裸鼠荷瘤资料.doc
吉西他滨时辰给药治疗荷瘤裸鼠的实验研究
吉西他滨时辰给药治疗荷瘤裸鼠的实验研究王颖彦;常瑞明;常建星【摘要】目的建立肺癌A549细胞裸鼠皮下注射成瘤模型,按照昼夜的不同时辰给予吉西他滨,观察其疗效和副作用,初步筛选出最佳给药时间.方法 32只裸鼠饲养在SPF级实验动物房,统一光照条件,光照时间(7:30～19:30),黑暗时间(19:30～7:30),温度控制在25℃左右,湿度控制在50％左右;收集对数生长期培养的A549细胞,浓缩成2× 107/mL的细胞悬液,在无菌条件下抽取约0.2 mL细胞悬液注射至裸鼠皮下.待肿瘤长到约1 cm×1 cm×1 cm大小,随机分为4组,每组8只.前三组按照时辰2 am、8 am、14 pm给予吉西他滨(50 mg/Kg),隔两天给药一次,持续三周,第四组给予等量无菌生理盐水作为对照组.每周测量肿瘤体积和裸鼠体重,绘制肿瘤的生长曲线和体重变化曲线.第30天处死裸鼠,抽血测肝肾功能,留取标本做HE染色观察镜下改变.结果吉西他滨对A549肺癌裸鼠移植瘤有治疗效果,其中2 am组抑瘤效果最明显,肿瘤生长最慢,裸鼠体重增长最快;8 am组抑瘤效果最差,肿瘤生长最快,裸鼠体重增长最慢.光镜下可见吉西他滨治疗组肺肝肾损伤较对照组减轻,肝肾功能改善(P＜0.05,8 am、14 pm组vs.对照组;P＜0.01,2 am组vs.对照组);药物治疗组当中,2 am组治疗效果最好,8 am组治疗效果最差(P＜0.05,2 am vs.8 am组).结论吉西他滨对A549肺癌移植瘤裸鼠有明显的抑瘤作用,而且疗效和副作用呈时辰节律变化,2 am组疗效最佳,8 am组疗效最差.【期刊名称】《岭南现代临床外科》【年(卷),期】2014(014)004【总页数】4页(P362-365)【关键词】时辰化疗;吉西他滨;肺癌A549细胞【作者】王颖彦;常瑞明;常建星【作者单位】510120广州广东省中医院药学部;510120广州中山大学孙逸仙纪念医院急诊科;510120广州中山大学孙逸仙纪念医院外科【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是严重威胁人类健康、发病率较高的一种疾病［1］，对于错过手术时机的患者采取药物化疗是非常重要的手段。
小鼠皮下荷瘤标准操作规程
小鼠皮下荷瘤标准操作规程小鼠皮下荷瘤（或称移植瘤）实验是一种常用的动物实验方法，用于研究肿瘤生长、药物疗效等方面。
为了保证实验操作的准确性和动物福利的最大化，下面是一份小鼠皮下荷瘤标准操作规程。
一、实验动物1. 鼠种选择：建议使用常用的实验动物品系（如BALB/c、C57BL/6等）。
2. 年龄选择：选择6-8周龄的小鼠，确保其免疫系统和器官发育成熟。
3. 处理：在实验之前，将小鼠隔离一段时间，以适应新环境，并遵循动物实验伦理和相关法规进行处理。
二、荷瘤动物的准备1. 荷瘤细胞株的选择：根据实验目的选择合适的肿瘤细胞株。
细胞株应来源于可靠且经验证的来源，如细胞库、研究机构合作实验。
2. 细胞培养：在符合无菌条件下，将细胞培养在合适的培养基中，保持其活性和稳定性。
3. 细胞计数：使用细胞计数仪准确计算细胞数目，并调整细胞浓度。
4. 细胞检测：定期检测细胞的纯度、鉴定和验证细胞的肿瘤特性。
5. 注射剂量：根据实验需求和细胞特性，确定荷瘤细胞的注射剂量。
三、手术准备1. 操作间的准备：在符合无菌条件下进行手术，准备好所需的实验器具和仪器。
2. 麻醉与镇痛：使用适合的麻醉方法对小鼠进行麻醉，并在手术中给予镇痛以减轻小鼠的疼痛。
3. 无菌操作：实施手术之前，用适当的方法消毒手术台和手术器械。
四、手术操作1. 注射位置选择：选择合适的部位进行皮下注射（如腹部、背部），确保容易观察和测量肿瘤的生长。
2. 手术操作流程：(1) 麻醉小鼠并进行镇痛。
(2) 将小鼠定位到手术台上，以固定小鼠的身体。
(3) 使用酒精棉球消毒注射部位。
(4) 使用规格合适的针头将预定剂量的荷瘤细胞注入小鼠的皮下组织中。
(5) 注意注射的角度和深度，避免插入过深或过浅。
(6) 注射完毕后轻轻拍打注射部位以防止荷瘤细胞漏出。
(7) 小鼠苏醒后放回适宜的养护环境。
五、术后护理1. 观察：术后密切观察小鼠的行为和健康状况，特别是对于术后48小时内的小鼠，要加强监测，以及记录并报告任何异常情况。
裸鼠荷瘤实验
接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义了。
如果你的细胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。
查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。
有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。
建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。
基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后10到15天左右可以开始试验。
2. 开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD 不大于平均值的1/3左右。
3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g，并且没有溃烂。
当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。
接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。
抗肿瘤药物试验
实验试剂
人参皂苷Rg3 浓度为3mg·mL-1使用时用无菌氯化钠注射 液(0.9%)稀释为所需浓度。 阳性对照药--注射用环磷酰胺，0.2g/瓶。 阴性对照药--无菌氯化钠注射液(0.9%) 细胞培养液--H-DMEM培养液,标准胎牛血 清。
主要仪器
超净工作台，CO2孵箱,倒置显微镜
试验方法
• 动物接种：取体外培养对数生长期之所 选人瘤细胞株细胞，接种于BALB/C-nu 纯系裸鼠右腋皮下，每只小鼠接种 2×107个细胞。接种肿瘤细胞后，待可 触及明确瘤结节时（直径约0.5cm，瘤结 节不明显者淘汰），将小鼠随机分成6组， 每组8只。开始腹腔注射连续给药，停药 24小时后处死动物。环磷酰胺连续给药， 共给5次
Rg3治疗组（3.0mg/kg、1.0mg/kg、 0.3mg/kg，连续给药，直至试验结束前） 及联合用药组[环磷酰胺+20（S）-Rg3 （20mg/kg+0.5mg/kg）/次，连续给药5 次]。 实验结束后测量肿瘤体积、重量，计算抑 瘤率，观察20（S）-Rg3对人非小细胞 肺癌的生长是否具有抑制作用。
观测指标
⑤进行药物联合作用的评价，两药相互作 用指数（CDI）按下公式计算 ABCDI＝AB/(A×B) (AB是两药联合组与对照组的比值； A或B是各药单独使用组与对照组的比值。) （当CDI＜1时两药有协同作用；CDI＜ 0.7时，协同作用显著。）
统计学处理
实验数据用均数±标准差（x±s）形式 表示，采用SPSS11.5统计软件，计量资 料采用t检验，计数资料采用方差分析， 以P＜0.05为差异具有显著性。
体内试验介绍
本实验进行Rg3对非小细胞肺癌的抑制作 用的研究。选取人非小细胞肺癌瘤株 （NCI-H460人大细胞肺癌、A549人肺腺 癌）分别接种于BALB/C-nu纯系裸鼠制 成荷瘤模型，将接种动物随机分6组：空 白对照组、阳性对照组（环磷酰胺， 40mg/kg/次，连续给药5天）、
裸鼠荷瘤方法及注意事项
关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。
2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。
现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。
另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。
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接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义了。
如果你的细胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。
查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。
有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。
建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。
基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后10到15天左右可以开始试验。
2. 开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD 不大于平均值的1/3左右。
3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g，并且没有溃烂。
当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。
接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。
二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。
当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。
每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。
于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放于液氮中冻存。
血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。
2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并称重。
于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。
顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。
荷瘤小鼠实验报告
一、实验目的本实验旨在研究荷瘤小鼠的肿瘤生长、转移及治疗效果，为肿瘤的防治提供理论依据和实验数据。
二、实验材料与方法1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雌雄各半，体重18-22g。
2. 实验试剂：肿瘤细胞株、细胞培养试剂、免疫组化试剂、流式细胞术试剂等。
3. 实验方法：（1）肿瘤细胞培养：将肿瘤细胞株在细胞培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期后，收集细胞进行实验。
（2）荷瘤小鼠模型建立：取对数生长期的肿瘤细胞，以1×10^6个细胞/只的浓度注射至小鼠皮下，建立荷瘤小鼠模型。
（3）分组与处理：将荷瘤小鼠随机分为以下五组：模型组、药物低剂量组、药物中剂量组、药物高剂量组和对照组。
药物低、中、高剂量组分别给予相应浓度的药物灌胃，对照组给予等体积的生理盐水灌胃。
（4）观察指标：①肿瘤生长情况：每周测量肿瘤体积，计算肿瘤生长抑制率。
②肿瘤转移情况：在实验结束时，解剖小鼠，观察肿瘤转移情况。
③免疫组化检测：采用免疫组化技术检测肿瘤组织中相关蛋白的表达。
④流式细胞术检测：采用流式细胞术检测小鼠外周血中T淋巴细胞亚群的变化。
三、实验结果1. 肿瘤生长情况：与模型组相比，药物低、中、高剂量组肿瘤生长抑制率显著提高，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. 肿瘤转移情况：与模型组相比，药物低、中、高剂量组肿瘤转移率显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. 免疫组化检测：药物低、中、高剂量组肿瘤组织中相关蛋白表达显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。
4. 流式细胞术检测：药物低、中、高剂量组小鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞数显著增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。
四、讨论本实验通过建立荷瘤小鼠模型，研究了药物对肿瘤生长、转移及免疫功能的抑制作用。
结果表明，药物低、中、高剂量组均能有效抑制肿瘤生长和转移，提高小鼠的免疫功能。
1. 药物对肿瘤生长的抑制作用：药物通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等途径，发挥抗肿瘤作用。
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接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site，再高也没有意义了。
如果你的细胞很小，1*107/0.1ml 也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。
查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。
有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。
建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。
基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1.接种后10到15天左右可以开始试验。
2.开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD不大于平均值的1/3左右。
3.开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g, 并且没有溃烂。
当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。
接种部位接种部位：腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。
一般来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。
主要靠针头稍微动一动来判断。
是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg 每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。
另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。
因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。
所以一般情况下，应该尽量的复合这个瘤株本身的生长特性，不应该过多地去加以人为的干扰。
是否用手术标本荷瘤如果是药效试验，不建议用手术标本，因为SFDA的临床前研究指导原则上明确指出要用建株的肿瘤株进行试验，因为用手术标本的试验可重复性太差，你这个标本万一没有保存好，断掉了，你自己都很难重复出上次的试验结果。
国外的文献上看到的却很少有人用手术标本构建模型进行试验。
取材的部位：肿瘤生长活跃，状态良好，结缔组织比较少的地方。
运送途径：无菌、冰浴保温，无菌培养液浸泡，时间不能超过1个小时。
最好一个小时内就能够接种到动物体内。
接种部位：腋下。
另外，手术标本还有一个风险：你不能保证取得的标本一定能够顺利地成瘤并且用于试验。
注意事项A裸鼠的周龄,B肿瘤细胞:何种肿瘤，接种细胞的数量（用对数生长期的，活力高的）记数要准确,C接种方式:注意不要漏液，否则会损失细胞数量D饲养环境:要求是SPF条件具体操作1•能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关键是你的肿瘤细胞数，一般肿瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重点要考虑细胞数的问题，但最高不要超过1*107。
2•接种时间，最好在1小时之内完成。
但在我实际操作过程中，裸鼠的数量又多，1小时之内根本做不完的，所以你可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。
效果还是不错的。
3•成瘤时间，每个肿瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周左右应该能出来了；另外，如果你是打皮下，你要考虑是否有打到深层组织，比如肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出来。
腹腔注射1、腹腔注射进针的位置在腹中线与小鼠两后肢上沿连交叉以下的位置。
2、腹腔注射很少会打到肠管，因为肠子在碰到硬物时会缩起来，当然前提是你的进针不是特别深，如果你的整个针头都扎入了腹腔，那么肠子是无处可躲了。
3、腹腔注射进针后，你可以将针头左右摆动一下，如果是正确的，这时会有一种很自由无障碍的感觉，进针角度撑握在小于45度, 针头进入长度不超过3厘米左右。
用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推0.5〜1.0cm, 再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液（图2-5）,为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。
若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处。
肿瘤倍增时间肿瘤动物实验模型肿瘤的倍增时间(doubling time ),应该是在瘤体积100 —800之间计算，但是一组动物有10只，每周测量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我测量体积的时候正好到200或400 ,那么，在计算的时候，具体应该怎么做？Geddes等［29］将结节倍增时间的计算公式表示为：DT = (In2A t) /In (V2/V1 ), VI、V2分别是前后两次测量的体积，△t是两次测量的时间间隔你的问题有歧义，我觉得可以有几下几种理解：1. 测量的时候，对于某个老鼠来说，第一次可能测出来的体积是189.26 (不是正好200),第二次是415.31 (不是正好400), 对于其他的动物都有这样的问题，2. 对于十只老鼠来说，测量的时候，可能1号老鼠是189.26 , 2号是312.57 ,3号是110.89……，这也是一种理解，我的意见是：测量一段比较长的时间，每只老鼠可以独立计算倍增时间，然后计算平均值，SD等，用统计学处理的手段。
个体差异同一批种几十只老鼠，有的就长不出来，有的长得很大，使评价药效很困难。
排除接种悬液未摇匀的可能后，还有什么原因可能造成这一点？可能是是个体差异了。
其中，老鼠年龄是一个很大的因素。
本人就遇到过2个月的老鼠接种肿瘤以后，有的长有的不长的情况。
如果控制好试验条件，动物也比较均一的话，一般肿瘤生长都会很好的控制在一定范围的肿瘤模型新药申报zym145286做的肿瘤模型实验是用于新药申报用，现在有一些问题还不能校准，我做的是人癌模型，实验动物为裸鼠.1. 新药报批中，有明确的要求说肿瘤来源必须是体内传代3次以上吗？2. 实验结束后，对于取出肿瘤块的质量有没有明确的规定呢？还是跟其他种鼠一样，要求平均瘤重不小于1g或者不大于20% 的瘤快质量不小于400mg,3. 实验评价指标相对肿瘤增殖率T/C(%),指的是瘤体积比还是瘤质量比？4. 实验申报材料是否需要附属实验动物裸鼠的照片？若需要附属的话，照片没有没有什么要求怎么照的，是鼠活的时候的照片还是实验结束后处死鼠后在摆好位置照？5. 申报材料中附图要求是肿瘤的生长曲线还是不同时间测量的T/C值对时间所做的曲线？还是两个都要有呢？6. 实验分组分5组,空白溶剂对照组,药物高中低三个剂量组，阳性药物有效浓度对照组.这样可以吗？要是不可以,还需要怎么分呢？7. 实验材料中是否需要包含该实验动物血液相关指标的数值呢？比如：白细胞数量，骨髓的影响等等8. 一次实验有效后，是不是也需要重复实验三次？那三次的数据都需要包含在数据中吗？？swordzjsh具体问题回答如下：1. 没有问题，新老原则均明确要求体内三代以上，并且不能超过15~20代（人肿瘤）。
2. 新原则已经没有瘤重的指标，只考察瘤体积，也没有对试验结束后的肿瘤大小有明确要求，但是老的指导原则有这方面的要求。
3. 新的原则是指瘤体积，老的指瘤重，实际上在数据处理的时候一般瘤体积和瘤重的数据都会加入，分别计算相应的T/C。
4. 需要，常见的有两种：一种是处死后摆放并拍摄整鼠照片，还有一种是剥取肿瘤后拍摄肿瘤的照片，还是那句话，最好都有，至少资料中放一个，另外一份备好，答辩的时候可以随时展示。
另外，以前不允许数码拍摄，要求光学照相机，以防电脑编辑，不知道现在还有没有类似的要求。
5. 有的人要看肿瘤生长曲线，有的人要看T/C的曲线，不过一般放生长曲线的多一些，记住，生长曲线现在要求RTV，相对肿瘤体积。
以前报批的时候就可以放RTV曲线了，现在更是RTV的天下。
6. —般来说，正式试验基本上就是这么设计了，但是你最好有这些剂量、疗程、给药途径等的设计依据，比如权威文献、你们的预试验等材料备问。
当然，如果你的药物有些特别的地方，那么要根据他的具体特点设计试验。
7. 这个是锦上添花的指标，对于药效试验来说，没有明确要求，但是一定要有体重和死亡的数据。
8. 老原则要求重复两次，一共三次试验，新原则前几稿要求重复一次，一共三次试验，但是最新一稿我没有看到对于重复试验的要求，但是作为药理研究的基本常识，重复试验是一定需要的，作为正式试验的重复试验应该把数据和结果分析都列入报告中，重复试验之间是同等重要的。
zym145286:针对您的回答，我仍有几点不解1. 实验结束后瘤的质量标准问题，您说新原则没有指标，那么老原则（就是现在还遵循的原则）具体是多少呢，能不能说明一下啊？2. T/C标准按照体积计算的时候，按照的是哪个时间点的体积呢,还是说整个测量过程的体积都要算？3. 还有一个比较基本的问题，不要笑话我了，呵呵，那个RTV是怎样算出来的？是用药组数据减去空白组数据吗？还是其他算法？4. 正式实验中，每组的动物数量是多少？6只,还是10-12只？5. 对给药时间有没有什么具体要求呢，就是说有没有上限，比如不可以超过一个月啊什么的？swordzjsh1. 老原则的标准就是你写出来的那个。
2. 整个测量过程的体积都要算，可以用T/C对时间点作图的那种。
实际上，不知道你有没有老的指导原则，上面有一个表，那个表里面汇总了一些试验的基本信息，那个表里面要填增殖率，一般是选效果最好的那一天的数据填上去。
3. RTV = Vt / V0。