皱纹盘鲍的染色体研究

日本西氏鲍与皱纹盘鲍杂交试验初报

日本西氏鲍与皱纹盘鲍杂交试验初报
郑升阳
（福建省平潭县水产技术推广站，福建摘平潭３００）５４０
Байду номын сангаас
要：０５年在福建省平潭县对日本西氏鲍（ｌｔｏｉ）与皱纹盘鲍（ｌｔｉＵｈｒａ）进行了杂２ＯＨａｉｉｓｂｌｉｏｓｉｄｎｉｉｄｓａｍｉｏｓｆ
福建省自１８年从日本长崎引进盘鲍（ｌ — ９６Ｈａｉｏｔｉｕ）ｉｄｓｓ至今，的人工育苗和养殖得到很大的发ｓｃ鲍
ｊｖｎｌｂｌｎｓｏｈｒｓｂｅｄｎｅｗｅｎＨ．ｓｅｏｄｉｎ．ｄｓｕａｎｉｒｏｒｔａｈｓｆｔｅａ — ｕｅｉａａｏｅｆｔｅｃｏｓｒｅｉｇｂｔｅｅｉｂｌｉａｄＨｉｃｓｈｎａｗｅｅｌｗｅｈｎｔｏｅｏｈｕ
Ｈ．ｉｂｌｉａｄＨ，ｄｉｃｓｈｎａｒｉｈｒｈｒｗｔａｅｆｔｅｌｒａｎｕｖｖｌｒｔｓｏｖｒｎｅｉｇｓｏｄｉｎｅｓｕａｎｉｗｅｅｈｇｅ，ｔｅｇｏｈｒｔｓｏｈａｖｅａｄｓｒｉａａｅｆｏｅｗｉｔｒｎ
ＰｒｌｍｉｒｔｙｏｙｂｉｉａｉｎｂｔｅａｉｔｓｓｅｏｄｉａａｉｔｓｄｉｃｓｈａｎａｅｉｎａｙｓｕｄｎｈｒｄｚｔｏｅｗｅｎＨｌｏｉｉｂｌｉｎｄＨｌｏｉｓｕｎｉ
Ｈ，ｓｂｌｉｎｉｏｄｄＨ．ｄｓｓａｎｉｒ０５ａｄ７．％ｒｓｅｔｅ．Ｔｅｓｒｉａｒｔｓｏｅｈｂｉｉｔｎｏｅａｉｕｎａｅ８．ｎ３ｃｈｗｅ５ｅｐｃｉｌｖｙｈｕｖｌａｅｆｈｙｒｚｉｆｖｔｄａｏ

皱纹盘鲍4个养殖群体杂交子代生长与存活状况比较

中国水产科学 2018年5月, 25(3): 536-545 Journal of Fishery Sciences of China研究论文收稿日期: 2017-09-04; 修订日期: 2017-10-26.基金项目: 山东省农业良种工程项目(2017LZQC009).作者简介: 江海林(1992–), 女, 硕士研究生, 专业方向为贝类遗传育种. E-mail: hailinchiang@ 通信作者: 冯艳微, 助理研究员, 研究方向为贝类遗传育种. E-mail: fywzxm1228@DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17315皱纹盘鲍4个养殖群体杂交子代生长与存活状况比较江海林1, 2, 冯艳微1, 刘春廷1, 2, 姜绪1, 刘相全11. 山东省海洋资源与环境研究院, 山东省海洋生态修复重点实验室, 山东烟台 264006;2. 上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306摘要: 为利用杂种优势培育皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai )优良新品种, 本研究以4个不同养殖群体[黄岛(HD)、荣成(RC)、日本(JP)、大连(DL)]的皱纹盘鲍为亲本, 设计4×4完全双列杂交, 建立了4个自交家系和12个正反杂交家系, 在利用微卫星标记进行亲子鉴定的基础上, 对各家系的F 1在1、5、13、17月龄时的生长性状、杂种优势率、生长速度和存活情况进行比较, 分析杂交效应。

结果表明, 在各个生长阶段均有部分杂交家系与自交家系相比表现出显著的生长优势; HDRC 、HDDL 和JPDL 家系的生长速度较高; HDDL 、HDJP 、RCDL 、JPRC 及RCHD 家系有着较高的存活率; 在杂种优势方面, HDRC 、HDDL 与DLHD 家系在各生长参数与生长速度上有明显的杂种优势, HDDL 、RCDL 、DLHD 家系在存活率上表现出明显的杂种优势。

皱纹盘鲍延绳式养殖技术

１５ｍ以上出池育成的苗种。放养春苗．ｃ成活率较低，放养秋苗成活率较高。
但无论是春苗还是秋苗，应选择优质、
适温范围内温度越高越有利于生长发
育
健壮、抗病力强、生长迅速、成活率
高、饲料系数低的鲍苗。优良苗种特
平时正常管理。５赤潮防范、
到避光处，附着力强，整池苗种白天
无爬上苗（白天无附着在附着基阳即
苗时受伤引起的死亡，高温季节分苗
易引起大量死亡。养殖１～．２年出售５
面上的鲍鱼）．无伤病。３、放苗时间放苗时间一般以上
２苗种选择、鲍鱼分为春苗和秋
桩或石块母绳连接固定，每３０行为一养殖小区，每小区相隔ｌｍ，每条延Ｏ绳上每隔３ｍ缚上一个浮球（直径４～０６ｃ，每间隔８ｃ缚上一条长２０ｍ）０ｍｍ绳子吊养一只用网笼包着的塑料鲍桶。每条延绳可吊养６０只鲍桶。每区可吊养鲍桶总数１０８０只。２、鲍桶黑色硬质塑胶桶。采用
饵料投喂量投喂间隙一般２４～
法有干运和水运。３小时以内的运输
多采用干运。干运必须选择夜间或低
着物吸附鲍鱼体上。再次控制放养密

三倍体皱纹盘鲍活体倍性鉴定——用上足触手、外套膜活体组织制备染色体标本

ｔｚ “ Ｄ ∞ ｔ６２Ｃｍ１０３，ｈａ）
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ＡｂｔａｔＰｏｄｄｔｃｉｎｓｒｃ：ｌｉｙｅｅｔｍｅｈｄｆｌｉｇｏｙｓｖｒｉｏｔｎｏｏｅｔｐｒｉｏｐｏｄｂｅｄｏｔｏｏｉｎｂｄｉａｅｙｍｐｒｔｃｍｐｎｎａｎｐｌｌｉｒ－ｖａｔｙｅ
ｅｐｒｐｒｎｄｌａｌｎｈｏｓｍｅｂａｌｏｈｐｉｇｍｅｈｄｕｉｇｇｌｔｓｅｄｓｕｓｉｇｍｅｈｄｅｔｐｅａｉｇａｕｔｂａｏｅｃｒｍｏｏｙｍｅｘｓｆｃｏｐｎｔｏｓｎｉｉｕｓａｑａｈｎｔｏｌｓｎｕｉｇｇｎｄ，ｌｏｗｉｈｓｔｏｓｔｅａａｏｅｓｏｌｅｋｔｄｆｒｇｔｉｇｔｅｅｔｓｅｓｎｏａａｓｔｔｅｅｍｅｈｄｈｌｎｈｕｄｂｉｅｏｅｔｎｈｓｉｕｓ．ｉｏｙｌｉｒｅ — ｈｂｓｎｐｌｐｏｄｂｅｄｉｇｌｖｎｆｐｏｄａａｏｅｒｅｄｄ，ｎｉｉｇｔｌｉｂｌｎｓａｅｎｅｅｉｐｏｄｅｅｔｎｔｃｎｑｅｏｉｉｇａａｏｅｉｓｅｉｌｙｉｏＮｎ．ｌｉｙｄｔｃｉｅｈｉｕｆｌｖｎｌｎｓｅｐｃａｌｍｐａｔｏｂ
ＴｈｔｃｉｎｏｖｎｇＴｒｐｏｄｏｅＤｅｅｔｏｆＬｉｉｉｌｉｆＨＭｉｔｓｄｓｕａｎｌｏｉｉｃｓｈｎａ
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ＤｉｅｔｙＭａｉｒｍｏｏａｐｅｏａｔｅａｄＥｐｐｄｕｒｃｌｋｎｇＣｈｏｓｍｅＳｍｌｆＭｎｌｎｉｅｉｍ

日本西氏鲍与皱纹盘鲍杂交育种技术的初步研究

一
５、催产、受精、化孵（１）催产２００５年ｌ０月１０日挑取个体大、活力好、性腺成熟度较好的亲鲍，日本西氏鲍ｌ０８个，雌雄比为１：，体９５ｍ以上，０ｌ个．ｃ皱纹盘鲍３０个，雄比为１：，体在９ｍ以上，２雌０ｌ个ｅ雌雄分开进行催产，催产用具５ｅ０ｍ塑料盆，每盆放亲鲍８个，每盆换１个散气石进行微量充气，催产方法及步骤：晚将亲鲍阴干傍ｌｈ左右，至晚７０：ｏ点左右亲鲍人室，采用紫外线诱导方法进行诱导产卵，其紫外线照射量为每小时８０Ｗ，０ｍ每小时换水一次，２约ｈ左右，即开始排精、产卵。（２）受精亲鲍排卵至一定数量时，即在ｌｈ内进行受精，由于本试验分为四组，因此，受精分为四组进行。日本西氏鲍自交。皱纹盘鲍自 ① ② 交。日本西氏鲍早与皱纹盘鲍６杂交。皱 ③ ④ 纹盘鲍早与日本西氏鲍６的杂交，受精时按上述四组试验要求分别取少量精液加入各试验组轻轻搅拌，持一个卵子有２个左右精保０子即可。受精卵收集后连续洗卵４次以上，即按不同试验要求倒人孵化池进行孵化培育。（孵化培养３）孵化按３０－０粒２０－０４ｍ的密度人池孵化，般在水温２℃左右经ｌ－２２Ｏ１ｈ即可孵出。－（幼体培育４）孵出的幼体采用虹吸法将上层上浮幼体收集到幼体培育池，幼体培育密度在５ｌ～０个钿Ｌ每天换水５％以上，水温２ ℃左右，０在２经２ｄ后眼点出现，即为后期面盘幼体。

皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交Φ1的ΡΑ∏标记3

第卷第期海洋与湖沼∂年月 ≤∞ ∞× ≥ ≤ ≥皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交Φ1的ΡΑΠ∆标记3张国范王继红赵洪恩阙华勇刘晓中国科学院海洋研究所青岛大连水产学院大连大连市水产研究所大连提要利用皱纹盘鲍中国群体和日本群体野生个体的单自交和单正反杂交获得了个ƒ家系其中家系 ≤! ≤≤!≤≤ !⁄ 分别为日本α≅中国⎯!中国α≅中国⎯!中国α≅日本⎯和日本α≅日本⎯组合采用个引物对上述四个家系及其各自亲本个体的遗传结构进行了°⁄分析∀结果表明四个家系的平均杂合度 ≤为 ≤≤为 ≤≤ 为 ⁄为各家系两亲本间遗传距离 ≤为 ≤≤为 ≤≤ 为 ⁄ 为 ∀各家系子代群体与父母本的遗传距离 ≤为和 ≤≤为和 ≤≤ 为和 ⁄ 为和 ∀各家系子代个体间的遗传距离 ≤为 ≤≤为≤≤ 为 ⁄ 为而子代各群体间遗传距离均小于 ∀关键词皱纹盘鲍不同地理群体杂交子代杂交优势 °⁄分子标记中图分类号±皱纹盘鲍 Ηαλιοτισδισχυσηανναι 是我国海珍品养殖的重要种类∀近年来由于频繁发生病害张国范等给其养殖产业造成了重大损失∀为了提高养殖鲍抗逆性和加快其生长速度 /杂种优势0的利用在生产实践中有很大的应用价值∀遗传育种的理论与实践都已证明杂交优势利用的关键在于找到强优势的杂交组合亲本间遗传差异大时它们的杂交优势亦强∀遗传差异的本质是⁄ 序列水平的差异∀用⁄ 分子生物学方法能正确地测定亲本间的分子差异或分子遗传距离从而可作为预测杂交种优势的重要指标帮助育种学家减少配制杂交组合时的盲目性∀分析和比较不同皱纹盘鲍群体间个体及其杂交子代的遗传结构是预测杂种优势的重要途径之一而 °⁄标记技术为此提供了有效的手段∀°⁄标记现已用于动植物遗传作图!基因快速定位!特殊染色体区段的鉴定和分离!性别鉴定以及群体遗传变异的研究季维志等张细权等梁利群等滕春波等宋林生等孙致良等石拓等孙效文等孙易等张四明等李斌等刘萍等 ∏ √ εταλ εταλ3国家资助项目号国家杰出青年科学基金资助项目号∀张国范男出生于年月博士研究员 ∞2收稿日期 2 2 收修改稿日期 2 2期张国范等皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交ƒ 的 °⁄标记∀近期其在杂种优势预测方面的应用又引起越来越多学者的关注董在杰等吕雪梅等许明辉李祥龙等 ∀对于海洋贝类进行⁄ 多态性研究的比较多主要用于种内与种间不同群体间的变异与分化!种质鉴定与系统进化研究等刘必谦等 εταλ εταλ εταλ εταλ ∀在预测杂种优势等有关分子标记辅助育种方面的研究还未见报道∀本文中利用 °⁄技术对中国野生与日本野生皱纹盘鲍个体自交及正反杂交获得的个子一代家系及其各自亲本个体的遗传结构进行了 °⁄研究目的在于从分子水平上了解这个家系及其父母亲本个体的遗传结构为杂交育种的生产实践提供分子遗传学基础为皱纹盘鲍种质资源的更好利用提供基础资料和科学依据促进鲍杂交育种中的杂种优势预测及分子标记辅助育种工作的开展∀1材料与方法1 1材料1 1 1实验用鲍实验用皱纹盘鲍 Ηαλιοτισδισχυσηανναι 于年月分别采自辽宁大连长海县獐子岛和日本岩手县∀取野生中国和日本皱纹盘鲍雌雄亲本各只进行杂交及自交产生个交配组合及其ƒ 家系 ≤ 日本α≅中国⎯ ≤≤ 中国α≅中国⎯ ≤≤ 中国α≅日本⎯ ⁄ 日本α≅日本⎯∀各家系ƒ 饲养至壳长左右∀上述工作均在大连市水产研究所的协助下完成∀1 1 2仪器与试剂°≤ 扩增仪为°∞公司生产的°∞2 型∀引物!× ⁄ 聚合酶! ×°等试剂均购自上海≥ 公司∀1 2方法1 2 1基因组⁄ 的提取按萨姆布鲁克等的方法略做改进∀将各家系的亲本野生鲍及其个ƒ 个体活体取足部肌肉组织固定于乙醇中取组织用蒸馏水清洗!切成碎沫并溶于 Λ 裂解液中成分 × ≤ ∞⁄× ≥⁄≥ ∀加入蛋白酶至终浓度为 Λ 来回颠倒离心管数次置于 ε水浴中消化在此期间转动离心管数次以使之充分消化 ∀将上述消化液冷至室温加等体积的酚抽提一次以转离心取上清液再分别用等体积的酚氯仿酚Β氯仿Β异戊醇 Β Β 及氯仿氯仿Β异戊醇 Β 各抽提一次离心条件同上取上清液∀向上清液中加入双倍体积的冷的无水乙醇和十分之一体积的 ε冷冻再用乙醇洗涤⁄ 沉淀次沉淀置于室温凉干 ×∞溶解 ε保存∀1 2 2⁄ 定量使用 ∞≤ 公司生产的⁄ 型紫外分光光度计将提取的模板⁄ Λ 稀释倍至 Λ 进行测定∀在时读数用于计算样品中核酸的浓度 ⁄值等于时相当于大约 Λ 双链⁄ 同时读取 ⁄ ⁄ 的比值以估计所提⁄ 的纯度纯⁄ ⁄ ⁄ 为 ) ∀同时辅以凝胶电泳肉眼观察所提⁄ 的完整性∀将⁄ 原液稀释到 Λ 于 ε保存待用∀1 2 3 °⁄条件 °⁄程序 ε预变性后 ε变性 ε复性 ε延伸个循环∀最后 ε延伸 ε保存∀ °⁄反应总体积为 Λ 其中含有 ÷ °⁄反应缓冲液 Λ ≤ ×° 引物 × 酶基因海洋与湖沼卷组⁄ ∀1 2 4电泳及成像扩增产物在的琼脂糖凝胶中电泳电压为 ∂ 左右∀电泳完成后以 ∂°公司的 ⁄≥ 型凝胶成像仪对凝胶进行观察!拍照及保存并以 2 ° 软件包对图片进行计带处理有带记为无带记为并对每个扩增带进行分子量的估算∀1 2 5数据处理各群体的平均杂合度∀纯合度 ϑ (ΕΞ ι)/ν,杂合度:Η ϑ∀其中:Ξι表示第ι个等位基因的频率,ν为测定位点数(季维志等, )∀遗传分化指数(ΓΣΤ)∀总群体的基因多样性(ΗΤ)分解为群体内基因多样性(ΗΣ)和群体间基因多样性(∆ΣΤ):ΗΤ ΗΣ ∆ΣΤ,ΓΣΤ ∆ΣΤ/ΗΤ∀这里ΗΣ ϑΣ (Εϑι)/Σ,其中Σ为群体的数目∀ϑι (ΕΞ ικ)/ν,这里ϑι是第ι个群体内的基因一致性,Ξικ是第ι个群体内第κ个等位基因的频率,ν是ι个群体的基因位点数目;∆ΣΤ (ΕΕ∆ιϕ)/Σ ,这里∆ιϕ (ϑι ϑϕ)/ ϑιϕ,其中ϑιϕ是第ι个和第ϕ个群体间的基因一致性:ϑιϕ (ΕΞικΞϕκ)/ν∀群体间的遗传距离∀根据的计算方法计算∀∆ Ι,这里Ι ϑΞΨ/ (ϑΞϑΨ) / ,其中ϑΞ!ϑΨ和ϑΞΨ分别是所有位点上ϕξ!ϕψ和ϕξψ的算术平均值∀这里ϕξ ΕΞι,ϕψ ΕΨι,ϕξψ ΕΞιΨι,Ξι!Ψι分别是Ξ!Ψ群体中第ι个等位基因的频率∀群体内遗传距离∀随机扩增多态⁄ 片段的共享度根据下列公式 εταλ 计算 Φ {Ε[ Νξψ/(Νξ Νψ)]}/ν,Π Φ∀式中,Φ为相似率,Νξ和Νψ分别为个体ξ和个体ψ的随机扩增多态⁄ 位点数 Νξψ为两个体间相同的位点数,ν为个体间相比较的两两配对数,Π为遗传距离∀多态率∀多态率π ξ/ρ,其中ξ为具有多态性的位点,ρ为扩增出的总位点数∀2结果2.1ΡΑΠ∆扩增结果在 °⁄扩增中所用引物为经过挑选的扩增谱带清晰稳定的条引物 ≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ !≥ ∀选择扩增片段大小在 ) 之间的位点进行统计分析∀结果共检测到个位点平均每个引物扩增出个位点∀其中 ≤的多态位点数为个多态率为 ≤≤的多态位点数为个多态率为 ≤≤ 的多态位点数为个多态率为 ⁄ 的多态位点数为个多态率为 ∀多态位点的显性频率为家系 ≤在 ) 之间家系 ≤≤在 ) 之间家系≤≤ 在 ) 之间家系⁄ 在 ) 之间∀各引物的扩增情况见表 ∀扩增结果显示不同引物得到的扩增片段数各不相同所揭示的多态性也不尽相同∀图显示的是引物≥ 对个家系的扩增结果可以看出扩增位点数虽然居中却显示很高的多态性并且在 ! ! 处呈现子代所扩增的谱带强度比亲本大为增强的现象∀图是引物≥ 对个家系的扩增结果可以看出扩增位点极多且几乎皆为单态∀另外从整体的 °⁄扩增情况来看亲本出现的谱带都能在子代中找到并且有的像父本有的像母本有的是两者基因型的综合符合典型的孟德尔共显性遗传规律∀表1各引物序列及四个家系的ΡΑΠ∆扩增情况× × . ∏ °⁄ ∏引物序列 .) .产物的总片段数产物的多态数≤ ≤≤≤ ≤⁄ ≤ ≤≤≤ ≤⁄≥ × ×≤ ≤ ≥ ×≤× × ≥ ≤≤ ≤×× × ≥ × × ≤≤≤≤ ≥ ≤ ≤ ×≤ ≥ ××≤≤≤≤≤≤ ≥ ≤ ×≤≤ ≤ ≥ × × ≤× ≥ × ≤ ≤ ≥ ≤× ≤≤ ≤≤ ≥ ≤≤× ≤ ≤ ≥ ≤≤ ≤≤× ×≤ ≥ ×≤ ×≤≤ ≥ ×≤×≤≤ ≤≤≤× ≥ ≤≤ ≤≤≤ ≤ ≥ ≤ ≤ ≤≤×≤ ≥ ≤ ×× ×≤ ≥ ×≤ ≤ ≤ ≤ ≥ × ≤≤×≤ ≥ ≤≤ ≤≤ ≤ ≥ ≤≤ ≤× ≤≤ ≥ × ≤≤≤ ≤≤× 合计2 24个家系各群体内的遗传距离家系 ≤中父母本之间的遗传距离为父本对其子代的遗传距离为母本对其子代的遗传距离为子代个体间的遗传距离为家系 ≤≤中父母本之间的遗传距离为父本对其子代的遗传距离为母本对其子代的遗传距离为子代个体间的遗传距离为家系≤≤ 中父母本之间的遗传距离为父本对其子代的遗传距离为母本对其子代的遗传距离为子代个体间的遗传距离为家系⁄ 中父母本之间的遗传距离为父本对其子代的遗传距离为母本对其子代的遗传距离为子代个体间的遗传距离为 ∀期张国范等皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交ƒ 的 °⁄标记图个家系的 °⁄扩增情况ƒ × °⁄ ∏≥ 引物对四个家系的扩增产物大多为多态扩增位点数中等 ≥ 引物对四个家系的扩增产物大多为单态扩增位点数很高引物∀ ) 家系 ≤ 表示母系表示父系其余为子代 ) 家系 ≤≤ 表示母系表示父系其余为子代 ) 家系≤≤ 表示母系表示父系其余为子代 )家系⁄表示母系表示父系其余为子代2 3 4个家系各群体内的平均杂合度家系 ≤子代群体的平均杂合度为家系 ≤≤子代群体的平均杂合度为家系≤≤ 子代群体的平均杂合度为家系⁄ 子代群体的平均杂合度为 ∀2 4 4个家系子代群体间的遗传距离个家系子代家系间遗传距离的观察值为 ) 但最大值不是发生在 ≤≤和⁄之间表 ∀表2 4个家系群体间的遗传距离× × ≤≤≤≤≤⁄≤ ≤≤ ≤≤ ⁄2 5 总群体的基因多样性及基因分化系数个子代总群体的基因多样性为基因分化系数为 ∀海洋与湖沼卷期张国范等皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交ƒ 的 °⁄标记3讨论从扩增图片来看 °⁄呈典型的孟德尔共显性遗传规律虽不能区分某一座位扩增出的⁄ 片段是纯合的还是杂合的但其探测基因多态性效率高是研究杂种优势的极好工具可以从分子水平上提供基因多态性与杂种优势的关系∀个家系的平均杂合度说明两个杂交组合家系的杂合度均高于两个自交组合从而可以预测杂交可能产生杂种优势而这其中尤以亲本遗传距离最大的家系 ≤最为突出∀ ≤的两亲本间遗传距离为家系 ≤≤的两亲本间的遗传距离为家系≤≤ 的两亲本间遗传距离为家系⁄ 的两亲本间遗传距离为 ∀说明本文中所用亲本的两不同地理群体的个体间的遗传距离确实大于两同一地理群体的亲本个体间遗传距离但因样本少所以尚不能定论∀而中国与日本野生亲本的遗传距离都较大的事实说明皱纹盘鲍的野生资源保护较好∀由亲本间较大的遗传距离可以产生子代群体较大杂合度这一事实说明亲本间遗传差异大是产生杂种优势的基础∀然而家系≤≤ 的亲本遗传距离虽较 ≤≤!⁄ 大很多在家系的杂合度上并未表现出明显的增高这其中原因尚不能很好说明∀但可以肯定的是杂种优势是一复杂的遗传现象亲本间的遗传差异无疑是重要的原因之一∀由表可以看出家系⁄ 与 ≤≤的子代群体间的遗传距离小于其他群体间的遗传距离这其中的原因有可能是由于当初实验设计受实验条件所限造成的系统的部分开放所致∀另一原因可能是这种单交子代群体仅仅由单一个体父母亲本产生而且各群体个体间的遗传变异水平较高∀因此由两对个体产生的子代群体的群体间遗传距离能否与其这两个群体的两对父母本的遗传距离有对应的线性关系还值得讨论∀现有的理论只能比较个体与个体或群体与群体间遗传距离还无法比较一对父母本对另一对父母本之间的遗传距离∀两个纯合子代群体在某一位点的基因频率很可能会同时都很高导致/两个纯合子代群体间0的值高于/一个纯合子代群体与一个杂合子代群体间0或/两个杂合子代群体间0的值从而造成在两个纯合子代群体间Π值即群体间遗传距离最小的事实∀因此不能简单地用父母本间的遗传距离来推断子代群体间遗传距离∀各家系子代群体与父母亲本的遗传距离表明皱纹盘鲍的子代倾向于父本基因型的几率稍大即雄性遗传占主导地位在兴国红鲤Χψπρινυσχαρπιο√ .σινγυονενσισ与德国镜鲤Χψπρινυσχαρπιο√ σπεχυλαρισ的杂交中也出现类似结果董在杰等这其中的具体原因尚待进一步研究∀皱纹盘鲍在基因组水平上杂合度提高的贡献权重雄性占优这一结果在理论上有重要意义∀这一结果的应用价值在于只要引进雄性亲本进行杂交即有可能获得杂种优势∀皱纹盘鲍的繁殖特点是成熟雌性的产卵量只有几十万到百万精子量则以数十亿计∀因此在生产上只要引进雄性亲本并与本地群体杂交即可获得杂种优势这样可大大降低生产成本其潜在的经济效益是巨大的∀各家系子代间的遗传距离表明各家系子代个体间的遗传距离都远远低于其野生父母亲本间的遗传距离及子代与亲本的遗传距离而子代各群体间遗传距离均小于指示人工繁育过程中一定要避免用人工培育群体内或群体间的子一代个体作为父母亲本以免引起种质资源的严重退化也提醒我们保护好现有的各地理群落的野生资源对鲍养殖业的可持续发展是非常重要的∀海洋与湖沼卷从本文中的实验结果可以看出直接利用中国野生皱纹盘鲍与日本野生皱纹盘鲍杂交可能获得较好杂种优势本文为此提供了充分的分子生物学证据同时也说明 °⁄做为一种简单快捷的分子标记是预测杂种优势的极好手段可以广泛应用于分子标记辅助育种∀但本文中提供的分子生物学证据也仅限于提供了杂种优势产生的趋势和标记∀由于杂种优势遗传机理极其复杂一个杂交组合能否表现杂种优势不仅与双亲遗传差异有关还与双亲遗传背景!所携带等位基因的类型!基因效应种类以及环境等一系列因素有关许明辉 ∀杂交子代在生产上能否产生某些优良性状以及这些性状能否与这种标记相对应尚需做进一步研究∀致谢在实验过程中得到中国水产科学研究院黑龙江水产研究所孙孝文研究员!梁利群副研究员以及中国科学院海洋研究所宋林生研究员和刘保忠博士的热心指导谨致谢忱∀参考文献石拓孔杰刘萍等中国对虾遗传多样性的 °⁄分析)))朝鲜半岛西海岸群体的⁄ 多态性海洋与湖沼 )吕雪梅杨关福张细权等蛋鸡品系 °⁄变异及其与杂种优势关系的分析遗传 )刘萍孔杰石拓等中国对虾黄渤海沿岸群亲本及子一代 °⁄分析海洋水产研究 ) 刘必谦戴继勋巨蛎属牡蛎遗传多样性研究水产学报 )刘必谦戴继勋喻子牛 °⁄标记在大连湾牡蛎种群研究中的应用青岛海洋大学学报 )许明辉烟草数量性状遗传距离与杂种优势关系的研究遗传 )孙易宋文芹钟贻诚等用 °⁄和 ƒ °的方法对中国卤虫种及亲缘关系的研究遗传学报 )孙效文梁利群鲤鱼的遗传连锁图谱初报中国水产科学 )宋林生相建海周岭华等六种海产虾类基因组⁄ 多态性的 °⁄标记研究海洋与湖沼 ) 宋林生相建海李晨曦等日本对虾野生种群和养殖种群遗传结构的 °⁄标记研究海洋与湖沼 )李斌鲁成周泽扬等 °⁄标记构建家蚕分子连锁图遗传学报 )李祥龙田庆义马国强等波尔山羊杂交后代及其亲本随机扩增多态⁄ 研究遗传 )孙致良张超良金德敏等 °⁄技术在玉米自交系亲缘关系研究中的应用遗传学报 )张细权李加权杨关福动物遗传标记北京中国农业大学出版社 ) )张国范李霞我国贝类大规模死亡的现状中国水产 )张四明邓怀晏勇等中华鲟随机扩增多态性⁄ 及遗传多样性研究海洋与湖沼 )季维志宿兵遗传多样性研究的原理与方法杭州浙江科学技术出版社 )梁利群孙效文闫学春 °⁄技术分析荷包红鲤抗寒品系与亲本的基因组变化中国水产科学 ) 滕春波孙效文沈俊宝等利用异源精子激发雌核发育的银鲫及亲本的 °⁄分析水产学报 ) 董在杰夏德全吴婷婷等兴国红鲤和散鳞镜鲤杂种优势的 °⁄分析上海水产大学学报 )萨姆布鲁克弗里奇∞ƒ 曼尼阿蒂斯×著金冬雁黎孟枫张励等译分子克隆北京科学出版社 )° × ⁄ √ √ ≤ Χρασσοστρεαϖιρ2γινιχα )∏ √ ≤ 2 ° ⁄ √ √ • 2 ) ⁄ ⁄⁄ εταλ ° ∏ Πεχτενµαξµιυσ • √ ⁄ ∞ ° ≥ )期张国范等皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交ƒ 的 °⁄标记× ⁄εταλ ⁄ Τετραηψµενατηερµοπηιλα )≠ ∂ ∏ ∏¬≠ ⁄ ∞εταλ, ×≤ ≤ × ∞∏ 2 Οστρεαεδυλισ )• ∏ ∏ ° ≥ )∞ • ∏ ∞ ° εταλ ƒ ° √ ∏ 2 Πατινοπεχτενψεσσοενσισ ≥° ∞ ≤ εταλ × ∏ °⁄ ∏ Πλαχοπεχτενµαγελλανιχυσ ≥ )≤ √ ≤ ∏ ∏ ∏ ∏ ⁄ 2 Χρασσοστρεαϖιργινιχα )ΤΗΕΡΑΠ∆ΜΑΡΚΕΡΟΦΣΕΛΦ−ΒΡΕ∆ΑΝ∆ΗΨΒΡΙ∆ΠΡΟΓΕΝΨΒΕΤΩΕΕΝΧΗΙΝΕΣΕΑΝ∆ϑΑΠΑΝΕΣΕΠΟΠΥΛΑΤΙΟΝΣΟΦΗΑΛΙΟΤΙΣ∆ΙΣΧΥΣΗΑΝΝΑΙΙΝΟ∏ 2ƒ • 2 2∞ ± ∞ ∏ 2≠ ÷(ΙνστιτυτεοφΟχεανολογψ,ΤηεΧηινεσεΑχαδεµψοφΣχιενχεσ,Θινγδαο, )(∆αλιανΦισηεριεσΥνιϖερσιτψ,∆αλιαν, )(∆αλιανΙνστιτυτεοφΦισηεριεσΡεσεαρχη,∆αλιαν, )Αβστραχτ× ⁄ °⁄ ∏ ∏ √ 2 Ηαλιοτισδισχυσηανναι ∏ ≤ × ≤ α≅≤ ⎯ ≤≤ ≤ α≅≤ ⎯ ≤≤ ≤ α≅ ⎯ ⁄ α≅ ⎯ × √ ∏ ≤ ≤≤ ≤≤ ⁄ ∏ ∏ 2 ∏ × ≤ ≤≤ ≤≤ ⁄ √ ∏ 2 ∏ ∏ 2 ∏ √ ∏ ≤ ∏ √ × 2 ∏ ≤ ≤≤ ≤≤ ⁄ 2 × ∏ ≤ ≤≤ ≤≤ ⁄ × √ ∏ ¬ √ ∏ΚεψωορδσΗαλιοτισδισχυσηανναι ⁄ ∏ °⁄。

皱纹盘鲍(Haliotis discushannai Ino)胚胎RNA分离和cDNA文库构建

第37卷　第4期2006年7月海　洋　与　湖　沼OCEANOLOGI A ET L I M NOLOGI A SI N I CAVol 137,No 14July,2006皱纹盘鲍(H a liotis discus hanna i I no)胚胎RNA 分离和c D NA 文库构建3刘　晓　赵　敏　高其康　张国范(中国科学院海洋研究所　青岛　266071)(中国科学院海洋研究所　青岛　266071;中国科学院研究生院　北京　100039)(浙江大学分析测试中心　杭州　310029) 3国家自然科学基金项目,30271018号;国家863计划项目,2004AA626070号;青岛市自然科学基金项目,03222JZP 29号资助。

刘　晓,博士,研究员,E 2mail:liuxiao@m s .qdi o .ac .cn收稿日期:2005202216,收修改稿日期:2006201222提要从皱纹盘鲍胚胎样本中分离RNA 并构建了c DNA 文库。

分别收集孵化8、10和12h 的皱纹盘鲍胚胎,用抽滤除菌的海水反复悬浮胚胎,将这3个发育阶段的胚胎样本等量混合后用T R I Z OL 试剂提取总RNA,将提取物用酚2氯仿2异戊醇再抽提2次,分离获得高质量的总RNA 。

从总RNA 中分离mRNA,构建了皱纹盘鲍混合胚胎的c DNA 文库,未扩增胚胎文库的滴度为510×106pfu /m l,重组率为94112%,插入片段均大于400bp,7016%克隆的插入片段分布在1000—1500bp 之间,扩增后的文库滴度为3106×109pfu /m l 。

关键词皱纹盘鲍,胚胎,c DNA 文库,基因表达中图分类号 Q132 皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai I no )自然分布于北太平洋海区。

从上世纪80年代中期实现人工育苗以来,我国的皱纹盘鲍养殖业发展较快,现已成为重要的养殖贝类。

皱纹盘鲍的遗传育种研究进展

纹盘鲍野生群体进行了群体遗传多样性与遗传分化的研究。结果表明，微卫星标记是研究群体遗传
学的一种有效工具，显示当前我国北方皱纹盘鲍并
养殖群体与野生群体相比，遗传多样性显著下降，种质资源保护势在必行。李莉［等对不同地理群体１８１
的皱纹盘鲍做了遗传多样性分析，其研究结果为皱纹盘鲍的保护和利用提供了依据。微卫星分子标记
发。因此，皱纹盘鲍的遗传改良研究对于皱纹盘鲍养殖产业的可持续健康发展十分重要。本文对我国皱纹盘鲍（ｌｔｉ础Ｈａｏｓｄｃｌｉｓ
ｈｎａ）ａｎｉ的生物学特征、卫星标记、微选择育种、杂交育种、多倍体育种、核发育的研究现状进行了综述，雌并对今后皱纹盘鲍遗
３．，６当盐度下降至２．，３ｈ内全部死亡［０２０时３８１。皱纹盘鲍的生长比较慢，年后贝壳长至２３ｃ２年１～ｍ，后长至４５ｃ６７年才能长成壳长１ｍ以上的～ｍ，～０ｃ
鲍鱼。
２微卫星分子标记的开发和利用
第３３卷第１期
２１０２年１月１１３ｄｉ０３６￣ｉｎ１０－０１０２Ｏ．１ｏ１．９．ｓ．４２９．１．１２：９ｓ０２０
水
产
养
殖
Ｖｏ．３，．１３Ｎｏ１
ＪｕｎｌｏｕｃｌFra bibliotekｒｏｒａｆＡｑａｕｔｅｕ
为海产八珍之首，是鲍科动物中最具经济价值的种