裸鼠荷瘤实验
1 / 33 接种量
要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义了。如果你的细胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。
有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后10到15天左右可以开始试验。2. 开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD不大于平均值的1/3左右。3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g，并且没有溃烂。当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。
接种部位
接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。 2 / 33 如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。一般来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。主要靠针头稍微动一动来判断。
是否应用免疫抑制剂
裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？
楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿3 / 33 瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。所以一般情况下，应该尽量的复合这个瘤株本身的生长特性，不应该过多地去加以人为的干扰。
是否用手术标本荷瘤
如果是药效试验，不建议用手术标本，因为SFDA的临床前研究指导原则上明确指出要用建株的肿瘤株进行试验，因为用手术标本的试验可重复性太差，你这个标本万一没有保存好，断掉了，你自己都很难重复出上次的试验结果。国外的文献上看到的却很少有人用手术标本构建模型进行试验。取材的部位：肿瘤生长活跃，状态良好，结缔组织比较少的地方。运送途径：无菌、冰浴保温，无菌培养液浸泡，时间不能超过1个小时。最好一个小时内就能够接种到动物体内。接种部位：腋下。另外，手术标本还有一个风险：你不能保证取得的标本一定能够顺利地成瘤并且用于试验。
注意事项
A裸鼠的周龄,B肿瘤细胞:何种肿瘤,接种细胞的数量(用对数生长期的,活力高的)记数要准确,C接种方式:注意不要漏液,否则会损失细胞数量D饲养环境:要求是SPF条件
具体操作
1.能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关键是你的肿瘤细胞数，一般肿瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重点4 / 33 要考虑细胞数的问题，但最高不要超过1*107。
2.接种时间，最好在1小时之内完成。但在我实际操作过程中，裸鼠的数量又多，1小时之内根本做不完的，所以你可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。效果还是不错的。
3.成瘤时间，每个肿瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周左右应该能出来了；另外，如果你是打皮下，你要考虑是否有打到深层组织，比如肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出来。
腹腔注射
1、腹腔注射进针的位置在腹中线与小鼠两后肢上沿连交叉以下的位置。
2、腹腔注射很少会打到肠管，因为肠子在碰到硬物时会缩起来，当然前提是你的进针不是特别深，如果你的整个针头都扎入了腹腔，那么肠子是无处可躲了。
3、腹腔注射进针后，你可以将针头左右摆动一下，如果是正确的，这时会有一种很自由无障碍的感觉，进针角度撑握在小于45度，针头进入长度不超过3厘米左右。
用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推 0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液（图2-5），为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处。
肿瘤倍增时间 肿瘤动物实验模型肿瘤的倍增时间（doubli5 / 33 ngtime），应该是在瘤体积100－800之间计算，但是一组动物有10只，每周测量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我测量体积的时候正好到200或400，那么，在计算的时候，具体应该怎么做？Geddes
等[29]将结节倍增时间的计算公式表示为：DT =（ln 2△ t）/ln（V2/V1），V1、V2分别是前后两次测量的体积，△t是两次测量的时间间隔
你的问题有歧义，我觉得可以有几下几种理解：1.测量的时候，对于某个老鼠来说，第一次可能测出来的体积是189.26（不是正好200），第二次是415.31（不是正好400），对于其他的动物都有这样的问题，2.对于十只老鼠来说，测量的时候，可能1号老鼠是189.26，2号是312.57，3号是110.89......，这也是一种理解，我的意见是：测量一段比较长的时间，每只老鼠可以独立计算倍增时间，然后计算平均值，SD等，用统计学处理的手段。
个体差异 同一批种几十只老鼠，有的就长不出来，有的长得很大，使评价药效很困难。排除接种悬液未摇匀的可能后，还有什么原因可能造成这一点？可能是是个体差异了。其中，老鼠年龄是一个很大的因素。本人就遇到过2个月的老鼠接种肿瘤以后，有的长有的不长的情况。如果控制好试验条件，动物也比较均一的话，一般肿瘤生长都会很好的控制在一定范围6 / 33 的
肿瘤模型新药申报
zym145286做的肿瘤模型实验是用于新药申报用,现在有一些问题还不能校准,我做的是人癌模型,实验动物为裸鼠.
1. 新药报批中,有明确的要求说肿瘤来源必须是体内传代3次以上吗?
2. 实验结束后,对于取出肿瘤块的质量有没有明确的规定呢?还是跟其他种鼠一样,要求平均瘤重不小于1g或者不大于20%的瘤快质量不小于400mg,
3. 实验评价指标相对肿瘤增殖率T/C(%),指的是瘤体积比还是瘤质量比?
4. 实验申报材料是否需要附属实验动物裸鼠的照片?若需要附属的话,照片没有没有什么要求怎么照的，是鼠活的时候的照片还是实验结束后处死鼠后在摆好位置照?
5. 申报材料中附图要求是肿瘤的生长曲线还是不同时间测量的T/C值对时间所做的曲线?还是两个都要有呢?
6. 实验分组分5组,空白溶剂对照组,药物高中低三个剂量组,阳性药物有效浓度对照组. 这样可以吗?要是不可以,还需要怎么分呢?
7. 实验材料中是否需要包含该实验动物血液相关指标的数值呢?比如:白细胞数量,骨髓的影响等等 7 / 33 8. 一次实验有效后,是不是也需要重复实验三次?那三次的数据都需要包含在数据中吗??
swordzjsh具体问题回答如下：1.没有问题，新老原则均明确要求体内三代以上，并且不能超过15~20代（人肿瘤）。2. 新原则已经没有瘤重的指标，只考察瘤体积，也没有对试验结束后的肿瘤大小有明确要求，但是老的指导原则有这方面的要求。3. 新的原则是指瘤体积，老的指瘤重，实际上在数据处理的时候一般瘤体积和瘤重的数据都会加入，分别计算相应的T/C。4. 需要，常见的有两种：一种是处死后摆放并拍摄整鼠照片，还有一种是剥取肿瘤后拍摄肿瘤的照片，还是那句话，最好都有，至少资料中放一个，另外一份备好，答辩的时候可以随时展示。另外，以前不允许数码拍摄，要求光学照相机，以防电脑编辑，不知道现在还有没有类似的要求。5.有的人要看肿瘤生长曲线，有的人要看T/C的曲线，不过一般放生长曲线的多一些，记住，生长曲线现在要求RTV，相对肿瘤体积。以前报批的时候就可以放RTV曲线了，现在更是RTV的天下。6.一般来说，正式试验基本上就是这么设计了，但是你最好有这些剂量、疗程、给药途径等的设计依据，比如权威文献、你们的预试验等材料备问。当然，如果你的药物有些特别的地方，那么要根据他的具体特点设计试验。7. 这个是锦上添花的指标，对于药效试验来说，没有明确要求，但是一定要有体重和死亡的数据。8. 老原则要求重复两次，一共三次试验，新原则前几稿要求重复一次，一共三次试验，但是最新一稿我没有看到对于重复试验的要求，但是作为药理研究的基本常识，重复试验是8 / 33 一定需要的，作为正式试验的重复试验应该把数据和结果分析都列入报告中，重复试验之间是同等重要的。
zym145286:针对您的回答,我仍有几点不解1.实验结束后瘤的质量标准问题,您说新原则没有指标,那么老原则(就是现在还遵循的原则)具体是多少呢,能不能说明一下啊?
2. T/C标准按照体积计算的时候,按照的是哪个时间点的体积呢,还是说整个测量过程的体积都要算?3.还有一个比较基本的问题,不要笑话我了，呵呵,那个RTV是怎样算出来的?是用药组数据减去空白组数据吗?还是其他算法?4.正式实验中,每组的动物数量是多少?6只,还是10-12只?5.对给药时间有没有什么具体要求呢,就是说有没有上限,比如不可以超过一个月啊什么的?swordzjsh1. 老原则的标准就是你写出来的那个。2. 整个测量过程的体积都要算，可以用T/C对时间点作图的那种。实际上，不知道你有没有老的指导原则，上面有一个表，那个表里面汇总了一些试验的基本信息，那个表里面要填增殖率，一般是选效果最好的那一天的数据填上去。3. RTV = Vt / V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。RTV是针对每一只小鼠计算的。4. 对于裸鼠来说，5到10只，要根据你的药物的性质来定，如果SD较大，建议多设几只，容易做出统计差异。如果SD较小，不少于6只，因为要求试验过程中动物死亡率不超过20%，6只动物死了一只还可以接受，要是5只动物死了一只就是20%了。5. 没有
EMMPRIN和Ki
EMMPRIN和Ki67在panc1荷瘤裸鼠束缚应激模型移植瘤中的表达及意义
【摘要】 目的 探讨慢性心理应激对panc1荷瘤裸鼠移植瘤中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)和Ki67蛋白水平的影响。方法 将20只裸鼠随机分成单纯荷瘤组和荷瘤+应激组，每组10只，建立裸鼠胰腺癌移植瘤束缚应激模型，采用免疫组化检测移植瘤组织中EMMPRIN和Ki67蛋白的表达。结果 荷瘤+应激组移植瘤组织中EMMPRIN和Ki67的阳性表达均明显高于单纯荷瘤组，差异有统计学意义(Z=2636，P＜005)；移植瘤组织中EMMPRIN与Ki67的表达呈正相关(r=0534，P＜005)。结论 应激可能通过上调EMMPRIN的表达，诱导肿瘤细胞增殖，促进裸鼠胰腺癌的生长。
【关键词】 EMMPRIN；Ki67；胰腺肿瘤 胰腺癌是一种恶性度高、预后极差的恶性肿瘤。近年来发病率逐年增加，虽然临床综合诊治水平不断提高，但对其远期疗效和预后并未带来突破性影响，患者5年生存率不足2%，因为心理恐惧和躯体疼痛，可以推测大部分胰腺癌患者必然处于应激状态。本研究旨在建立裸鼠胰腺癌束缚应激模型，模拟胰腺癌患者所处的应激状态，通过检测移植瘤组织中EMMPRIN和Ki67蛋白的表达情况，探讨应激促进裸鼠胰腺癌移植瘤生长的机制。1 资料与方法11 一般资料 人胰腺癌细胞株panc1(中国协和医院微生物实验室)；BALB/C(nu/nu)裸小鼠，雄性，4～6周龄，体质量15～18 g(上海斯莱克实验动物有限责任公司)；EMMPRIN抗体和Ki67抗体(北京中杉金桥生物公司)等。12 方法 121 建立裸鼠胰腺癌移植瘤束缚应激模型 新购的裸鼠饲养在室温26℃～28℃相对无菌的环境中，饲料和水均经过高压灭菌，将20只裸鼠随机分为两组：荷瘤+应激组和单纯荷瘤组，每组10只。荷瘤+应激组的裸鼠在种瘤后给予束缚(每天10：00～18：00，共2周)，单纯荷瘤组裸鼠正常活动。结束后处死全部裸鼠，取移植瘤，具体步骤参考文献［13］。122 免疫组化 采用PV6000法，按试剂盒说明书进行操作。结果判定：EMMPRIN染色阳性细胞为胞膜呈棕黄色，Ki67染色阳性细胞为胞核
裸鼠卵巢癌模型实验技术原理
裸鼠卵巢癌模型实验技术原理
裸鼠卵巢癌模型造模：皮下移植 A组：5只，用针头分别于左右背侧近前后肢处皮下注射Ao细胞悬液20ul/注射点，共注射20点；B组：5只，同法注射20点，每点注射50ul Ao细胞悬液。注射后每天观察肿瘤形成及有无**、溃破，成瘤后每周用游标卡尺测量瘤体长径与短径，计算肿瘤面积。接种6w后处死裸鼠，无菌条件下取出瘤体，用于网膜移植并做成标本检测。
裸鼠卵巢癌模型网膜移植：取出瘤体取肿瘤实质部分切成大小一致的16个小块，再从中选出较大和较小的各三个瘤块于无菌室外称重，其余十个瘤块浸于生理盐水中备用。受体10只裸鼠在麻醉下切开腹壁，将瘤块分别缝扎于脾区网膜表面并作半包埋。关腹后每天向每只裸鼠注射含antibiotics的细胞培养液1ml，共2w，30d后处死裸鼠尸检并切取瘤体及脾区网膜称重。
方法比较：皮下移植瘤模型的优点是操作简单、便于观察，可根据不同时期肿瘤体积大小了解生长速度，反应肿瘤的生长特征及生物学行为变化。而卵巢癌发生的原始环境为卵巢本身，皮下移植不符合环境要求。所以很多学者致力于裸鼠卵巢内原位移植的研究，但裸鼠卵巢较小，操作较困难，且即使在人类卵巢也很难做到。
[整理版]抗肿瘤药物体内活性评价
![[整理版]抗肿瘤药物体内活性评价](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/937f1916bfd5b9f3f90f76c66137ee06eff94e2d.webp)
抗肿瘤药物体内活性评价（KGSS008）
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实验目的：根据《抗肿瘤药物药效学指导原则》和《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》的要
求，测试受试样品对人癌裸鼠异种移植肿瘤生长有无抑制作用及作用强度。
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实验动物：BALB/c裸小鼠，提供实验动物质量合格证原件和实验动物使用许可证复印件
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实验内容与方法：
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取处于对数生长期细胞，制备细胞悬液，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。待肿瘤生长至50-100mm3后将动物随
机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。至小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
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肿瘤体积(tumor volume ,TV)：TV = 1/2×a×b2（a、b分别表示长宽）。
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相对肿瘤体积（RTV）： RTV = Vt/V0。（V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的
肿瘤体积。）
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相对肿瘤增殖率T/C（%），抗肿瘤活性的评价指标：
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TRTV0
T/C（%）= ────×100
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CRTV0
TRTV：治疗组RTV ；CRTV：阴性对照组RTV。
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实验信息（客户提供）：
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样品名称：
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样品来源：□合成，□提取，□其他：
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样品量（准确称量）： mg
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分子量：
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物理性状：□固体，□液体； 溶媒及溶解度：
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保存温度：□-20℃；□4℃；□室温；□其他：
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给药方式：
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给药剂量：
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给药周期：
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服务周期：6周
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结果提交：提交实验报告书、荷瘤小鼠
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收费标准：15000元/模型
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实验范例
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受试样品1、2、3、4对人乳腺癌细胞MDA-MB-231异种移植瘤抑制作用
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冬凌草甲素联用刺五加皂甙对Ec-9706荷瘤裸鼠的抑瘤作用
空国塞旦匡刊!Q!!生!旦筮!!鲞筮!翅￡塾i望!塑』!望婴型堕里!!鲤!型丛塑!堕堡坠!!：!!!!：!!!：!!：堕!：!57
冬凌草甲素联用刺五加皂甙对Ec一9706荷瘤裸鼠的抑瘤作用
孙明月王留兴李月华孙桢
【摘要】目的研究冬凌草甲素与刺五加皂甙联用对裸鼠Ec一9706模型的抑瘤作用。方法以Ec一9706
细胞株接种裸鼠制成荷瘤模型，研究冬凌草甲素与刺五加皂甙联用高、中、低剂量组与阳性对照组比较对荷瘤裸鼠
的抑瘤效应。结果高、中、低剂量组及阳性对照组1和2的抑瘤率分别为35．1％，37．1％，43．1％，49．6％和
19．2％，与空白对照组比较差异均有统计学意义，高、中、低剂量组和阳性对照组1、阳性对照组2相比，差异有统计
学意义(P<0．01)；三个剂量组间差异无统计学意义(P>0．05)。结论冬凌草甲素与刺五加皂甙联用对Ec一
9706荷瘤裸鼠有明显的抑瘤作用，能提高生命质量。
【关键词】冬凌草甲素；刺五加皂甙；抑瘤作用
恶性肿瘤严重危害着人类的健康，在各类疾病死因中居前
位，如何有效防治恶性肿瘤已成为医药界的重大课题…。近年
来国内外在肿瘤防治中己取得不少进展，主要采用手术、化学
治疗、放射治疗及生物治疗等综合措施。但是对于中晚期恶性
肿瘤的临床治疗具有一定的局限性、且效果不佳。近年我国传
统医学中的中药成为抗肿瘤药物研究的热点。中药复方制剂
在控制肿瘤增殖、减毒增效、预防复发、延长生存期、改善生活质
量等方面具有独特的优势旧J。本实验中采用两味中药提取物以
研究其对Ec一9706荷瘤裸鼠的抑瘤作用。本实验通过对冬凌
草与刺五加提取物——甲素与皂甙对Ec一9706荷瘤裸鼠的抑
瘤作用的观察，以期为临床联合应用冬凌草甲素与刺五加皂甙
提供依据。
1材料与方法
1．1研究材料：冬凌草有效成分甲素由河南省科学院天然植
物研究所提供，刺五加有效成分皂甙购于吉林大学医学院有机
化学教研室。消癌平注射液(南京圣河药业有限公司，批准文
号：国药准字Z20025868)，平阳霉素(天津太河制药有限公司，
护肝布祖热方联合奥沙利铂对肝细胞癌荷瘤裸鼠的减毒增效作用及机制
2024年第35卷第32024353 283 护肝布祖热方联合奥沙利铂对肝细胞癌荷瘤裸鼠的减毒增效作用及机制 Δ孟小艺 1＊，杨建华 1， 2，文丽梅 2，阿依孜巴·图尔洪 1，胡君萍 1 #（1.新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830017；2.新疆医科大学第一附属医院药学部，乌鲁木齐 830054）中图分类号 R965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）03-0283-07DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.03.04摘要 目的 研究护肝布祖热方联合奥沙利铂对肝细胞癌荷瘤裸鼠的减毒增效作用及机制。方法 从40只裸鼠中选取8只作为空白组（生理盐水），其余32只裸鼠皮下接种人肝癌Huh7细胞构建荷瘤裸鼠模型。将造模成功的32只裸鼠随机分为模型组（生理盐水，灌胃）、奥沙利铂组（10 mg/kg，腹腔注射）、护肝布祖热方组（0.69 g/kg，灌胃）和联合用药组（腹腔注射10 mg/kg奥沙利铂+灌胃0.69 g/kg护肝布祖热方浸膏），每组8只。每天灌胃给药/生理盐水1次，连续32 d；每7天腹腔注射给药1次，共5次。实验期间，观察各组裸鼠一般情况，每4 d测量1次肿瘤体积；给药第30天，检测裸鼠热刺激缩足潜伏期；给药结束后，检测各组裸鼠的抑瘤率、脾脏系数、血常规指标以及血清中天冬氨酸转氨酶（AST）和肌酐水平，观察裸鼠肿瘤组织病理形态变化，检测肿瘤组织中微管相关蛋白1轻链3（LC3）、选择性自噬接头蛋白p62、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶3（Caspase-3）的表达。结果 与模型组比较，奥沙利铂组裸鼠肿瘤体积、瘤重以及全血中白细胞、红细胞数量和脾脏系数均显著减小/降低（P＜0.01），热刺激缩足潜伏期和血清中AST、肌酐水平均显著延长/升高（P＜0.05或P＜0.01）。与奥沙利铂组比较，联合用药组裸鼠肿瘤体积、瘤重均显著减小/降低（P＜0.01），全血中白细胞、红细胞、血小板数量和脾脏系数均显著增加/升高（P＜0.05或P＜0.01），热刺激缩足潜伏期和血清中AST、肌酐水平均显著缩短/降低（P＜0.01）；肿瘤组织中LC3、Bax和Caspase-3蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.01），p62、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P＜0.01）。结论 护肝布祖热方通过诱导凋亡和自噬增强奥沙利铂对裸鼠的抑瘤作用，并可缓解奥沙利铂引起的外周神经毒性、血液毒性、肝肾毒性和免疫器官毒性。关键词 护肝布祖热方；奥沙利铂；肝癌；减毒增效；凋亡；自噬Attenuation and synergism of Hugan buzure recipe combined with oxaliplatin on hepatocellular carcinoma tumor bearing nude mice and its mechanismMENG Xiaoyi1，YANG Jianhua1， 2，WEN Limei2，Ayiziba·Tuerhong1，HU Junping1（1. College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830017， China；2. Department of Pharmacy， the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Urumqi 830054， China）ABSTRACTOBJECTIVE To investigate the attenuation and synergism of Hugan buzure recipe （HBR） combined with oxaliplatin on hepatocellular carcinoma tumor bearing nude mice and its mechanism. METHODS Eight nude mice were selected from 40 nude mice as the blank group （normal saline）， and the remaining nude mice were inoculated with hepatoma cells Huh7 to establish the tumor-bearing model. The 32 modeled nude mice were randomly allocated to four groups： model group （normal saline， ig）， HBR group （0.69 g/kg， ig）， oxaliplatin group （10 mg/kg， ip）， and combination group （intraperitoneal injection of 0.69 g/kg HBR+intragastric administration of 10 mg/kg oxaliplatin）， with 8 mice in each group. Administer drug/normal saline once a day for 32 consecutive days； administer subcutaneous injection once every 7 days for a total of 5 times. During the experiment， the general condition of nude mice in each group was observed， and the tumor volume was measured every 4 days. On the 30th day of administration， the thermal stimulation paw withdrawal latency of nude mice in each group were detected. The tumor inhibition rate， spleen coefficient， the number of red blood cells， white blood cells and platelets in the whole blood of nude mice in each group， and the content of aspartate aminotransferase （AST） and creatinine in serum were detected after the end of administration. HE staining was used to observe the pathological changes in tumor tissues in nude mice in each group. The expression of microtubule-associated protein 1 light chain 3 （LC3）， selective autophagy adaptor protein p62， B-cell lymphoma-2 （Bcl-2）， Bcl-2 associated X protein （Bax）， and Caspase-3 protein in tumor tissues. RESULT Compared with the model group， the tumor volume， tumor weight， white blood cells， red blood cells in the whole blood and spleen coefficients of nude mice in the oxaliplatin group were significantly decreased Δ 基金项目国家自然科学基金项目（No.81560688，No.81860745）；新疆天然药物活性组分与释药技术重点实验室项目（No.XJDX1713）；中央引导地方科技发展专项（No.ZYYD2023B11）＊第一作者硕士。研究方向：中药复方肝保护作用及机制。 E-mail：2393860921@# 通信作者教授，博士生导师，博士。研究方向：中药、天然药物。E-mail：hjp-yft@ 284 2024353 2024年第35卷第3（P＜0.01）； the thermal stimulation paw withdrawal latency， AST and creatinine in serum were significantly increased （P＜0.05 or P＜0.01）. Compared with the oxaliplatin group， the tumor volume and tumor weight of nude mice in the combination group were significantly decreased （P＜0.01）； the white blood cells， red blood cells and platelets in the whole blood and spleen coefficients of nude mice were significantly increased （P＜0.05 or P＜0.01）； the thermal stimulation paw withdrawal latency， AST and creatinine in serum were significantly decreased （P＜0.01）； the expression levels of LC3， Bax and Caspase-3 proteins in tumor tissues of nude mice were significantly increased （P＜0.01）， and the expression levels of p62 and Bcl-2 proteins were significantly decreased （P＜0.01）. CONCLUSIONS HBR enhances the tumor inhibition rate of oxaliplatin by inducing apoptosis and autophagy， and can alleviate the peripheral neurotoxicity， hematological toxicity， hepatorenal toxicity， and immune organ toxicity caused by oxaliplatin in nude mice.KEYWORDSHugan buzure recipe； oxaliplatin； hepatic cancer； attenuation and synergism； apoptosis； autophagy肝细胞癌是目前与癌症相关死亡的第三大原因[1]。目前，肝癌的治疗方法主要包括肝切除、肝移植等外科疗法和放疗及化疗等，但由于这些疗法的毒副作用和耐药性，导致肝癌的预后不好[2]。目前，以奥沙利铂为主的FOLFOX4方案被广泛用于肝癌的治疗，且治疗效果良好[3]。研究表明，奥沙利铂可以通过下调肝癌细胞中B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）表达和上调Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）表达来诱导肝癌细胞凋亡[4]。另有研究表明，奥沙利铂也可以诱导自噬体增加，进而增强HepG2肝癌细胞的自噬功能[5]。但随着奥沙利铂临床用量的增加，其不良反应引起了人们的广泛关注，主要有神经系统、消化系统不良反应和血液毒性及肝肾毒性等[6]。中药复方多年来一直被用于肝细胞癌的治疗，可有效改善患者的临床症状。比如，槐耳清膏可以激活人肝癌细胞SK-HEP-1自噬，从而发挥抑制癌细胞增殖的作用[7]；小柴胡汤可以上调凋亡相关蛋白Bax的表达、下调Bcl-2的表达，从而促进人肝癌细胞Huh7的凋亡[8]。中药复方联合化疗药物用于肿瘤的治疗，不仅可以增强化疗药物的疗效，还可以延缓耐药性的产生，减轻其毒副反应。如贞芪扶正颗粒具有增强奥沙利铂抑制肝癌移植瘤生长的作用[9]，槐耳颗粒可通过调控氧化还原平衡缓解奥沙利铂所引起的肝脏损伤[10]。护肝布祖热方是新疆地区的保肝经典方，由芹菜根（Apii Radix）、芹菜子（Apii Semen）、菊苣根（Cichorii Ra‐dix）、菊苣子（Cichorii Semen）、菟丝子（Cuscutae Se‐men）、茴香根皮（Foeniculi Cortex）、小茴香（Foeniculi Fructus）7种药味组成，具有补益肝胃、散气止痛、利胆和利水等功效，在临床上主要用于治疗急、慢性乙型肝炎和急、慢性胆囊炎，并可联合化疗药物用于治疗肝癌等。本课题组前期研究证实了护肝布祖热方在体外可通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导肝癌细胞凋亡和自噬，进而抑制肝癌细胞增殖[11]。在此基础上，本研究拟从抗凋亡和自噬角度探讨护肝布祖热方联合奥沙利铂对荷瘤裸鼠的减毒增效作用，以期为拓展护肝布祖热方的临床应用提供理论基础。1 材料1.1 主要仪器本研究所用的主要仪器有：AE240型分析天平[梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司]、H1750R型高速台式冷冻离心机（湖南湘仪动力测试仪器有限公司）、Mul‐tiskanGO型酶标仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）、PL-200型热刺痛仪（成都泰盟科技有限公司）、BC5000vet型全自动血液分析仪（深圳迈瑞医疗器械有限公司）、Eclipse Ni-U型显微镜（日本Nikon公司）。1.2 主要药品与试剂菊苣子（批号JJZ-YP-200527）、菊苣根（批号JJZ-YP-191209）、茴香根皮（批号HXGP-YP-210115）药材均购自新疆安萨尔维吾尔药业有限公司；芹菜根（批号G30131002）、芹菜子（批号Z30142203）药材均购自新疆维吾尔自治区维吾尔医医院；小茴香（批号191023）、菟丝子（批号150701）药材均购自新疆和济中药饮片有限公司。以上药材由新疆医科大学药学院胡君萍教授鉴定均为真品，药材标本保存于新疆医科大学生药学教研室。奥沙利铂对照品（批号100584-202005，纯度≥99%）购自中国食品药品检定研究院；兔抗微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）抗体（批号14600-1-AP）、鼠抗选择性自噬接头蛋白p62抗体（批号66184-1-lg）、鼠抗胱天蛋白酶3（Caspase-3）抗体（批号66470-2-lg）、鼠抗Bax抗体（批号60267-1-lg）、鼠抗β-肌动蛋白（β-actin）抗体（批号66009-1-lg）、辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG二抗（批号20000275）和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗（批号20000758）均购自武汉三鹰生物技术有限公司；兔抗Bcl-2抗体（批号32124）购自英国Abcam公司；天冬氨酸转氨酶（aspartate transaminase，AST）测试盒（批号C010-2-1）和肌酐测试盒（批号C011-2-1）均购自南京建成生物工程研究所。
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤
顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠， 无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
☞ 肿瘤细胞移植时的简要步骤
首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择 1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。将腋窝或腹股沟用 75%
酒精消毒 3 次。右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约 1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约 1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌 PBS（或 1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法
采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进行干预，观察药物对肿瘤的作用。
二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作
1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每 裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹 包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种 于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁
本积大于100m3后，选取肿瘤大小 相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组 ，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。当天高剂 量组、中剂量组、顺铂组开始给药 其中，高剂 量组连续21天每天灌胃给 药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。每两天测量荷瘤裸鼠体重和 冲瘤体积。于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体 积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤指数 完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存 放于液氮中冻存。血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。
2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均 现黄豆大小瘤块，于当天开始测量肿瘤体积并 称重。于接种第11天时，测量肿瘤生 长指数和体重时发现，各组荷瘤裸鼠肿瘤体积均 值达到100mm3，于当天开始分组给药 在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳 夆明显，与对照组相比具有极显著性差异 루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。顺 铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差 쿠(P<0.01)。高剂量组和中剂量组肿瘤体积也明 显小于对照组，但无显著性差异。血浆 中APTT、PT检测结果发现，高剂量组和中剂量 组小鼠血浆中APTT指标明显低于对 照组，顺铂组小鼠血浆中APPT指标高于对照组 但各组小鼠血浆中APPT变化均无显著性差异。中剂量组和顺铂组小鼠血浆中PT 肯标明显低于对照组，并具有极显著性 差异。实验过程中，各组未见小鼠死亡。
龙葵碱对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制研究
龙葵碱对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制研究
周怡;李影;孔鸿儒;张青顺;周蒙滔;孙洪伟
【摘 要】目的 探讨龙葵碱对胰腺癌细胞SW1990裸鼠移植瘤的抑制作用并初步研究其作用机制.方法 建立胰腺癌细胞SW1990的裸鼠荷瘤模型,随机分为对照组和实验组,每组10只.肿瘤接种成功第2周起对照组和实验组分别腹腔注射溶媒(含1‰二甲亚砜)1 mL、龙葵碱10 mg/kg,隔天给药1次,共给药2周.每次给药结束用游标卡尺记录肿瘤大小.给药结束后颈椎脱臼处死裸鼠,测量瘤体重量并计算抑瘤率,留取新鲜肿瘤组织用RT-PCR和免疫组化检测Bc1-2、Bax和Caspase-3基因mRNA和蛋白表达情况.结果 与对照组相比,实验组裸鼠肿瘤生长受到显著抑制(P＜0.05),实验组的肿瘤组织Bc1-2表达阳性率明显降低(实验组90％ vs对照组46％,P＜0.01),Bax(实验组38％ vs对照组70％,P＜0.01)和Caspase-3(实验组22％ vs对照组74％,P＜0.01)的表达阳性率明显升高.结论 龙葵碱在裸鼠体内能显著抑制人胰腺癌细胞SW1990的增殖,此抑制作用呈明显的时间依赖性.龙葵碱发挥上述作用的机制可能在于诱导胰腺癌细胞凋亡.
【期刊名称】《肝胆胰外科杂志》
【年(卷),期】2016(028)003
【总页数】4页(P209-212)
【关键词】龙葵碱;胰腺癌;凋亡;裸鼠
【作 者】周怡;李影;孔鸿儒;张青顺;周蒙滔;孙洪伟
【作者单位】温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科,浙江 温州 325000;温州医科大学附属第一医院手术室,浙江 温州 325000;温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科,浙江 温州 325000;温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科,浙江 温州 325000;温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科,浙江 温州 325000;温州医科大学附属第一医院肝胆胰外科,浙江 温州 325000
188Re-DTPA-DG治疗荷人乳腺癌裸鼠的疗效观察
２００７年８月第２９卷第８期ｃｈｉｎ Ｑ ！： ！： ：
瑚Ｒｅ．ＤＴＰＡ．ＤＧ治疗荷人乳腺癌裸鼠的疗效观察
熊青峰陈跃何菱黄占文李举联甘西伦
【主题词】荷瘤裸鼠； Ｒｅ．ＤＴＰＡ－ＤＧ；治疗 【Ｓｕｂｊｅｃｔ ｗｏｒｄｓ】Ｔｕｍｏｒ．ｂｅａｒｉｎｇ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ； Ｒｅ－ＤＴＰＡ・ＤＧ；Ｔｈｅｒａｐｙ
Ｆ．脱氧葡萄糖（ＦＤＧ）ＰＥＴ显像已用于多种肿瘤诊断、
治疗和疗效评价，但由于费用较贵，从而限制了它的普及应
用。陈跃等¨０ 将ＤＴＰＡ连接在葡萄糖胺的氨基上，合成了
ＤＴＰＡ．ＤＧ，并用 Ｔｃ标记ＤＴＰＡ－ＤＧ，放化纯度高（＞９９％），
荷瘤鼠显像Ｔ／ＮＴ比值随时间延长而升高，显像效果满意。
有研究显示， Ｔｃ标记葡萄糖结构类似物ＥＣ－ＤＧ，可以评价
肿瘤细胞代谢活性，甚至可以评价良恶性 。ＤＴＰＡ－ＤＧ具 有与ＥＣ．ＤＧ相似的化学结构，它们之间可能存在共同的机
制。 Ｒｅ作为 Ｔｃ的同族元素，具有与 Ｔｃ相似的化学性
质，用 Ｒｅ标记ＤＴＰＡ．ＤＧ，不但可以显像，还可以用于治疗。
我们用 Ｒｅ来标记ＤＴＰＡ－ＤＧ，并进行肿瘤治疗的相关研究。
一、材料与方法 １．仪器和试剂： ｗ．瑚Ｒｅ发生器（北京原子高科核技
术应用股份有限公司）；ＤＴＰＡ－ＤＧ（四川大学华西药学院提
供）； Ｒｅ．ＤＴＰＡ．ＤＧ（本实验室标记）；人ＭＣＦ－７乳腺癌细胞
（四川大学华西医院）；裸鼠（四川大学实验动物中心）；ＳＮ－
６９５型自动计数仪（上海日环光电仪器有限公司）；ＡＢ２０４－Ｓ
电子天平（瑞士生产）；ＴＣ２３２３３二氧化碳培养箱（美国
ＳＨＥＬＬＡＢ），ＸＤＳ－１Ｂ倒置生物显微镜、超净操作台、隔水式电 热恒温培养箱、ＳｎＣ１：、葡萄糖酸钠、磷酸二氢钠和碳酸氢钠均
由本实验室提供；鼠抗人ｂｃｌ－２单抗、兔抗人ｂａｘ抗体免疫组 化试剂盒（武汉博士德公司）。
２．实验方法：（１）荷瘤动物模型的制作：将ＭＣＦ－７乳腺
半枝莲多糖对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究
CJCM 中医临床研究 2020年第12卷 第32期
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mesenchymal transition via activation of SNAIL by hypoxia-inducible
factor-1a in hepatocellular carcinoma[J].BMC Cancer,2013,13:108.
[16]YANG MH, WU MZ, Chiou SH, et al. Direct regulation of TWIST by
HIF-1alpha promotes metastasis[J].Nat Cell Biol,2008,10:295-305.
[17]JIANG J, TANG YL, LIANG XH. EMT: a new vision of hypoxia
promoting cancer progression[J].Cancer Biol Ther,2011,11(8):714-723.
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基金项目：
南阳医专自然科学项目2016NYYZOO3。
作者简介：
王静，通讯作者，硕士研究生，讲师。
编辑：田杏茹 编号：EA-4200724296（修回： 2020-10-12）
半枝莲多糖对宫颈癌荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究
The tumor-inhibiting effect of SBP on cervical cancer in mice
袁 辉 孙 健 徐吉雨* 许晓义 徐文秀 李 丽 石 屹