时的吸光系数；C为待测物质浓
度；L为吸收池厚度。AS1为光散射
二 、
和背景吸光度。同样对于λ2也有：
血 细
Coulter ACT diff
۩ 反应池
三 、
血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
۩ 右侧面
۩ 蠕动泵
۩ 稀释液储存箱
三
۩ 针筒
、
Coulter ACT diff
۩ 电磁阀
۩ 过滤器
۩ 气泵
血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
Coulter ACT diff
۩ 夹阀
三 、
血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
二
小和数目成正比。
、 血
细
胞
计
数
检
测
原
理
2. 白细胞分类及计算方法
۩ 根据脉冲的大小，即可人为地将血内地白 细胞分成几群（二分群或三分群）
۩ 三分类：淋巴细胞LY，单核细胞MO，粒 细胞GI。
۩ 五分类：淋巴细胞LY，单核细胞MO，粒
细胞GI（中性细胞，嗜酸性细胞，嗜碱性
细胞）
二 、
۩ 电阻抗法白细胞“分类”不能代替显微镜
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
7. 五分类血液分析仪原理及应用机型
1. 电阻抗、高频电导及激光散射联合 检测法即库尔特公司的VCS技术
۩ Coulter公司的STKS型、MAXM 型以 及Gen．s型五分类血液分析仪
2. 光散射和细胞化学染色联合检测法
۩ Bayer公司的的ADVIA 120型和2120
血
细
胞
计
数
检
测
原
理
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
۩ 经过溶血剂处理后的白细胞根据体 积大小可以初步确认其相应的种类：
۩ 第一亚群（小细胞群）是淋巴细胞LYM；
۩ 第二个亚群是单个核细胞群MONO， 也被称为中间细胞MID；
۩ 相当于粒细胞的细胞群GRAN位于第三
二
亚群（大细胞群）。
、 血
血
细
数的同时进行分析测量。
胞
计
数
检
测
原
理
直方图与脉冲信号的关系
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
۩ 在进行白细胞分析时，仪器的计算
机部分可以将白细胞体积从35～
450fl分为256个通道，每个通道约为
1.64fl，细胞根据其体积大小被分别
放在不同通道中，从而得到白细胞
体积分布的直方图
二
、
۩ 成年男子的红细胞个数为(4.6～ 6.2)×1012个/L
۩ 成年女子的红细胞个数为(4.2～ 5.4)×1012个/L
۩ 白细胞
۩ 有核 球形 ۩ 直径为7～25µm。 ۩ 正常人的白细胞数目为(4～10)×109个
/L
۩ 血小板
۩ 两面微凹的圆盘，受刺激时伸出伪足 ۩ 正常人的血小板值为(100～300)×109
细
胞
计
数
检
测
原
理
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
۩ 仪器根据各细胞群占总体积的比例计算出 各细胞群的百分比，如果与该标本为的白 细胞总数相乘，即得到各项的绝对值
۩ 注意，由于各厂家血细胞分析仪使用的稀
释液和溶血剂成分不完全相同，对白细胞
膜的作用程度不同，所以仪器对各类白细
胞区分界限的规定有所不同，在使用时不
۩ 国外厂商：
۩ 日本SYSMEX ۩ 美国beckman-
coulter ۩ 日本KOHDEN ۩ 美国DANAM ۩ 瑞典BOULE ۩ 美国BAYER ۩ 美国ABBOTT
۩ 国内厂商：
۩ 南昌特康 ۩ 南昌百特 ۩ 深圳迈瑞 ۩ 桂林百利特
二、血细胞计数检测原理
1. 库尔特计数原理 2. 白细胞分类及计算方法 3. 红细胞计数核红细胞比容测定原理 4. 血红蛋白测定原理 5. 血小板计数原理 6. 其它参数计算方法 7. 五分类血液分析仪原理及应用机型
个/L，直径为2～4µm。
۩ 血红蛋白（血色素或血红素）
۩ 血红蛋白存在于红细胞中，是一种含铁 的色蛋白
۩ 成年男子为120～160g/L ۩ 成年女子为110～150g/L
血液细胞分析仪测量参数
۩ 红细胞RBC ۩ 白细胞WBC ۩ 血小板PLT ۩ 血红蛋白HGB
۩ 红细胞比容HCT ۩ 平均红细胞容量
۩ 卡槽
۩ 卡与试剂的批次相 对应
三 、
血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
Coulter ACT diff
۩ 计数软件卡
三 、
血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
۩ 正面内部
۩ 吸样针
۩ 反应池
三
۩ 光电管
、
Coulter ACT diff
۩ 电磁阀
۩ 扫流管
۩ 真空隔离室
血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
分 析
仪
的
结
构
Coulter ACT diff
3. 管路流程分析
三 、
血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
Coulter ACT diff
真空系统和计数
三 、 血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
Coulter ACT diff
排废和清洗系统
三 、 血 细 胞 分 析 仪 的 结 构
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
۩ 血小板分别贮存于64个通道内，直 方图范围为2-30fl。
۩ 为了使血小板计数更准确，有些仪
器专门设置了增加血小板准确性的
计数，如鞘流计数、浮动界标、拟
合曲线等
二
、
血
细
胞
计
数
检
测
原
理
6. 其它参数计算方法
۩ 根据以上的方法检测出的参数套用相应公式就可 计算出：红细胞比容(HCT)、平均血红蛋白量 (MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、淋巴细胞 计数百分比(LY％)血小板压积(PCT)等。
1. 库尔特计数原理
۩ 库尔特原理（coulter principle） ：
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
库尔特原理
۩ 悬浮在电解液中的颗粒/细胞，随电
解液通过小孔管时，因取代了相同
体积的电解液，在恒电流设计的电
路中导致小孔管内外两电极间电阻
发生瞬时变化，而产生了电位脉冲。
脉冲信号的大小和次数与颗粒的大
血 细
50%,女性为37%-48%。
胞 计
数
检
测
原
理
4. 血红蛋白测定原理
۩ 一般采取比色法 ۩ 加入溶血剂，释放血红蛋白 ۩ 用HiCN 生成氰化血红蛋白 ，或是
用SLS，光谱最大吸收在540nm附 近。
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
二 、 血 细 胞 计 数 检 测 原 理
双波长法测量血红蛋白含量
数结果。
计 数
检
测
原
理
仪器是如何进行细胞分群的呢？
۩ 仪器除给出细胞数据结果外，同时提供出 细胞体积分布图形，这些可以表示出细胞 群体分布情况的图形被称为直方图
۩ 它可以显示出某一特定细胞群的平均细胞 体积、细胞分布情况和是否存在明显的异 常细胞群
۩ 直方图是由测量通过感应区的每个细胞脉
二 、
冲累积得到的，根据库尔特原理可以在计
2. 管路工作过程：
۩ 进样
۩ 擦拭进样针外部并抽干
۩ 样本稀释诸如WBC反应池
三
۩ 二次稀释样本注入RBC反应池
、